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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k ES 2 072 102 kInt. Cl. : A61K 31/405

11 N.◦ de publicaci´ on: 6

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˜ ESPANA

k

A61K 31/135

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 92310615.7 kFecha de presentaci´on : 20.11.92 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 543 659 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 26.05.93

T3

86 86 87 87

k

54 T´ıtulo: Derivados de melatonina y combinaciones con compuestos antiestr´ ogenos para tratar car-

cinoma de pecho en mam´ıferos.

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73 Titular/es: Eli Lilly and Company

k

72 Inventor/es: Clemens, James Allen y

30 Prioridad: 21.11.91 US 796108

Lilly Corporate Center Indianapolis, Indiana 46285, US

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.07.95

k

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

01.07.95

Aviso:

k k

Flaugh, Michael Edward

k

74 Agente: Carpintero L´ opez, Francisco

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 072 102 T3 DESCRIPCION Fundamento de la invenci´ on 5

La melatonina, representada por la estructura siguiente:

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se nombra sistem´aticamente como N - [2 - (5 - metoxi - 3 - indolil)etil]acetamida. Los nombres triviales para el compuesto incluyen N - acetil - 5 - metoxitriptamina y N - acetil - O - metilserotonina. La melatonina es una hormona de la gl´ andula pineal que tiene actividad inhibidora de la ovulaci´ on, Chu et al., Endocrinology, 75: 238 (1964), as´ı como alguna actividad frente a c´elulas de c´ancer de pecho humano MCF - 7, Blask et al., J. Neural. Transm. [Supp.], 21: 433 - 449 (1986) y para el tratamiento de carcinoma de pecho en mam´ıferos, Blask et al, Neuroendocrinol. Lett., 9, n◦ 2: 63 - 73 (1987). Diversos an´alogos de melatonina de f´ ormula:

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en la cual R1 es H, alquilo C1 - C4 o alcoxi C1 - C4 ; 40

R2 es H o alquilo C1 - C4 ; R3 es H o metilo; 45

R4 es H, haloacetilo, alcanoilo C1 - C5 , benzoilo o benzoilo sustituido con halo o metilo; R5 y R6 son individualmente H o halo; y 50

R7 es H o alquilo C1 - C4 ; con la condici´on de que cuando R2 es H, al menos uno de R5 y R6 es halo; o

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cuando R5 y R6 son H, R2 es alquilo C1 - C4 , han sido preparados tambi´en y han mostrado poseer actividad de inhibici´ on de la ovulaci´ on. V´eanse las patentes de Estados Unidos nos 4.997.845 y 4.614.807. No obstante, ninguno de estos an´ alogos mostraron previamente poseer actividad frente al carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en mam´ıferos. El tamoxifen (1 - p - β - dimetilaminoetoxifenil - trans - 1,2 - difenilbut - 1 - eno), representado por la estructura 2

ES 2 072 102 T3

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es un compuesto antiestr´ ogeno bien conocido que tiene actividad frente al carcinoma de pecho en mam´ıferos. V´ease The Merck Index, 11a as, los an´alogos de tamoxifen tie¯ ed., 1430 (1989). Adem´ nen tambi´en actividad antiestr´ ogena, incluida actividad frente al carcinoma de pecho humano (patente de alogamente actividad antiestr´ ogena, EE.UU. n◦ 4.623.660). Otros numerosos compuestos han mostrado an´ que da lugar a la supresi´ on del crecimiento del tumor de pecho en mam´ıferos. Por ejemplo, en la patente de EE.UU. n◦ 4.133.814 se describen 2 - fenil - 3 - aroilbenzotiofenos y 2 - fenil - 3 - aroilbenzotiofeno - 1 - ´oxidos; en la patente de EE.UU. n◦ 4.230.862 se describieron 3 - fenil - 4 - aroil - 1,2 - dihidronaftalenos y 1 - aroil - 2 - fenilnaftalenos; y en la patente de EE.UU n◦ 4.418.068 se expuso el 6 - hidroxi - 2 - (4 hidroxifenil) - 3 - [4 - (2 - piperidinoetoxi)benzoil]benzo[b]tiofeno. Aunque el tamoxifen ha sido estudiado en combinaci´ on con ciclofosfamida en forma de una inyecci´on alogos de meintravenosa, Abrams et al., Br. J. Cancer, 57: 604 - 607 (1988), las combinaciones de an´ latonina y los compuestos antiestr´ ogenos anteriormente mencionados, incluido el tamoxifen, no han sido probadas para el tratamiento de carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en mam´ıferos. Es la finalidad de esta invenci´ on proporcionar el uso de ciertos an´ alogos de melatonina para la elaboraci´ on de un medicamento para el tratamiento de carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en mam´ıferos. Una finalidad adicional de esta invenci´on proporciona el uso de una combinaci´ on de ciertos an´ alogos de melatonina m´ as compuestos antiestr´ogenos para la elaboraci´on de un medicamento para el tratamiento de carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en mam´ıferos, en la que la combinaci´on de ciertos an´alogos de melatonina m´ as compuestos antiestr´ogenos, cuando se administra en cantidades adecuadas, es sin´ergicamente eficaz frente a tales carcinomas. Sumario de la invenci´ on Esta invenci´on se refiere al uso de un compuesto de f´ ormula

