PROCESOS BIOTECNOLOGICOS I Area Fisicoquímica (Plan de estudios 2007)

TEORICOS 2011 SEGUNDO CUATRIMESTRE

Responsable del dictado: Prof. Asociado G. Picó

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Dictado de la Asignatura: Responsable: Profesor Asociado G. Picó Prof. Asociada: Dra B. Farruggia y Prof. Adjunta: Dra B. Nerli

Promoción directa de la Asignatura sin examen final + Asistencia: clases Teóricas obligatorias, Tareas de Aula y Laboratorios. (ver Cronograma en transparente) + Aprobar Tareas de Aula y Laboratorios + Aprobar Parcial I y II o sus recuperatorios

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BIBLIOGRAFIA

Bibliografia: fotocopias de capítulos de Libros (ver cada profesor) Guía de Estudio (en fotoc. de C. de Estudiantes). Apuntes de temas que están poco descriptos en libros

- Doran, P. Principios de los Bioprocesos. Editorial Acribia (1995) - A. Pessoa, Beatriz Van Kilikian Purificacao de Productos Biotecnologios - G. Jagnow , W. David, Biotecnologia Introduccion con experimentos modelos Ed. Acribia -W. Mc Cabe, J. Smith, P. Harriott Operaciones Unitarias en Ingenieria Quimica 7ma Ed - Perry's Chemical Engineers' Handbook (7th Edition) - Knovel -

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OBJETIVO GENERAL DE LA ASIGNATURA: Introducir al alumno en el escalado de los Bioprocesos.

OBJETIVOS PARCIALES 1) Introducir al alumno en la química de la MACRO ESCALA aplicada a la obtención de moléculas a partir de procesos biológicos 2‐ Introducir el concepto de Operación Unitaria, su clasificación y los principios  fisicoquímicos de las misma con sus  ecuaciones de estado 3) Desarrollar  criterios de optimización para el escalamiento (scale‐up) de los  procesos.  Integrar las OPERACIONES UNITARIAS entre si.

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1915 

OPERACIONES UNITARIAS: OPERACIONES UNITARIAS INGENIERIA QUIMICA OBTENCION DE GRANDES  CANTIDADES DE MOLECULAS DE BAJO PESO MOLECULAR Aporta las leyes y  Ecuaciones de  Estado

FISICOQUIMICA

1930‐ 1950   OBTENCION DE GRANDES CANTIDADES DE MACROMOLECULAS  Insulina, Proteínas plasmáticas, quimosina, etc.

1980 MODIFICACION GENETICA DE MICRO ORGANISMOS OBTENCION DE FUENTES  INAGOTABLES DE ENZIMAS Y OTRAS MACROMOLECULAS

Se incorpora la BIOLOGIA a las operaciones unitarias

BIOPROCESOS

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¿ Cómo se estudian los Procesos Biotecnológicos en cualquier Universidad ?

PROCESOS BIOTECNOLOGICOS

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

PROCESOS DE SEPARACION (downstream processing)

(fermentación)

Molécula de interés

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FISICOQUIMICA PROCESOS BIOTECNOLOGICOS un Ingeniero Químico posee excelentes herramientas para diseñar Operaciones Químicas en macro escala, carece de conocimientos de: Microbiología, necesarios para entender el metabolismo y desarrollo de microorganismos productores de moléculas lábiles, Biología Molecular, necesarios para modificar genéticamente microorganismos, Fisicoquímica de la soluciones de macromoléculas, necesarios para entender los Procesos Químicos donde se deben manipular y estabilizar macromoléculas. Fisicoquímica de los fenómenos superficiales, necesarios para interpretar el mecanismo mediante el cual se llevan a cabo diferentes Procesos Químicos como cromatografía, adsorción, formación de emulsiones, etc. 7

OBTENCION DE UNA SUSTANCIA EN EL LABORATORIO Masas o volumenes de reactivos muy pequeños: 1 ‐100 ‐1000 mL (g) Los tiempos no importan (muchas veces son largos o estan fraccionados en días Recipientes empleados: los clásicos que conocemos de vidrio No se calculan costos El producto final tiene una masa de mg o menos

OBTENCION DE UNA SUSTANCIA EN  MACRO ESCALA Masa o volumenes de miles de Kg o L Los tiempos SI importan Los ciclos deben durar poco tiempo y son continuos Los recipientes no son los de laboratorios Los costos ($) SI importan !!!! El producto a obtener representa masa de miles de g, Kg

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Escala industrial Aparecen dos variables nuevas asociadas a los procesos en escalado: el tiempo: no puede ser cualquiera, debe estar muy acotado y perfectamente determinado, esto esta relacionado con la segunda variable; el costo del proceso, el cual pasa a ser la variable mas importante de todas, dado la magnitud que adquiere por la extensión del sistema que se esta manejando. las variables que caracterizan el proceso en el laboratorio (rendimiento, pureza del producto, etc.) no muestran los mismos valores que las obtenidas cuando el proceso se realiza en macro escala.

