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en Contents English...................................................................................................................... 5 Français...................................................................................................................11 Deutsch....................................................................................................................19 Italiano.................................................................................................................... 27 Español................................................................................................................... 35 Português................................................................................................................ 43 Ελληνικά.................................................................................................................51 Русский.................................................................................................................. 59

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en English INTENDED PURPOSE The V8 Immunodisplacement Kit is intended for the separation and identification of monoclonal gammopathies by capillary zone electrophoresis. This technique separates proteins on the basis of their net charge in an alkaline buffer solution in combination with their differing interaction with the wall of the silica capillary. Immunotyping of gammaglobulins is achieved by testing aliquots of sample with a panel of monospecific antisera. The complex formed by the test antisera and it’s target protein has a modified migration profile and is therefore displaced from the standard serum protein electropherogram. By comparing the results from the test panel with a reference analysis the immunoglobulin type present can be determined by the specific removal or reduction of the abnormal spike from the CE electropherogram. The greatest demand for Immunodisplacement is in the clinical laboratory, where it is used primarily for the detection of monoclonal gammopathies. A monoclonal gammopathy is a primary disease state in which a single clone of plasma cells produces elevated levels of an immunoglobulin of a single class and type. Such immunoglobulins are referred to as monoclonal proteins, M-proteins or paraproteins. Their presence may be of a benign nature or of uncertain significance. In some cases, they are indicative of a malignancy, such as multiple myeloma or Waldenström’s macroglobulinaemia. Differentiation must be made between polyclonal and monoclonal gammopathies, as polyclonal gammopathies are a secondary disease state due to clinical disorders such as chronic liver disease, collagen disorders, rheumatoid arthritis and chronic infection. Urinary proteins are derived primarily from plasma proteins that filter through the kidney. The appearance of abnormal plasma proteins in the urine is of great value in evaluating renal function. The appropriate study of proteinuria should include quantitative and qualitative assessment of the type and amount of proteins excreted1-5 . The combination of electrophoretic separation of urine proteins, coupled to the identification of specific protein types by immunoprecipitation allows the differentiation of several types of proteinuria - Physiological, Glomerular (selective and non-selective), Tubular and proteinuria associated with Dysglobulinaemias1-5 . WARNINGS AND PRECAUTIONS The reagents contained in this kit are for in-vitro diagnostic use only. Do not ingest or pipette by mouth any kit component. Wear gloves when handling all kit components. Refer to the product safety data sheet for risk and safety phrases and disposal information.

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V8 Immunodisplacement Kit COMPOSITION 1. Anti-human IgG antisera. REF HL-3-2125SA (1 x 50 tests). 2. Anti-human IgA antisera. REF HL-3-2126SA (1 x 50 tests). 3. Anti-human IgM antisera. REF HL-3-2127SA (1 x 50 tests). 4. Anti-human kappa antisera. REF HL-3-2128SA (1 x 50 tests). 5. Anti-human lambda antisera. REF HL-3-2129SA (1 x 50 tests). Each bottle contains enough antisera for the completion of 50 tests. The antisera is ready for use and should be placed in the appropriate location on the Helena V8 instrument as instructed in the operator manual. 6. Instructions for Use. Each kit contains Instructions for Use. STORAGE AND SHELF-LIFE 1. Anti-human IgG antisera. 2. Anti-human IgA antisera. 3. Anti-human IgM antisera. 4. Anti-human kappa antisera. Anti-human lambda antisera. The antisera should be stored at 2…8°C and is stable until the expiry date indicated on the label. Opened bottles are stable for 4 weeks when stored at 2…8°C. Ensure antisera vials are re-capped when not in use to minimise evaporative losses. The antisera solutions are clear and colourless. Discard the antisera solutions if changes to their appearance are noted, for example colouration or cloudiness indicating bacterial contamination. DO NOT FREEZE THE ANTISERA SOLUTIONS. ITEMS REQUIRED BUT NOT PROVIDED REF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 800200 V8 Serum Protein 6-band Kit (If conducting 6-band analysis) REF 800500 V8 Serum Protein SPE Kit (if conducting SPE analysis) REF 800800 V8 Serum Protein 6-band Zoom Kit (if conducting 6-band Zoom analysis) REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack

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en OPTIONAL ITEMS REF 800410 V8 Urine Preparation Buffer SP6 REF 800411 V8 Urine Preparation Buffer SP6 Zoom REF 800412 V8 Urine Preparation Buffer SPE REF VS2002 Sartorius VivaSpin 20 Centrifugal Concentrators REF GEHE 17-0853-02 GE Healthcare NAP-5 Desalting Columns - if conducting urine immunodisplacement REF 820500 V8 Free kappa / Free lambda Kit REF 821400 V8 Anti-IgD / Anti-IgE Kit SAMPLE COLLECTION AND PREPARATION For serum protein analysis, freshly collected serum is the specimen of choice as plasma samples will contain a large fibrinogen band between the beta and gamma fractions. Samples can be stored at 2…8°C for up to 7 days and up to 1 month at -20°C. If samples are to be stored frozen, they should be refrigerated immediately and frozen within 8 hours of collection. Storing samples at 2…8°C can result in protein degradation, particularly, but not exclusively of complement fractions. Consequently, after 7 days storage at 2…8°C detection of a distinct beta-2 region may no longer be possible. DO NOT store samples at room temperature - the sample will degrade rapidly. Samples which contain cryoglubulins may become viscous or tubid after refrigeration or freezing. It is advisable to warm these samples to room temperature before analysis. For urine analysis, freshly collected urine (24 hour collection) is the specimen of choice. Samples can be stored at 2…6°C for up to 7 days. For longer storage periods, it is recommended to store samples at -70°C, for up to 1 month. DO NOT store samples at -20°C. Urine samples must be de-salted before analysis on the V8 system, using one of the optional urine preparation buffer and device combinations listed above.

