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INFORME FINAL
B1N0 0€ am€
PROYECTO FONDECYT REGULAR
.J
3 años
1040873
DURACIÓN
MERO PROYECTO
Teresa Pelissier Serrano RUT
INVESTIGADOR RESPONSABLE
9786050
Av. Independencia 1027
FONO
DIRECUON
[email protected] E-mI
CONTENIDO
(MARQUE EL CASILL'LO QUE CORRESPONDA) FUE ENVIADO (FECHA) ____________________________ NO HAY ADJUNTO
Informe Final (en formulario)
________________ SERA ENVIADO (FECHA)
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Publicaciones
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Resumen de Tesis de Grado
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Información acerca de inventos y patentes
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Otros (especificar): Anexos Informe Incentivo Coop. Internacional (SI corresponde)
Firma Coinvestigadores Alejandro Hernández Claudio Infante
X
Firma Investigador Responsable
7 /
Teresa Pelissier
/\» -
____________________________
f_
Fecha:
13 /_3 /2007
CONTENIDO DEL INFORME FINAL 1. CUMPLIMIENTO DE LOS OB)ETIVOS PLANTEADOS EN EL PROYECTO.
Objetivos 1. Estudiar el efecto antinociceptivo y determinar la DE50 de antagonistas de los sitios de modulación del receptor NMDA (competitivos, no competitivos, NR2B), subunidad glicina, utilizando técnicas algesimétricas mecánico origen de (dolor mediante el test de Randall-Selitto y nocicepción química evocada por capsaicina) .
¿Cumplido?_____ Fundamentar el cumplimiento parcial o incumplimiento No Parcial Si U
O
O
______ ______________________________________
2. Estudiar el efecto antinociceptivo y determinar la DE50 de combinaciones de los antagonistas NMDA en los tests algesimétricos mecanico y químico, y definir el tipo de interacción mediante análisis isobolográflco. 3. Estudiar el efecto de antagonistas de los sitios de modulación del receptor NMDA (competitivos, no competitivos, glicina, subunidad NR2B) en la transmisión nociceptiva espinal de ratas monoartríticas y determinar las DE50 , mediante técnicas electrofisiológicas (registro del reflejo nociceptivo C y "wind-up" espinal).
O
O
efecto de el Estudiar 4. O O U antagonistas de combinaciones NMDA en la transmisión nociceptiva espinal de ratas monoartríticas, determinar sus DE50 y definir el tipo de interacción mediante análisis isobolográfico. _______ _______ ______ ____________________________________ 5. Determinar la expresión de óxido O O nítrico sintasa en sus isoformas nNOS, INOS y eNOS en médula regiones lumbar y espinal supramedulares de ratas normales y monoartríticas mediante la técnica de inmunodot biot.
de efecto el Estudiar 6. antagonistas NMDA en la expresión de óxido nítrico sintasa (isoformas nNOS, 1NOS y eNOS) en médula espinal lumbar de ratas normales y monoartríticas mediante la técnica de inmunodot blot. 7. Estudiar el efecto antinociceptivo y en la transmisión nociceptiva del moduladores de espinal receptor NMDA (ketamina) y de enzimas implicadas en su sistema de transducdón de señales (óxido nítrico sintasa, guanilato ciclasa soluble). 8. Estudiar el efecto antinociceptivo del agonista dopaminérgico D1/D apomorfina, y dilucidar el tipo de receptor implicado en este efecto. 9. Estudiar el efecto antinociceptivo de agmatina, antagonista del sitio de poliaminas y agonista del receptor imidazolínico en ratas con dolor crónico, así como su interacción con otros bloqueadores del receptor NMDA mediante análisis isobolográfico.
U
D
O
O
O
________ ______ _______ ______________________________________ Objetivo adicional que apareció durante O U el año 2005, sobre la base que existen los entre interacciones importantes sistemas dopaminérgicos y glutamatérgicos en el sistema nervioso central. U
O
O
Objetivo adicional que apareció durante
el año 2005 a través de la interacción científica con un equipo de la Universidad de Clermont-1, Francia. Agmatina es una molécula endógena de gran potencial clínico.
Otro(s) aspecto(s) que Ud. considere importante(s) en la evaluación del cumplimiento de los objetivos planteados en la propuesta original o en las modificaciones autorizadas por el Consejo.
