“ANÀLISIS Y CARACTERIZACIÒN DE BACTERIAS HETERÒTROFAS AISLADAS A PARTIR DE MUESTRAS DE AGUA DE UNO DE LOS CANALES DE XOCHIMILCO” Liliana Rangel-Ortìz, Gustavo Acosta-Zamora, Mario de Jesús Casimiro-Reyes, María Enriqueta SantamaríaIslas, Sergio Salvador Ramírez-Alcantar y María Teresa Núñez-Cardona * Laboratorio de Ecología Microbiana, Departamento el Hombre y su Ambiente. Universidad Autónoma MetropolitanaXochimilco. Calzada del Hueso 1100, Colonia Villa Quietud, C. P. 04960. [email protected] RESUMEN Xochimilco es una región importante por sus canales y chinampas, puesto que son utilizados con fines turísticos a nivel nacional y para la agricultura de ésta región. Los trabajos previos realizados sobre bacteriología en el área de estudio han sido enfocados a la contaminación fecal bacteriana; de ahí la importancia de desarrollar o enfocar investigación ecológica relacionada con las poblaciones bacterianas existentes en este canal. Debido a ello esta investigación está enfocada a un análisis bacteriológico del agua de un canal de Xochimilco, a través de tres muestras recogidas en el canal de puente Urrutia. A estas muestras se les practicó una serie de pruebas microbiológicas para determinar la consecuente actividad de las bacterias heterótrofas, que tiene lugar en éste canal de Xochimilco. Por medio de cultivos en placas de agar Mc Conkey y después en agar nutritivo, continuando con la tinción de Gram, se obtuvieron 17 cepas puras Gram negativas, a las cuales se les hicieron las siguientes pruebas bioquímicas convencionales: Fermentación de la glucosa, sacarosa y lactosa; Citrato de Simmons, Indol, Producción de ácido sulfhídrico, Movilidad, Producción de Gas, Amilasa, Gelatinasa, Ureasa, ADN asa y Polisacáridos, de lo que se obtuvo que el 100% de las cepas redujo los nitratos y el 88% los nitritos; además se observó una gran actividad sobre la glucosa, lactosa y sacarosa, que fueron utilizadas por el 88%, 94% y el 82%, respectivamente. Estas mismas cepas fueron sometidas a 12 diferentes antibióticos (antibiograma) para evaluar la respuesta a dichos, de las cuales el 100% de las cepas fueron resistentes a la ampicilina y el 88% a la Cefalotina y Carbenicilina, el total de cultivos mostró sensibilidad a la Cefotaxima, Netilmicina, Ceftriaxona, Amikacina, Trimetoprim sulfametoxazol, Pefloxacina, Nitrofurantoína, Cloranfenicol y Gentamicina. Se utilizaron tres cepas de referencia de comparación (E. coli, Pseudomona aeruginosa y Staphilococcus aureus) para el análisis de correlación de Pearson, de lo que se encontró que no existe relación alguna con las cepas de referencia, pero sí se encontraron las siguientes bacterias: E. coli, P. morgagnii, Pseudomona, shigella sp, C. diversus, Providencia sp, Enterobacter sp y Klebsiella sp., las cuales se encuentran en variedades extensas en este canal y por supuesto en los restantes de la delegación Xochimilco. La capacidad de reducción de nitratos y nitritos, además la utilización de urea, hace clara la participación de éste grupo de bacterias en los ciclos del nitrógeno y del carbono en los lugares donde éstas se encuentren, además por su participación en la degradación de macromoléculas formadoras de carbohidratos y de algunas proteínas. Palabras clave: contaminación fecal bacteriana, canal de Xochimilco, cultivo en placa, cepas puras, pruebas bioquímicas, antibiograma, resistencia, sensibilidad, correlación de Pearson, ciclo del nitrógeno, ciclo del carbono, degradación de macromoléculas. ABSTRATC Xochimilco is an important region by its channels and chinampas, since they are utilized with tourist end to national level and for the agriculture of this region. The prior works carried out on bacteriology in the area of study have been focused to the bacterial fecal contamination; from there the importance to develop or to focus ecological investigation related to the existing bacterial populations in this channel. Due to it this investigation is focused to a bacteriological analysis of the water of a channel of Xochimilco, through three samples collected in the channel of bridge Urrutia. To these samples was practiced them a series of tests microbiological to determine the consequent activity of the bacteria heterótrofas, that takes place in this channel of Xochimilco. Through cultivations in plates of agar Mc Conkey and later in agar nutritious, continuing with the tintion of Gram, 17 pure stumps were obtained Gram negative, to which them they were done the following conventional biochemical tests: Fermentation of the glucose, sacarose and lactose; Citrate of Simmons, Indol, Production of sulfhídric acid, Mobility, Production of Gas, Amylase, Gelatinase, Ureasa, DNAasa and Polisacarids, of what was obtained that the 100% of the stumps reduced the nitrates and the 88% the nitrites; besides a great activity on the glucose was observed, lactose and sacarose, that were utilized by the 88%, 94% and the 82%, respectively. These same stumps were submitted to 12 different antibiotics (antibiogrames) to evaluate the answer to you said, of which the 100% of the stumps they were resistant to the ampiciline and the 88% to the Cefalotine and Carbeniciline, the total of cultivations showed sensibility to the Cefotaxime, Netilmicine, Ceftriaxone, Amikacine, Trimetoprim sulfametoxazol, Pefloxacine, Nitrofurantoína, Cloranfenicol and Gentamicine. Three comparison reference stumps were utilized (E. Coli, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus) for the analysis of correlation of Pearson, of what was found that not any relation with the stumps of reference exists, but yes they were found the following bacteria: E. Coli, P. Morgagnii, Pseudomonas, Shigella sp, C. Diversus, Providence sp, Enterobacter sp and Klebsiella sp., which they are found in extensive varieties in this channel and of course in the remainders of the delegation Xochimilco. The nitrates reduction capacity and nitrites, besides the utilization of urea, does clear the participation of this group of bacteria in the nitrogen cycles and of the carbon in the places where these be found, besides by their participation in the degradation of macromolecules to bring of carbohydrates and of some proteins. Key words: bacterial fecal contamination, channel of Xochimilco, cultivation in plate, pure stumps, biochemical tests, antibiogrames, resistance, sensibility, correlation of Pearson, nitrogen cycle, cycle of the carbon, degradation of macromolecules. *________ Profesora titular del módulo “Procesos celulares fundamentales”, a quien agradecemos por hacer posible este trabajo, por su atención y su amable apoyo dentro de su área de investigación: Laboratorio “Ecología microbiana”, UAM-X.

