Efecto del PH y Temperatura sobre una reacción enzimática • Objetivos: ♦ Medir la Actividad enzimática de B−Glucosidasa con respecto a temperaturas diferentes y Ph diferentes. ♦ Calcular la velocidad de reacción enzimática ♦ Medir la temperatura optima para la enzima. ♦ Medir el PH optimo de la enzima ♦ Hacer curvas de calibrado ♦ Realizar gráficos con ecuación de la recta, velocidad V/s Temperatura, velocidad V/s Ph. Resultados: Tabla de datos Tubos

[PNF](nm)

1 2 4 5 6 7

0.00666 0.0133 0.02 0.0266 0.0333 0.04

Absorvancia (405nm) 0.126 0.23 0.3 0.359 0.390 0.430

M=8.81x; B=0.1014 A=8.81x + 0.1014 Para calcular la concentración de [PNF] : Vinicial*Cinicial=Vfinal*Cfinal (V=velocidad , C=concentración) Ejemplo de calculo [PNF] [PNF]=(0.1*0.2)/3 =0.0066

1

*Para calcular el coef de extinción (mM) A=* l*C =8.81 (1/mM*cm) Efectos de la temperatura Tabla de datos TUBO 1 2 3 4

T° (°C) 16 40 60 100

A(405nm) 0.474 0.482 0.502 0.401

Control −0.009 −0.006 −0.007 0.000

Calculo de la velocidad enzimática: V(UI/ml)= (A/*l )*(1/t)*(V/v)*Fd A= Absorvancia del tubo menos la absorvancia del control *l =Pendiente de la curva de calibrado (8.60) t = Tiempo (5 Min) V= volumen del ensayo (E+S) V= volumen de enzima (0.1 ml) Fd = factor dilucion del ensayo =volumen total/volumen de ensayo Fd=3ml/0.9+0.1=3 Calculo de tubo 1 (ejemplo): V(UI/ml )=(0.474−(−0.009))/5.23*(1/5min)*(1ml/0.1ml)*3 =0.554 (UI) Tabla de datos Tubo 1 2 3 4

T° (°C) 16 40 60* 100

V(UI/ml) 0.554 0.560 0.584 * 0.460

Efectos del PH sobre la reacción enzimática Tabla de datos

2

TUBO B 1 2 3 4

PH 5.0 4.0 5.0 6.0 7.0

A (405 nm) − 0.243 0.482 0.95 0.288

Control − 0.1 0.0 0.01 0.003

Cálculos de la velocidad de reacción enzimática: Calculo de tubo 1 (ejemplo): V(UI/ml )=(0.243−0.1)/5.23*(1/5min)*(0.1+0.9ml/0.1ml)*3 =0.164 (UI) Tabla de datos TUBO 1 2 3 4

PH 4.0 5.0 6.0 7.0

V (UI/Ml) 0.164 0.553 1.08 0.327

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