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Eficacia del extracto de las hojas del Neem Azadirachta indica A. Juss en el control de nemátodos gastrointestinales en ovino Pelibuey - Efficiency of the Neem Azadirachta indica A. Juss leaf extract in the control of gastrointestinal nematodes in Pelibuey sheep Dublín, Devon Ronald, MVZ (Tesista): Ministerio de Agricultura de Guayana [email protected] | Roque López, Eugenio, Ph.D: Departamento de Parasitología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Agraria de La Habana (UNAH) [email protected], [email protected] | Estrada Ortiz, Jesús, Ph.D: Departamento de Productos Naturales. Instituto de Investigaciones Fundamentales En Agricultura Tropical (INIFAT) [email protected]

Resumen Con el objetivo de evaluar el efecto del extracto acuoso de las hojas de Neem (Azadirachtina indica A. Juss) sobre los nemátodos gastrointestinales en ovinos, se llevó a cabo un experimento en la colonia de ovino de CENPALAB. Se emplearon 110 reproductoras de 45 kg y edad promedio de 22 meses, de la raza Pelibuey. Las hojas fueron cosechadas, deshidratadas y molinadas en INIFAT, lo cual fue mezclado en agua a una proporción de 1 g/ 3 mL y dejado en reposo durante 12 horas obteniendo el extracta acuoso que fue administrado por vía oral. Se realizó un primer experimento en búsqueda de una dosis efectiva del extracto y un segundo para determinar la frecuencia necesaria para emplear dicha dosis, en ambos casos, se realizó el coprocultivo determinando así los géneros susceptibles al Neem. Se colectaron muestras coprológicos directamente del recto en los 3 días antes y 7, 14 y 21 después de la aplicación de los tratamientos. El HPG se estableció mediante la técnica de McMaster. Empleando el programa STATGRAPICS plus 5.1, se realizaron pruebas de Duncan estableciendo diferencias significativas para HPG antes y 7, 14 y 21 días después de los tratamientos en los grupos tratados con 2 o 3 aplicaciones destacándose el grupo tratado con 3 aplicaciones a la dosis de 30 g/90 mL con intervalos de 48 horas y concluimos que esta es la forma efectiva para aplicar el extracto lo cual produce disminuciones en los géneros Strongyloides, Haemonchus, Ostertagia y Trichostrongylus en un 100%.

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Palabras claves: Neem, nematodos, gastrointestinales, ovino, Pelibuey. Abstract With the objective of evaluating the effects of the watery extract of Neem (Azadirachtina indica A. Juss) leaves on gastrointestinal nematodes in sheep, an experiment in the ovine colony of CENPALAB was carried out. A total of 80 Pelibuey ewes with an average weight and age of 45 kg and 22 months were used. The leaves were harvested, dried and ground to powder in INIFAT which was then mixed in water at a proportion of 1 g: 3 ml and left at rest during 12 hours, obtaining the watery extract that was administered orally. The first experiment was to find an effective dose of the extract and a second one to determine the necessary frequency to apply this dose. Faecal samples were collected from the rectum 3 days before and 7, 14 and 21 days after the application of the treatments. The EPG was determined using the McMaster technique and in both cases faecal cultures were carried out determining in the susceptible genus. Using the STATGRAPICS plus 5.1 program, Duncan tests were carried out establishing significant differences between the EPG before and 7, 14 and 21 days after the treatments in the groups treated with 2 or 3 applications with the group treated with 3 applications at the dose of 30 g in 90 ml of water with intervals of 48 hours standing out as the best. We conclude that this is the effective form to apply the extract which produces a 100% decrease in Strongyloides, Haemonchus, Ostertagia and Trichostrongylus. Key words: Neem, gastrointestinal, nematodes, sheep, Pelibuey.