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INTRODUCCIÓN Las bacterias se encuentran en todas parte del planeta, ya sea integrando relaciones simbióticas con diversos organismo conocidos, por ejemplo algunas se encuentran formando parte de la flora intestinas de animales y el hombre, además una de las características notable de ellas es que se les encuentra en diversas condiciones climáticas, favoreciendo así la producción de nutrientes específicos que son utilizadas por otros organismos para su propia sobrevivencia, se les encuentra en ambientes reductoras u oxidantes de materia orgánica e inorgánica. Aludiendo a lo mismo también se les encuentra en aguas, suelos húmedos y secos, lugares ácidos, alcalinos, y en el aire. Las bacterias hoy en día son de gran importancia, debido a la producción de distintas sustancias y al cultivo de algunas otras para cosechar un gran beneficio para el hombre con el objetivo de inhibir o combatir algunas enfermedades producidas por un descontrol en el propio organismo, como es el caso de la diabetes, el cáncer y algunos otros síndromes. De la misma manera se encuentran como autoras de diversas enfermedades en plantas, en animales y el caso muy especial, en el hombre. Debido a la importancia radical ecológica de estos microorganismos la presente va encaminada a proporcionar información acerca de la actividad de las bacterias heterótrofas en los canales de Xochimilco, por medio de muestras de agua del canal del puente de Urrutia, localizada dentro de la misma delegación. La importancia de llevar a cabo investigación de ésta índole se debe a que los canales son de principal utilidad tanto para fines turísticos como para la propia agricultura de los campesinos de ésta región, también es importante mencionar que la gran mayoría de bacterias productoras de enfermedades se encuentran en éste grupo (bacterias heterótrofas), debido a lo mismo es de principal importancia conocer a qué se exponen las personas que visitan a los canales, además informar qué tipo de riesgos se corre al consumir alimentos cosechados con aguas de éste tipo, que por lo que se mencionó que se utilizan para el riego de hortalizas y otros cultivos por los campesinos de ésta región en la zonas chinamperas.. BACTERIAS HETERÓTROFAS EN EL AGUA DE LOS CANALES DE XOCHIMILCO