¿Por qué se producen estas diferencias, si el proceso que se ejecuta es el mismo desde el punto de vista químico?

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¿ Cómo pasamos del laboratorio a la macro escala ?

¿que hago?

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Se pueden emplear diferentes caminos Fenomenológico: fundamentado en algunos razonamientos  teóricos que permite hacer predicciones en rangos o intervalos de  operaciones no estudiados experimentalmente.

Método basado en la experiencia (empirismo): recurre al registro   de los datos del proceso en la escala existente y una posterior  relación matemática de ellos,  surgen correlaciones empíricas que permitan escalar el proceso. No se puede generalizar para diferentes procesos.

Método basado en el principio de similaridad: 11

Fundamento teórico del escalado El principio de similaridad hace referencia a la relación que existe entre el tamaño de los  sistemas físicos, siendo un principio básico en el escalamiento  de los procesos químicos. ¿Qué similaridades hay?

Geométrica Cinética

?

Dinámica Térmica Química

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Suponiendo dos mezcladores de 1 L y otro de 1000 L

C1

a1 = cte a2

H1 V1 F2

b

V3

C2

H2

V4

b1

F3

V2

F4 a1

1L F1

Similaridad geometrica: cuando sus medidas mantienen una relación constante

a

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1000500 L L

Similaridad cinemática:

Similaridad dinámica:

V1 = cte V2

F1 = cte F3

C1

Similaridad térmica:

H1 V1 F2

b

V3

C2

H2

V4

b1

H1 = cte H2

F3

V2

F4 a1

1L F1

a 500 L

Similaridad química:

C1 = cte C2 14

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Similaridad geométrica NO se cumple el principio de similaridad geométrica

Diámetro 1000 veces mayor ¡¡ 100 m !!!

h= 12,7 cm

h= 121 cm

Diámetro 10 cm

Valor de diámetro normal

Diámetro 100 cm

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Similaridad calórica

Flujo de Q Flujo de Q

Volumen total 1 L

Volumen total 1000 L

1 kcal / L

1 kcal / L

Calor total 1 kcal

Calor total 1000 kcal

cm2

Superficie 45844 cm2

Superficie 477

H = 2 cal/cm2

H = 21,8 cal / cm2 16

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Similaridad dinámica

Potencia 20W = Volumen 1L Potencia 20000W X 1000 = Volumen 1000 L

Relacion de Potencia =

Imposible de obtener

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Hay similaridades geometricas,   pero..........

≠ En muchos casos el principio de similaridad no se cumple...............

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El mezclado de sustancias ..........

≠ Agitador de mesa de laboratorio

Agitador industrial

Fase I

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Fase II

Gotas distribuidas uniformemente y de diametro constante

Las burbujas tienen tendencia a moverse por gravedad ascendiendo por la fase liquida

Gotas distribuidas no uniformemente y de diametro variable

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La transferencia de calor .......... Flujo de calor ≈ pocas calorias ΔT≈ 0

≠ El equilibrio térmico entre sistema y medio ambiente se mantiene facilmente

Flujo de calor miles de calorias ΔT >> 0

El equilibrio térmico entre sistema y medio ambiente se mantiene mediante sistemas adicionales que facilitan la disipación de calor

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Conclusión los valores de las variables que caracterizan un Proceso Biotecnológico llevado a cabo a escala de laboratorio, no son las mismas que cuando el proceso se realiza en escalado.

≠ Además de este problema, se deben responder otras cuestiones, tales como: - a producción de desperdicios: ¿como se eliminan ? - el costo del proceso - el manejo de grandes volúmenes o masas de reactivos calidad y pureza de los reactivos, por los costos no pueden ser de la misma 22 calidad que los empleados en el proceso de laboratorio.

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El escalado El escalado de los procesos: un largo camino de los procesos: un largo camino

LABORATORIO 1-5 L ESCALADO INDUSTRIAL 100.000 L

PLANTA PILOTO 100 -500 L

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VENTAJA DE LA PLANTA PILOTO: - Muestra el rendimiento del proceso en escala intermedia.

