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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 185 606 kInt. Cl. : A61K 31/165

11 N´ umero de publicaci´on: 7

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˜ ESPANA

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A61P 25/04

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 01107026.5 kFecha de presentaci´on: 21.03.2001 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 1 243 263 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 25.09.2002

T3

86 86 87 87

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54 T´ıtulo: Nuevo uso de una clase de compuestos pept´ıdicos para tratamiento de la alodinia u otros

tipos diferentes de dolor cr´ onico o fantasma.

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73 Titular/es: SCHWARZ PHARMA AG

Alfred-Nobel-Strasse 10 40789 Monheim, DE

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72 Inventor/es: Selve, Norma

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74 Agente: Lehmann Novo, Mar´ıa Isabel

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.05.2003

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 185 606 T3

01.05.2003

Aviso:

k k

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 185 606 T3 DESCRIPCION Nuevo uso de una clase de compuestos pept´ıdicos para tratamiento de la alodinia u otros tipos diferentes de dolor cr´onico o fantasma. 5

Antecedentes de la invenci´ on

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La presente invenci´on se refiere al nuevo uso de harkoserida y sus derivados para la preparaci´ on de composiciones farmac´euticas u ´ tiles para el tratamiento de la alodinia como s´ıntoma principal y singular de dolor independiente de la naturaleza de una enfermedad subyacente, pero que est´ a relacionado en muchos casos con dolor neurop´ atico, u otros tipos diferentes de dolor cr´ onico o fantasma. Los compuestos de la invenci´on son agentes conocidos u ´ tiles en terapia anticonvulsiva para trastornos del sistema nervioso central tales como epilepsia, ataque fulminante e isquemia cerebral.

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La presente invenci´on concierne al nuevo uso de un compuesto de la F´ ormula I siguiente para la preparaci´ on de composiciones farmac´euticas u ´ tiles para el tratamiento del dolor, particularmente para el tratamiento de trastornos de dolor cr´ onico y especialmente para el tratamiento de la alodinia como s´ıntoma principal y singular de dolor independiente de la naturaleza de una enfermedad subyacente, pero que est´ a relacionado en muchos casos con condiciones de dolor neurop´aticas, u otros tipos diferentes de dolor cr´onico o fantasma y tinnitus aureum. Los compuestos de acuerdo con la invenci´ on son los de la F´ ormula I

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(F´ormula I) 30

35

o una de sus sales farmac´euticamente aceptables, en la cual Ar es fenilo que est´a insustituido o sustituido con al menos un grupo halo;

40

Q es alquilo inferior que contiene 1-3 a´tomos de carbono y Q1 es metilo; se incluyen en la invenci´on diastereois´omeros y enanti´omeros de los compuestos de F´ormula I.

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Compuestos preferidos de la invenci´ on son aquellos compuestos de acuerdo con la F´ormula I en la cual los compuestos son un is´omero (R), (S), o (R,S). El compuesto m´as preferido de la invenci´ on es (R)-2-acetamido-N-bencil-3-metoxipropionamida o una de sus sales farmac´euticamente aceptables.

50

El dolor es una experiencia subjetiva y la percepci´on del dolor tiene lugar en partes particulares del sistema nervioso central. Usualmente, los est´ımulos nocivos (perif´ericos) se transmiten al Sistema Nervioso Central (CNS) con antelaci´on, pero el dolor no siempre est´a asociado con la nocicepci´on.

55

Existe una gran diversidad de tipos diferentes de dolor cl´ınico, que se derivan de diferentes mecanismos patofisiol´ ogicos subyacentes y que precisar´an enfoques de tratamiento diferentes. La percepci´on del dolor puede caracterizarse por tres tipos principales de dolor cl´ınico:

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- dolor agudo - dolor cr´onico 2