II. RESULTADOS OBTENIDOS Describa brevemente los resultados obtenidos en el proyecto en un máximo de cinco páginas, tamaño carta, espacio seguido. Para cada uno de los objetivos específicos, descnba o resuma los resultados. Reladone las publicaciones y/o manuscritos enviados a publicación con los objetivos específicos. Incluya en anexos, la información de apoyo que estime pertinente y necesaria para la evaluación. * ------------
Objetivo N° 1. Estudiar el efecto antinociceptivo y determinar la DE de antagonistas de los sitios de modulación del receptor NMDA (competitivos, no competitivos, glicina, subunidad NR2B), utilizando técnicas algesimétricas (dolor de origen mecánico mediante el test de Randall-Selitto y nocicepción química evocada por capsaicina). En el test de dolor químico (capsaicina intraplantar) la administración intratecal de los antagonistas NMDA (antagonista no competitivo: ketamina; antagonista competitivo: ácido 3-(2carboxipiperazina-4) propil 1-fosfónico, (±)CPP; antagonista del sitio de poliaminas: N,N'-bis-(3aminopropil) ciclohexano-1,4-diamina, DCD; antagonista del sitio de glicina: ácido 5,7, di-cloro quinurénico, DCQ) produjo una disminución significativa importante de la conducta nociceptiva. Tanto ketamina como (±)CPP fueron más efectivos en las ratas monoartríticas comparado a las normales, de acuerdo a las DE obtenidas (Refs. 1.1., 3.2., 33, 4.1. y 4.2.). En este mismo test, la administración del antagonista del sitio de poliaminas del receptor NMDA, DCD, en la rata monoartrítica produjo también disminución dosis-dependiente del umbral nociceptivo, mientras que DCQ indujo un efecto antinociceptivo no dependiente de la dosis, lo que impidió determinar su DE50 (Anexo 1). En el test de dolor mecánico (presión de la pata, Randall-Selitto) la administración intratecal de los antagonistas NMDA (antagonista no competitivo: ketamina; antagonista competitivo: (±)CPP; antagonista del sitio de poliaminas: DCD; antagonista del sitio de glicina: DCQ) produjo una disminución moderada pero significativa de la conducta nociceptiva. Todos los antagonistas fueron más efectivos en la pata monoartrítica, en comparación a la pata normal. El orden de potencias, de acuerdo a las DE 25 , fue (±)CPP > DCD > ketamina > DCQ, tanto en la pata normal como en la monoartrítica (Refs. 1.1., 3.5. y Anexo 1).
Objetivo N° 2. Estudiar el efecto antinociceptivo y determinar la DE de combinaciones de los antagonistas NMDA en los tests algesimétricos mecánico y químico, y definir el tipo de interacción mediante análisis isobolográfico. En el test de dolor químico (capsaicina intraplantar), el análisis isobolográfico de la combinación ketamina/(±)CPP asociada en proporciones fijas determinadas por las DE 50 de cada fármaco, dio lugar a una sinergia supra-aditiva tanto en la pata normal como en la pata monoartrítica, aunque más activa en esta última (Refs. 1.1., 3.4.y 4.2.). En cambio, en el test de dolor mecánico (presión de la pata, Randall-Selitto), la combinación ketamina/(±)CPP asociada en proporciones fijas determinadas por las DE 25 de cada fármaco sólo originó una interacción aditiva en la pata normal y en la monoartrítica (Refs. 1.1. y 3.5.). A pesar de ello, la combinación fue más activa en la pata monoartrítica En este mismo test de dolor mecánico, la combinación (±)CPP/DCD determinada por las respectivas DE 25 resultó en sinergia supra-aditiva, posiblemente debido a que los antagonistas del sitio de poliaminas (como espermidina, y probablemente DCD) son capaces además de interaccionar con canales de potasio rectificadores, regulando así la excitabilidad de neuronas nociceptivas (Ref. 3.9.) Puesto que fue imposible determinar la DE25 para DCQ dado su efecto antinociceptivo independiente de la dosis, no se pudo realizar combinaciones que pudieran incluir a este fármaco.
4
Objetivo N° 3 Estudiar el efecto de antagonistas de los sitios de modulación del receptor NMDA (competitivos, no competitivos, glicina, subunidad NR2B) en la transmisión nociceptiva espinal de ratas monoartríticas mediante técnicas electrofisiológicas (registro del reflejo nociceptivo C y "wind-up" espinal), y determinar el orden de potencias. Los estudios electrofisiológicos señalaron que la administración intratecal de los antagonistas NMDA (antagonista no competitivo: ketamina; antagonista competitivo: (±)CPP; antagonista del sitio de poliamirias: DCD; antagonista del sitio de glicina: DCQ) modificaron diferencialmente el reflejo nociceptivo C y el wind-up espinal, con un efecto antinociceptivo dosis-dependiente de magnitud variable: (±)CPP > DCD > ketamina > DCQ = O (de acuerdo al orden de potencias determinado por la DE 12.5 ). En efecto, en las ratas monoartríticas el reflejo C presentó elevada sensibilidad a (±)CPP, sensibilidad que se incrementó aún más en el wind-up; en cambio, tanto el reflejo C como el wir,d-up presentaron una sensibilidad moderada a DCD, lo que indica una baja capacidad antinociceptiva de los antagonistas del sitio de poliaminas; por su parte, la sensibilidad del reflejo C fue pobre frente a ketamina, sensibilidad que mejoró sólo moderadamente en el wind-up; finalmente, DCQ no presentó actividad antinociceptiva. Se concluye que la utilización de moduladores de los distintos sitios del receptor NMDA frente a dolor artrítico ejerce efectos antinociceptivos en el rango moderado a nulo, los cuales podrían eventualmente incrementarse mediante combinaciones de dosis subanalgésicas. (Refs. 3.13. y 4.3.).