Introducción El ganado ovino es una fuente para la obtención de proteína animal, cuero y carne en beneficio de la sociedad humana; dentro de los problemas que afectan el desarrollo de sus poblaciones están las enfermedades parasitarias ocupando un lugar principal según Perry et al., (2002); Sani et al., (2004) donde las condiciones agro-ecológicas y geoclimáticas en los trópicos favorecen su alta incidencia (Soulsby, 1982). El parasitismo afecta de manera importante el desarrollo de la ovinocultura debido a que provoca trastornos que interfieren en la nutrición y el desarrollo normal de los animales López y Vázquez, (1995); Cervantes et al., (1997), origina pérdida de peso, anorexia,

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anemia, retardo en el crecimiento, retraso en la madurez sexual, disminución en la producción de carne y leche, y favorece la susceptibilidad a enfermedades secundarias, provocando pérdidas cuantiosas en la producción. Parasitismo por nemátodos gastrointestinales provoca una pérdida promedio en sangre de 0.05 mL/día con una rápida caída en el volumen de células y el descenso en la absorción de hierro desde los intestinos causando una severa anemia y muerte súbita según (Khalid et.al., 2005). Castells y Nari, (1996) reportan que en el Uruguay las pérdidas en la ovinocultura por parásitos gastrointestinales han sido cuantificadas y hoy se sabe que en corderos altamente parasitados existe hasta un 50% de mortalidad; pérdidas de peso vivo de hasta un 20% y reducción en la producción de lana de hasta un 30%. El control de las enfermedades parasitarias está basado en el regular tratamiento antihelmíntico y los antihelmínticos comerciales han sido considerados durante mucho tiempo como la única forma de controlar la infección parasitaria; sin embargo, ellos son caros y generalmente no disponibles a los campesinos en las áreas rurales (Chandrawathani et al., 1995; Conder y Campbell, 1995; Chandrawathani et al., 2004). Nari y Hansen, (1999) señalan que hay algunas desventajas graves de usar estos antihelmínticos como son problemas de residuos químicos en productos alimenticias de origen animal, toxicidad y el desarrollo de resistencia por parte de los parásitos helmintos frente a esos medicamentos donde esta última está extendida en la especie ovina y constituye un obstáculo serio para el efectivo control de las infecciones por helmintos en este especie. Además, la persistente demanda del público por productos animales orgánicos, libres de químicos, obligan a los productores e investigadores a desarrollar alternativas para el control de parásitos gastrointestinales Duval, (1996). Entre estas alternativas se encuentran el empleo de antihelmínticos, basados en remedios antiguos, compuestos de hierbas y extractos de plantas los cuales poseen en la actualidad importancia científica (Chandrawathani et al., 1994). La OMS reconoció la necesidad para la investigación y movilización de las prácticas medicinales antiguas para cuidar los animales y dio cuenta que el sistema tradicional de medicina puede tener un rol importante en el desarrollo del ganado en los países en desarrollo señala el WHO, (1993). Además, El Comité Nacional de Investigación (NRC) de los Estados Unidos (1992) publicó un reporte titulado “Neem: A Tree for Solving Global Problems”; el NRC considera el árbol del Neem como el

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recurso natural más comprometido de todas las plantas por sus múltiples propiedades y usos, que beneficiará a toda la población humana. El árbol Neem (Azadirachta indica) está presente en muchas explotaciones de ovino y resultados experimentales muestran que este árbol produce principios activos efectivos, particularmente contra endoparásitos Pietrosemoli et al., (1999); Salazar, (1999); Pietrosemoli et al., (2002); Salazar, (2004), sin embargo, la preparación y dosis no parece estar clara. Teniendo presentes las razones anteriormente referidas, constituyen los objetivos de esta investigación, estudiar las hojas de Neem como un posible antihelmíntico natural para el uso en pequeños rumiantes. 1.1. Problema Científico ¿Cual es la eficacia del extracto de las hojas del Neem (Azadirachta indica A. Juss) en el control de nemátodos gastrointestinales en ovino Pelibuey? 1.2. Hipótesis El extracto acuoso de las hojas del Neem (Azadirachta indica A. Juss) presenta propiedades antihelmínticas que justifican su empleo como medicamento alternativo para el control de nemátodos gastrointestinales en ovino Pelibuey, particularmente en sistemas productivos autosostenibles y ecológicos. 1.3. Objetivo Conocer la eficacia del extracto acuoso de las hojas del Neem (Azadirachta indica A. Juss) en el control de nemátodos gastrointestinales en ovino Pelibuey. 2.