ES 2 185 606 T3 - dolor neurop´ atico

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El dolor cl´ınico agudo es t´ıpicamente resultado de inflamaci´ on o lesi´on de tejidos blandos. Este tipo de dolor es adaptable y tiene la funci´ on biol´ogicamente relevante de advertir y hacer posible que la curaci´on y reparaci´ on de una parte del cuerpo ya lesionada ocurra sin perturbaciones. Una funci´ on protectora se logra haciendo que el ´area lesionada/inflamada y el tejido circundante sean hipersensibles a todos los est´ımulos, de tal manera que se evite el contacto con cualquier est´ımulo externo. Los mecanismos neuronales que subyacen en este tipo de dolor cl´ınico est´an bastante bien comprendidos, y se dispone de medios farmacol´ogicos eficaces de control del dolor cl´ınico agudo mediante, v.g., F´ armacos Anti-Inflamatorios No Esteroidales (NSAIDs) hasta opioides dependiendo del tipo y alcance de la sensaci´ on. El dolor cl´ınico cr´onico aparece como anormalidades sensoriales prolongadas resultantes de una patolog´ıa perif´erica en curso tal como c´ancer o inflamaci´on cr´ onica (v.g. artritis) o puede ser independiente de los desencadenantes iniciales. Este u ´ltimo es inadaptable, no ofrece ventaja alguna de supervivencia y en muchos casos no se dispone de tratamiento eficaz alguno para el mismo. El dolor neurop´ atico est´ a causado por lesi´ on o infecci´ on de nervios sensoriales perif´ericos. Este tipo de dolor incluye, pero sin car´ acter limitante, dolor procedente de traumatismo de nervios perif´ericos, infecci´on por herpesvirus, diabetes mellitus, causalgia, avulsi´ on de plexos, neuroma, amputaci´ on de miembros, y vasculitis. El dolor neurop´ atico est´ a causado tambi´en por lesi´on nerviosa provocada por alcoholismo cr´onico, infecci´on por el virus de la inmunodeficiencia humana, hipotiroidismo, uremia, o deficiencias vitam´ınicas. El dolor neurop´ atico incluye, pero sin car´ acter limitante, dolor causado por lesi´on nerviosa tal como, por ejemplo, el dolor que padecen los diab´eticos. El dolor neurop´ atico exhibe dos mecanismos patofisiol´ ogicos diferentes que tienen que ser considerados: En primer lugar, la actividad incrementada de neuronas aferentes nociceptivas despu´es de la sensibilizaci´on de las neuronas (durmientes) (v.g., dolor inflamatorio, dolor debido a c´ ancer, dolor de cabeza, dolor de la parte inferior de la espalda, dolor visceral, migra˜ na) permaneciendo intacta la neurona nociceptiva aferente primaria, aunque la actividad del receptor est´ a modificada y se encuentran t´ıpicamente umbrales reducidos, aumento de las tasas de disparo y comienzo de o aumento de la actividad espont´anea. En segundo lugar, la actividad ect´ opica de neuronas nociceptivas aferentes consecutiva a lesiones de sus axones (v.g., dolor neurop´ atico perif´erico y central), estando deteriorada la neurona aferente primaria. Esto conduce a cambios irreversibles bioqu´ımicos, morfol´ ogicos y funcionales, perif´ericos y centrales. Por esta raz´on, la neuropat´ıa (perif´erica) se define generalmente como una enfermedad del sistema nervioso (perif´erico). Existen varias causas de neuropat´ıa humana con variabilidad considerable en los s´ıntomas y d´eficits neurol´ ogicos. Las neuropat´ıas dolorosas se definen como trastornos neurol´ ogicos caracterizados por la persistencia del dolor e hipersensibilidad en una regi´ on del cuerpo, del cual se ha deteriorado la inervaci´ on sensorial, pero el da˜ no de los nervios sensoriales no siempre produce dolor neurop´ atico, observ´andose usualmente p´erdida de sensaci´on m´ as bien que hipersensibilidad o dolor. A los trastornos somatosensoriales espec´ıficos Se hace referencia como alodinia (la estimulaci´on somatosensorial inocua evoca una sensaci´ on anormal de dolor intenso con car´acter radiante explosivo de duraci´ on de est´ımulo mayor como desencadenante), hiperalgesia (la estimulaci´ on nociva induce sensaciones dolorosas m´ as intensas y prolongadas), parestesia (sensaciones espont´aneas de rechazo pero no dolorosas, descritas como picaz´ on o “hormigueo”), disestesia (inducida tambi´en como sensaciones espont´ aneas anormales). Varios sucesos clave est´an reconocidos como sucesos patofisiol´ogicos comunes de estados anormales de dolor subsiguientes particularmente a la lesi´ on de nervios perif´ericos. As´ı, una descarga espont´ anea de alta frecuencia desde un sitio ect´opico va seguida por una sensibilidad incrementada de las neuronas de las astas dorsales y expansi´on del campo receptor, lo que se define en muchos casos como sensibilizaci´on central. Los analg´esicos comunes tales como los opioides y f´armacos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAIDs) mejoran s´ olo insuficientemente los s´ındromes de dolor cr´ onico anormal. En la b´ usqueda de reg´ımenes de tratamiento alternativos para producir un alivio satisfactorio y prolongado del dolor, se han ensayado corticosteroides, bloqueo de la conducci´on, glicerol, antidepresivos, anest´esicos locales, gangliosidos y electroestimulaci´ on, pero se han encontrado u ´tiles principalmente los anti-convulsivos contra 3