Objetivo N° 4. Estudiar el efecto de combinaciones de antagonistas NMDA en la transmisión nociceptiva espinal de ratas monoartríticas, determinar el orden de potencia, y definir el tipo de interacción mediante análisis isobolográfico. Mediante el registro del reflejo nociceptivo C, se estudió las tres combinaciones posibles entre los antagonistas NMDA: ketamina/(±)CPP, (±)CPP/DCD, y ketamina/DCD. No pudieron evaluarse combinaciones incluyendo DCQ, por cuanto este fármaco presentó un efecto nulo en los parámetros estudiados y por lo tanto no pudo definirse una DE apropiada. El análisis isobolográfico de las tres combinaciones estudiadas, asociadas en proporciones fijas determinadas por las DE 12 . 5 de cada fármaco, dio lugar sólo a una interacción aditiva en la capacidad depresora de los fármacos sobre el reflejo C evaluado en ratas monoartríticas, lo que indica una incapacidad para obtener sinergia mediante estas drogas en dolor fásico (baja frecuencia) (Refs. 4.4. y Anexo 2). En términos generales, estos resultados concuerdan con los obtenidos mediante el test de presión de la pata, un test de dolor fásico, donde las asociaciones de fármacos son predominaritemente aditivas (ver Objetivo N° 2).
Objetivo N° 5. Determinar la expresión de óxido nítrico sintasa en sus isoformas nNOS, INOS y eNOS en médula espinal lumbar y regiones supramedulares de ratas normales y monoartríticas mediante la técnica de inmunodot biot. En las ratas controles solo se detectó la presencia de nNOS a nivel espinal, donde las concentraciones relativas a nivel de la médula dorsal parecen ser más altas que las observadas a nivel ventral. Sin embargo, las ratas monoartríticas presentaron las tres isoformas de la enzima en diferentes concentraciones relativas, siendo más expresada la nNOS. Interesantemente, las tres isoformas de NOS se expresaron bilateralmente en el cuerno dorsal de la rata monoartrítica, así como a niveles supramedulares (tálamo, corteza sensoriomotora, hipocampo y caudado). Interesantemente, en la cuarta semana post-inducción de la artritis la expresión de nNOS fué máxima mientras que las expresiones de NOS y eNOS fueron mínimas (Refs. 1.2., 1.3., 3.6. y 3.11). Se estudió además la expresión diferencial entre ratas mono y poliartríticas, observándose que en la médula dorsal de estas últimas, al igual que en las ratas monoartríticas, se expresaron las tres isoformas de la NOS. Los niveles más altos de NOS fueron detectados en las ratas poliartríticas, sugiriendo que la expresión de esta isoforma está vinculada a procesos inflamatorios
más intensos. Los niveles de eNOS muestran una tendencia similar, sin alcanzar a ser significativa. Los niveles de nNOS fueron significativamente más bajos en las ratas poliartríticas que en las monoartríticas, lo que puede corresponder a un cambio compensatorio a los aumentos de iNOS (y eventualmente de eNOS) (Ref. 3.10.). Objetivo N° 6. Estudiar el efecto de antagonistas NMDA en la expresión de óxido nítrico sintasa (isoformas nNOS, NOS y eNOS) en médula espinal lumbar de ratas normales y monoartríticas mediante la técnica de inmunodot blot. En las ratas monoartríticas, la administración intratecal de ketamina y (±)CPP produjo una disminución de la nNOS acompañada de un aumento de las isoformas eNOS e iNOS a nivel de las astas dorsales de la médula espinal, cambios que estaban ya presentes a las 6 horas postinyección pero que perduraron por más de 24 horas . Estos resultados sugieren que el bloqueo competitivo y no competitivo de tos receptores NMDA en la médula espinal genera mecanismos regulatorios complejos de larga duración, genómicamente mediados, en la expresión de las isoformas de NOS. Estos cambios pueden tener gran relevancia los mecanismos nitridérgicos neuronales y gliales involucrados en la fisiopatología de la monoartritis y en la respuesta farmacológica de los cuadros artríticos frente a fármacos que ¡nteractúan con los receptores NMDA y las cascadas de señales asociadas (Refs. 1.2. y 3.7.). En cuanto a la administración de DCD, éste generó una caída sostenida bilateral de la isoforma nNOS en la médula dorsal en los grupos de ratas monoartríticas a las 6 y 24 hrs, sin producir cambios estadísticamente significativos de la isoforma INOS. Respecto de la eNOS, DCD produjo un aumento estadísticamente significativo en el grupo a las 6 hrs para luego retornar, a las 24 hrs, a los niveles basales de las ratas monoartríticas de referencia (Anexo 3). No se estudió DCQ por su escaso efecto antinociceptivo. Objetivo N° 7. Estudiar el efecto antinociceptivo y en la transmisión nociceptiva espinal de la administración crónica de moduladores del receptor NMDA (ketamina, (±)CPP, DCD) y de fármacos inhibidores de enzimas implicadas en su sistema de transducción de señales (óxido nítrico sintasa, guanilato ciclasa soluble). Debido a que en dolor crónico es necesario administrar analgésicos en forma sostenida, se estudió el efecto antinociceptivo de diversos antagonistas NMDA administrados crónicamente durante 14 días mediante minibombas osmóticas. Ketamina (antagonista NMDA no competitivo), Nt-nitro-Larginine methyl ester, L-NAME (inhibidor de óxido nítrico sintasa) y azul de metileno (inhibidor de guanilato ciclasa soluble) por vía intraperitoneal, redujeron significativamente y durante todo el tratamiento los umbrales de dolor mecánico y la actividad wind-up en la pata monoartrítica, sin producir efecto antinociceptivo en la pata contralateral sana (Ref. 1.4). Por su parte, el bloqueo crónico de receptores NMDA mediante administración intratecal continuada (14 días) de ketamina, ácido 3-(2-carboxipiperazina-4) propil 1-fosfónico, (±)CPP (anatagonista NMDA competitivo), y N,N'-bis-(3-aminopropil) ciclohexano-1,4-diamina, DCD (antagonista del sitio de poliaminas del receptor NMDA), redujo significativamente los umbrales nociceptivos mecánicos en la pata monoartrítica, suprimiendo la hiperalgesia, y fue capaz de mantener la eficacia antinociceptiva a lo largo del tratamiento, sin modificar los umbrales nociceptivos mecánicos en la pata sana. En el wind-up espinal evocado por estimulación de la pata monoartrítica, la administración intratecal crónica de ketamina, (±)CPP y DCD fue capaz de reducir el efecto que perduró durante los 14 días de tratamiento. Este resultado es consistente con los resultados algesimétricos, y confirma que los receptores NMDA espinales mantienen su sensibilidad durante la totalidad del tratamiento (Anexo 4).