ANTECEDENTES Las bacterias se clasifican en autótrofas y heterótrofas; las primeras utilizan compuestos inorgánicos oxidados como única fuente de energía y CO2 como fuente de carbono, el segundo grupo requiere una forma orgánica de carbono como nutrientes, una de las cuales son los carbohidratos, además utilizan CO2, pero no les satisface las necesidades de carbono. Estas son de gran importancia, puesto que participan en los procesos de autopurificación del agua y procesos biogeoquímicos presentes en la misma, también intervienen en la producción de diversas enfermedades (cuadro 1). Muchas de estas bacterias presentan una gran diversidad con respecto a sus necesidades de nitrógeno, e incluso algunas crecen en medios exentos de vitaminas. Las bacterias heterótrofas pertenecen al grupo de las enterobacterias (tabla 1), que son negativas a la tinción de Gram, además tienen forma de bacilos de tamaño mediano, que pueden ser aerobios y anaerobios facultativos, son fermentativas de algunos carbohidratos, casi siempre con producción de gas, y generalmente son móviles, reducen los nitratos y los nitritos, necesitan de compuestos orgánicos tanto como para obtener energía como para su crecimiento. Se asocian con enfermedades humanas, algunas de ellas son provenientes de heces fecales y la presencia de estas en medios externos como es el agua indica una contaminación de origen fecal, además son productoras de enfermedades gastrointestinales en el hombre, en algunos animales y en algunos peces que se ven perjudicados con la presencia de estas bacterias en el agua en que ellos se encuentran, algunos ejemplos de géneros bacterianos patógenos pertenecientes a éste grupo son las que se mencionan a continuación: Escherichia, Shigella, Edwardsiella,Citrobacter, Salmonella, Klebsiella,Enterobacter, Serratia, Proteus, Yersinia,y Erwinia FAMILIA 1- Escherichieae

GENERO Escherichia Shigella

ESPECIE coli. dysenteriae, flexneri. boydii.

sonnei.

2- Edwardsielleae

Edwardsiella

tarda

3- Salmonelleae

Salmonella Arizona Citrobacter

choleraesuis. typhi. enteritidis. hindshawii. freundil. diversus. amalonaticus.

4- Klebsielleae rhinoscleromati.

Klebsiella

pneumoniae.

Enterobacter

aerogenes. cloacae. agglomerans. sakazakii. gergoviae. alveri. marcescens. liquefaciens. rubidaea.

Hafnia Serratia 5- Proteeae

Proteus Morganella Providencia

6- Yersinieae

Yersinia

7- Erwinieae

Erwinia Pectobacterium.

mirabilis.

oxytoca.

Tabla 1. Clasificación de las enterobacterias

ozalnae.

vulgaris. morganii

alcalifaciens.

stuartii.

Rettgeri.

pestis. Pseudotuberculosis enterocolitica. intermedia. fredriksenii. Ruckeri.