ES 2 185 606 T3 diversos tipos de condiciones de dolor neurop´ aticas, pareciendo ser de la m´axima eficacia en casos de sucesos parox´ısticos lancinantes, v.g. la neuralgia del trig´emino.

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Si la superactividad general y la activaci´ on de umbral bajo no conducida de las neuronas sensoriales se considera como uno de los s´ındromes principales de neuropat´ıa y sensaci´on neurop´ atica de dolor con una mecanoalodinia acusada como el s´ıntoma cl´ınico m´as discapacitante, la inhibici´ on selectiva de este suceso patofisiol´ogico en lugar de la inhibici´ on general de los est´ımulos nocivos de umbral alto (v.g., por anest´esicos locales) de la nocicepci´on sensorial normal proporciona ventajas claras. Es sabido que las condiciones enumeradas anteriormente se tratan deficientemente por los analg´esicos existentes actualmente en el mercado, tales como narc´oticos o f´ armacos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAID’s) debido a la eficacia insuficiente o efectos secundarios limitantes. Es un objeto de esta invenci´ on proporcionar un nuevo uso de compuestos de acuerdo con la F´ ormula I mencionada anteriormente y sus derivados para la preparaci´ on de composiciones farmac´euticas u ´ tiles para el tratamiento de la alodinia como un s´ıntoma mayor y singular de dolor independiente de la naturaleza de una enfermedad subyacente, pero que est´a relacionado en muchos casos con dolor neurop´ atico, u otros tipos diferentes de dolor cr´ onico o fantasma.

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Particularmente, es un objeto de esta invenci´ on proporcionar un nuevo uso de harkoserida para la preparaci´ on de composiciones farmac´euticas u ´ tiles para el tratamiento de la alodinia como un s´ıntoma de dolor mayor y singular independiente de la naturaleza de una enfermedad subyacente, pero que est´ a relacionado en muchos casos con dolor neurop´ atico, u otros tipos diferentes de dolor cr´ onico o fantasma.

25

La harkoserida, cuyo nombre qu´ımico es (R)-2-acetamido-N-bencil-3-metoxipropionamida es un derivado seleccionado del grupo de los derivados de amino´ acidos espec´ıficos.

30

Este grupo de sustancias se describe en los documentos US 5.378.729; US 5.654.301 y 5.773.475. Dichas sustancias exhiben actividad para el tratamiento de la epilepsia y el ataque fulminante. No obstante, no se da descripci´ on alguna en las referencias anteriores que haga obvia la presente invenci´on. Los compuestos de la presente invenci´ on pueden formar sales farmac´euticamente aceptables con ´acidos o bases tanto org´ anicos como inorg´anicos.

35

Por ejemplo, las sales de adici´ on de a´cido de los compuestos b´ asicos se preparan por disoluci´on de la base libre en una soluci´ on acuosa o acuoso-alcoh´olica u otros disolventes adecuados que contienen el ´acido apropiado, y aislamiento de la sal por evaporaci´ on de la soluci´on.

40

Ejemplos de sales farmac´euticamente aceptables son hidrocloruros, hidrobromuros, hidrosulfatos, etc., as´ı como sales de sodio, potasio y magnesio, etc.