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V8 Immunodisplacement Kit STEP BY STEP PROCEDURE 1. Ensure that the waste container drawer is on-board. 2. Before switching on the V8, ensure that Storage Buffer, Maintenance Buffer and disposable cups are on-board and in their correct positions. For correct installation of all consumables, please refer to the operator manual. 3. Launch Platinum 4V and begin a new CE session. In Platinum 4V, select ‘CE SYSTEM’ from the drop down menu, click ‘DEFAULT METHOD’ and ensure the relevant Immunodisplacement assay is selected (refer to operator manual). For reflex testing or individual test ordering please refer to the operator manual. 4. Switch on the Helena V8 as instructed in the operator manual. 5. To conduct Immunodisplacement testing, install the relevant Serum Protein Buffer and Diluent if required. For correct installation of all Serum Protein Buffer bottles and Serum Protein Diluents please refer to the operator manual. 6. Ensure that the Immunodisplacement reagent barcode information is loaded into Platinum 4V by selecting ‘CE SYSTEM’ from the drop down menu. Click ‘DEFINE REAGENTS’ and ensure the barcode information for each antisera type has been entered and that the location of the reagent information corresponds with the intended vial location on-board the V8. 7. Uncap the antisera vials and place them in the reagent bay of the V8. 8. When the V8 is ready to accept samples for operation, the instrument will pulse red. 9. For samples that have been ordered for Reflex testing and are NOT already on-board the V8, place each primary sample tube into the sample rack, ensuring that the barcode is clearly visible through the rack window (refer to the operator manual). 10. Load sample racks onto the left-hand side of the V8 sample transport area and close lid as instructed in the operator manual. 11. The V8 will automatically commence analysis of all loaded samples, and the results will be transferred to Platinum 4V. 12. After analysis, and if required, initiate V8 shut-down mode by switching off the instrument as instructed in the operator manual. 13. It is important that the V8 is post-conditioned correctly at the end of the day. Please refer to the operator manual.

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en INTERPRETATION OF RESULTS The majority of monoclonal proteins migrate in the cathodic, gamma region of the protein pattern, but due to their abnormal nature, they may migrate anywhere within the globulin region on capillary electrophoresis. Immunodisplacement is a subtractive analytical technique and the abnormal protein is identified by noting which antisera types react with it, resulting in the originally identified peak being reduced or removed in the test CE electropherograms. Care must be taken when analysing results as normal polyclonal immunoglobulins will be removed from the trace as well as abnormal paraproteins. Attention must therefore be paid to the shape of the test electropherograms as well as their relative peak areas. QUALITY CONTROL Helena Biosciences Abnormal CEtrol Serum Control (Cat. no. 802500) can be used to verify all phases of the Immunodisplacement procedure. LIMITATIONS 1. Reaction with Kappa or Lambda light chain antisera but no reaction with IgG, IgA or IgM heavy chain antisera. Samples showing this pattern may either have a free light chain monoclonal gammopathy or they may have an IgD or IgE monoclonal protein. In this situation, the ID should be repeated, substituting IgD and IgE antisera for two of the other heavy chain antisera. Failure to obtain a reaction with IgD or IgE antisera would be indicative of free light chain disease. 2. Band in gamma region showing no reactivity with ID antisera. C Reactive Protein (CRP) may be detected in patients with acute inflammatory response 6-7. Elevated alpha-1 antitrypsin and haptoglobin are supportive evidence for CRP 3. Non-reactivity with Kappa and Lambda antisera. Occasionally a sample will have a reaction with a heavy chain antiserum but no light chain reaction is obvious. In this situation, the following need to be ruled out – a. Heavy chain disease, b. Very high concentrations of light chains, leading to antigen excess, c. Low concentrations of light chains, d. Atypical light chain molecule that does not react with the antiserum, e. Light chains with ‘hidden’ light chain determinants (as sometimes seen with IgA and IgD). 4. Cross Reactivity of Antisera. Due to the modified nature of Immunodisplacement antibody molecules, antibody-antigen reactions performed on capillary can result in some antisera cross reacting with monoclonal components present in a sample. Cross reactivity, which is a rare occurrence, may lead to the clinical conclusion of a bi-clonal gammopathy. If cross reactivity of antisera is suspected further testing using gel immunofixation may be necessary to confirm results. There is no risk of false negative results as a consequence of cross reactivity.