Materiales y métodos

Las investigaciones se efectuaron durante el período de febrero a mayo 2007 en la colonia de ovino que pertenece a la División de Animales Convencionales de CENPALAB. Se utilizaron 60 reproductoras vacías de la raza Pelibuey Bermejo Oscuro con un peso promedio de 45 kilogramos y edad promedio de 22 meses, los cuales fueron distribuidos en 7 grupos nombrados F (n=10): Control, G (n=10): Neem como aplicación única; H (n=10): Neem con 2 aplicaciones con intervalos de 7 días; I (n=10): Neem con 3 aplicaciones con intervalos de 7 días; J

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(n=5): Neem con 3 aplicaciones con intervalos de 24 horas; K (n=5): Neem con 3 aplicaciones con intervalos de 48 horas y L (n=10): control positivo con Labiozol (Albendazol) por vía subcutánea a una dosis de 5,5 mg/kg. PV. 2.1. La obtención y administración del extracto de las hojas de Neem (Azadirachta indica A. Juss) Las hojas del Neem (Azadirachta indica A. Juss) fueron cosechadas manualmente de árboles ubicados en el Instituto de Investigaciones Fundamentales En Agricultura Tropical "Alejandro Humboldt" (INIFAT) después la cosecha de las frutas y fueron separadas de sus folíolos, lavados con agua limpia y secados previamente al sol en tendales durante 24 horas basado en lo expresado por Schmutterer, (1995) quien plantea que esto es para prevenir la descomposición de los principios activos. A continuación las hojas fueron colocadas en una estufa al 50oC durante un período de 24 a 48 horas hasta que se cruja y deshace con el tacto de mano que significa que las hojas del Neem presentaban 6 a 8% de humedad. Las hojas una vez secadas fueron molidas obteniendo un polvo de color verde claro y un olor característico con partículas de 1 ≤ 2 mm con un contenido de humedad de 8 ≤ 10%, el cual es comercializado por INIFAT como FoliarNim-HM. Esto fue la forma de almacenar el producto natural y según Álvarez et al., (1989) es recomendable confeccionar los medicamentos a partir de la droga seca, ya que de esta forma la dosificación se hace más precisa. Como Gomero, (1994) planteó que los productos naturales (alcaloides, esteroides, flavonoides, terpenoides, quiones) deben ser extraídos tal como están en la planta, sin que sufran modificación alguna que pueda alterar sus propiedades biológicas, el método de extracción acuosa elaborado por Toledo et al., (1990) fue seleccionado porque era el más adecuado en este caso. El proceso de la extracción acuoso comenzó en la tarde antes el día del tratamiento de los animales así evitando la fermentación de los azúcares que contienen el Neem que conduce a la pérdida de sus propiedades. Para desarrollar este método se hizo una maceración utilizando un recipiente herméticamente cerrado usando como solvente extractor agua estéril a una temperatura de 45 oC. Se realizó la mezcla del polvo con el líquido extractor en una proporción de 1 gramo en 3 mililitros utilizando una batidora. Esto se quedó en reposo durante las horas de la noche (14 horas) de tal modo que las sustancias puedan desprenderse bien para pasar al agua como fue