45

Los compuestos de la presente invenci´ on pueden contener uno o varios a´tomos de carbono asim´etricos. La invenci´on incluye los diastereois´ omeros o enanti´omeros individuales, y sus mezclas. Los diastereois´omeros o enanti´omeros individuales se pueden preparar o aislar por m´etodos ya bien conocidos en la t´ecnica. De acuerdo con la invenci´ on, se prefiere que los compuestos se encuentren en la configuraci´on (R). Es muy preferido el compuesto (R)-2-acetamido-N-bencil-3-metoxipropionamida.

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Los compuestos de esta invenci´on se pueden sintetizar como se describe en los documentos USP 5.378.729; USP 5.654.301 y USP 5.773.475.

55

Los compuestos fabricados por los m´etodos de s´ıntesis se pueden utilizar en forma de composiciones farmac´euticas como agente en el tratamiento del dolor cuando se utiliza una cantidad eficaz de un compuesto de la F´ ormula I, junto con un veh´ıculo farmac´euticamente aceptable. El agente farmac´eutico puede utilizarse en un m´etodo para tratamiento de trastornos de este tipo en mam´ıferos, con inclusi´ on de humanos, que padecen dichos trastornos, por administraci´ on a tales mam´ıferos de una cantidad eficaz de los compuestos descritos anteriormente en forma de dosificaci´on unitaria.

60

El compuesto farmac´eutico, producido de acuerdo con la presente invenci´on, se puede preparar y administrar en una gran diversidad de formas de dosificaci´ on por v´ıas de administraci´ on oral o parenteral. Por ejemplo, estas composiciones farmac´euticas se pueden preparar en veh´ıculos inertes, farmac´euticamente 4

ES 2 185 606 T3

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aceptables, que son s´ olidos o l´ıquidos. Preparaciones en forma s´olida incluyen polvos, tabletas, gr´ anulos dispersables, c´ apsulas, sellos, y supositorios. Otras preparaciones en forma s´olida y l´ıquida podr´ıan producirse de acuerdo con m´etodos conocidos de la t´ecnica y administrarse por la v´ıa oral en una formulaci´ on apropiada, o por una v´ıa parenteral tal como inyecci´on intravenosa, intramuscular, o subcut´ anea, como una formulaci´ on l´ıquida. La cantidad de compuesto activo en una dosis de preparaci´ on unitaria puede modificarse o ajustarse desde 1 mg a aproximadamente 300 mg al d´ıa, basada en un paciente medio de 70 kg. Se prefiere un intervalo de dosis diaria de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 50 mg/kg. Las dosificaciones, sin embargo, pueden modificarse dependiendo del requerimiento de un paciente, la gravedad de la condici´ on que se est´e tratando, y el compuesto que se emplee. La determinaci´ on de la dosificaci´on apropiada para situaciones particulares est´a dentro de la experiencia en la t´ecnica. Los ejemplos pr´ acticos que siguen, seleccionados a partir de modelos animales espec´ıficos, muestran la actividad anti-dolor neurop´ atico de harkoserida y sus derivados en general, y la eficacia antialodinia de harkoserida y sus derivados en particular. 1. Ejemplo 1

20

Ensayo de la formalina en la rata La eficacia significativa y dependiente de la dosis de harkoserida pudo demostrarse en la fase tard´ıa del ensayo de la formalina en la rata.

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30

35

El ensayo de la formalina es un modelo de dolor t´ onico inducido qu´ımicamente en el cual se eval´ uan los cambios bif´ asicos del comportamiento nociceptivo y la plasticidad espinal/supraespinal de la nocicepci´ on se considera como una base molecular el dolor neurop´ atico particularmente durante la segunda fase (= tard´ıa) del ensayo, durante la cual son activos la mayor parte de los f´armacos utilizados cl´ınicamente contra el dolor neurop´ atico. Estas caracter´ısticas han dado como resultado que el ensayo de la formalina est´e aceptado como un modelo v´alido de dolor cl´ınico persistente. El compuesto se ensay´ o en lo referente a sus propiedades anti-nociceptivas por el uso del m´etodo de registro ponderado de comportamiento: Los animales que se mov´ıan libremente se sometieron a evaluaci´ on por observaci´on de la posici´ on de la pata posterior izquierda de acuerdo con un registro de evaluaci´ on en una escala de 0 a 3 antes y 10, 20, 30 y 40 min despu´es de la inyecci´on de 0,05 ml de formalina est´eril al 2,5 % bajo la piel en la superficie dorsal de la pata. La harkoserida, administrada por v´ıa intraperitoneal inmediatamente antes de la inyecci´on de formalina produc´ıa una reducci´on dependiente de la dosis del comportamiento nociceptivo inflamatorio t´ onico inducido por la formalina, como se muestra en la tabla 1 (registros de dolor ponderados ± error est´andar del valor medio (SEM), n = 11-12/grupo).

