MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD CENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA

DESARROLLO DE LA PRUEBA DE AGLUTINACIÓN DE LÁTEX PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA HIDATIDOSIS HUMANA SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº27

BLGO : EDUARDO FERNANDO MIRANDA ULLOA. M.SC.: ELIZABETH SÁNCHEZ ROMANÍ DR: CÉSAR NÁQUIRA VELARDE DR: JOSÉ RENÉ SOMOCURSIO PERALTA SOMOCURSIO. DRA: GLADYS PATIÑO.

2007

DESARROLLO DE LA PRUEBA DE AGLUTINACIÓN DE LÁTEX PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA HIDATIDOSIS HUMANA

I.- IDENTIFIC+ACIÓN Código de la Investigación: 2-01-05-03-058 Centro de Referencia:

Centro Nacional de Salud Pública

Título de la Investigación: “Desarrollo de la Prueba de Aglutinación de Látex para el Diagnóstico de la Hidatidosis Humana” Autor Principal Blgo : Eduardo Fernando Miranda Ulloa. [email protected] [email protected]. Tf: 4719920, anexo 137 Laboratorio de Zoonosis Parasitaria, Centro Nacional en Salud Pública- INS. Coautores: M.Sc.: Elizabeth Sánchez Romaní [email protected]. Tf: 4719920, anexo 137 Laboratorio de Zoonosis Parasitaria, Centro Nacional en Salud Pública- INS. Dr:

César Náquira Velarde Instituto Nacional de Salud

Dr:

José René Somocursio Peralta Somocursio. [email protected]. Hospital Edgardo Rebagliatti Martins. EsSalud

Dra:

Gladys Patiño. [email protected] Hospital Hipólito Unanue. MINSA

Institución donde se ejecutó la Investigación: Laboratorio de Zoonosis Parasitaria del Centro Nacional de Salud Pública del Instituto Nacional de Salud

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II.-RESÚMEN

La hidatidosis humana causada por la forma larvaria de Echinococcus granulosus es una zoonosis parasitaria de gran importancia en salud pública Existen diferentes métodos serológicos para el diagnóstico de esta enfermedad, las cuales requieren equipamiento complejo con los que generalmente no cuentan los laboratorios de las regiones endémicas. En tal sentido con el propósito de obtener una técnica sencilla, rápida y de bajo costo se estandarizó y desarrolló la prueba de aglutinación de látex, la cual ha demostrado buenos resultados cuando fueron utilizados para el diagnóstico de otras enfermedades parasitarias. En el estudio se utilizó partículas de látex de 0.25 um de diámetro, las cuales fueron sensibilizadas con antígeno total de líquido de quíste hidatídico de ovino liofilizado (ATLH-O). Para evaluar la eficiencia de la prueba se emplearon 80 sueros, de los cuales 40 pertenecieron a pacientes con enfermedad hidatídica confirmados quirúrgicamente y por patología, 20 a pacientes con otras enfermedades parasitarias y 20 a personas sanas. Asimismo se evaluó la repetibilidad y reproducibilidad de la prueba en regiones endémicas de esta enfermedad. La sensibilidad y especificidad encontrada fue de 97.5% y 90% respectivamente, la concordancia hallada al evaluar la repetibilidad y reproducibilidad fue del 100%. La prueba de aglutinación de látex presenta alta sensibilidad y buena especificidad, pudiéndose usar como prueba de tamizaje para estudios epidemiológicos y para diagnóstico de rutina en regiones endémicas del Perú. El costo de cada prueba fue calculado entre 1 a 1.5 dólares.