- Muestra el comportamiento de las variables al pasar a la escala piloto. - Permite evaluar los residuos.

- Evalúa el costo de reactivos. - Este ensayo es mas económico, si hay errores o hay que entrenar personal. 24

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EL CAMINO GENERAL DE UN PROCESO DE OBTENCION DE UNA MOLECULA

Materias Primas o

Transformación Física

Reactivos

Transformación Química

Productos

Operaciones Unitarias

Producto final

Residuos Reactor Químico o Fermentador

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OPÉRACION UNITARIA    ¿ QUE ES ?   (OPERACION BASICA) Concepto introducido en 1915 por el profesor Little, del  Massachussets Institute of Technology. "... todo proceso químico puede descomponerse en una serie  ordenada de pasos, que pueden llamarse operaciones unitarias, como pulverización, secado, cristalización, filtración, evaporación,  destilación, etc. " El número de estas operaciones básicas no es muy grande, y  sólo  unas cuantas de entre ellas intervienen en un proceso  determinado." 26

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Operaciones unitarias que forman un proceso de obtención de una sustancia

trituración

filtración

destilación

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Las Operaciones Unitarias son iguales e independiente del proceso y del producto final  que se obtenga.

El fundamento científico de una Operación Unitaria es el mismo,  independiente del proceso en que se aplique. Si el objetivo de las OU es obtener una molécula a partir de un ser vivo tendremos un

PROCESO BIOTECNOLOGICO Operacion Unitaria DESTILACION ETANOL Mosto fermentado

Diferentes fracciones de hidrocarburos

Petroleo

Si el objetivo de las OU es obtener una molécula a partir de sustancias químicas tendremos un

PROCESO INDUSTRIAL

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EJEMPLO: producción de insulina recombinante

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DIAGRAMAS DE FLUJO Esquema simple que describe un proceso quimico, detallando cuales son las operaciones unitarias.

EJEMPLO: EXTRACCIÓN DE ACEITE DE POROTO DE SOJA

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En cada operación unitaria se cambian las condiciones de  la materia, ya sea:

1. Modificando su masa o composición

2. Modificando el nivel y la calidad de la  energía que posee 3. Modificando su cantidad de movimiento 31

Siempre hay una fuerza conductora debido a un gradiente en una variable fisica

Fuerza G

J = −D

Gradiente de Temperatura

∂φ ∂x

φ = G, P, T presión

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Clasificación de las OU, según la propiedad que se  transfiere

FLUJO CALOR A TRAVES DEL SISTEMA

Cantidad de calor: Dehidratación

Evaporación

Congelación

Pasteurización

Liofilización

Cristalización

Esterilización

Secado

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Flujo forzado de materia a tavéz de un medio o barrera

O. U. de TRANSFERENCIA DE MATERIA Destilación

Absorción

Secado

Adsorción

Cristalización

Liofilización

Osmosis Inversa 34

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Clasificación de las OU, según la propiedad que se  transfiere

FLUJO FORZADO DE MATERIA A TRAVES DE UN MEDIO O BARRERA

Cantidad de movimiento: Sedimentación

Filtración

Ultrafiltración

Osmosis inversa

Mezcla

Centrifugación

Emulsificación

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Flujo forzado de materia a tavéz de un medio o barrera

O. U. DE CAMBIO EN LA CANTIDAD DE MOVIMIENTO Sedimentación

Filtración

Ultrafiltración

Osmosis Inversa

Mezcla

Centrifugación

Emulsificación

Flotación 36

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CADA OPERACIÓN UNITARIA TIENE UNA FUERZA  IMPULSORA, LA CUAL PRODUCE LA TRANSFERENCIA

1. Transferencia de masa:   DIFUSION: EL GRADIENTE ES LA CONCENTRACION Benceno + Acetona Agua

Benceno

Agua + Acetona

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2. Transferencia de calor: CONDUCCION,  CONVECCION: EL GRADIENTE ES LA TEMPERATURA FLUJO DE ENERGÍA COMO CALOR

Vapor de disolvente CALOR

ALIMENTO Disolución concentrada

Vapor de agua

Condensado 38

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3. Transferencia de cantidad de movimiento. ROZAMIENTO: EL GRADIENTE ES LA VELOCIDAD Operación básica controlada por la transmisión de movimiento

alimento

Liquido clarificado

lodos

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CLASIFICACION DE LAS OPERACIONES UNITARIAS  SEGUN SU APLICACION

1‐ SEPARACION Procesos industriales

+

2‐ CONSERVACION Procesos biológicos 40

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1. OPERACIONES DE SEPARACION ABSORCION ADSORCION MICRO FILTRACION ULTRA FILTRACION EXTRACCION DESTILACION OSMOSIS INVERSA CRISTALIZACION EVAPORACION SEDIMENTACION LIXIVIACION CENTRIFUGACION