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Los síntomas de las enfermedades de enterobacterias se debe en gran parte a la producción de endotoxinas que ellas fabrica, por ejemplo las enterotoxinas de E. coli tienen importancia en las enfermedades diarreicas, Salmonella y Shigella son francamente patógenas, otros géneros como Proteus, Serratia y Enterobacter, con patógenos oportunistas que producen enfermedades bajo determinadas condiciones, por ejemplo en casos de traumatización de tejidos (mastitis), estados de debilidad, heridas y desnutrición. La infección o riesgo a sufrir alguna enfermedad por alguna enterobacteria se produce en la mayoría de los casos por ingestión, ya sea por agua contaminada o en alimentos que también es muy común su presencia, sobre todo los que están en contacto con el ambiente exterior como los que se elaboran y se consumen en los puestos de mercados, calles, etc.es por esto que debe tenerse mucha precaución de no consumir alimento en cualquier lugar. La contaminación fecal del agua y de los alimentos en contacto con ella está determinada por la presencia de E. coli, organismos coliformes, Estreptococcus fecalis y el Clostridium perfringens. Como ya se mencionó, las bacterias heterótrofas requieren sustratos ricos en nutrientes de carbono, por lo tanto una concentración elevada de compuestos orgánicos en el agua o donde quiera que exista ésta revela la presencia de éste tipo de bacterias En el canal de cuemanco se han hecho una gran cantidad de investigaciones bacteriológicas cuantitativas, una de ellas revela la presencia de Pseudomona aeruginosa, Pseudomona putida, E. coli, entre otras. La distribución del grupo coniforme en aguas dulces representa un peligro para la salud humana, debido a un aumento de de aguas negras, de desechos domésticos, de residuos industriales, en su mayorías residuos orgánicos, y drenajes de campor agrícolas se has reportados la presencia de bacilos Gram negativos y Cocobacilos, en formas de cadenas: Sarcinas, Estafilococos y Diplococos, También se han identificado bacterias Grampositivas, como el subgénero Aerobacillus; esporógeno, Grampositivo que produce gas. De acuerdo con algunos resultados obtenidos en muestras de agua del canal de Cuemanco, las densidades de bacterias coliformes, tanto totales como fecales, superan las 594 NMP X 100 ml.; en la mayoría de los puntos de muestreo en agua y sedimento (Soto y Esquivel, 2003). Un estudio realizado por profesores investigadores de la UAM- X demuestra valores mínimos encontrados de 37 NMP X 100ml.; éstos resultados resaltan la influencia de los asentamientos humanos sobre los niveles de coliformes. Así, la mayor parte de los valores encontrados exceden los máximos aceptables de acuerdo con las normas de calidad del agua para uso y consumo humanos*. Cuantificaciones tomadas en el canal han demostrado la presencia de Escherichia, Shigella, Arizona, Citrobacter, Enterobacter, Serratia, Pectobacterium y Proteus, sin embargo, aún no se encuentran los géneros: Edwarsiella, Salmonella, Providencia y Klebsiella En el siguiente cuadro se pueden observar algunas bacterias que están presentes en las aguas superficiales, la enfermedad o infección que causan y los diversos síntomas (Lenntech, 2005). BACTERIA Aeromas

Salmonella thypi

SINTOMAS Diarrea muy liquida con sangre y moco Campilobacteriosis Gripe, diarrea, dolor de cabeza y estomago, fiebre calambres y nauseas Infecciones del tracto urinario, meningitis Diarrea acuosa, dolores de neonatal, enfermedades intestinales cabeza, fiebre, uremia homiletica, daños hepáticos Plesiomonas- infección Nauseas, dolores de estomago y diarrea acuosa, a veces fiebre, dolores de cabeza y vomito Fiebre tifoidea Fiebre

Streptococus

Enfermedad gastrointestinal

Campylobacter jejuni

Escherichia coli

Plesomonas shigellodes

Salmonella sp

Vibrio el tor (agua duke)

ENFERMEDAD/INFECCION Enteritis

Dolores de estomago, diarrea y fiebre, a veces vómitos

salmonelosis

Colera en forma leve

Fuerte diarrea

_____________*Investigación realizada por los profesores: Ruth Soto Castor y Alfonso Esquivel Herrera, del departamento El hombre y su ambiente de la universidad Autónoma Metropolitana- Xochimilco.

