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Curso Básico de Citometría de Flujo

Fechas curso: Del 20 al 23 de octubre de 2014 Horario: Día 1 teoría: mañana de 9h a 14 h y tarde de 16h a 19h. Practica I: Mañana de 9h a 13.30h. Practica II: Mañana de 10h a 12h. Práctica III: Tarde de 15:30h a 19h. Duración: 18 horas

Presentación La citometría de flujo es una técnica de análisis celular sencilla pero muy informativa y versátil que permite estudiar desde la expresión de determinadas proteínas en la célula hasta el metabolismo o la capacidad proliferativa de la misma y todo ello de una manera rápida, estudiando múltiples células individuales y determinando diferentes parámetros de forma simultánea. En la actualidad, el conocimiento y utilización de ésta técnica resultan de gran importancia en la investigación médica ya que no sólo permite estudiar las células sino que nos ofrece la posibilidad de separar las que nos interesan dentro de una mezcla de tipos celulares lo que la convierte en una técnica fundamental en los proyectos de investigación en biología celular. La citometría se ha adaptado también a otras aplicaciones fuera del estudio celular, así, se ha desarrollado el análisis multiplex que nos permite cuantificar por citometría la concentración de proteínas en líquidos biológicos, realizar estudios de genotipado y de niveles de micro ARN entre otras aplicaciones. Objetivo general: Este curso tiene el objetivo de adquirir los principales fundamentos teóricos en los que se sustenta la citometría de flujo, familiarizarse con el manejo de los equipos, presentar las diferentes aplicaciones que se derivan del mismo y conseguir que los alumnos sepan interpretar los datos que genera un citómetro de flujo. Esta actividad se entronca dentro del Plan de Formación en Investigación del IIS Aragón cuyo objetivo principal es la capacitación de sus investigadores para alcanzar un nivel de

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excelencia en la actividad investigadora en Aragón, mejorar el rendimiento científico e incorporar la investigación en biomedicina y Ciencias de la Salud al ámbito internacional. Los Servicios Científico Técnicos del Instituto de Investigación Sanitaria Aragón (IIS Aragón) tienen el objetivo de potenciar la investigación en biomedicina en Aragón mediante la puesta a disposición del conjunto de investigadores de infraestructuras científicas que, por sus características, superan en general las posibilidades de adquisición y utilización por parte de grupos de investigación individuales, y de personal cualificado que ofrezca apoyo técnico y científico especializado. En éste contexto, esta actividad formativa está promovida por la Unidad de Separación Celular y Citometría El curso sigue una metodología activo-participativa con combinación de sesiones teóricas con otras de carácter práctico donde se explicarán diferentes protocolos de preparación de muestras y se analizarán experimentos ya realizados.

A quién se dirige Este curso va dirigido a profesionales de Salud, y/o Investigadores del ámbito biomédico y ciencias de la salud, que precisen el manejo de este tipo de metodología para el desarrollo de su labor investigadora. (Máximo 18 plazas).

Criterios de selección: 1. Profesionales que pertenecen a grupos de investigación 2. Profesionales que desean iniciar su labor investigadora. 3. Orden de preinscripción

Profesorado

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Javier Godino Gómez. Responsable del Servicio Científico Técnico de Separación Celular y Citometría del IIS Aragón

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César Vallejo Ruiz. Técnico de laboratorio. Servicio Científico Técnico de Separación Celular y Citometría del IIS Aragón

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Matilde Desirée Pereboom Maicas: Responsable del SAI de Citómica de la Universidad de Zaragoza

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Contenidos 1. Fundamentos de la citometría de flujo − Componentes de un citómetro: Sistema de fluidos, óptico y electrónico. − Dispersión óptica y fluorescencia: Compensación de fluorescencias. − Control de calidad en citometría de flujo 2. Inmunofenotipado − Marcaje directo e indirecto; marcaje intra y extracelular. − Controles de isotipo y bloqueo de receptores Fc. − Análisis e interpretación de resultados: Prácticas en citómetro. 3. Estudios funcionales por citometría de flujo − Análisis de proliferación celular: Ciclo celular, Estudio de fase S del ciclo, estudio del número de divisiones celulares. − Estudio de la muerte celular: Apoptosis frente a necrosis. − Estudio del metabolismo celular: Concentración de Ca2+, pH, estado redox, potencial de membrana. − Análisis e interpretación de datos: Ciclo celular y muerte por apoptosis usando Anexina V y yoduro de propidio. 4. Separación celular por citometría − Fundamentos teóricos de la separación celular por citometría. − Puesta a punto de una separación celular en el citómetro. 5. Análisis multiplex por citometría − Fundamentos del análisis multiplex de la concentración de proteínas en líquidos biológicos. − Otras aplicaciones del análisis multiplex: Genotipado, concentración de ARN mensajero, expresión de microARN, activación de factores de trascripción.