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recomendado por Estrada y López, (1998). El extracto tomó un color verde oscuro con un olor característico que coincida con lo planteado por Estrada y López, (1998). El extracto obtenido muestran claramente que la azadirachtina es muy soluble en agua coincidiendo con Sánchez, (2007) que señaló que el Neem contienen varios miles de componentes químicos, de especial interés son los terpenoides, compuestos por C, H y O, la presencia del oxígeno hace esos compuestos más solubles en agua, metanol o etanol que en hexano, gasolina u otros solventes similares. El extracto fue administrado por vía oral utilizando una botella a una dosis de 30 gramos de hojas secas del Neem disueltos en 90 mL de agua. 2.2. Procesamiento de las muestras de heces fecales Se realizó el muestreo de heces fecales antes tratamiento y 7, 14 y 21 días post tratamiento donde se colectaron 5 a 15 gramos en horas de la mañana directamente del recto de cada animal por estimulo digital durante la mañana, antes de que los animales salieron al pastoreo. Las muestras recolectadas fueron almacenadas en frascos de plástico, cada uno de ellos con la información de cada ovino, para su transporte al Laboratorio de Parasitología Veterinaria de la Unidad Docente Nazareno, donde se procesaron el mismo día. En el laboratorio las muestras fueron procesadas mediante los procedimientos coprológicos de concentración-flotación de McMaster descritos por Morales y Pino, (1977); Thienpont et al., (1986); Hansen y Perry, (1994); RodríguezVivas et al., (1994); Vásquez et al., (2001); Morales et al., (2004) donde de cada muestra se tomaron 3 gramos de heces, los cuales fueron diluidos en 42 mL de jarabe. La suspensión fue percollada y el sedimento obtenido se mantuvo en reposo durante 5 minutos después de los cuales el tercio superior de la suspensión se dispensó en una cámara especialmente diseñada para el conteo de los huevos, conocida como cámara de McMaster para llevar a cabo el cuento de huevos de parásitos gastrointestinales 10 minutos después. Para estimar el número de huevos por gramo de heces fecales, cada huevo observado dentro o sobre las líneas de demarcación y luego se aplicó la siguiente formula: EPG = Campo A + Campo B

x 50 2

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Las muestras de heces de cada fecha de muestreo y grupo se mezclaron y se homogenizaron después de realizarles su conteo fecal de huevos para hacer el coprocultivo, lo cual fue realizado en el mismo día del muestreo mediante la técnica descrita por Roberts y O´Sullivan (1952) para la obtención de las L3. Se emplearon aproximadamente 20 g de material fecal, lo cual fue depositado sobre la superficie de la placa más pequeña evitando que no llegue a los bordes de la misma. Durante un período de 11 días se mantuvo las heces fecales húmedas, a una temperatura entre 28oC y 30oC con la placa semicerrada. Se colectaron las larvas de L3 al décimo primer día donde las heces fueron colocadas en un embudo de Baerman con agua sobre una criba en la superficie del embudo para obtener las L3 que han emigrado fuera de las heces en el fondo del embudo, los cuales fueron colectados en las primeras gotas del sedimento luego de abrirle la llave. Se identificaron 100 larvas del tercer estadio por fecha de muestreo y grupo, basados en sus características morfológicas mediante las claves descritas por (Rodríguez et al., (1987). 2.3. Análisis estadístico Se realizó el análisis de varianza (ANOVA) de clasificación simple y por lo tanto se comparó las medias con Test de Rango Multiple de Duncan al 95% de confiabilidad con el STATGRAPHICS Plus y fueron analizados utilizando metodologías descriptivas incluidas en el mismo programa, el cual emplea los procesos descritos por (Bailey, 1992). 3. Resultados y discusión En el grupo de animales que sirvieron de control negativo (no tratados) no se mostró notable variación en cuanto al HPG (Tabla 1). Se mantuvo un promedio de hpg alto durante el curso del tiempo estudiado. Tabla1: Resultados del Grupo F (Control o testigo sin tratamiento) Identificación 241 6103 6083 4012 5165 5263

EPG Inicial 5800 1850 1250 900 500 400

EPG 7º día después 5500 1650 1900 1200 350 50

EPG 14º día después 6950 1700 1450 1700 1000 450

EPG 21º día después 400 5050 1100 1100 250 250

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2906 1666 601 760 Promedio CV Des. Estándar

200 100 100 100 1120 155,706% 1743,91

50 0 150 0 1085 157,853% 1712,71

450 250 450 450 1485 134,69% 2000,15

0 200 1100 0 945 159,813% 1510,23

En la Tabla 2 se demuestra que el grupo G tratado con el Neem como dosis única presenta un comportamiento similar al grupo de control negativo, ello permite corroborar el criterio que una sola administración no es suficiente para mostrar los efectos antihelmínticos del Neem con una dosis más elevada. Tabla 2: Resultados del Grupo G (30 gramos de hojas secas del Neem disueltos en 90 mL de extracto Neem como dosis única) Identificación 3663 1601 841 1163 2763 1606 6389 3185 1969 4422 Promedio CV Des. Estándar