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METODOLOGÌA EMPLEADA Para la caracterización de bacterias heterótrofas en el canal de Cuemanco, se tomaron tres muestras de agua del canal que se encuentra en el puente Urrutia, las cuales fueron tomadas en condiciones de esterilidad, además después del muestreo fueron conservadas en refrigeración, a dichas muestras se les hicieron una serie de diluciones para sembrarlas en placas de Agar Mc Konkey y agar nutritivo por lo que se siguió el siguiente procedimiento: Para el recuento de microorganismos, se realizo un recuento en placa, esto con el objetivo de determinar el número de bacterias formadoras de colonias presentes en las muestras colectadas, además de realizar algunas series de pruebas que revelen la existencia de bacterias heterótrofas. Morfología celular (tinción de Gram), tabla 2, para determinar si las bacterias encontradas son negativas o positivas y a partir de esto seleccionar las cepas puras, para lo cual se prepararon 36 frotis en portaobjetos, de cada una de las colonias aisladas en el agar nutritivo, para determinar cepas puras bacterianas. 1) Fijar las células con calor 2) Agregar Azul Violeta (Cristal Violeta) y esperar 60 segundos. (Moradas/Gram Positiva). 3) Enjuagar con agua. 4) Agregar Lugol y esperar 60 segundos. Tabla 2. Procedimiento de 5) Enjuagar con agua. la tinción de Gram 6) Agregar alcohol y acetona. 7) Enjuagar con agua. 8) Agregar Safranina y esperar 1 minuto. Además se realizaron las siguientes pruebas bioquímicas (Rosadas/Gram Negativa). 9) Agregar aceite de inmersión convencionales: Citrato de Simmons, el cual indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato, además de la prueba de la Ureasa, SIM, Producción de gas, Reducción de nitratos, reducción de nitritos y la fermentación de la glucosa, sacarosa, lactosa, ADNasa y Gelatinaza. Por último, se determinó la actividad microbiana a 12 antibióticos, con la ayuda de antibiogramas.

RESULTADOS Las muestras tomadas fueron marcadas de las siguiente forma: X1, X2 Y X3, de las cuales al ser sembradas en placas con agar Mc Konkey, resultaron colonias con las siguientes características: X1-Colonias rosas y transparentes, X2Colonias rosas con halo y colonias incoloras y X3- Colonias rosas y colonias amarillas. Utilizando el método por medio de estrías en placas de agar nutritivo; de la muestra X1 se resembraron 8 colonias, de X2 fueron resembradas 12 colonias y de X3 16 Las colonias de bacterias crecidas en éstas placas se volvieron a sembrar en cajas a agar nutritivo, las cuales fueron de color amarillo, a excepción de la colonia 8, que fue de color amarillo-anaranjado en el agar nutritivo. TINCIÓN DE GRAM: Se prepararon 36 portaobjetos con tinción de Gram, de cada una de las colonias aisladas en el agar nutritivo, con el objetivo de determinar cuáles eran cepas puras, a las que harían las pruebas posteriores. Se obtuvieron: 17 cepas puras(X13, X15, X12, X211, X24, X22, X23, X29, X210, X31, X34, X21, X39,X17, X16, X27, X312) y las restantes fueron mixtas. Las cepas puras y mixtas fueron pasadas a medios líquidos da caldo nutritivo, al siguiente día las cepas puras se resembraron en placas de agar nutritivo, Las cepas puras fueron fueron evaluadas con las respectivas pruebas bioquímicas, y posteriormente fueron sometidas a respuesta a 12 antibióticos, cuyos resultados se muestran a continuación: Con respecto a las pruebas bioquímicas ensayadas a las 17 cepas se identificaron los siguientes géneros de bacterias: E. coli, P. morgagnii, Pseudomona, shigella Sp, C. diversus, Providencia Sp, Enterobacter Sp y Kliepsiella Sp.

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Tabla 3, muestras los resultados totales obtenidos por las bioquímicas y antibióticos ensayados: glucosa sacarosa lactosa citrato Anaer. Fac. Indol Ac. Sulfúrico Movilidad Gas Ureasa ADN asa Red. Nitratos Red. Nitritos ANTIBIOTIC. AM R S I SXT R S I CTX R S I NET R S I PEF R S I NF R S I CF R S I CRO R S I CB R S I CL R S I AK R S I GE R S I

x13 x15 x12 x211 x24 x22 x23 x29 x210 x31 x34 x21 x39 x17 x16 x27 x312 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 0 1 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 12

1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 12

15 14 16 9 15 11 0 15 14 13 15 17 14

88 82 94 53 88 65 0 88 82 76 88 100 82

1 17 0 0 0 0 0 2 1 15 0 0 0 0 1 17 0 0 0 0 1 17 0 0 0 0 1 13 0 4 0 2 1 15 0 0 1 14 0 3 0 0 0 0 1 17 0 0 1 14 0 2 0 1 0 1 1 15 0 1 0 0 1 17 0 0 0 0 1 17 0 0 12 204

100 0 0 11.764 88.235 0 0 100 0 0 100 0 0 76.4706 23.5294 11.7647 88.2353 0 82.3529 17.6471 0 0 100 0 82.3529 11.7647 5.88235 5.88235 88.2353 5.88235 0 100 0 0 100 0 1200