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Cronograma Parte teórica: Aula teoría. Instalaciones del IACS Mañana 9:00 - 9:30

Presentación y evaluación inicial

9:30 - 11:00

1.- Fundamentos de la citometría de flujo. Componentes de un citómetro

11:00 - 11:15

Descanso

11:15 - 12:30

2.- Inmunofenotipado celular

12-30 - 14:00

3.- Estudios funcionales por citometría de flujo: muerte celular: Apotosis y necrosis

Proliferación celular, ciclo celular y

Tarde 16:00 – 16:30

3.- Estudios funcionales por citometría de flujo: Estudio del metabolismo celular

16:30 - 17:30

4.- Separación celular por citometría

17:30 - 17:45

Descanso

17:45 - 19:00

5.- Análisis multiplex por citometría

Parte práctica: 18 alumnos divididos en 6 grupos de 3 Práctica 1: Análisis de experimentos de citometría: Se hará en aula convencional (aula del IACS), cada grupo de alumnos dispondrá de un ordenador para realizar los análisis, 3 grupos lo harán un día y los otros 3 el siguiente. 9:00 - 10:00

Manejo del programa de análisis FACSDIVA

10:00 -11:15

Estudios de viabilidad celular. Apoptosis y necrosis

11:15 - 11:30

Descanso

11:30 - 13:30

Inmunofenotipado

Práctica 2: Componentes de un citómetro y adquisición de muestras: Se realizará en el Servicio de Citómica de laUniversidad de Zaragoza, 3 grupos lo harán un día y los otros 3 el siguiente 10:00-12:00 Componentes del Citómetro ImageStream X, análisis simultáneo por citometría y microscopia.

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Práctica 3: Componentes de un citómetro y adquisición de muestras: Se hará en la Unidad de separación Celular y Citometría, son 2 módulos de una hora y media por donde los distintos grupos irán rotando, cada día lo realizarán 2 grupos. Componentes del citómetro FACSARIA, control de calidad en citometría y separación celular 15:30 - 18:30 Componentes de los citómetros FACSARRAY y GALLIOS. Análisis de ciclo celular por citometría. 18:30 - 19:00

Evaluación final

20 de octubre

Mañana

Tarde

Teoría

21 de octubre

22 de octubre

Práctica 1

Práctica 1

Grupos 4,5 y 6

Grupos 1,2 y 3

Grupo único

23 de octubre

Práctica 2

Práctica 2

Grupos 1,2 y 3

Grupos 4,5 y 6

Teoría

Práctica 3

Práctica 3

Práctica 3

Grupo único

Grupos 1 y 2

Grupos 3 y 4

Grupos 5 y 6

Coste de matrícula: 50 €

Lugar de celebración: Teoría grupo único y práctica 1: Sala Levi-Montalcini. Centro de Investigación Biomédica de Aragón (CIBA). Avda. San Juan Bosco,13. Planta 0.

Práctica 2 Unidad de Separación Celular y Citometría. Centro de Investigación Biomédica de Aragón (CIBA). Avda. San Juan Bosco,13. Planta A.

Acreditación Actividad solicitada para su reacreditación por la Comisión de Formación Continuada de las Profesiones Sanitarias de Aragón. (Nº Expediente: 02 0007 05 0014 – A. 3,6 Créditos)

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Coordinación Científica Javier Godino Unidad de Separación Celular y Citometria Servicios Científico Técnicos IIS Aragón Email: [email protected]

Delia Recalde Responsable de Recursos de Investigación Instituto de Investigación Sanitaria Aragón Instituto Aragonés de Ciencias de la Salud Email: [email protected]

Coordinación Técnica Daniel Bordonaba Oficina Técnica IIS Aragón. Formación www.iisaragon.es Email: [email protected]

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