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V8 Immunodisplacement Kit The Immunodisplacement antisera are capable of completely removing monoclonal peaks of < 30 g/L from serum samples and of < 0.6 g/L from urine samples. Gammaglobulins in large excess of these concentrations may not be entirely removed from the trace, rendering interpretation of the results difficult. In such cases it is advised that the original patient sample is diluted with either isotonic saline or the appropriate V8 Urine Preparation Buffer to reduce the protein concentration to a level at which complete displacement can occur, and the Immunodisplacement assay procedure is repeated. Alternatively, the overide dilution function can be used to reduce the protein concentration to a level at which complete displacement can occur. Please refer to the operator manual for further information. Sensitivity The V8 Immunodisplacement Kit is able to immunotype monoclonal gammopathies with serum protein concentrations of 0.208 g/L or urine protein concentrations of 0.02 g/L, or higher. PERFORMANCE CHARACTERISTICS A series of samples were tested and compared to another commercially available test kit - both kits showed equivalent results. BIBLIOGRAPHY 1. Fauchier, P. and Catalan, F. ‘Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis’ Alfred Fournier Institute, Paris, France, 1988. 2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. ‘Finding Clues to Disease in Urine’ Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : 69-75. 3. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘Determination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations’ Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : 163-172. 4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic Methods’, Clin. Lab.; 1999, 45 : 257-262. 5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. ‘A Comparison of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria’ Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 : 371-374. 6. Jeppsson, J.O., Laurell, C.B. and Franzen, B., ‘Agarose Gel Electrophoresis’, Clin. Chem., 1979; 25 (4) : 629-638. 7. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M., ‘Protein Analysis’, Diagnostic Medicine, 1980; Jan/Feb : 3-15.

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fr Français UTILISATION Le kit V8 Immunodisplacement (immunodéplacement V8) sert à la séparation et à l’identification des gammapathies monoclonales par électrophorèse capillaire (CE). Cette technique sépare les protéines en fonction de leur charge nette dans une solution tamponnée alcaline en combinaison avec leur interaction différentielle avec la paroi du capil-laire en silice. L’immunotypage des gammaglobulines s’effectue en analysant des aliquotes de l’échantillon avec un panel d’antisé-rums monospécifiques. Le complexe formé par l’antisérum du test et la protéine ciblée présente un profil de migration modifié, ce qui fait que sa migration est différente de celle observable sur un électrophorégramme de protéines séri-ques normales. En comparant les résultats du panel du test avec une analyse de référence, il est possible de déter-miner le type d’immunoglobuline présent par l’absence ou la réduction du pic anormal de l’électrophorégramme obte-nu par électrophorèse capillaire. Les protéines urinaires proviennent principalement de la filtration des protéines plasmatiques par le rein. L’apparition de protéines plasmatiques anormales dans l’urine est un élément important dans l’évaluation de la fonction rénale. L’étude d’une protéinurie doit inclure l’évaluation qualitative et quantitative du type et de la quantité de protéines excrétées1-5 . La séparation électrophorétique des protéines urinaires, unie à l’identification des types de protéines spécifiques par immunoprécipitation, permet de différencier plusieurs types de protéinuries : physiologique, glomérulaire (sélective et non sélective), tubulaire et protéinurie associée à une dysglobulinémie1-5 . AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Les réactifs du kit sont à usage diagnostique in vitro uniquement. Ne pas ingérer ou pipeter à la bouche aucun composant. Porter des gants pour la manipulation de tous les composants du kit. Se reporter aux fiches de sécurité des composants du kit pour la manipulation et l’élimination. COMPOSITION 1. Antisérum Anti-human IgG (anti-IgG humaines). RÉF HL-3-2125SA (1 x 50 analyses). 2. Antisérum Anti-human IgA (anti-IgA humaines). RÉF HL-3-2126SA (1 x 50 analyses). 3. Antisérum Anti-human IgM (anti-IgM humaines). RÉF HL-3-2127SA (1 x 50 analyses). 4. Antisérum Anti-human kappa (anti-kappa humaines). RÉF HL-3-2128SA (1 x 50 analyses).

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V8 Immunodisplacement Kit 5. Antisérum Anti-human lambda (anti-lambda humaines). RÉF HL-3-2129SA (1 x 50 analyses). Chaque flacon contient assez d’antisérum pour réaliser 50 analyses. L’antisérum est prêt à l’emploi et doit être mis dans l’emplacement approprié de l’instrument Helena V8 comme indiqué dans le manuel d’utilisation. 6. Notice d’utilisation. Chaque kit contient une notice d’utilisation. STOCKAGE ET CONSERVATION 1. Antisérum anti-IgG humaines. 2. Antisérum anti-IgA humaines. 3. Antisérum anti-IgM humaines. 4. Antisérum anti-kappa humaines. Antisérum anti-lambda humaines. Les antisérums doivent être conservés à 2…8 °C ; ils sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquet-te. Les flacons ouverts sont stables 4 semaines à 2…8 °C. S’assurer de reboucher les flacons d’antisérum quand ils ne sont pas utilisés afin d’éviter les pertes dues à l’évaporation. Les solutions d’antisérum sont transparentes et incolores. Jeter les solutions d’antisérum en cas de modification de leur aspect, par exemple, une coloration ou un aspect flo-conneux indiquant une contamination bactérienne. NE PAS CONGELER LES SOLUTIONS D’ANTISÉRUM. MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNI RÉF 830100 V8 Storage Buffer RÉF 830200 V8 Maintenance Buffer RÉF 800200 V8 Serum Protein 6-band Kit (en cas de séparation en 6 bandes analyse) REF 800500 V8 Serum Protein SPE Kit (en cas de séparation en 6 bandes, SPE analyse) REF 800800 V8 Serum Protein 6-band Zoom Kit (en cas de séparation en 6 bandes, zoom analyse) REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack

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fr MATÉRIEL OPTIONNEL RÉF 800410 Tampon V8 Urine Preparation Buffer SP6 (préparation d’urine SP6 V8 RÉF 800411 Tampon V8 Urine Preparation Buffer SP6 Zoom (préparation d’urine SP6 zoom V8) RÉF 800412 Tampon V8 Urine Preparation Buffer SPE (préparation d’urine SPE V8) RÉF VS2002 Concentrateurs par centrifugation VivaSpin 20 de Sartorius RÉF GEHE 17-0853-02 Colonnes de dessalement NAP-5 de GE Healthcare - en cas d’immunodéplacement d’urine RÉF 820500 Kit V8 Free kappa / Free lambda (anti-kappa libre / anti-lambda libre V8) RÉF 821400 Kit V8 Anti-IgD / Anti-IgE (anti-IgD / anti-IgE V8) PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS Pour les analyses des protéines sériques, l’utilisation de sérum fraîchement prélevé est fortement recommandée car les échantillons de plasma laissent apparaître une large bande de fibrinogène entre les fractions bêta et gamma. Les échantillons peuvent être conservés 7 jours à 2…8 °C ou 1 mois à -20 °C. S’il est nécessaire de congeler les échantillons, ils doivent être réfrigérés immédiatement et congelés dans les 8 heures suivant le prélèvement. La conservation des échantillons à 2…8 °C peut entraîner une dégradation des protéines, en particulier, mais pas uniquement les fractions du complément. Par conséquent, après 7 jours de conservation à 2…8 °C, la détection d’une zone bêta 2 différenciée risque de ne plus être possible. NE PAS conserver les échantillons à température ambiante, car ils se dégradent rapidement. Les échantillons qui contiennent des cryoglobulines peuvent présenter un aspect visqueux ou trouble après la réfrigé-ration ou la congélation. Il est conseillé de ramener ces échantillons à température ambiante avant d’effectuer l’analy-se. Pour l’analyse d’urine, l’utilisation d’urine fraîchement prélevée (prélèvement dans les 24 heures) est fortement re-commandée. Les échantillons peuvent être conservés 7 jours à 2…6 °C. Pour une conservation plus longue, il est recommandé de conserver les échantillons à 70 °C, pendant 1 mois maxi-mum. NE PAS conserver les échantillons à 20 °C. Les échantillons d’urine doivent être dessalés avant l’analyse sur l’instrument V8 à l’aide de l’une des combinaisons de tampon de préparation d’urine et de dispositif de dessalement en option indiqués ci-dessus.

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V8 Immunodisplacement Kit MÉTHODOLOGIE 1. S’assurer que le chariot du réservoir à déchets est placé sur l’instrument. 2. Avant d’allumer le V8, s’assurer qu’il dispose de tampon de stockage, de tampon de maintenance et de cupules jetables correctement mis en place. Consulter le manuel d’utilisation pour savoir comment mettre en place correctement les consommables. 3. Lancer Platinum 4V et initier une nouvelle session d’électrophorèse capillaire (CE). Dans Platinum 4V, sélectionner CE SYSTEM (Système d’électrophorèse capillaire) dans le menu déroulant, cliquer sur DEFAULT METHOD (Méthode par défaut), puis s’assurer que l’option pertinente d’immunodéplacement est sélectionnée (consulter le manuel d’utilisation). Consulter le manuel d’utilisation pour savoir comment réaliser une analyse spécifique ou une analyse complémentaire conditionnelle. 4. Mettre l’instrument Helena V8 sous tension conformément aux instructions du manuel d’utilisation. 5. Pour réaliser un immunodéplacement, mettre en place le flacon approprié de tampon et de diluant Protéines sériques si nécessaire. Pour une mise en place correcte de tous les flacons de tampon Protéines sériques et de diluants Protéines sériques, consulter le manuel d’utilisation. 6. S’assurer que les informations du code-barre du réactif d’immunodéplacement sont chargées dans Platinum 4V en sélectionnant CE SYSTEM (Système d’électrophorèse capillaire) dans le menu déroulant. Cliquer sur DEFINE REAGENTS (Définir les réactifs) et s’assurer que les informations du code-barre de chaque type d’antisérum ont été saisies et que l’emplacement indiqué du réactif correspond à l’emplacement prévu pour le flacon dans le V8. 7. Déboucher les flacons d’antisérum et les placer dans le compartiment des réactifs du V8. 8. Lorsque l’instrument V8 est prêt à accepter des échantillons pour les analyser, il clignote en rouge. 9. Pour les échantillons qui doivent être soumis à une analyse complémentaire conditionnelle et qui NE SONT PAS déjà placés dans le V8, placer chaque tube d’échantillon initial dans le portoir en s’assurant que le code-barre est clairement visible dans la fenêtre du portoir (consulter le manuel d’utilisation). 10. Charger les portoirs échantillons sur le côté gauche de la zone de transport des échantillons du V8, puis fermer le couvercle comme indiqué dans le manuel d’utilisation. 11. Le V8 démarre automatiquement l’analyse des échantillons chargés et les résultats sont transmis à Platinum 4V. 12. Après l’analyse, et si vous le désirez, initier le mode d’arrêt du V8 en éteignant l’instrument comme indiqué dans le manuel d’utilisation. 13. Il est important que la mise hors service en fin de journée du V8 soit effectuée correctement. Consulter le manuel d’utilisation.