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DISCUSIÓN DE RESULTADOS De acuerdo a los resultados obtenidos, las principales características que presentan las bacterias heterótrofas aisladas en éste canal son las siguientes: a).- Tienen una gran actividad hacia los azucares como la glucosa, sacarosa y lactosa,88,82 y 94% respectivamente, utilizándolos como medios de nutrientes. Al presentar una gran actividad hacia los carbohidratos, revela su importancia en las distintas fuentes de utilidad de los mismos, como parte de una red alimenticia en la degradación de los distintos azúcares ya sea al hidrolizar las moléculas mayores, en éste caso algunos polisacáridos, o degradarlos por otros medios realizando diferentes procesos útiles y capaces en la digestión de azúcares. b).- Pocas veces utilizan el citrato como única fuente de nutrientes (53%), como ya se dijo, utilizan como primera fuente de nutrición a los carbohidratos. Esta es la principal característica para diferenciarlas de los demás grupos bacterianos, puesto que como ya se mencionó su primer recurso nutritivo son los carbohidratos, y en raras ocasiones aluden a otros compuestos orgánicos como es el caso del citrato como única fuente de carbono y fosfato de amonio como fuente de fosfato c).- La mayoría de las bacterias encontradas son anaerobios facultativos (88%). Esto indica que algunas pueden vivir tanto en ausencia como en presencia de oxígeno. d).- No producen Acido Sulfúrico(100%). Esto representa una característica principal de éste grupo de bacterias (Heterótrofas). e).- En medios de SIM, la mayoría de las bacterias heterótrofas presentan movilidad (88%). Esto lleva a una diferencia muy específica a comparación de otros grupos, pues esto indica la extensa distribución de estas bacterias en diferentes regiones de la corteza terrestre, es decir se les encuentra en todas partes. f).- Otra característica es la producción de gas (82%). Como parte de la fermentación y degradación de compuestos con alto contenido de carbono como es el caso de los azúcares que contiene los medios suficientes para el crecimiento de las bacterias heterótrofas, pues los principales son los que contienes carbono y nitrógeno. g).- Algunas presentan actividad sobre la urea(76%), es decir en su metabolismo intervienen compuestos con alto contenido de nitrógeno como la urea, además participan en la degradación de los mismo produciendo de ésta forma iones amonio, CO2 y H2, poseen enzimas ureasas. h).- Son positivas a la ADNasa(88%). i).- Todas reducen los nitratos y los nitritos (100 y 82%, respectivamente). Esto radica en la importancia de participación en los ciclos del nitrógeno y en la gran actividad de ambientes ricos en compuestos del nitrato y del nitrito. De acuerdo con estos resultados el agua de los canales de Xochimilco es rica en compuestos puros orgánicos que permiten el crecimiento no sólo de bacterias heterótrofas, sino de una gran número de bacterias de otras familias y algunas veces son productoras de enfermedades Y con respecto a la respuesta a diferentes antibióticos ensayados, podemos decir de las bacterias heterótrofas que: a).- Presentan resistencia a la ampicilina, Cefalotina y Carbenicilina, b).- son sensibles al trimetoprim sulfametoxazol, a la Cefotaxima, Netilmicina, Pefloxacina, Nitrofurantoína, Ceftriaxona, Cloranfenicol, Amikacina y Gentamicina. Esto indica al mismo tiempo de utilizar estos antibióticos como caracterización para las bacterias heterótrofas se debe tener mucho cuidado en el tratamiento de las distintas enfermedades producidas por éste grupo de bacterias, puesto que presentan resistencia a los antibióticos de uso muy común para el tratamiento de enfermedades respiratorias, por lo que sería de mucha utilidad tener acceso a los distintos antibióticos observados de las que las bacterias sean más sensibles. Con los resultados de las respuestas a los doce antibióticos ensayados a éstas bacterias, la comparación con tres cepas puras estándar(Tabla 4) para establecer una posible relación con las cepas bacterias heterótrofas ( correlación de Pearson), encontramos una relación mayor de las cepas X16 y X15 con Pseudomona aeruginosa, y una muy baja relación de éstas dos cepas con E. coli y S. aureus, sin embargo hubo una estrecha relación de las cepas restantes con S. aureus y a la ves una mínima semejanza con E. coli. De las 17 cepas. En esto radica la importancia de utilizar antibióticos necesarios en la prevención de enfermedades producidas por bacterias heterótrofas, sin embargo, es importante la clara participación de éstas bacterias dentro de los ciclos del nitrógeno y del carbono en los lugares donde se encuentren, así como también por medio de la producción de gas, su presencia en lugares expuestos a procesos de putrefacción de la materia muerta, como algunos ríos, basureros, y especialmente en los canales como es el caso de Xochimilco.