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en la cual 50

R1 es H, alquilo C1 - C4 o alcoxi C1 - C4 ; R2 es alquilo C1 - C4 ;

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R3 es H o metilo; R4 es H, haloacetilo, alcanoilo C1 - C5 , benzoilo o benzoilo sustituido con halo o metilo; R5 y R6 son individualmente H o halo; y

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R7 es H o alquilo C1 - C4 ;

3

ES 2 072 102 T3 o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo; para la elaboraci´ on de un medicamento para el tratamiento de c´ancer de pecho hormonalmente dependiente.

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Compuestos preferidos de la f´ ormula anterior incluyen β - metil - 6 - fluoromelatonina, β - etil - 6 cloromelatonina y 2 - metil - 6,7 - dicloromelatonina. Es especialmente preferido β - metil - 6 - cloromelatonina. Con cada uno de estos derivados de melatonina, R1 y R7 son metilo. El uso seg´ un esta invenci´on proporciona tambi´en un m´etodo para tratar terap´euticamente un carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en un mam´ıfero, que comprende administrar a dicho mam´ıfero una cantidad eficaz de un primer componente que es un compuesto de la f´ ormula (I) anterior, o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo, y una cantidad eficaz de un segundo componente que es un compuesto antiestr´ ogeno o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo. Con este m´etodo para tratar tales carcinomas de pecho en mam´ıferos, compuestos preferidos del primer componente incluyen β - metil - 6 - fluoromelatonina, β - etil - 6 - cloromelatonina y 2 - metil - 6,7 - dicloromelatonina, aunque es especialmente preferido β - etil - 6 - cloromelatonina. Compuestos antiestr´ ogenos preferidos del segundo componente incluyen compuestos antiestr´ ogenos no esteroidales, y es especialmente preferido tamoxifen. Adem´as de ello, el uso proporcionado en esta invenci´on es un m´etodo para tratar terap´euticamente un carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en un mam´ıfero, que comprende administrar a dicho mam´ıfero un primer componente que es un compuesto de la f´ ormula (I) anterior, o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo, y un segundo componente que es un compuesto antiestr´ ogeno o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo; siendo administrados dichos primer y segundo componentes en cantidades que sean sin´ergicamente eficaces frente a dicho carcinoma de pecho. Los compuestos preferidos y especialmente preferidos del primer y segundo componentes son como se especific´o anteriormente. Tambi´en est´a contemplado dentro del alcance del uso de esta invenci´ on un m´etodo de tratar terap´euticamente un carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en un mam´ıfero, que comprende administrar a dicho mam´ıfero una cantidad efectiva de un primer componente que es un compuesto de la f´ ormula (I) anterior, o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo, y una cantidad eficaz de un segundo componente que es un compuesto antiestr´ogeno, o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo; en el que dicho primer componente y dicho segundo componente, junto con un diluyente, excipiente o veh´ıculo farmac´euticamente aceptable, forma una formulaci´ on farmac´eutica para dicha administraci´ on. El primer y segundo componente preferidos y especialmente preferidos, como se especific´o anteriormente, son los mismos para esta formulaci´on farmac´eutica. Descripci´ on detallada de la invenci´ on

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Las siguientes definiciones se refieren a los diversos t´erminos utilizados en lo que antecede y en toda la descripci´on. El t´ermino “halo” se refiere a fluoro, cloro, bromo y yodo.