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2. OPERACIONES DE ESTABILIZACION O  CONSERVACION CONGELACION LIOFILIZACION CRISTALIZACION DESHIDRATACION SECADO ESTERILIZACION PASTEURIZACION ESCALDADO

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Fisicoquímica de los fenomenos de superficie Operación Unitaria Flotación

Ley Fisica o Fisicoquímica Ecuacion d e Dupre

Emulsificación

Energía libre de formación de una emulsión Velocidad de sedimentacion : ley d e Stokes

Sedimentacion

Ecuación de estado

ΔG flotación = γ GL (cosφ − 1)

Adsorción

Isotermas de adsorción : Langmuir y Freunlich

Cromatografia

Isoterma de adsorcion de Langmuir y Freunlich

ΔGemulsifica ción = ΔAγ WO − TΔ S S Vs =

2 g ( ρ s − ρ agua Cρ

n nKC = ; w 1 + Kc n nKC = ; w 1 + Kc

Vol A particula

n = aC b w n = aC b w

Fisicoquímica de los cambios de fases Operación Unitaria Destilación Congelación Cristalización

Desecación

Osmosis Inversa

Ley Fisica o fisicoquímica Ecuación de estado Equilibrio entre fases: liquido- vapor P = P o x -Ley de Raoult Equilibrio entre fases: sólido- ΔT = K c m líquido - Propiedades coligativas Equilibrios entre fases: sólido- ln S = f ( pH , T , etc) liquido, solubilidad vs temperatura, S: solubilidad pH, fuerza iónica aW a (C − 1) 1 Equilibrio entre fases: vapor- solido = + (1 − aW )W Wm C Wm C Isoterma BET Propiedades coligativas

π = RT c

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Fisicoquímica de los sistemas en equilibrio Operación Unitaria Ley Fisica o fisicoquímica Ecuación de estado Extracción liquido - Reparto de un soluto entre dos fases [ S ] fase1 K= líquido inmiscible

[ S ] fase 2

Lixiviación

Reparto de un soluto entre dos fases inmiscibles

K=

[ S ] fase1 [ S ] fase 2

Fisicoquímica de las soluciones de macromoléculas Operación Unitaria Micro filtra ción Crioprotección Ultrafiltración

Ley Fisica o fisicoquímica Presión Osmótica Equilibrio entre fases solida liquida: eutécticos Presión Osmótica

Ecuación de estado

π = RT c

y

π = RT c

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PRODUCCION DE UNA MOLECULA A PARTIR DE UN MICROORGANISMO O PRODUCTO NATURAL

LAS OPERACIONES UNITARIAS EN LOS PROCESOS BIOTECNOLOGICOS

ERITROPOYETINA MICROBIANA QUIMOSINA DE LEVADURA O ECHERICHIA COLI FACTOR IX DE COAGULACION,

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HORMONA DEL CRECIMIENTO EN LECHE DE VACAS TRANSGENICAS

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FUENTE BIOLOGICA MOLECULA DE INTERES CONTENIDA EN SISTEMA COMPLEJO PRODUCCION DE LA BIO MOLECULA

Downstream processing OPERACIONES UNITARIAS DE AISLAMIENTO Y PURIFICACION

FILTRACION- ABSORCION – EXTRACCION ADSORCION (CROMATOGRAFIAS) OSMOSIS, ETC. CONCENTRACION

OPERACIONES UNITARIAS

LIOFILIZACION

DE ESTABILIZACION DEL PRODUCTO FINAL

ADICION DE SOLUTOS CRISTALIZACION, ETC. 47

Veamos algunos ejemplos de procesos biotecnológicos

INDUSTRIA LACTEA FUENTE BIOLOGICA LECHE

FILTRACION

CENTRIFUGACION

Donde se produce el proceso biológico

PASTEURIZACION +

Leche 3 % grasa

GRASA ($)

MICRONIZACÍON Globulos de grasas uniforme

Todos procesos físicos

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OBTENCION DE ETANOL FERMENTACION DE AZUCARES FINALIZA CUANDO LA [ETANOL] = 12- 14 % v / v (Parte química del proceso)

DESTILACION DEL AZEOTROPO Todos procesos físicos

(Parte física del proceso)

Etanol absoluto (Eliminación del 4 % de agua)

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