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III.-INTRODUCCION La hidatidosis humana, zoonosis causada por el estadio larval del Echinococcus granulosus, el cual se alberga principalmente en el perro, es una enfermedad endémica en muchos países, siendo muy pocas la naciones que han logrado erradicar esta zoonosis de sus tierras, dentro de los cuales podemos mencionar a Nueva Zelanda, Tasmania e Islandia 1 La hidatidosis en sudamérica tiene gran prevalencia en países como Argentina y Chile, reportándose en este último, tasas que alcanzan los 10.7 x 1000 habitantes 2. En el Perú no existen datos epidemiológicos actualizados sobre esta enfermedad. Sin embargo, para el año 1990 la incidencia de la hidatidosis en el Perú alcanzaba cifras de 17.8x mil habitantes (SAIS – Pachacutec, Junín) 3. La hidatidosis es un problema de salud pública en el Perú, principalmente en los departamentos de Cerro de Pasco, Junín, Puno, Huancavelica y Arequipa que son áreas donde se cría ganado ovino y bovino ocasionando altos costos hospitalarios médicos y/o quirúrgicos que llegan entre 1000 y 5500 dólares por paciente, produciendo limitación en la capacidad funcional y productiva de la población parasitada, así como problemas sociales originados en la situación familiar y laboral de los pacientes.

4,5

. lo cual

significa gran pérdida de recursos materiales, pues es lamentable decir que el Perú es uno de los países con más prevalencia de hidatidosis en América, y que aún así no existe una política para evaluar y controlar el impacto que ocasiona esta enfermedad. El Echinococcus granulosus en su estado de tenia (adulto) se aloja entre las vellosidades intestinales del perro. El hombre y el ganado huéspedes intermediarios, contraen la enfermedad al ingerir los huevos de la tenia, en cuyo caso el embrión liberado atraviesa la pared intestinal para ir a ubicarse en el hígado, pulmón u otros órganos en los que se desarrolla la forma quística del parásito (estado larval). El perro contrae la enfermedad cuando ingiere vísceras parasitadas con quístes hidatídicos fértiles, cerrándose de este modo el ciclo de vida del Echinococcus granulosus.6. La patogenia de la hidatidosis es debida principalmente a la presión física que ejercen los quístes sobre las vísceras del huésped y al shock anafiláctico que se produce por rotura traumática del quíste intra-abdominal luego de una sensibilización del organismo a algunos constituyentes del líquido hidatídico. 7 El diagnóstico clínico de la hidatidosis humana es difícil de realizar debido a la gran variedad de signos y síntomas que se presentan en esta enfermedad. Para un diagnóstico

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definitivo requiere de medios auxiliares, tales como, la tomografía axial computarizada, la centellografía y la radiografía que permiten determinar la localización, el tamaño y la apariencia física de la lesión, sin lograr precisar la naturaleza del agente etiológico. Las pruebas inmunológicas cumplen un rol importante en el diagnóstico de la hidatidosis por estar orientados a la detección de anticuerpos circulantes o células sensibilizadas a los constituyentes de la larva de Echinococcus granulosus

8.

Estas pruebas

inmunodiagnósticas son también de gran utilidad en la determinación de la prevalencia e incidencia de la hidatidosis humana en una determinada región, pues estos estudios implican el examen de un gran número de sueros, por lo que es conveniente emplear pruebas sencillas rápidas de bajo costo, con una alta sensibilidad.9,10 En la actualidad los métodos serológicos de diagnóstico más empleados son: La prueba de ELISA, HAI, IFI, Arco V y Inmunoblot. La prueba de Inmunoensayo ligado a enzima -ELISA usando antígeno total de líquido hidatídico presenta una alta sensibilidad y una baja especificidad lo que la hace útil en la aplicación de estudios epidemiológicos ; sin embargo la desventaja de esta prueba es que se requiere para su ejecución equipos y materiales de alto costo 7 La prueba de Inmunofluorescencia indirecta (IFI), que utiliza como antígenos cortes de protoescólices, adheridos a láminas porta objetos, posee una alta sensibilidad y buena especificidad; sin embargo requiere de un microscopio de fluorescencia y de antígenos que no siempre están disponibles motivo por el cual su uso es limitado7 La prueba de Hemaglutinación Indirecta(HAI) utiliza glóbulos rojos como soporte de los antígenos solubles del quíste hidatídico los cuales al reaccionar contra el anticuerpo específico del suero produce una aglutinación visible y cuantificable, esta técnica presenta una alta sensibilidad y buena especificidad, además de ser de fácil ejecución, barata y no requiere de equipos de lectura, sin embargo la desventaja de este método está en la necesidad de determinar un título de valor diagnóstico para cada región endémica. Asimismo se ha encontrado alto indice de reacción cruzada con sueros de pacientes con cisticercosis.7 La prueba de ARCO V utiliza geles de a agarosa como soporte por donde difunden los antígenos y los anticuerpos formando bandas de precipitación. Esta técnica es altamente específica, de fácil manejo e interpretación pero presenta el incoveniente de ser poco sensible, utilizar mucho reactivo y ser muy lento en su ejecución 11 La prueba de Inmunoblot permite observar la reacción de los anticuerpos presentes en el suero de un paciente frente a proteínas antigénicas del líquido hidatídico. Este método

