Facultad de Farmacia Departamento de Química Física Universidad de Granada

PRÁCTICA 3 SEPARACIÓN DE ASPIRINA, ACETOFENITIDINA Y CAFEÍNA POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

Introducción • A menudo, la aspirina, acetofenitidina y cafeína se usan combinados en las preparaciones analgésicas y antipiréticas. • La detección e identificación en tales preparaciones puede hacerse por cromatografía de capa fina.

Material • • • •

Recipiente para desarrollo. Portaobjetos. Gel de sílice para cromatografía de capa fina. Disolvente eluyente: mezcla de metanol absoluto, ácido acético glacial, éter dietílico y benceno en la proporción volumétrica 1:18:60:120. • Disoluciones de aspirina, acetofenitidina y cafeína en cloroformo con concentraciones de 5-10 mg/ml. • Reactivo revelador: permanganato potásico 0,1N en ácido sulfúrico 0,05N. • Disolución mezcla de composición desconocida.

Recipientes para el desarrollo

Cubetas para cromatografía

Parte experimental

Preparación de las placas

• Limpiar dos portaobjetos (25x75 mm) con disolución de mezcla crómica, o con disolución jabonosa, enjuagar minuciosamente con agua destilada y secar

•Preparar una pasta formada por 15 g de gel de sílice G y 37 ml de agua, agitando bien con una varilla.

•Coger por sus extremos dos portaobjetos, juntos por sus caras más extensas, y sumergirlos en la pasta separándolos a continuación. Debe quedar una capa fina y homogénea sobre cada portaobjetos.

Dejar secar al aire

•Una vez seco el gel al aire, colocar los portaobjetos en una estufa a 100ºC durante una hora

Indicador de temperatura abrir la puerta

Colocar los portaobjetos sobre la bandeja

• Preparación Micropipeta

Abrir el gas para encender el mechero

Abrir la puerta

Girar las llaves de la derecha cerrado

abierto

Girar la llave a la derecha abierto cerrado

• Encender el mechero: Girar el tornillo del mechero para dejar salir el gas

Acercar la llama al mechero

Calentar el capilar de vidrio y estirar

Aplicación de la muestra

• Aplicar en una de las placas la muestra de composición desconocida y una sustancia pura,

y en la otra las dos disoluciones restantes de las sustancias puras,

Aplicar con una micropipeta una gotita de muestra a unos 12 mm del extremo de la placa, repitiendo pequeñas aplicaciones de la disolución en un punto y dejando que cada incremento se seque antes de la nueva aplicación. La gota de muestra no debe tener más de 3 mm de diámetro.

Desarrollo cromatográfico

Se vierte el suficiente líquido eluyente en el recipiente de desarrollo cromatográfico para que entre en contacto con el extremo inferior del portaobjetos, pero sin llegar a tocar las manchas de la muestra.

Tapar y dejar unos minutos para crear una atmósfera saturada de fase movil

Colocar los portaobjetos en la cubeta y tapar

•Cuando el frente del disolvente haya avanzado unos 50 mm, se saca de la cubeta y se rasga cuidadosamente la superficie del portaobjetos para indicar la posición del frente del disolvente. A continuación se deja secar al aire durante unos minutos para evaporar el disolvente orgánico. Frente de la fase movil

Lugar de colocación de las muestras

Revelado del cromatograma

Para ello colocar el portaobjetos seco en un papel de filtro.

Pulverizar ese portaobjetos con la disolución de permanganato potásico mediante el frasco pulverizador

Se calienta el portaobjetos en una estufa durante unos minutos.

• Las muestras aparecen como manchas amarillo-verdosas en un fondo violeta.

•La mancha de la cafeína es muy débil y algunas veces se distingue más fácilmente observándola por la parte posterior, es decir, a través del vidrio.

Cálculos

• Determinar el factor de retención (Rf) para las tres sustancias. Distancia de la sustancia al origen Rf = -------------------------------------------------Distancia del eluyente al origen Dado que, en cromatografía de capa fina, los valores de Rf son reproducibles para unas condiciones experimentales fijas, se utilizan los valores de Rf para localizar la posición de cada componente en la placa donde se ha separado la mezcla desconocida.

Cálculos del factor de retención ( Rf ) para cada una de las sustancias separadas

Frente del disolvente

5,0 cm

Nueva posición del compuesto 3.9 cm

Lugar de aplicación de la muestra

Rf =

3, 9 5, 0

= 0,78