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TABLA 1 Registro de dolor ponderado, ensayo de la formalina, en la rata Tiempo despu´es de la inyecci´on de formalina y SPM 927

45

50

55

60

Dosis [mg/kg]

No. de animales

L´ınea base

10 min

20 min

30 min

40 min

0

11

0,00±0,00

0,30±0,16

0,93±0,21

1,84±0,19

2,10±0,24

5

12

0,01±0,01

0,31±0,11

0,78±0,23

1,47±0,20

1,46±0,19∗

10

11

0,00±0,00

0,42±0,17

0,33±0,16∗

1,02±0,27∗

1,05±0,19∗

20

12

0,00±0,00

0,48±0,18

0,57±0,14

0,78±0,18∗

1,02±0,24∗

40

12

0,00±0,00

0,12±0,05

0,10±0,04∗

0,09±0,06∗

0,12±0,06∗

5

ES 2 185 606 T3 ∗ = Diferencia significativa del veh´ıculo (ANOVA corregido para comparaciones m´ ultiples, p = 0,05). El t´ermino ANOVA significa An´ alisis de la Varianza. 5

Estos resultados soportan y confirman la actividad anti-dolor neurop´ atico formulada como hip´ otesis del compuesto. 10

15

Los datos aqu´ı consignados soportan y proporcionan la base cient´ıfica necesaria para la actividad observada anteriormente en el ensayo de las contorsiones y el ensayo de la formalina en el rat´ on. Los datos antiguos resultaban limitados debido al hecho de que el ensayo de las contorsiones se considera como un ensayo muy inespec´ıfico con algunos aspectos nociceptivos t´onicos inducidos qu´ımicamente, que da usualmente resultados positivos para todos los f´ armacos psicoactivos, relajantes musculares, etc., por lo que no son suficientemente espec´ıficos para reivindicar una actividad espec´ıfica. Adicionalmente, los resultados anteriores obtenidos en el ensayo de la formalina en el rat´on, carecen de evidencia clara de relaci´on con la dosis y por consiguiente de especificidad de los efectos observados para la harkoserida. Adicionalmente, la dosis u ´ nica y m´ axima que produc´ıa efectos significativos en la primera investigaci´on se encontr´o que era ya claramente t´oxica. Dado que los efectos t´ oxicos inclu´ıan cambios en el comportamiento, estos cambios relacionados con los f´armacos no pueden reivindicarse ya como antinociceptivos.

20

Por esta raz´on, u ´ nicamente los datos nuevamente consignados proporcionados en esta memoria se pueden considerar como un efecto antinociceptivo demostrado in vivo de la harkoserida, sirviendo la dependencia de la dosis como medida de la especificidad y mejora del comportamiento antinociceptivo, por no estar asociada con efectos t´oxicos. 25