Objetivo N° 8. Estudiar el efecto antinodceptivo del agonista dopaminérgico D1/D2 apomorfina, y dilucidar el tipo de receptor Implicado en este efecto. La apomorfina indujo una respuesta bifásica, produciendo hiperalgesia a bajas dosis y efecto antinociceptivo a altas dosis, en los test de nocicepdón térmica (inmersión de la cola), mecánica (presión de la pata) y química (formalina), siendo el más sensible el dolor de tipo químico (dolor tónico). El efecto antinociceptivo fue revertido por el antagonista D 2 sulpinde pero no por el antagonista D2 periférico domperidona. Aunque es posible que los efectos antinociceptivos observados sean debidos a la activación de receptores dopaminérgicos D 2 a nivel espinal, es más probable que ellos sean consecuencia de efectos en receptores situados en el cerebro anterior, donde neuronas mesolímbicas que nacen del área tegmental ventral y que proyectan al núcleo accumbens juegan un rol importante en la supresión selectiva del dolor tónico. En esta región cerebral existen importantes interacciones entre los sistemas dopaminérgicos y glutamatérgicos que merecen atención futura (Re!. 1.5., 3.8. y 3.12.). Objetivo N° 9. Estudiar el efecto antinociceptivo de agmatina, antagonista del sitio de poliaminas y agonista del receptor imidazolinico en ratas con dolor crónico, así como su interacción con otros bloqueadores del receptor NMDA mediante análisis lsobolográflco. Agmatina intratecal fue ineficaz en los tests de alodinia táctil (test de von Frey), alodinia térmica (test de inmersión de la cola) y de hiperalgesia mecánica (test de presión de la pata) en ratas normales; sin embargo suprimió en forma dosis-dependiente tanto la alodinia como la hiperalgesia en ratas con dolor neuropático (diabéticas). Este efecto inhibitorio fue suprimido por un inhibidor del receptor imidazolínico pero no por bloqueo del receptor alfa2 y oploide. El análisis isobolográfico reveló una sinergia supra-aditiva de la asociación agmatina/CPP y solo una sinergia aditiva para la combinación agmatina/L-NAME y agmatina/morfina. Estos resultados ponen de relevancia la importancia de combinaciones de ligandos para diversos sitios del receptor NMDA, así como de asociaciones con fármacos que modulan los sistemas nitridérgicos asociados (Re!. 1.6.).
III. PRODUCTOS GENERADOS POR EL PROYECTO En esta sección debe induir todo documento o material cuyo contenido corresponda substancialmente a los objetivos del proyecto que se Informa y en los que se explicite el N° del proyecto FONDECYT. Aténgase a los formatos que se incluyen para cada tipo de producto generado. Sólo adjunte copia de los documentos no enviados previamente a FONDECVT. $1 Ud. tiene un proyecto de Incentivo a la Cooperación Internacional, destaque con (*) las publicaciones a.neradas como oroducto del mismo continuación de las que corresponden al Regular
1. Artículos en revistas científicas nacionales o extranjeras con Comité Editorial. 1. Antlnocíceptive effect and interaction of uncompetitive and competítive NMDA receptor antagonísts upon capsaicin and paw _____________________ pressure testing in normal and monoarthritic rats Pellssier T, Infante C, Constandil L, Espinosa J, De Lapeyra C and Hernández Autor(es) A. Nombre Completo de la PaIn Revista.