EPG Inicial 3600 2650 1550 1000 500 350 250 150 100 100 1025 118,849% 1218,21

EPG 7º día después 50 2950 0 1800 2300 350 1050 1650 0 1300 1145 90,9595% 1041,49

EPG 14º día después 150 1000 0 2250 4950 100 650 700 200 600 1060 62,1221% 1515,62

EPG 21º día después 300 50 200 3800 5250 750 500 4150 0 1050 1605 142,983% 1986,41

En los animales tratados con el Neem con dos y tres administraciones se observó una reducción notablemente significativa de la infestación a los 7, 14 y 21 días después el tratamiento (Tablas 3, 4, 5 y 6). Tabla 3: Resultados del Grupo H (30 gramos de hojas secas del Neem disueltos en 90 mL de extracto Neem con 2 aplicaciones a intervalos de 7 días) Identificación 4127

EPG Inicial 2250

EPG 7º día después 50

EPG 14º día después 100

EPG 21º día después 0

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1226 5164 2104 1722 5963 5560 1003 963 2141 Promedio CV Des. Estándar

1900 1000 600 400 150 200 200 200 100 700 11,117% 777,817

100 0 0 0 0 0 50 0 0 20 174,804% 34,9603

0 0 0 50 0 0 50 0 50 25 141,241 35,3553

50 0 0 0 0 0 0 0 0 5 316,228% 15,8114

Tabla 4: Resultados del Grupo I (30 gramos de hojas secas del Neem disueltos en 90 mL de extracto Neem con 3 aplicaciones a intervalos de 7 días) Identificación 122 726 4083 426 2645 3123 1300 2106 324 3244 Promedio CV Des. Estándar

EPG Inicial 2200 1550 700 450 150 100 200 200 100 100 575 126,494% 727,343

EPG 7º día después 50 0 0 100 0 0 0 50 100 0 30 140,546% 42,1637

EPG 14º día después 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 -

EPG 21º día después 0 0 50 0 0 0 0 100 0 0 15 224,983% 33,7474

Tabla 5: Resultados del Grupo J (30 gramos de hojas secas del Neem disueltos en 90 mL de extracto Neem con 3 aplicaciones a intervalos de 24 horas) Identificación 1700 2903 1606 561 160 Promedio

EPG Inicial 350 100 500 150 250 270

EPG 7º día después 200 0 150 0 0 70

EPG 14º día después 0 0 0 0 0 0

EPG 21º día después 100 0 150 0 0 50

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CV 59,4326% 139,24% 141,421% Des. Estándar 160,468 97,4679 70,1707 Tabla 6: Resultados del Grupo K (30 gramos de hojas secas del Neem disueltos en 90 mL de extracto Neem con 3 aplicaciones a intervalos de 48 horas) Identificación EPG EPG 7º día EPG 14º día EPG 21º día Inicial después después después 5761 150 0 0 0 6123 250 0 0 0 3181 250 0 0 0 1524 250 0 0 0 7480 250 0 0 0 Promedio 230 0 0 0 CV 19,4441% Des. Estándar 44,7214 Se nota que el grupo K se comportó mejor con 100% de los animales presentando un hpg de 0 en todas las evaluaciones post tratamientos; mientras el grupo J fue el menos eficiente con respecto a todos los otros grupos tratados con el Neem, ya que el promedio de hpg los superó a los 7 y 21 días post tratamiento lo cual paradójicamente parecen contradictoria pero es debido a que con intervalos de 48 horas se logra alcanzar el efecto acumulativo deseable. Los resultados de los animales tratados con Labiozol Grupo L según muestra la Tabla 7, exhibe una buena disminución total del número de huevos en los animales tratados con un 10%, 30% y 30% de ellos mostrando un HPG mayor de 0 a los 7, 14 y 21 días respectivamente; es importante notar en este sentido que a los 21 días post tratamiento en el caso del Labiozol igual que el Neem los animales tienden a recuperar la infestación destacando aun más el éxito de la aplicación del producto con intervalos de 48 horas. Tabla 7: Resultados del Grupo L (Control positivo con Labiozol) Identificación 3780 1920 2264 581 6163 3662 743