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Tabla 4, correlación de Pearson (izquierda) cepas de referencia (derecha)

CORRELACIÓN DE PEARSON CEPAS

X34

DISTANCIA

Pseu

Stap h

E. coli

glucosa sacarosa

0 1

1 1

1 1

X31

lactosa citrato

1 1

1 0

1 0

X39

Anaer. Fac.

0

1

1

Indol Ac. Sulfúrico

0 0

0 0

0 0

Movilidad

1

0

1

Gas Ureasa

0 0

0 0

0 0

ADN asa Red. Nitratos

0

0

0

I R

0

0

0

S

1

1

1

I R

0 1

0 0

0 1

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0

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0

0

X27 X211 X312 X21

Red. Nitritos ANTIBIOTIC AM

X24 X17 X210

S SXT

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X12 NET

X13 X23 X29 X22 CF

STAPH ECOLI CRO

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R

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1 0 0

1 0 0

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1

0

0

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CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados obtenidos, las principales características encontradas que presentan las bacterias heterótrofas son las siguientes: - Tienen gran actividad hacia los azucares como la glucosa, sacarosa y lactosa, utilizándolos como medios de nutrientes - Pocas veces utilizan el citrato como única fuente de nutrientes - La mayoría de las bacterias encontradas son anaerobios facultativos - No producen Ácido Sulfúrico. - En medios de SIM, la mayoría de las bacterias heterótrofas presentan movilidad - Otra característica es la producción de gas - Algunas presentan actividad sobre la urea - Son positivas a la ADNasa. -Todas reducen los nitratos y los nitritos. -Presentan resistencia a la ampicilina, Cefalotina y Carbenicilina, - Son sensibles al trimetoprim sulfametoxazol, a la Cefotaxima, Ceftriaxona, Cloranfenicol, Amikacina y Gentamicina.

Netilmicina,Pefloxacina,

Nitrofurantoína,

La reducción de los nitratos y los nitritos, la producción de ureasa y su actividad sobre los sustratos ensayados revelan la importancia de estos microorganismos en los ciclos del nitrógeno y la materia orgánica. De las bacterias encontradas, E. coli, P. morgagnii, Pseudomona, shigella Sp, C. diversus, Providencia Sp, Enterobacter Sp y Kliepsiella Sp., se encuentran en variedades extensas en los canales de Xochimilco. Esto indica al mismo tiempo de utilizar estos antibióticos no solamente como forma para caracterizar a este grupo de bacterias sino como una forma de proteger, cuando se ha sido infectado por un género bacteriano perteneciente a estos por que se debe tener mucho cuidado en el tratamiento de las distintas enfermedades producidas por bacterias heterótrofas, puesto que presentan resistencia a los antibióticos de uso muy común para el tratamiento de enfermedades respiratorias , por lo que sería de mucha utilidad tener acceso a los distintos antibióticos observados anteriormente a lo que estas bacterias no ponen resistencias. En esto radica la importancia de utilizar antibióticos necesarios en la prevención de enfermedades producidas por bacterias heterótrofas, sin embargo, es importante la clara participación de éstas bacterias dentro de los ciclos del nitrógeno y del carbono en los lugares donde se encuentren, así como también por medio de la producción de gas, su presencia en lugares expuestos a procesos de putrefacción de la materia muerta, como algunos ríos, basureros, y especialmente en los canales como es el caso de Xochimilco. La actividad de degradar azúcares como única fuente de nutrientes hace importante la presencia de estas bacterias en los canales de Xochimilco, puesto que funcionan como autopurificación del agua, y participan en la red alimenticia favoreciendo los nutrientes más sencillos a otros organismos que se encuentran en estos canales.

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