Ejemplo 2 Lesi´ on por constricci´ on cr´ onica (CCI, modelo de Bennett) 30

35

40

La efectividad de la harkoserida en la reducci´ on del dolor cr´ onico espont´ aneo, la alodinia mec´ anica, y la hiperalgesia t´ermica se ensayaron utilizando el modelo de neuropat´ıa perif´erica de la lesi´on por constricci´on cr´ onica (CCI), uno de los modelos animales in vivo mejor caracterizados utilizados para estudiar el dolor cr´ onico debido a lesi´ on de nervios perif´ericos. En este modelo, se aplican ligaduras d´ebiles alrededor del nervio ci´ atico, lo cual produce hinchamiento axonal y una desaferenciaci´ on parcial manifestada como una p´erdida significativa pero incompleta de axones en la porci´on distal del nervio perif´erico. Uno de los comportamientos prominentes observados despu´es de la ligaci´on del nervio ci´ atico es la aparici´on de protecci´on de la pata posterior, que se considera como indicaci´ on de un dolor cr´ onico espont´ aneo en curso. El soporte para esta idea se deriva de informes de actividad neural incrementada de la m´edula espinal, y descarga neuronal espont´ anea incrementada en las neuronas del tracto espinotal´ amico y en el t´alamo ventrobasal en ausencia de estimulaci´ on perif´erica manifiesta. Adem´ as de la aparici´ on de comportamientos espont´aneos de dolor, se presentan varias anormalidades en el dolor provocado por el est´ımulo como resultado de la CCI, que incluyen hiperalgesia t´ermica y alodinia mec´anica. Se ha comunicado tambi´en que el desarrollo de estos dolores anormales provocados por el est´ımulo ocurren en a´reas situadas fuera del territorio del nervio lesionado, a´reas inervadas por nervios no lesionados.

45

50

55

60

Se realizaron ensayos de comportamiento para dolor espont´ aneo, hiperalgesia t´ermica, y alodinia mec´anica a fin de evaluar diferentes componentes del dolor neurop´ atico. Antes de cualquier procedimiento experimental se recogieron datos de la l´ınea base para cada ensayo; adicionalmente, todos los animales se ensayaron en cuanto al desarrollo de comportamientos de dolor cr´ onico 13-25 d´ıas despu´es de la cirug´ıa CCI, un d´ıa antes del d´ıa de la administraci´ on de veh´ıculo (0,04 ml de agua est´eril/10 g de peso corporal) o del f´ armaco, y despu´es de la administraci´on de veh´ıculo/f´ armaco. La secuencia de los ensayos fue (1) comportamiento espont´aneo relacionado con el dolor, (2) alodinia mec´ anica, (3) hiperalgesia t´ermica a fin de minimizar la influencia de un ensayo sobre el resultado del siguiente. Los procedimientos de ensayo y los resultados se presentan por separado para cada aspecto de dolor cr´ onico. Se administraron 0 (veh´ıculo, 0,04 ml/10 g de peso corporal), 5, 10, 20 o´ 40 mg/kg de SPM 927 (n = 7-23/grupo) por v´ıa intraperitoneal 15 minutos antes del primer ensayo de comportamiento. El dolor espont´ aneo (dolor continuo sin un est´ımulo externo aparente) de la pata ligada se evalu´o durante 5 min despu´es de un periodo de aclimataci´ on de 10 min por el uso de un registro de evaluaci´on (registro de comportamiento ponderado en una escala de 0-5).

6

ES 2 185 606 T3 La harkoserida no cambiaba el nivel de dolor espont´ aneo inducido por la lesi´ on de constricci´ on cr´ onica unilateral, como se muestra en la tabla 2 (registros de dolor ponderados ± SEM). TABLA 2 5

10

15

20

25

30

Nocicepci´ on espont´ anea, modelo CCI en la rata Dosis [mg/kg]

No. de animales

L´ınea base

Post-op

Post-op + f´ armaco

0

23

0±0

1,4±0,15

1,2±0,14

5

9

0±0

2,0±0,10

1,8±0,18

10

20

0,0019±0,0019

1,5±0,10

1,5±0,11

20

8

0±0

1,1±0,17

0,9±0,14

40

10

0,0004±0,0004

1,3±0,12

0,8±0,28

La hiperalgesia t´ermica se evalu´o por medio de la latencia de retirada en respuesta al calor radiantes aplicado a la superficie subplantar de la pata posterior ligada de la rata. En comparaci´ on con la latencia de la l´ınea base (s), una disminuci´on significativa en la latencia (postoperativa) de la retirada del pie en respuesta al est´ımulo t´ermico se interpret´o como indicativa de la presencia de hiperalgesia t´ermica despu´es de la lesi´on por constricci´ on cr´ onica. La dosis de harkoserida reduc´ıa con dependencia de la dosis la hiperalgesia t´ermica inducida por la lesi´on por constricci´ on cr´ onica como se muestra en la tabla 3 [latencias (s)±SEM]. Se observaron efectos significativos solamente a las dosis m´as altas ensayadas (20 y 40 mg/kg, i.p.) observ´andose el efecto m´aximo ya a 20 mg/kg, i.p. TABLA 3 Hiperalgesia t´ermica, modelo CCI en la rata