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presenta una alta sensibilidad y especificidad, siendo usado en el diagnóstico confirmatorio de esta enfermedad sin embargo es de alto costo.

12, 13

El reactivo látex hidatidosis consiste en una suspensión de partículas de poliestireno sobre las cuales se ha absorvido antígeno de líquido hidatídico. Esta suspensión de partículas de poliestireno tiene un aspecto uniforme y lechoso si se le observa a simple vista sobre una placa oscura. Si esta suspensión se enfrenta a una muestra en la cual hay anticuerpos desarrollados contra el parásito, esta suspensión pierde su aspecto uniforme produciéndose una agregación de partículas, esta agregación puede observarse a simple vista. Estos agregados están formados por el entrecruzamiento de las partículas de látex por los anticuerpos presentes en la muestra al unirse estos al antígeno absorbido sobre las partículas de látex

14,15

. La prueba de látex empleando antígeno hidatídico

purificado, ha sido utilizada en otros países mostrando una alta sensibilidad de 93% y una especificidad de 82%. También a mostrado buenos resultados al utilizarse para el diagnóstico

de

otras

parasitosis

como:

Tricomoniosis,

Tripanosomiasis

y

Toxoplasmosis.14,,16,17. En el Perú el diagnóstico de laboratorio no es posible en laboratorios de escasos recursos; siendo necesario y teniendo en cuenta la importancia de contar con pruebas sencillas de ejecución en laboratorio con escasa estructura e instrumentales y que pueda usarse en el tamisaje de la infección por la larva de Echinococcus granulosus en zonas poco accesibles para estudios epidemiológicos, lo cual ayudará al diagnóstico precoz y tratamiento oportuno, así como a conocer la prevalencia e incidencia de hidatidosis humana en áreas endémicas como la sierra del Perú, para acciones de prevención y control de esta zoonosis parasitaria. Es por lo que en el presente estudio se planteó como objetivo general: Desarrollar una prueba sencilla y de bajo costo para el diagnóstico de la infección por la larva de Echinoccocus granulosus. Mientras que los objetivos específicos fueron:  Estandarizar la técnica de aglutinación de partículas de látex para el diagnóstico de la hidatidosis humana en áreas endémicas del Perú  Evaluar la sensibilidad y especificidad de la prueba de aglutinación de látex  Evaluar la repetibilidad y reproducibilidad de la prueba de aglutinación de látex

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IV.-MATERIAL Y MÉTODOS

En la presente investigación se desarrollaron cuatro etapas diferenciadas: selección de sueros humanos, preparación del antígeno, preparación de la técnica de aglutinación en látex y determinación de la eficiencia diagnóstica de la aglutinación en látex. A continuación describimos cada una de estas etapas13,14,18.