Título del Artículo
Mo:_______ Vol. ______ N° _______ Pág. Ref. bibliográfica O En preparación Estado de la publicación a O Publicada/En O Aceptada U Enviada la fecha.* Prensa Otras fuentes de financiamiento, si las hay ______________________________________________________________ 2. Expression of nitnc oxide synthase isoforms in spinal cord of monoarthritic rats: Effect of competitive and uncompetitive NMDA antagonists. _____________________ Infante C, Díaz M, Hernández A, Constandil L and Pellssier T Autor(es) Titulo del Artículo
n1ibre Completo (la la
Arthritis Research & Therapy
Mo:______ Vol. _____ N° ______ Pág. Ref. bibliográfica O En preparación Estado de la publicación a O Publicada/En O Aceptada U Enviada la fecha.* Prensa Otras fuentes de financiamiento, si las hay ___________________________________________________________ Título del ArtIculo
3. Expression of neuronal, inducible and endothelial isoforms of nitric oxide synthase ¡n spinal cord and supraspinal structures during _____________________ development of adjuvant-induced arthritis in the rat. Infante C, Díaz M, Hernández A, Constandil L and Pelissier T Autor(es) Nombre completo de la Revista. Año:_______ Vol. ______ N° _______ Pág. Ref. bibliográfica Estado de la publIcación a O publicada/En O Aceptada U En preparación O Enviada la fecha.* Prensa Otras fuentes de financiamiento, SI las hay ______________________________________________________________
litulo del Artículo
4. Antinociceptíve effects of long-term administration of ketamine, LNAME and mettiylene blue in monoarthritic rats
Autor(es)
Pelissier T, Alvarez P, Constandil L, Laurido C, Infante C, Hodar MP and Hernández A. European Joumal of Neurosdence
Nombre Completo de la
Mo:_______ Vol. ______ N° _______ Pág. Reí. bibliográfica Estado de la publicación a O Publicada/En O Aceptada • Enviada la fecha.* Prensa Otras fuentes de financiamiento, si tas hay
O En preparación
Titulo del ArtIculo
5. Biphasic effect of apomorphine on rat nodception and effect of dopamíne D2 receptor antagonists
Autor(es)
Pelissier T, Laurido C, Hernandez A, Constandil L and Eschalier A.
Nombre Completo de la
European Joumal of Pharmacology
Vol. 546 Pág. 40-47 Mo: 2006 O En preparación Estado de la publicación a • Publicada/En O Aceptada O Enviada la fecha. * Prensa Otras fuentes de DICYT 020443LF financiamiento, si las hay ________________________________________________________________ Ref. bibliográfica
Titulo del ArtIculo
6. Agmatine induces anti-hyperalgesic effects in diabetic rats and a superadditive interaction wlth D-CPP, a NMDA-receptor antagonist.
Courteix C, Pnvat AM, Pélissier T,Hernandez A, Eschalier A and Autor(es) _____________________ Fialip). Nombre Completo de la Pain Revista. Año:_______ Vol. ______ N° _______ Pág. Reí. bibliográfica O En preparación Estado de la publicación a O Publicada/En O Aceptada • Enviada la fecha.* Prensa Otras fuentes de financiamiento, si las hay ______________________________________________________________ Marque con una "X" lo que corresponda. Para trabajos En Prensa/Aceptados/Enviados adjunte copia de carta de aceptación o de envío.
2. Otras publicaciones/productos.
Titulo Tipo de publicación o producto 1.rqu. con una
COfleSPOd,d
X' So qu.
[] Monografía EJ Ubro O Capítulo de Ubro [] Mapa p Exposición de Arte Otro. Especificar:
O [] o O
SeminarIo/Taller/Curso Informe Técnico Software Patente
Autor(es) Editor(es) (Libro. o Capitulo.
de Libro.)
Nombre de la Edltorlal/ Organización Lugar y Fecha de PublIcación
País:______________________ audad: _____________________ Fecha: _______________________
Titulo O Monografía O Ubro EJ Capítulo de Ubro P(atque con una "Xo qu. O Mapa _______________________ EJ Exposición de Arte Otro. Especificar: ilpo de publicadón o producto
EJ Seminario/Taller/Curso EJ Informe Técnico O Software EJ Patente
Autor(es) Editor(es) (Ubro. o CapitUlO.
deUbro.)
Nombre de la Editorlal/ Organización Lugar y Fecha de Publicación País:_______________________ Ciudad: ______________________ Fecha: _______________________
lo
3. Presentaciones a Congresos Nacionales e Internacionales.
Adjunte copia del resumen o texto de la ponencia y de la tapa del libro de Resúmenes, si no la ha enviado previamente.