35

40

45

Dosis [mg/kg]

No. de animales

L´ınea base

Post-op

Post-op + f´ armaco

0

13

9,8±0,74

7,0±0,29

7,3±0,43

5

7

10,5±0,68

8,1±0,59

9,2±0,98

10

7

9,2±0,68

7,1±0,60

8,1±0,59

20

8

10,0±0,70

7,0±0,56

9,7±0,96∗

40

8

8,3±0,57

7,4±0,48

10,2±0,75∗

50

∗ = Diferencia significativa del veh´ıculo (ANOVA corregido para comparaciones m´ ultiples, p = 0,05). 55

60

La sensibilidad mec´anica y la alodinia de la pata posterior ligada de la rata se cuantificaron por la retirada brusca del pie en respuesta a los est´ımulos mec´anicos normalmente inocuos como se ha descrito previamente. La sensibilidad a los est´ımulos mec´anicos se ensay´o con un alg´ ometro de presi´on electr´onico calibrado de Von Frey, conectado a un sistema de recogida de datos por ordenador en l´ınea. Una disminuci´ on significativa en el periodo post-operativo comparada con la presi´ on de la l´ınea base (g/mm2) necesaria para provocar una retirada brusca del pie en respuesta a este est´ımulo mec´anico se interpreta como alodinia mec´anica.

7

ES 2 185 606 T3 La harkoserida reduc´ıa de manera dependiente de la dosis la intensidad de la alodinia mec´anica inducida por la ligaci´ on nerviosa unilateral como se muestra en la tabla 4 [presi´on (g/mm2)±SEM]. El an´ alisis por regresi´on mostr´ o una correlaci´on lineal positiva entre la dosis de harkoserida y el aumento en la cantidad de fuerza requerida para producir la retirada del pie. 5

TABLA 4 Alodinia mec´ anica, modelo CCI en la rata

10

15

20

35

No. de animales

L´ınea base

Post-op

Post-op + f´ armaco

0

20

41,6±2,20

18,8±2,09

20,2±1,90

5

11

53,6±3,35

16,4±2,56

21,8±2,34

10

17

42,9±2,55

21,2±2,13

29,2±2,85∗

20

8

46,1±2,62

24,7±2,78

39,6±3,62∗

40

9

48,4±3,84

23,9±2,23

43,0±5,48∗

∗ = Diferencia significativa del veh´ıculo (ANOVA corregido para comparaciones m´ ultiples, p = 0,05).

25

30

Dosis [mg/kg]

Estos resultados soportan y confirman la eficacia anti-alodinia formulada como hip´ otesis de la harkoserida. Ulteriormente, este efecto est´a relacionado adem´as con el dolor neurop´ atico y por consiguiente soporta el uso cl´ınico potencial del compuesto por mimetizar lo m´ as estrechamente posible la situaci´on cl´ınica del tratamiento sintom´ atico. Una prueba adicional de la especificidad del efecto anti-alodinia de la harkoserida se obtuvo por los resultados negativos en el ensayo de sacudidas de la cola que excluye la analgesia t´ıpica de tipo opioide del compuesto. Los datos antiguos obtenidos en ratones pudieron repetirse y confirmarse en una segunda especie, la rata, por medios adicionales de elecci´on m´ as apropiada de las dosis ensayadas: Ejemplo 3