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aticos lineales o ramifiLa expresi´on “alquilo C1 - C4 ” o “alquilo inferior” se refiere a los radicales alif´ cados de 1 - 4 ´atomos de carbono que incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n - butilo, isobutilo, sec - butilo y terc - butilo. La expresi´on “alcoxi C1 - C4 ” incluye los radicales ´eter alif´aticos lineales o ramificados de 1 - 4 ´atomos de carbono tales como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, n - butoxi, isobutoxi, sec - butoxi y terc butoxi. El t´ermino “haloacetilo” se refiere a cloroacetilo, bromoacetilo, fluoroacetilo y yodoacetilo.

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La expresi´on “alcanoilo C1 - C5 ” incluye formilo, acetilo, propionilo, butirilo, α - metilpropionilo, valerilo, α - metilbutirilo, β - metilbutirilo y pivaloilo. La expresi´on “benzoilo sustituido con halo” define grupos mono - y di - halobenzoilo. Grupos mono - halobenzoilo espec´ıficos son clorobenzoilo, bromobenzoilo, fluorobenzoilo y yodobenzoilo.

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Grupos di - halobenzoilo incluyen aquellos en los que los dos sustituyentes halo son los mismos. Grupos di - halobenzoilo t´ıpicos incluyen 2,4 - diclorobenzoilo, 2,4 - dibromobenzoilo, 2,4 - difluorobenzoilo y 2,4 - diyodobenzoilo. 4

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La expresi´on “benzoilo sustituido con metilo” contempla metilbenzoilo, dimetilbenzoilo y trimetilbenzoilo. 5

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La expresi´on “radical heteroc´ıclico” incluye estructuras de un anillo de 5 o 6 miembros que contiene nitr´ ogeno que incluyen opcionalmente un a´tomo de ox´ıgeno o azufre como segundo hetero´atomo. Radicales heteroc´ıclicos t´ıpicamente sustituidos incluyen pirrolidino, piperidino y morfolino. Los compuestos empleados en el m´etodo de esta invenci´on son conocidos en la t´ecnica o se pueden preparar mediante m´etodos descritos en la t´ecnica. En general, los compuestos de f´ormula (I) son conocidos como inhibidores de la ovulaci´on. Publicaciones representativas que exponen la preparaci´on de los compuestos de f´ ormula (I) incluyen las patentes de EE.UU. nos 4.614.807 y 4.997.845. Aunque se cree que la totalidad de los compuestos de f´ ormula (I) son u ´tiles para tratar carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en mam´ıferos, algunos de estos compuestos son preferidos para tal ormula (I) son alquilo C1 - C4 , especialmente uso. Sustituyentes R2 preferidos para los compuestos de f´ metilo. Sustituyentes R5 y R6 preferidos son halo, en el que R5 o R6 es individualmente halo y el otro es hidr´ ogeno, o los dos pueden estar sustituidos con el mismo a´tomo de hal´ ogeno, especialmente cloro. Un compuesto especialmente preferido de f´ormula (I) es cuando R1 y R2 son metilo; R3 , R4 y R5 son hidr´ ogeno; R6 es cloro y R7 es metilo. Los compuestos de f´ ormula (I), tal como se utilizan en esta invenci´on, son u ´tiles para el tratamiento terap´eutico de carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en mam´ıferos cuando se administran en una cantidad eficaz. La expresi´on “tratar terap´euticamente carcinoma de pecho hormonalmente dependiente”, tal como se emplea en la memoria descriptiva de esta solicitud, incluidas las reivindicaciones, se debe interpretar como cualquier medio que afecte adversamente a la existencia o crecimiento de carcinoma de pecho en mam´ıferos. La expresi´on “cantidad eficaz” significa la dosificaci´ on de sustancia activa suficiente para proporcionar un tratamiento terap´eutico de carcinoma de pecho en mam´ıferos. La expresi´on “carcinoma hormonalmente dependiente” se entiende generalmente en la t´ecnica que significa los carcinomas en los que el crecimiento del mismo est´a influenciado, de alguna manera, por la presencia, ausencia, abundancia o insuficiencia de hormonas de mam´ıferos. Tales hormonas incluyen, pero sin estar limitadas a ellas, estr´ogeno y prolactina. No obstante, es importante reconocer que el mecanismo de acci´on de los compuestos de f´ ormula (I) es directamente frente al tejido con carcinoma. Por tanto, el mecanismo de acci´on de los compuestos de f´ ormula (I) no es hormonal ni antihormonal, por lo que estos compuestos proporcionan un mecanismo de acci´ on distinto para tratar un carcinoma de pecho. Los compuestos denominados antiestr´ ogenos, incluida su composici´ on, uso y preparaci´ on, son tambi´en bien conocidos en la t´ecnica. Las siguientes publicaciones son representativas, pero en modo alguno exclusivas, de referencias que explican la composici´on, preparaci´ on y uso de compuestos antiestr´ ogenos: patentes de EE.UU. nos 4.133.814, 4.230.862, 4.418.068 y 4.623.660 y The Merck Index, 11a¯ Ed. (1989), y Tytotoxic Estrogen in Hormone Receptive Tumors (J. Raus, et al., 1980). Cuando se usan en combinaci´on con los compuestos de f´ormula (I), todos los compuestos antiestr´ ogenos se cree que son u ´ tiles para tratar un carcinoma de pecho en mam´ıferos. Particularmente u ´tiles son los compuestos antiestr´ogenos no esteroidales, incluidos los derivados de alquenos de f´ormula