1. Antinociceptive effects of long-term administration of ketamine, LNAME_and_methylene_blue_in_monoarthntic_rats. _______________ Pelissier T, Alvarez P, Paeile C, Constandil L, Infante C, Hernández A. Autor(es)
Titulo de la PonencIa
Nombre del Congreso FENS Forum 2004, Federation of European Neuroscience Societies. FENS ________________ Forum Abstracts, vol 2, 2004. Poster 243. Abstract A192.26. Fecha: 10-14 Julio 2004 Ciudad: Lisboa País: Portugal Lugar y Fecha Titulo de la PonencIa 2. Efecto antinociceptivo de (±)CPP, antagonista competitivo del receptor _________________ NMDA, en el test de capsaicina Intraplantar en la rata. Hernández A, De Lapeyra C, Constandil L, Infante C, Pelissier T. Autor(es) Nombre del Congreso X)(VI Reunión Anual de la Sociedad de Farmacología de Chile. Pag. 76, ________________ Poster N° 24. Ciudad: Quinamávida Fecha:3-5 Octubre 2004 País: Chile Lugar y Fecha Titulo de la Ponenda 3. Efecto antinociceptivo comparativo de ketamina en los tests de _________________ capsaicina_oral_e_intraplantar_en_la_rata. Pelissier T, De Lapeyra C, Paeile C, Infante C, Hernández A. Autor(es) NombredelCongreso XXVI Reunión Anual de a Sociedad de Farmacología de Chile. Pag. 77, ________________ Poster N° 25. Ciudad: Quinamávida Fecha:3-5 Octubre 2004 País: Chile Lugar y Fecha 4. La asociación ketamina y (±)CPP, antagonistas NMDA, produce efecto ________________ supraaditivo en nocicepción química en rata normal y monoartrítica Pelissier T, Paeile C, Infante C y Hernández A Autor(es)
Titulo de la PonencIa
Nombre del Congreso XXVII Congreso Sociedad de Farmacología de Chile. Poster N°34. lugar y Fecha
País: Chile
f
Ciudad: Santiago
Fecha: 17-18 Nov-2005
iltulo de la PonencIa 5. La asociación ketamina y (±)CPP, antagonistas NMDA, no produce ________________ efecto supraaditivo en nocicepción mecánica en rata monoartrítica Autor(es) Hernández A, Infante C y Pelissier T. Nombre del Congreso XXVII Congreso Sociedad de Farmacología de Chile. Poster N°35. Lugar y Fecha
País: Chile
Ciudad: Santiago
11
tFecha: 17-18 Nov-2005
Titulo de la Ponenda 6. Probable efecto pronociceptivo de la isoforma neuronal de la óxido _________________ nítrico sintasa en la médula espinal lumbar de ratas monoartríticas Díaz M, Infante C, Leiva), Hernández A y Pelisser T. Autor(es) Nombre del Congreso XXVII Congreso Sociedad de Farmacología de Chile. Poster N°36. Lugar y Fecha
País: Chile
Ciudad: Santiago
Fecha: 17-18 Nov-2005
Titulo de la PonencIa 7. Efecto de la administración intratecal del antagonista (±) CPP sobre los niveles de la enzima óxido nítrico sintasa en la médula espinal lumbar de _________________ ratas monoartríticas Infante C, Díaz M, Hernández A y Pelissier T. Poster N°37. Autor(es) Nombre del Congreso XXVII
Lugar y Fecha
Congreso Sociedad de Farmacología de Chile
País: Chile
Ciudad: Santiago
Fecha: 17-18 Nov-2005
Titulo de la Ponenda 8. Rol de los receptores dopaminérgicos D2 en antinocicepción: estudio ________________ en la rata Laurido C, Constandil L, Hernández A y Pelissier T Autor(es) Nombre del Congreso 1 Congreso Sociedad Chilena de Neurociencia. Resumen CP34. Lugar y Fecha
País: Chile
Ciudad: Santiago
Fecha: 1-2 Dic-2005
Título de la PonencIa 9. Association of the NMDA antagonists DCD and (±)CPP produce superadditive effect on mechanical nociception in monoarthritic rats. Autor(es)
Hernández A., Constandil L., Bilbeny N. and Pelissier T.
Nombre del Congreso FENS Forum 2006, Federation of European Neuroscience Societies. FENS _______________ Forum Abstracts, vol 3, 2006. Poster board 25. Abstract Al 10.7 Fecha: 8-12 JulIo-2006 Ciudad: Viena País: Austria Lugar y Fecha Título de la PonencIa ________________
Autor(es)
10. Expresión de la enzima óxido nítrico sintasa en médula espinal lumbar
de_ratas_monoartríticas_y_poliartríticas. Pelissier T., Díaz M., Leiva J., Hernández A. e Infante C.
Nombre del Congreso )(XVIII Congreso Sociedad de Farmacología de Chile. Pag. 54. Resumen _______________ P- 16 Fecha: 20-22 Agos -2006 Ciudad: Olmué País: Chile Lugar y Fecha
12
Título de la PonencIa 11. Curso temporal de la expresión de la enzima óxido nítrico sintasa en ________________ ratas con monoartritis de 2, 4 y 6 semanas de evolución. Infante C., Díaz M, Hernández A y Pelissier T. Autor(es) Nombre delCongreso XXVIII Congreso Sociedad de Farmacología de Chile. Pag. 55. Resumen _________________ P- 17 Fecha: 20-22 Agos -2006 Ciudad: Olmué País: Chile Lugar Fd 12. Effects of dopamine modulating drug son nociceotion induced by mechanic, thermic and chemical tests: study on the rat _________________ Laurido C, Constandíl L, Hernández A y Pelissier T Autor(es) Nombre del Congreso 2do. Congreso Sociedad Chilena de Neurociencia. Resumen N° C123. Lugar y Fecha
País: Chile
Ciudad: Curicó
Fecha: 27-29 Sept -2006
13. Bloqueo farmacológico de diferentes sitios de modulación del receptor NMDA a nivel espinal en un modelo experimental de monoartritis. ________________ Evaluación_electrofisiotógica Autor(es) Vergara A, Davanzo S, Hernández A, ConstandO L, y Pelissier T
Título de la PonencIa
Nombre del Congreso XLIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Chile. Pag. R-138, _______________ Resumen 195. Fecha: 22-25 Nov-2006 Ciudad: Pucón País: Chile Lugar y Fecha
13
4. Tesis y/o Memorias en ejecución y/o terminadas en el marco del proyecto. Adjunte copla del resumen no informado anteriormente y certificación de aprobación, si corresponde.