1.- Sueros Humanos Utilizados en la Estandarización Para la selección de los sueros se utilizó el muestreo no provabilístico por conveniencia. Se seleccionaron un total de 80 sueros; de los cuales 40 fueron hidatídicos confirmados por cirugía y patología, 20 no hidatídicos pertenecientes a habitantes de zonas no endémicas radiologicamente(tórax) sanos y con reacciones negativas a las pruebas de Inmunoblot, DD5 y ELISA; y 20 sueros procedentes de pacientes con otras enfermedades parasitarias ( 5 sueros de pacientes con cisticercosis, 5 con fasciolasis, 5 con toxoplasmosis, 2 con teniosis, 2 con chagas y 1 con malaria). Las muestras fueron seleccionadas y obtenidas de la seroteca del laboratorio de zoonosis parasitaria del Instituto Nacional de Salud, la confirmación por cirugía y patología de los pacientes con hidatidosis se realizó en los hospitales: Edgardo Rebagliatti Martins y el Hospital Nacional Hipólito Unanue. Asimismo la confirmación de los sueros con otras parasitosis se realizaron de la siguiente manera: Los sueros de pacientes con cisticercosis fueron confirmados por el método de Inmunoblot, los sueros de Fasciolasis se confirmó mediante el método de DD2, los de Toxoplasmosis mediante el método de IFI, los sueros de los pacientes con teniosis fueron confirmados por el método parasitológico en heces, los de chagas y malaria por análisis directo en lámina 2.- Preparación del Antígeno Hidatídico 2.1.- Obtención de los quístes hidatídicos.Se colectaron hígados y pulmones que contenían quístes hidatídicos de ovinos sacrificados en el camal de Yerbateros de Lima (Perú), entre febrero y mayo del 2004.(foto 01, 02) En el laboratorio, el líquido hidatídico fue extraído asépticamente con una jeringa estéril (foto 03) Este líquido fue transferido a frascos estériles y luego centrifugado a 5000 rpm a 4 ºC durante 30 minutos, el sobrenadante se

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congeló a -20 ºC hasta su procesamiento posterior y en el sedimento se observó microscópicamente la presencia de protoescólices lo que demostró que eran quístes fértiles de Echinococcus granulosus 2.2.- Diálisis y Liofilización del Líquido Hidatídico. El líquido hidatídico se dializó utilizando una membrana de diálisis (MWCO: 6000-8000 molécula weight) por tres días a 4ºC contra agua destilada, la cual fue cambiada tres veces. El volumen de agua destilada empleada fue 100 veces mayor que el volumen de líquido hidatídico a dializar. Luego de dializado, el líquido hidatídico se liofilizó.(foto 04) 2.3.- Cuantificación de proteínas del Antígeno hidatídico. El antígeno liofilizado fue resuspendido con buffer glicina ph: 8.2 y centrifugado a 14000 rpm por una hora a 4ºC. El sobrenadante fué separado y la concentración de proteínas medida por el método de LOWRY y luego conservado a – 20 ºC hasta su utilización. 2.4.-Control de antígeno hidatídico El

antígeno

hidatídico

fue

evaluado

mediante

la

prueba

de

Inmunoelectroforesis usando doble difusión en gel de agarosa confirmándose así la presencia del ARCOV al enfrentarlo a un suero control positivo de referencia. A este antígeno también se le analizó mediante electroforesis en gel de poliacrilamida para confirmar y caracterizar los componentes protéicos según su peso molecular.(foto 05) 3.- Técnica de Aglutinación de Látex.3.1.- Preparación del reactivo 3.1.1.-Preparación de la suspensión stock de las partículas de látex Se emplearon partículas látex de poliestireno de aproximadamente 0.25 um

de

diámetro

promedio.