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fr INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS Lors d’une électrophorèse capillaire, la plupart des protéines monoclonales migrent du côté cathodique, c’est-à-dire dans la zone gamma du protéinogramme, mais, en raison de leur caractère anormal, il est possible qu’elles migrent ailleurs dans la zone des globulines. L’immunodéplacement est une technique analytique soustractive et la protéine anormale est identifiée grâce aux types d’antisérum avec lesquels elle réagit, ce qui est indiqué par une absence ou une diminution du pic d’origine corres-pondant sur les électrophorégrammes obtenus par électrophorèse capillaire. Il convient de faire attention lors de l’analyse des résultats car les immunoglobulines polyclonales normales sont sous-traites de l’électrophorégramme en même temps que les protéines monoclonales anormales. Il faut regarder attenti-vement la forme des électrophorégrammes de l’analyse ainsi que leurs zones de pic correspondantes. CONTRÔLE QUALITÉ Le contrôle Abnormal CEtrol Serum Control d’Helena Bioscience (RÉF 802500) peut être utilisé pour vérifier toutes les phases de la procédure d’immunodéplacement. LIMITES 1. Réaction avec les chaînes légères kappa ou lambda, mais pas de réaction avec les antisérums à chaînes lourdes IgG, IgA ou IgM. Les échantillons présentant cette réaction peuvent avoir une chaîne libre légère monoclonale ou une IgD ou IgE monoclonale. Dans ce cas, il est nécessaire de répéter l’analyse en substituant les antisérums IgD et IgE par deux autres à chaînes lourdes. L’absence de réaction avec les antisérums IgD et IgE indique en principe l’existence d’une maladie des chaînes légères libres. 2. Bande dans la zone gamma, pas de réaction avec les antisérums de l’ID. Il est possible que la protéine C-réactive (CRP) soit détectée chez les patients présentant une réaction inflammatoire aiguë 6-7. Un niveau élevé d’alpha-1antitrypsine et d’haptoglobine corrobore la présence de CRP. 3. Absence de réaction avec les antisérums kappa et lambda. De temps en temps, un échantillon réagit avec un antisérum à chaîne lourde mais vous ne détectez aucune réaction avec les chaînes légères. Dans ce cas, vous devez éliminer les hypothèses suivantes : a. maladie des chaînes lourdes, b. concentration très élevée en chaînes légères (ce qui entraîne un excès d’antigènes), c. faible concentration en chaînes légères, d. molécule à chaîne légère atypique ne réagissant pas avec l’antisérum, e. chaînes légères avec des déterminants antigéniques « cachés » (comme cela existe parfois avec l’IgA et l’IgD).

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V8 Immunodisplacement Kit 4. Réactivité croisée des antisérums. Étant donné que les molécules d’anticorps d’immunodéplacement sont des molécules modifiées, les réactions anticorpsantigène ayant lieu sur le capillaire peuvent entraîner certaines réactions croisées des antisérums avec des composants monoclonaux présents dans un échantillon. Cette réactivité croisée, qui se produit rarement, peut conduire à la conclusion clinique d’une gammapathie biclonale. Si une réactivité croisée des antisérums est suspectée, d’autres tests utilisant une immunofixation sur gel peuvent être nécessaires pour confirmer les résultats. Il n’y a aucun risque de résultats faussement négatifs en raison d’une réactivité croisée. Les antisérums d’immunodéplacement permettent de soustraire totalement des pics monoclonaux < 30 g/l pour les échantillons de sérum et < 0,6 g/l pour les échantillons d’urine. Il est possible que les gammaglobulines présentant un taux largement plus élevé ne soient pas totalement soustraites de l’électrophorégramme, ce qui complique l’interprétation des résultats. Dans ce cas, il est conseillé de diluer l’échan-tillon patient d’origine soit avec du sérum physiologique, soit avec le tampon de préparation d’urine V8 Urine Prepara-tion Buffer approprié pour réduire le taux de protéines à un taux permettant un immunodéplacement total, puis de répéter la procédure d’immunodéplacement. Sinon, il est possible d’utiliser la fonction de dilution pour réduire le taux de protéines à un taux permettant un immunodéplacement total. Consulter le manuel d’utilisation pour de plus amples informations. Sensibilité Le kit V8 Immunodisplacement (immunodéplacement V8) peut effectuer l’immunotypage des gammapathies monoclo-nales avec un taux de protéines sériques supérieur ou égal à 0,208 g/l ou un taux de protéines urinaires supérieur ou égal à 0,02 g/l. PERFORMANCES Une série d’échantillons a été analysée et comparée avec un autre kit disponible sur le marché. Les résultats obtenus sur ces deux kits sont équivalents.

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fr BIBLIOGRAPHIE 1. Fauchier, P. and Catalan, F. ‘Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis’ Alfred Fournier Institute, Paris, France, 1988. 2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. ‘Finding Clues to Disease in Urine’ Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : 69-75. 3. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘Determination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations’ Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : 163-172. 4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic Methods’, Clin. Lab.; 1999, 45 : 257-262. 5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. ‘A Comparison of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria’ Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 : 371-374. 6. Jeppsson, J.O., Laurell, C.B. and Franzen, B., ‘Agarose Gel Electrophoresis’, Clin. Chem., 1979; 25 (4) : 629-638. 7. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M., ‘Protein Analysis’, Diagnostic Medicine, 1980; Jan/Feb : 3-15.