Titulo de la TesIs
1. Estudio comparativo del efecto antinociceptivo de ketamlna y (±)CPP, antagonistas de distintos sitios de modulación del receptor NMDA en ratas
Nombre y Apellidos del/ de los Alumno(s) Y Tutor
Alumno: Carolina De Lapeyra Palma
Titulo /Grado alcanzado Institución, Facultad,
Cirujano Dentista
Lugar y Fecha
País: Chile Fecha de Inicio: Mayo 2004
Departamento
Tutor: Teresa Pelissier Serrano Universidad de Chile, Facultades de Medicina y de Odontología, Programa de Farmacología Molecular y Clínica. Ciudad: Santiago Fecha de Término: Noviembre 2004
Título de la TesIs
2. Efecto antinociceptivo e interacción sinérgica, de un antagonista competitivo y uno no competitivo del receptor NMDA en un modelo de dolor crónico en rata.
Nombre y Apellidos del /de los Alumno(s) Y Tutor
)eannette Espinosa Aravena
TituIo/ Grado alcanzado Institución, Facultad,
Cirujano Dentista
Lugar y Fecha
País: Chile Fecha de Inicio: Marzo 2005
Departamento
Tutor: Teresa Pelissier Serrano Universidad de Chile, Facultades de Medicina y de Odontología, Programa de Farmacología Molecular y Clínica. Ciudad: Santiago Fecha de Término: Diciembre 2005
Titulo de la TesIs
3. Evaluación electrofisiológica del bloqueo farmacológico de los diferentes sitios de modulación del receptor NMDA a nivel espinal en __________________ un_modelo_de_dolor_crónico_benigno_en_rata. Alumno: Soledad Davanzo Friedenthal Nombre y Apellidos del/ de los Alumno(s) Tutor: Teresa Pelissier Serrano Y Tutor Titulof Grado alcanzado Institución, Facultad,
Cirujano Dentista
Lugar y Fecha
País: Chile Fecha de Inicio: Marzo 2005
Departamento
Universidad de Chile, Facultades de Medicina y de Odontología, Programa de Farmacología Molecular y aínlca.
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Ciudad: Santiago Fecha de Término: Marzo 2006
Titulo de la TesIs
4. Efecto antinociceptivo e interacción de un antagonista competitivo y uno no competitivo del receptor NMDA en un modelo de dolor crónico _________________ en rata Nombre y Apellidos Andrea Vergara Padilla del ide los Alumno(s) Y Tutoi Tutor: Teresa Pellssler Serrano TItulo! Grado Médico Veterinario alcanzado Institución, Facultad, Universidad de Chile, Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias Departamento Escuela de Ciencias Veterinarias Lugar y Fecha
País: Chile Fecha de Inicio: julio2005
Ciudad: Santiago Fecha de Término: Enero 2007
IV. OTROS LOGROS DEL PROYECTO. Describa, si las hay, actividades tales como: • Estadías de Investigación • Formación de recursos humanos exceptuando lo reportado en el ítem 4. • Cualquier otro logro no contemplado en los ítem anteriores y que Ud. quiera destacar Durante el año 2005, entre el 13 de Junio y el 7 de Agosto, se realizó una estadía de investigación en el Laboratoire de Pharmacologie Fondamentale , Faculté de Pharmacie, Université de Clermont 1, Clermont-Ferrand, Francia, laboratorio especializado en estudios experimentales fisiopatológicos y farmacológicos en dolor crónico. De esta Interacción nació un objetivo adicional del proyecto (Objetivo N° 9): Estudiar el efecto antinocicep-tivo de agmatina, antagonista del sitio de poliaminas y agonista del receptor imidazolínico en ratas con dolor crónico, así como su interacción con otros bloqueadores del receptor NMDA mediante análisis isobolográfico. Como resultado de esta interacción se originó una publicación que ha sido recientemente enviada para su publicación a la revista Pain (Ref. 1.6.), y una nueva invitación para continuar las colaboraciones durante el año 2007.