Estas

partículas

se

obtuvieron

comercialmente en una suspensión al 10 % V/V procedente de Bangs Laboratories, USA. La suspensión stock se preparó diluyendo la suspensión comercial 1:8 en buffer glicina ph: 8.2 3.1.2.-Sensibilización de las partículas de látex con el Antígeno hidatídico (reactivo de látex sensibilizado) La concentración óptima de proteínas utilizada como antígeno para la prueba de látex fue de 2 mg/ml en buffer glicina ph: 8.2

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Luego con esta concentración de antígeno se sensibilizó las partículas de látex de la siguiente manera: a 3.0 ml de buffer glicina se agregó 1.0 ml de Antígeno hidatídico y se añadió 0.6 ml de suspensión stock de partículas de látex. Se agitó e incubó la mezcla durante 30 minutos a 37ºC y luego 24 horas a 4ºC. 3.2.- Ensayos Realizados 3.2.1.- Sueros examinados Antes de realizar los ensayos los sueros se inactivaron en baño de agua durante 30 minutos a 56 ºC, Los sueros fueron utilizados sin dilución alguna. 3.2.2.- Prueba de Aglutinación de Látex Para realizar la prueba de aglutinación de látex se utilizó una placa de vidrio fondo oscuro, donde se colocó 20 ul de suero inactivado mas 20 ul del reactivo de látex sensibilizado a las concentraciones de 2 mg/ml y se homogeneizó con un tips, seguidamente se agitó suavemente por rotación, durante 8 minutos y se realizó la primera lectura; luego a los 15 minutos se realizó una segunda lectura, sólo si en la primera lectura no existía aglutinación. 3.2.3.- Lectura de resultados. La aglutinación de las partículas de látex correspondieron a una prueba positiva. En los sueros negativos las partículas permanecieron en suspensión es decir sin aglutinación.(foto 06)

4.- Determinación de la Eficiencia de la prueba de aglutinación de Látex.

Finalmente, para la evaluación de la validez diagnóstica de la prueba de aglutinación de látex se determinó su sensibilidad con los sueros hidatídicos y su especificidad con sueros no hidatídicos y con sueros de pacientes con otras enfermedades parasitarias. Estos datos fueron calculados haciendo uso de una tabla tetracórica.

Para medir la repetibilidad de la prueba se realizó 10 ensayos por triplicado usando 10 sueros positivos y 10 sueros negativos.

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La reproducibilidad de la prueba fue medida en los departamentos de Junín, Ayacucho y Lima. Usando el mismo panel de sueros positivos y negativos que se utilizó para determinar la sensibilidad y especificidad. La concordancia de la repetibilidad y reproducibilidad de la prueba de aglutinación de látex fue calculada en porcentajes.

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V.-RESULTADOS

En el cuadro I se puede apreciar que de los 40 sueros hidatídicos 7 no reaccionaron (falsos negativos) a la prueba de aglutinación de látex, asimismo también se observa que de los 40 sueros no hidatídicos solamente reaccionaron en forma positiva 4 sueros (falsos positivos). Esto a una lectura realizada a los 8 minutos. El cuadro II muestra que de los 40 sueros hidatídicos solamente 1 no reaccionó (falso negativo) a la prueba de aglutinación de látex. Esto a una lectura realizada a los 15 minutos. En el cuadro III se aprecia y compara la sensibilidad y especificidad de la prueba de aglutinación de látex en relación a los tiempos de lecturas de los 8 y 15 minutos. En el cuadro IV se observa que de los 40 sueros no hidatídicos solamente reaccionaron en forma positiva a la prueba de aglutinación de látex 4 sueros, que correspondieron 2 a pacientes con cisticercosis y 2 con fasciolosis( falsos positivos).