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de Deutsch ANWENDUNGSBEREICH Der V8 Immunodisplacement Kit dient zur Auftrennung und Identifizierung monoklonaler Gammopathien mittels Kapillarzonenelektrophorese. Diese Technik trennt Proteine in einer alkalischen Pufferlösung auf Basis ihrer Nettoladung auf zusammen mit ihrer unterschiedlichen Wechselwirkung mit der Wand der Quarzkapillare. Die Immuntypisierung von Gammaglobulinen wird durch Testen von Probenaliquots mit einem Panel mo-nospezifischer Antiseren durchgeführt. Der durch die Antiseren des Tests gebildete Komplex und sein Ziel-protein haben ein modifiziertes Migrationsprofil und ist daher zum normalen Serumproteinelektrophero-gramm versetzt. Durch den Vergleich der Ergebnisse des Testpanels mit einem Referenztest kann der vor-liegende Immunglobulintyp durch die spezifische Entfernung oder Reduzierung der abnormalen Zacke be-stimmt werden. Der größte Bedarf für eine Immunodisplacement-Analyse liegt im klinischen Laborbereich, hier vor allem in der Diagnose monoklonaler Gammopathien. Bei einer monoklonalen Gammopathie handelt es sich um eine Primärerkrankung, in der ein einzelner Plasmazellklon vermehrt erhöhte Mengen von Immunglobulin einer einzelnen Klasse und eines einzelnen Typs produziert. Solche Immunglobuline werden als monoklonale Proteine, M-Proteine oder Paraproteine bezeichnet. Ihre Anwesenheit kann harmlos oder von unspezifischer Bedeutung sein. In manchen Fällen ist ihr Nachweis ein Hinweis auf das Vorliegen einer malignen Erkrankung wie dem multiplen Myelom oder Morbus Waldenström. Man muss zwischen polyklonalen und monoklonalen Gammopathien unterscheiden. Polyklonale Gammopathien sind sekundäre Erkrankungszustände, die durch chronische Lebererkrankungen, Kollagenosen, rheumatoide Arthritis und chronische Infektionen hervorgerufen werden. Proteine im Urin stammen hauptsächlich von durch die Niere gefilterten Plasmaproteinen ab. Das Vorkommen abnormaler Plasmaproteine im Urin ist bei der Beurteilung der Nierenfunktion von großer Bedeutung. Die richtige Untersuchung der Proteinurie sollte quantitative und qualitative Bewertungen von Typ und Menge der ausgeschiedenen Proteine umfassen1-5 . Die Kombination der elektrophoretischen Auftrennung der Urinproteine und Bestimmung bestimmter Proteintypen durch Immunpräzipitation erlaubt eine Unterteilung mehrerer Proteinurieformen: physiologische, glomeruläre (selektiv und nicht-selektiv), tubuläre sowie Proteinurie, die mit Dysglobulinämie im Zusammenhang steht1-5 .

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V8 Immunodisplacement Kit WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN Die Reagenzien dieses Kits sind nur zur In-vitro-Diagnostik bestimmt. Nicht einnehmen oder mit dem Mund pipettieren. Beim Umgang mit den Kitkomponenten Handschuhe tragen. Siehe Sicherheitsdatenblatt bezüglich der R- und S-Sätze sowie Informationen zur Entsorgung. INHALT 1. Anti-human IgG antisera. REF HL-3-2125SA (1 x 50 Tests) Jede Flasche enthält ausreichend Antiserum für 50 Tests. Das Antiserum ist gebrauchsfertig und muss, wie im Bedienungshandbuch angegeben, auf dem V8-Gerät von Helena in die entsprechende Position eingesetzt werden. 2. Anti-human IgA antisera. REF HL-3-2126SA (1 x 50 Tests) Jede Flasche enthält ausreichend Antiserum für 50 Tests. Das Antiserum ist gebrauchsfertig und muss, wie im Bedienungshandbuch angegeben, auf dem V8-Gerät von Helena in die entsprechende Position eingesetzt werden. 3. Anti-human IgM antisera. REF HL-3-2127SA (1 x 50 Tests) Jede Flasche enthält ausreichend Antiserum für 50 Tests. Das Antiserum ist gebrauchsfertig und muss, wie im Bedienungshandbuch angegeben, auf dem V8-Gerät von Helena in die entsprechende Position eingesetzt werden. 4. Anti-human kappa antisera. REF HL-3-2128SA (1 x 50 Tests) Jede Flasche enthält ausreichend Antiserum für 50 Tests. Das Antiserum ist gebrauchsfertig und muss, wie im Bedienungshandbuch angegeben, auf dem V8-Gerät von Helena in die entsprechende Position eingesetzt werden. 5. Anti-human lambda antisera. REF HL-3-2129SA (1 x 50 Tests) Jede Flasche enthält ausreichend Antiserum für 50 Tests. Die Antiseren sind gebrauchsfertig und müssen, wie in der Gebrauchsanleitung im Bedienungshandbuch angegeben, in die entsprechende Position auf dem V8-Gerät von Helena eingesetzt werden. 6. Gebrauchsanweisungen. Jedes Kit enthält eine Gebrauchsanweisung. LAGERUNG UND STABILITÄT 1. Anti-human IgG antisera. 2. Anti-human IgA antisera. 3. Anti-human IgM antisera. 4. Anti-human kappa antisera. Anti-human lambda antisera. Die Antiseren sollten bei 2 bis 8 ℃ gelagert werden und sind bis zum aufgedruckten Verfallsdatum sta-bil.Geöffnete Fläschchen sind bei 2 bis 8 °C 4 Wochen stabil. Achten Sie darauf, dass die Fläschchen mit Antiseren nach Gebrauch wieder verschlossen werden, um den Verdunstungsverlust so gering wie möglich zu halten.