EPG Inicial 3050 2400 1350 950 700 300 250

EPG 7º día después 0 0 0 0 0 0 50

EPG 14º día después 0 0 0 50 50 0 0

EPG 21º día después 300 0 0 0 200 0 400

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5829 2382 1242 Promedio CV Des. Estándar

150 100 100 935 111,206% 1039,78

0 0 0 5 316,228% 15,8114

0 100 0 20 174,801% 34,9603

0 0 0 90 169,32% 152,388

Como se observa en la Tabla 8, no hubo diferencias significativas entre los grupos tratados con el Neem, lo cual demuestra que prácticamente cualquiera de las variantes pueden ser empleadas en un programa de desparasitación. Estos resultados obtenidos coinciden con Estrada y López, (1998); Pérez, (2002) y Estrada, (2006) pues plantean que son necesarias varias aplicaciones para lograr una adecuada y efectividad del Neem. Tabla 8. Cambios en EPG en ovino postratamiento con Neem Días después tratamiento Día 0 EPG

Día 7 EPG

%HPG incremento/reducción Día 14 EPG

%HPG incremento/reducción Día 21 EPG

%HPG incremento/reducción

Grupo F

Grupo G

Grupo H

Grupo I

Grupo J

Grupo K

Grupo L

1120 ± 623,91 a

1025 ± 193,21 a

700 ± 77,817 a

575 ± 152,343 a

935 ± 104,78 a

270 ± 110,468 a

230 ± 185,2786 a

1085 ± 627,71 a

1145 ± 103,51 a

20 ± 14,9603 b

30 ± 12,1637 b

5± 10,8114 b

70 ± 27,4679 b

0b

(3,13%)

(+ 11,71%)

(-91,4%)

(-94.78%)

(- 99,47%)

(-7,07%)

(-100%)

1485 ± 515,15 a

1060 ± 455,62 ab

25 ± 10,3553 b

0b

20 ± 14,9603 b

0b

0b

(+ 32,59%)

(+ 3,41%)

(-97,14%)

(-100%)

(- 97,86%)

(-100%)

(-100%)

945 ± 565,23 ab

1605 ± 381,41 a

5± 10,8114 d

15 ± 18,7474 d

90 ± 62,388 bc

50 ± 20,1707 cd

0 de

(+ 56,59%)

(-99,29%)

(-97,39%)

(- 90,37%)

(-81,48)

(-100%)

(15,63%) + = % incremento

- = % de reducción

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Letras diferentes en la misma columna indican diferencia significativa para 5% de probabilidad de error. Comparando los resultados de los grupos H, I, J y K con el grupo G (dosis única), parece indicar que el Neem actúa más contra los adultos y no afecta los estadios larvarios coincidiendo con Del Moral, (1994); siendo necesarias varias aplicaciones seguidas para mantener la acción antiparasitaria por efecto acumulativo pues como es conocido, la cantidad de principio activo en cada tratamiento es baja en comparación con las de síntesis química, una tendencia general en los fitofármacos. No obstante es evidente que comparando los efectos del Neem y los provocados por Labiozol, no hay diferencias sustanciales; tales resultados permiten buscar en utilizar los bioproductos Neem como antiparasitaraio alternativo a Labiozol u otros similares. Los géneros encontrados a partir de los cultivos de larva fueron Strongyloides, Haemonchus, Ostertagia y Trichostrongylus que indica que a la dosis y frecuencia del extracto acuoso del Neem utilizado se puede controlar estos tipos de nematodos, lo cual coinciden con lo reportado en la literatura (Delmoral, 1994; García y Ruiz, 1994; Pietrosemoli et al., 1999; Salazar, 1999 y 2004). Los resultados alcanzados muestran que las hojas del árbol Neem presentan propiedades anti-parasitarias, lo cual corroboró lo expresado por: Díaz y Morales, (1996); Coronado, (1997) y Del Moral, (1994), los cuales nos permitido encontrar la dosis, números de aplicaciones e intervalo que reducen las infestaciones por los géneros encontrados, lo cual no fue encontrado por otros autores, los cuales utilizaron dosis demasiadas bajas o debido a la administración ad libitum era imposible publicara una dosis como Pietrosemoli et al., (1999) quien se le administró en la dieta ad libitum; Chandrawathani et al. (2000 y 2002) que administró las hojas frescas durante un mes ad libitum a ovinos; Costa et al., (2005) quien utilizó 0,1g/Kg durante 3 meses en ovino y Khalid et al., (2005) que trató ovinos con 10% de extracto acuoso de las hojas del Neem. 4. Conclusiones ¾ Para lograr una eficacia deseable del extracto acuoso de las hojas del Neem es necesario administrarlo 3 veces cada 48 horas a una dosis de 0,67 g/Kg. ¾ El extracto acuoso de las hojas del Neem es eficaz contra los géneros Strongyloides, Haemonchus, Ostertagia y Trichostrongylus.