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y. RESUMEN (NO DEBE EXCEDER ESTE ESPACIO EN LETRA ARIAL 10) Describa en forma precisa y breve el tópico general del proyecto, sus metas y objetivos y los resultados alcanzados. Utilice un lenguaje apropiado para la comprensión del público no especialista en el tema. Esta informadón podrá ser difundida. El dolor crónico permanece intratable en una significativa proporción de pacientes debido a que es en general refractario a los tratamientos farmacológicos tradicionales. Desde hace un tiempo ha surgido la ketamina, un antagonista no competitivo del receptor NMDA, como un fármaco capaz de reducir el dolor en diversos síndromes dolorosos crónicos episódicos tales como miembro fantasma, neuralgia post-herpética, neuralgia trigeminal y dolor neuropático. Estos resultados clínicos están avalados por numerosos artículos sobre el efecto de los antagonistas de receptores NMDA y sus mecanismos asociados de transducción en modelos de dolor crónico experimental. Sin embargo, a pesar que los receptores NMDA y la cascada de mediadores intracelulares de otras regiones del sistema nervioso central experimentan notables cambios frente a manipulaciones farmacológicas crónicas, los efectos sobre la posible interacción en los sitios de modulación del receptor NMDA primero aguda y luego crónica no han sido estudiados en modelos animales de dolor crónico. Este conocimiento es de suma importancia para las expectativas de éxito de tratamientos prolongados de dolor crónico en clínica utilizando agentes que ínteractúan con la neu rotrasmisión glutamatérg ica. En este contexto, el objetivo del presente proyecto fue estudiar en ratas monoartríticas (modelo experimental de dolor crónico) mediante técnicas algesimétricas, electrofisiológicas y neuroquímicas, el efecto del bloqueo farmacológico de los sitios de modulación del receptor NMDA y de tas interacciones entre ellos, en cuanto a: (i) los cambios en el tiempo de la efectividad antinociceptiva de esas manipulaciones farmacológicas agudas y crónicas (tests de nocicepción mecánico y químico), y (u) los cambios asociados en la transmisión nociceptiva espinal (estudios mediante el reflejo nociceptivo C, y estudios de wind-up espinales). El estudio propuesto se basó en la hipótesis que la acción farmacológica sobre diferentes sitios de modulación del receptor deberían producir un efecto antinoceceptivo sinérgico, el que a su vez no debería modificar en el tiempo la efectividad antinociceptiva de estos agentes ya que se pueden utilizar dosis pequeñas en cada sitio y de esa manera no producir up-regulation. Los resultados pusieron en evidencia que: - Los antagonistas estudiados (ketamina, (±)CPP, DCD, DCQ) fueron más efectivos en dolor persistente (nocicepcióri química) que en dolor fásico (determinación de umbrales en nocicepción mecánica), siendo más activos en ratas monoartríticas que en normales - Las combinaciones de estos antagonistas fueron supra-aditivas en nocicepción química y solo aditivas en nocicepción mecánica, siendo más activos en ratas monoartríticas que en normales - Los antagonistas estudiados y sus combinaciones fueron menos activos en los paradigmas electrofisiológicos (reflejo integrado C, wind-up espinal) que en las determinaciones algesimétricas - En animales normales solo se detectó la presencia de nNOS a nivel espinal, mientras que en las ratas monoartríticas se expresaron las tres isoformas de la enzima - Los antagonistas NMDA redujeron la expresión de nNOS, pero aumentaron la expresión de ¡NOS y eNOS, probablemente en forma compensatoria - La administración crónica durante 14 días (sistémica e intratecal) de los antagonistas NMDA y/o de inhibidores de enzimas implicadas en su sistema de transducción de señales produjo antinocicepción en las pruebas algesimétricas y electrofisiológicas - El agonista dopaminérgico apomorfina y el antagonista NMDA endógeno agmatina produjeron antinocicepción dosis-dependiente Los presentes resultados aportan información útil para redimensionar la utilidad de tratamientos prolongados mediante fármacos que interfieren con la neurotransmisión glutamatérgica en el manejo farmacoterapéutico del dolor crónico. 16
PROYECTO DE INCENTIVO A LA COOPERACION INTERNACIONAL (adjuntar al Informe final del proyecto FONDECYT Regular asociado)
_______________ 1 1 1
NUMERO DE PROYECTO FONDECYT REGULAR ASOCIADO
NUMERO DE PROYECTO DE INCENTXVO A LA COOPERACION INTERNACIONAL ____________________________________________________________ INVESTIGADOR RESPONSABLE PERIODO QUE SE INFORMA
E
1
HASTA
DESDE
FECHASDEESTADIA
FECHA PRESENTACION
FIRMA
1
1
_____________ HASTA
Breve resumen de actividades realizadas y resultados obtenidos, destacando de que manera contribuyen al logro de los objetivos del proyecto regular asodado. Indique si es pertinente, las publicaciones conjuntas generadas con la contraparte Internacional, haciendo referencia a lo informado en el punto iii del Informe de avance! final. (Agregue los anexos que estime pertinentes).
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-
\ ., " " UNIVERSIDAD DE CHILE - FACULTAD DE MEDICINA Programa de Farmacología Molecular y Clínica Casila 70.000 - Santiago 7 - Fono 6786050 - FAX 7372783
Santiago, 12 de Marzo de 2007
Sra. María Elena Boisier Directora del Programa FONDECYT: Presente
Estimada Sra. Boisier, Adjunto a la presente informe Final Proyecto FONDECYT N° 1040873 Saluda atentamente a usted.
i4III Dra. Teresa Pehssier
CONICYT - RECtBDO OFICI N ADE PARI ES
R77 H0RA