40

45

50

55

60

Ensayo de sacudidas de la cola en la rata Se ensay´ o adicionalmente la harkoserida en cuanto a actividad potencial en la nocicepci´ on t´ermica medular aguda utilizando el ensayo de sacudidas de la cola. En este modelo de hiperalgesia t´ermica aguda medular/refleja se aplica calor radiante a la cola del animal aproximadamente a 2 cm de la punta y se eval´ ua autom´ aticamente el tiempo de latencia para la reacci´on de retirada por medio de un alg´ ometro, evit´andose la lesi´ on del tejido por un tiempo m´ aximo definido del est´ımulo. Este ensayo es utilizado ampliamente como ensayo para la eficacia anti-nociceptiva de los agentes farmacol´ ogicos y es altamente predictivo de la eficacia analg´esica aguda en humanos. Usualmente los analg´esicos puros de tipo opioide son los m´as activos; ni los adyuvantes como la amitriptilina ni los anti-epil´epticos, ni tampoco los NSAIDs (f´ armacos anti-inflamatorios no esteroidales) son activos. Los resultados para 20 y 40 mg/kg de harkoserida por v´ıa intraperitoneal se muestran en la tabla 5 [antinocicepci´on porcentual, calculada como [{(latencia post-f´ armaco) (latencia pre-f´armaco)}/{(latencia m´axima) - (latencia pre-f´armaco)} x 100]±SEM, n = 12/grupo]. Se determin´ o una l´ınea base o latencia de la sacudida de la cola pre-f´ armaco promediando 5 medidas consecutivas tomadas con 2 minutos de diferencia. Se administraron luego veh´ıculo (agua est´eril, 0,04 ml/10 g de peso corporal) o harkoserida, y se registraron las latencias de las sacudidas de la cola a intervalos de 10 minutos durante los 60 minutos siguientes. Incluso a dosis que proporcionaban el efecto m´aximo en el ensayo de la formalina en la rata (v´ease anteriormente), la harkoserida ten´ıa poco o ning´ un efecto sobre la latencia del reflejo de las sacudidas de la cola.

8

ES 2 185 606 T3 TABLA 5 Hiperalgesia t´ermica aguda, sacudidas de la cola en la rata Efecto anti-nociceptivo [ %] de diferentes dosis [mg/kg] de harkoserida intraperitoneal

5

Tiempo despu´es de SPM 927 [min]

0

20

40

10

-2,1±3,08

5,0±3,94

-1,6±12,82

20

-0,5±3,19

9,7±7,51

-4,3±14,04

30

4,4±4,71

9,7±2,37

-2,3±9,14

40

10,4±5,91

1,7±7,42

- 4,4±11,44

50

7,6±4,58

5,4±4,12

0,3±15,50

60

7,4±6,07

8,1±5,20

-5,5±14,11

10

15

20

25

Por consiguiente, no era detectable efecto anti-nociceptivo alguno de la harkoserida en el ensayo de las sacudidas de la cola, lo cual soporta el perfil formulado como hip´ otesis de la harkoserida con propiedades anti-alodinia altamente espec´ıficas y que no es activa en condiciones de dolor agudo.

30

35

40

45

50

55

60

9

ES 2 185 606 T3 REIVINDICACIONES 1. Uso de un compuesto que tiene la f´ormula (I) 5

(I) 10

15

en la cual Ar es fenilo que est´a insustituido o sustituido con al menos un grupo halo; Q es alcoxi inferior que contiene 1-3 a´tomos de carbono y Q1 es metilo

20

o de una de sus sales farmac´euticamente aceptables, para la preparaci´ on de una composici´ on farmac´eutica para el tratamiento de la alodinia como un s´ıntoma de dolor principal y singular independiente de la naturaleza de una enfermedad subyacente o dolor cr´ onico o fantasma. 25

2. Uso de acuerdo con la reivindicaci´on 1, en el cual el compuesto o una de sus sales farmac´euticamente aceptables se encuentra en la configuraci´on R. 3. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el cual el compuesto es en esencia enantiom´ericamente puro.

30

4. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el cual Ar es fenilo insustituido. 5. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el cual halo es fluoro. 35

6. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el cual Q es alcoxi que contiene 1-3 ´atomos de carbono y Ar es fenilo insustituido. 7. Uso de acuerdo con la reivindicaci´on 1, en el cual el compuesto de f´ ormula (I) es (R)-2-acetamidoN-bencil-3-metoxipropionamida o su sal farmac´euticamente aceptable.

40

8. Uso de acuerdo con la reivindicaci´on 7, en el cual el compuesto tiene sustancialmente pureza enantiom´erica. 45

9. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, para la fabricaci´on de un medicamento destinado al tratamiento de tinnitus aureum.

50

55

60

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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