Cuadro I. Prueba de Aglutinación de látex de sueros hidatídicos y no hidatídicos con lectura a los 8 minutos

LECTURA

A LOS 8 MINUTOS TOTAL LATEX POSITIVO

LATEX NEGATIVO

SUEROS

HIDATÍDICOS

33

07

40

04

36

40

NO HIDATÍDICOS

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Cuadro II. Prueba de Aglutinación de látex de sueros hidatídicos y no hidatídicos con lectura a los 15 minutos

LECTURA

A LOS 15 MINUTOS TOTAL LATEX POSITIVO

LATEX NEGATIVO

SUEROS

HIDATÍDICOS

39

01

40

04

36

40

NO HIDATÍDICOS

Cuadro III. Sensibilidad y Especificidad de la Prueba de Aglutinación de Látex usando 40 sueros hidatídicos y 40 sueros no hidatídicos

PRUEBA

CON LECTURA

CON LECTURA

LÁTEX

A LOS 8 MINUTOS

A LOS 15 MINUTOS

SENSIBILIDAD

82.5%

97.5%

ESPECIFICIDAD

90.0%

90.0%

PARÁMETRO

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Cuadro IV. Resultados de la Prueba de Aglutinación de Látex con lectura a los 15 minutos utilizando sueros de pacientes con hidatidosis, con otras parasitosis y de personas sin hidatidosis.

Patología

Hidatídicos

No Hidatídicos Cisti-

Fascio

Toxopla

Teni

Cha

Mala

Neg

cercosis

losis

smosis

osis

gas

ria

Hid

Total

2

2

0

0

0

0

0

43

Positivos

Compro bados 39

Negativos

01

3

3

5

2

2

1

20

37

Total

40

5

5

5

2

2

1

20

80

Resultados

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VI.-DISCUCIÓN La prueba de aglutinación de látex estandarizada en el presente trabajo con líquido de quístes hiadtídicos de ovinos, es válido para sueros de pacientes sospechosos de hidatidosis en Perú, es posible que utilizando la misma prueba se encuentre resultados diferentes con sueros de poblaciones de otros países, debido a que este valor varía en relación a la calidad y cantidad de anticuerpos formados por el huésped, en respuesta a los antígenos del quíste hiatidico. La calidad está determinada por la capacidad inmunogénica de los antígenos parasitarios que estimulen al sistema inmune del huésped y la concentración de anticuerpos depende de la intensidad del estímulo, ambos parámetros varían en las diferentes poblaciones del huésped14

La no detección de anticuerpos en 7 sueros con hidatidosis comprobada (falsos negativos) al realizar la primera lectura a los 8 minutos podría deberse a la muy escasa cantidad de anticuerpos de estos sueros ya que al realizar una segunda lectura a los15 minutos la reacción se hace positiva en 6 de estos 7 sueros. En uno de los sueros hidatídicos que no se detectó anticuerpos al realizar la segunda lectura a los 15 minutos, podría deberse a que este paciente albergaba un quíste calcificado, en el cual no hay salida de inmunógenos del parásito o es muy escasa. Se ha demostrado que la respuesta inmune del huésped está relacionada a la integridad de la capa germinal de la larva, la cual impide la salida del líquido hidatídico u otros productos parasitarios que estimulan al sistema inmune; de allí que los pacientes con este tipo de quístes muestran serología negativa.7 Se tiene información de que el suero que dio reacción falsa negativa a la prueba de aglutinación de látex, también dio reacción negativa a las pruebas de DD5, ELISA e Inmunoblot, realizadas en el Instituto Nacional de Salud en el año 2004. Si consideramos al paciente con quíste calcificado, como no hidatídico, la sensibilidad de la prueba de Aglutinación de látex subiría de 97.5% a 100%. Los principales factores que influyen en las respuestas del huésped a los antígenos del quíste hidatídico lo constituyen, la cepa de parásitos, la inmunocompetencia del huésped, el órgano parasitado, la fertilidad del quíste, la viabilidad de las larvas y la integridad de la pared quística19 La reacción cruzada observada en dos sueros de pacientes con cisticercosis y 2 sueros de pacientes con fasciolasis, nos revela la presencia de antígenos comunes o proteínas diferentes con los mismos determinantes antigénicos entre estas tres especies de