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ES 2 072 102 T3

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en la cual o bien R8 es H o un radical alquilo inferior y R9 es un radical alquilo inferior, o R8 y R9 est´an unidos conjuntamente con el a´tomos de nitr´ ogeno adyacente para formar un radical heteroc´ıclico; 20

R10 es H o un radical alquilo inferior;

25

R11 es H, halo, OH, un radical alquilo inferior o es un radical buta - 1,3 - dienilo, de forma que junto con el anillo de benceno adyacente forma un radical naftilo; R12 es H o OH;

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n es 2; o una sal farmac´euticamente aceptable de los mismos. Los compuestos de f´ ormula (II) preferidos son cuando R8 y R9 son los dos el mismo radical alquilo inferior, especialmente metilo; R10 es un radical uor, cloro o bromo, o R11 es un radical alquilo inferior, especialmente etilo; R11 es halo, especialmente fl´ alquilo inferior, especialmente metilo o etilo; R12 es OH; y n es 2. Los compuestos de f´ormula (II) son conocidos por lo dem´ as como an´alogos de otro compuesto antiestr´ ogeno, tamoxifen, que es especialmente preferido. Combinaciones preferidas de compuestos de f´ ormula (I), denominados primeros componentes, y compuestos antiestr´ ogenos, denominados segundos componentes, para el tratamiento terap´euticamente eficaz de un carcinoma de pecho hormonalmente dependiente en mam´ıferos incluyen β - metil - 6 - fluoromelatonina o 2 - metil - 6,7 - dicloromelatonina, o β - etil - 6 - cloromelatonina y tamoxifen, aunque β - metil - 6 - cloromelatonina y tamoxifen son especialmente preferidos. Los tratamientos en los que se administran un primer y un segundo componente al mismo mam´ıfero que tiene un carcinoma de pecho son frecuentemente sin´ergicamente eficaces frente a tal carcinoma. Los datos de la Tabla 1 proporcionan una evidencia de este efecto sin´ergico. Una descripci´ on de procedimientos experimentales aparece a continuaci´on.

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ES 2 072 102 T3 TABLA 1 Efecto de β - metil - 6 - fluoromelatonina administrada por v´ıa oral, con y sin tamoxifen, sobre el crecimiento de tumores de mamas inducidos por DMBA 5

Area media de tumor (mm2 ) 10

a ∗

± SEMa

Semana de tratamiento

Veh´ıculo de aceite de ma´ız 0,2 ml oral

β - metil - 6 fluoro - melatonina 15 mg/kg

Citrato de tamoxifen 5 mg/kg

β - metil - 6 - fluoro melatonina + Citrato de tamoxifen

Comienzo 1 2 3 4

27,4 ± 2,6 103,9 ± 9,8 332,0 ± 54,8 617,1 ± 92,0 860,2 ± 59,7

24,6 ± 2,9 81,7 ± 8,1 116,3 ± 23,1∗ 166,0 ± 40,5∗ 261,5 ± 72,8∗

21,6 ± 1,7 43,1 ± 5,1∗ 37,1 ± 23,1∗ 91,4 ± 65,3∗ 147,0 ± 105∗

25,1 ± 2,0 37,6 ± 5,0∗ 4,6 ± 3,0∗ 0,0 ± 0∗ 2,3 ± 2,3∗

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X

Cada grupo de ensayo conten´ıa 7 ratas. Significativamente diferente del testigo (P < 0,05).