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5. Recomendaciones ¾ Aplicar el extracto acuoso de las hojas del Neem en ovino Pelibuey 3 veces cada 48 horas a una dosis de 0,67 g/Kg. ¾ Continuar el estudio en está línea para profundizar aun más los resultados de está investigación. 6. Bibliografía • Álvarez, A., Fuentes, V., Pérez, P. y Alfonso, H. 1989. Medicina Tradicional y Acupunctura, su aplicación en Veterinaria. Sociedad Cubana de Acupuntura en Medicina Veterinaria (SCAMV). La Habana. Ediciones ENPES. p. 93-120 • Bailey, N. 1992. Statistical ideas in biology. Hoddet & Stoughton. London. p. 200. • Castells, D. y Nari, A. 1996. Sanidad en la producción de carne ecológica. En: Seminario de Carne ecológica (24-25 de octubre, 1996) Montevideo, sp. • Cervantes, R., Cuellar, O. y Silva, M. 1997. Evaluación del periodo de reinfestación por nematodos gastroentéricos en ovinos tratados con closantel, ivermectinas o moxidectina. Memoria IX Congreso Nacional de Producción Ovina. AMTEO. Querétaro, Qro. p. 150-155. • Chandrawathani, P., Parameswaran, S. y Asiah-Naina, M. 1994. Antiparasitic drugs used in selected sheep and goat farms in West Malaysia. Jurnal Veterinar Malaysia 6(2): 61-64. • Chandrawathani, P., Jamnah, O. y Rajamanickam, C. 1995. Testing potential control programmes for helminthiasis in sheep on open pasture. The 17th Malaysian Society of Animal Production Annual Conference, Penang. • Chandrawathani, P., Adnan M. y Zaini C. 2000. Preliminary study on Neem (Azadirachta indica) as an alternative anthelmintic for sheep. En: Proceedings of the 12th Veterinary Association Malaysia Scientific Congress 1-4 Sept. 2000, Kuantan. p. 126-127. • Chandrawathani, P., Brelin, D., NorFasihah, S., Adnan, M., Jamnah, O., Sani, R., Hoglund, J. y Waller, P. 2002. Evaluation of the Neem tree (Azadirachta indica) as a herbal anthelmintic for nematode parasite control in small ruminants in Malaysia. Tropical Biomedicine 19(1&2): 41-48. • Chandrawathani, P., Yusoff, N., Wan, L., Ham, A. y Waller P. 2004. Total anthelmintic failure to control nematode parasites of

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REDVET: 2012, Vol. 13 Nº 7 Recibido 25.0.2011 / Ref. prov. FEB1120_REDVET / Aceptado 08.11.2012 Ref. def. 071210_REDVET / Publicado: 01.07.2012 Este artículo está disponible en http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n070712.html concretamente en http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n070712/071210.pdf REDVET® Revista Electrónica de Veterinaria está editada por Veterinaria Organización®.Se autoriza la difusión y reenvío siempre que enlace con Veterinaria.org® http://www.veterinaria.org y con REDVET®http://www.veterinaria.org/revistas/redvet

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