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helmintos20. No se encontró reacción cruzada con sueros de pacientes con toxoplasmosis, teniosis, chagas, malaria ni con sueros de personas sanas, lo cual nos demuestra la buena especificidad de la prueba de aglutinación de látex. La sensibilidad y la especificidad de la prueba de aglutinación de látex usando antígeno total de líquido hidatídico de ovino es de 97.5% y 90% respectivamente, la cual es muy superior al 87% y 88% hallada por Barbieri y Col., pues este utilizó como antígeno a una fracción lipoprotéica purificada del líquido hidatídico 21. Szyfres y col, utilizando como antígeno el líquido de quístes hidadídicos de ovinos, encontraron una sensibilidad de 93%22 la cual es ligeramente inferior a la hallada en el presente trabajo.

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VII.-CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye en lo siguiente:

1.- Se recomienda el uso de la prueba de aglutinación de látex con antígeno total del líquido de quístes hidatídicos de ovinos para el diagnóstico de rutina de la hidatidosis humana en regiones endémicas del país 2.-Se sugiere utilizar la prueba de aglutinación de látex como prueba de tamizaje para estudios epidemiológicos debido a su bajo costo, rapidez y posibilidad de automatización. 3.-Los estudios posteriores, deben estar orientados a caracterizar las fracciones protéicas de líquido hidatídico tratando de encontrar la proteína que se encuentre en alta concentración, que sea inmunogénica y específica, a fin de ser usada en el diagnóstico de la hidatidosis para elevar su especificidad.

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VIII.-REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Fernandez H. Perspectivas para la eliminación de la Hiadidosis en el cono sur. XII Reunión Interamericana a nivel Ministerio de Salud y Agricultura. OMS. OPS. 2001 2. Schenome H. Human Hidatidosis in Chile. Seroprevalence and estimate of the number of infected people. Bol Chil Parasitol 1999; 54:70-73 3. Náquira C. Epidemiología de la Hidatidosis en el Perú 1989. Anales del Seminario Nacional de Hidatidosis y Enfermedades de Transmisión alimentaria. Perú: Editorial EIRL, 1989. 4. Rojas M. Cisticerosis e Hidatidosis, Metocestodiasis de Perentorio control en el Perú. Universidad Nacional Mayor de San Marcos..2000 5. Lagos L y col. Costos de la Hidatidosis Humana. Facultad de Medicina de la Facultad de Chile.. V Congreso Peruano de Parasitología. Pag, 107. Trujillo, Perú. 6. Larrieu E y col Control de la Hidatidosis en la provincia de Río Negro Argentina.. Rev. San Hig. 1994; 68: 197-202. 7. Escalante H. Estandarización y Evaluación de la Técnica de ELISA para el diagnóstico serológico de la hidatidosis humana usando Antígenos Parcialmente Purificado de Líquido Hidatídico. Universidad Nacional de Trujillo, TrujilloPerú, 1991. 8. Salvatella R, Pulma C. Monografías del Instituto Nacional de Salud. Las Enfermedades Transmisibles en el Uruguay. 2001. pp : 26-27. 9. García J, Picazo J. Microbiología Médica. 1° Edición. Editorial Harcourt Brace. Madrid-España, 1998.

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I.

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realizados

con

sueros

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IX.-ANEXOS

Foto 01: Quístes hidatídicos en pulmón e hígado de ganado ovino a)

b)

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Foto 02 Hígados y pulmones de ovino con quístes hidatídicos procedentes del departamento de Ayacucho

Foto 03 Recolección de Líquido hidatídico

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Foto 04 a) Liofilización del Líquido hidatídico de Ovino

b) Antígeno hidatídico liofilizado

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Foto 05 a)

b)

Caracterización de los componentes protéicos del antígeno hidatídico en gel de poliacrilamida

Demostración del Arco V del antígeno hidatídico en gel de Agarosa

DESARROLLO DE LA PRUEBA DE AGLUTINACIÓN DE LÁTEX PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA HIDATIDOSIS HUMANA

Foto 06 a)

Aglutinación negativa

b)

Aglutinación positiva