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Sin embargo, el sinergismo entre un compuesto de f´ ormula (I) del primer componente y un segundo compuesto antiestr´ogeno del segundo componente no siempre es demostrable en comparaciones una a una. Cuando compuestos del primer o segundo componente exhiben individualmente un nivel elevado de actividad sobre tumores de mamas de forma que no existan diferencias significativas entre un tratamiento individual y un tratamiento de combinaci´ on, no es demostrable el efecto sin´ergico del tratamiento de combinaci´on de compuestos del primer y segundo componentes. TABLA 2 Efecto de β - metil - 6 - fluoromelatonina administrada por via oral, con y sin tamoxifen, sobre el crecimiento de tumores de mamas inducidos por DMBA

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Area media de tumor (mm2 ) 40

Semana de tratamiento

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a ∗

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± SEMa

Comienzo

Veh´ıculo de aceite de ma´ız 0,2 ml oral 24,3 ± 2,5

β - metil - 6 fluoro - melatonina 15 mg/kg 26,4 ± 1,8

Citrato de tamoxifen 5 mg/kg 25,1 ± 2,5

β - metil - 6 - fluoro - me latonina + Citrato de tamoxifen 25,9 ± 2,4

1 2 3 4

80,3 ± 8,4 202,6 ± 17,3 540,0 ± 121 1046,0 ± 348

48,0 ± 6,2∗ 78,9 ± 10,3∗ 76,7 ± 22,5∗ 138,3 ± 46,2∗

30,3 ± 5,1∗ 15,0 ± 6,7∗ 5,9 ± 3,9∗ 5,1 ± 3,4∗

31,0 ± 7,5∗ 26,7 ± 16,8∗ 41,1 ± 35,3∗ 41,1 ± 35,3∗

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X

Cada grupo de ensayo conten´ıa 7 ratas. Significativamente diferente del testigo (P < 0,05).

Cuando se utilizan en combinaci´ on, los compuestos del primer componente y los compuestos del segundo componente se pueden preparar independientemente en forma de formulaciones farmac´euticas para ser administradas a mam´ıferos, o los compuestos del primer y segundo componentes se pueden combinar y seguidamente combinarse adicionalmente con un diluyente, excipiente o veh´ıculo farmac´euticamente aceptable para formar una formulaci´ on farmac´eutica para su administraci´ on. Se prefiere el primer m´etodo 7

ES 2 072 102 T3 de preparaci´ on y administraci´ on de formulaciones farmac´euticas.

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Como ser´a reconocido por los expertos en la t´ecnica, muchos de los compuestos utilizados en esta invenci´on contienen un a´tomo de carbono asim´etrico. Esta invenci´on no se limita a cualquier is´ omero particular, sino que incluye los enanti´ omeros individuales as´ı como los racematos de los compuestos. Las sales por adici´on de a´cidos farmac´euticamente aceptables utilizadas en esta invenci´on incluyen sales derivadas de a´cidos inorg´ anicos tales como ´acido clorh´ıdrico, a´cido n´ıtrico, a´cido fosf´ orico, a´cido sulf´ urico, ´acido bromh´ıdrico, a´cido yodh´ıdrico, a´cido fosforoso y similares, as´ı como sales derivadas de ´acidos org´ anicos tales como ´acidos alif´aticos mono - y di - carbox´ılicos, ´acidos alcanoicos fenil - sustituidos, a´cidos hidroxi - alcanoicos y - alcano - dioicos, ´acidos arom´aticos, a´cidos sulf´onicos alif´aticos y arom´aticos y similares. Por tanto, las sales farmac´euticamente aceptables t´ıpicas incluyen sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, nitrato, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, fluoruro, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formiato, isobutirato, caprato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, butino - 1,4 - dioato, hexino - 1,6 - dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, tereftalato, bencenosulfonato, tolueno - sulfonato, clorobencenosulfonato, xilenosulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, β - hidroxibutirato, glicolato, malato, tartrato, metanosulfonato, propanosulfonato, naftaleno - 1 - sulfonato, naftaleno - 2 - sulfonato y las sales similares. Las sales preferidas de esta invenci´on son las derivadas de ´acidos inorg´ anicos, especialmente ´acido clorh´ıdrico. Inhibici´ on de tumores de mamas inducidos por DMBA