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de Die Antiserumlösungen sind klar und farblos. Die Antiseren verwerfen, wenn Veränderungen im Aussehen bemerkt werden. Verfärbung oder Trübung weist zum Beispiel auf eine Verunreinigung hin. ANTISEREN NICHT EINFRIEREN. NICHT MITGELIEFERTES, ABER BENÖTIGTES MATERIAL REF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 800200 V8 Serum Protein 6-band Kit (Bei Durchführung einer 6-Banden- Analyse) REF 800500 V8 Serum Protein SPE Kit (Bei Durchführung einer 6-Banden- Analyse) REF 800800 V8 Serum Protein 6-band Zoom Kit (Bei Durchführung einer 6-BandenAnalyse) REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack OPTIONAL ZU VERWENDENDE PRODUKTE REF 800410 V8 Urine Preparation Buffer SP6 REF 800411 V8 Urine Preparation Buffer SP6 Zoom REF 800412 V8 Urine Preparation Buffer SPE REF VS2002 Sartorius VivaSpin 20 Centrifugal Concentrators REF GEHE 17-0853-02 GE Healthcare NAP-5 Desalting Columns - Bei Durchführung von Immunodisplacement im Urin REF 820500 V8 Free kappa / Free lambda Kit REF 821400 V8 Anti-IgD / Anti-IgE Kit PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG Für Serumproteinanalysen ist frisch entnommenes Serum das Untersuchungsmaterial der Wahl, da Plasma-proben zwischen der Beta- und Gammafraktion eine große Fibrinogenbande enthalten. Proben können bei 2 bis 8 ℃ bis zu 7 Tagen und bei -20 °C bis zu 1 Monat gelagert werden. Wenn Proben eingefroren werden sollen, müssen sie sofort gekühlt und innerhalb von 8 Stunden nach Ent-nahme eingefroren werden. Aufbewahren der Proben bei 2 bis 8 ℃ kann zu einem Proteinabbau, insbesondere der Komplementfrak-tionen, führen. Folglich kann bei einer Lagerung bei 2 bis 8 ℃ nach 7 Tagen der Nachweis einer eindeutigen Beta-2-Region nicht mehr möglich sein. Proben NICHT bei Raumtemperatur lagern - die Probe wird schnell abgebaut. Proben mit Kryoglobulinen können nach Kühlen oder Einfrieren viskös oder trübe werden. Es ist anzuraten, diese Proben vor dem Testen auf Raumtemperatur zu bringen.

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V8 Immunodisplacement Kit Das Untersuchungsmaterial der Wahl für die Urinanalyse ist frisch gesammelter Urin (24-Stunden- Samme-lurin). Proben können bei 2 bis 6 ℃ bis zu 7 Tagen gelagert werden. Für längere Lagerzeiten können die Proben bis zu einem Monat bei -70 °C aufbewahrt werden. Proben NICHT bei -20 °C aufbewahren. Urinproben sind vor dem Testen auf dem V8-System mit einem der oben aufgeführten optionalen Urinvor-bereitungspuffer (Urine Preparation Buffer) und Gerätekombinationen zu entsalzen. SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODE 1. Vergewissern Sie sich, dass sich der Einschub für den Abfallbehälter im Gerät befindet. 2. Vergewissern Sie sich vor Einschalten des V8, dass sich Lager- und Wartungspuffer sowie Einweggefäße auf dem Gerät und in den richtigen Positionen befinden. Im Bedienungshandbuch ist beschrieben, wie das Verbrauchsmaterial richtig eingesetzt wird. 3. Starten Sie die Platinum 4V-Software und legen eine neue CE-Sitzung an. Wählen Sie in Platinum 4V aus dem Dropdown-Menü ‘CE SYSTEM’ (CE-System) und klicken auf ‘DEFAULT METHOD’ (Standardmethode). Achten Sie darauf, dass das richtige Immunodisplacement Assay ausgewählt ist (siehe Bedienungshandbuch). Für Reflex-Testing oder Einzeltestanforderungen siehe Bedienungshandbuch. 4. Schalten Sie das V8-Gerät von Helena wie im Bedienungshandbuch beschrieben ein. 5. Setzen Sie für die Durchführung eines Immunodisplacement-Tests ggf. die entsprechende Serumproteinpufferflasche und das Diluent ein. Für das korrekte Einsetzen aller Serumproteinpuffer- und Diluentflaschen (siehe Bedienungshandbuch). 6. Überprüfen Sie, ob der Barcode des Immunodisplacementreagenz in die Platinum 4V geladen wurde, indem Sie aus dem Dropdown-Menü „CE SYSTEM“ (CESystem) wählen. Klicken Sie auf DEFINE REAGENTS’ (Reagenzien festlegen) und vergewissern Sie sich, dass für jedes Antiserum der Barcode eingegeben wurde und die Position der Reagenzieninformationen mit den vorgese-henen Positionen der Fläschchen auf dem V8 übereinstimmen. 7. Die Verschlusskappen der Antiseren abnehmen und sie in das Reagenzienfach des V8 setzen. 8. Wenn das V8-Gerät für die Probenaufnahme betriebsbereit ist, blinkt es rot. 9. Für Proben, die für ein Reflex-Testing angefordert wurden und sich NICHT bereits auf dem V8-Gerät befinden, das jeweilige Primärprobenröhrchen in das Probenrack stellen. Dabei darauf achten, dass durch das Rackfenster der Barcode deutlich zu erkennen ist (siehe Bedienungshandbuch).