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Se produjeron tumores de mamas en ratas Sprague - Dawley hembras que se adquirieron en Harlan Industries, Indianapolis, Indiana. A la edad de aproximadamente 55 d´ıas, las ratas recibieron una u ´ nica alimentaci´on oral de 20 mg de 7,12 - dimetilbenz[a]antraceno (DMBA). Aproximadamente 6 semanas despu´es de la administraci´on de DMBA, las gl´andulas mamarias fueron palpadas a intervalos semanales en cuanto a la aparici´on de tumores. Siempre que aparecieron uno o m´ as tumores, se midieron los di´ ametros m´as largo y m´as corto de cada tumor con un calibrador m´etrico, las mediciones se registraron y ese animal se seleccion´o para la experimentaci´on. Se hizo un intento de distribuir uniformemente los diversos tama˜ nos de tumores en los grupos tratado y testigo, de forma que tumores de tama˜ no medio se distribuyeron equivalentemente entre los grupos de ensayo. Los grupos testigo y los grupos de ensayo para cada experimento conten´ıan 5 a 9 animales. El n´ umero medio de animales de ensayo se establece para cada experimento en las tablas de datos contenidas en la presente memoria descriptiva. Los compuestos de ensayo se administraron o bien por medio de inyecciones intraperitoneales en goma ar´abiga al 2%, o por v´ıa oral. Los compuestos administrados por v´ıa oral se disolvieron o bien se suspendieron en 0,2 ml de aceite de ma´ız. Cada tratamiento, incluidos los tratamientos testigo con goma ar´ abiga y aceite de ma´ız, se administraron una vez al d´ıa a cada animal del ensayo. A continuaci´on de la medici´on del tumor inicial y la selecci´on de los animales testigo, los tumores se midieron cada semana mediante el m´etodo anteriormente mencionado. El tratamiento y las mediciones de animales continuaron durante 3 a 5 semanas, en cuyo momento se determinaron las ´areas finales de los tumores. Para cada compuesto y tratamiento testigo se determin´ o el cambio en el ´area media de tumor. El cambio medio se analiz´ o en cuanto a su significaci´on, utilizando el ensayo de Student. Los resultandos de estos ensayos se muestran en las Tablas 3 a 7, a continuaci´ on.

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ES 2 072 102 T3 TABLA 3 Efecto de β - metil - 6 - cloromelatonina y 2 - metil - 6,7 - dicloromelatonina administradas por via IP sobre el crecimiento de tumores de mamas inducidos por DMBA 5

Area media de tumor (mm2 ) 10

± SEMa

Semanas de tratamiento IPb

Veh´ıculo de goma ar´ abiga

Melatonina 15 mg/kg

β - metil - 6 cloromelatonina 15 mg/kg

2 - metil - 6,7 dicloromelatonina 15 mg/kg

Comienzo 1 2 3 4

47,9 ± 3,6 106,0 ± 10,4 236,1 ± 33,8 565,3 ± 105 915,7 ± 63,5

44,1 ± 5,1 90,0 ± 8,6 159,1 ± 21,4 333,4 ± 65,3 599,3 ± 205

47,7 ± 7,0 78,6 ± 7,5∗ 118,4 ± 18,9∗ 142,7 ± 26,0∗ 237,5 ± 40,1∗

34,3 ± 5,7 88,0 ± 12,9 152,7 ± 31,0 259,3 ± 41,7∗ 402,0 ± 87,3∗

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X

a

Cada grupo de ensayo conten´ıa 7 ratas IP = administraci´ on intraperitoneal de compuestos del ensayo en goma ar´ abiga al 2%. ∗ Significativamente diferente del testigo (P