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de 10. Die Probenracks links in den V8-Probentransportbereich stellen und wie im Bedienungshandbuch beschrieben den Deckel schließen. 11. Das V8-Gerät beginnt automatisch mit der Analyse aller geladenen Proben. Die Ergebnisse werden an die Platinum 4V-Software übertragen. 12. Bei Bedarf nach Testende das Gerät herunterfahren, indem es wie im Bedienungshandbuch beschrieben ausgeschaltet wird. 13. Am Ende eines Arbeitstags muss das V8 unbedingt wieder richtig aufbereitet werden. Siehe Bedienungshandbuch. AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Die Mehrzahl der monoklonalen Proteine wandern in den katodischen Gammabereich des Proteinmusters, können aber aufgrund ihrer pathologischen Beschaffenheit bei der Kapillarelektrophorese innerhalb des Globulinbereichs überall hinwandern. Immunodisplacement ist eine subtraktive Analysetechnik. Das abnormal Protein wird identifiziert, indem getestet wird, mit welchem Antiserum es reagiert. Daraufhin wird der ursprünglich identifizierte Peak in den Test-CE-Elektropherogrammen vermindert oder entfernt. Bei der Analyse der Ergebnisse muss berücksichtigt werden, dass normale polyklone Immunglobuline sowie abnormale Paraproteine ebenfalls aus der Spur entfernt werden. Es muss deshalb die Form des Testelek-tropherogramms sowie ihre relativen Kurvenabschnitte beachtet werden. QUALITÄTSKONTROLLE Helena Biosciences Abnormal CEtrol Serum Control (REF 802500) von Helena Biosciences kann zur Identifizierung aller Phasen des Immunodisplacement-Verfahrens eingesetzt werden. EINSCHRÄNKUNGEN 1. Reaktion mit Kappa- oder Lambda-Leichtketten-Antiseren, aber keine Reaktion mit IgG-, IgA- oder IgM-Schwerketten-Antiseren. Proben, die dieses Verhalten aufzeigen, haben entweder eine monoklonale freie LeichtkettenGammopathie oder eventuell ein monoklonales IgD- oder IgE-Protein. Unter diesen Umständen sollte die ID unter Austauschen von IgD- und IgE-Antiseren gegen zwei der anderen Schwerkettenantiseren wiederholt werden. Falls es nicht zur Reaktion mit IgD- oder IgE-Antiseren kommt, kann dies ein Hinweis auf eine LeichtkettenGammopathie sein. 2. Die Bande in der Gamma-Region zeigt keine Reaktion mit den ID-Antiseren. C-reaktives Protein (CRP) kann bei Patienten mit akuter Entzündungsantwort nachgewiesen werden 6-7. Erhöhtes Alpha-1-Antitrypsin und Haptoglobin bestärkt die Anwesenheit von CRP.

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V8 Immunodisplacement Kit 3. Keine Reaktivität mit Kappa- und Lambda-Antiserum. Gelegentlich reagiert eine Probe mit einem Schwerketten-Antiserum, ohne dass eine Reaktion mit einem Leichtketten-Antiserum ersichtlich ist. Unter diesen Umständen muss Folgendes ausgeschlossen werden: a. Schwerkettenkrankheit b. Sehr hohe Leichtkettenkonzentrationen, die zu Antigenüberschuss führen c. Niedrige Konzentrationen von Leichtketten d. Atypische, nicht mit dem Antiserum reagierende Leichtketten-Moleküle e. Leichtketten mit „versteckten“ Leichtkettendeterminanten (wird manchmal bei IgA und IgD beobachtet). 4. Kreuzreaktivität der Antiseren. Aufgrund der veränderten Beschaffenheit der Antikörpermoleküle für Immunodisplacement können die in der Kapillare durchgeführten Antikörper-Antigen-Reaktionen mit einigen Antiseren in einer Kreuzreaktivität mit den monoklonalen Komponenten einer Probe resultieren. Diese selten auftretende Kreuzreaktivität kann zu der klinischen Schlussfolgerung einer biklonalen Gammopathie führen. Falls eine Kreuzreaktivität der Antiseren vermutet wird, können weitere Tests mit einer Gel-Immunfixation erforderlich sein, um die Ergebnisse zu bestätigen. Es besteht kein Risiko, als Folge einer Kreuzreaktivität falsch negative Ergebnisse zu erhalten. Die Antiseren für das Immunodisplacement sind in der Lage, monoklonale Peaks von