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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 185 691 kInt. Cl. : A61K 31/403

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˜ ESPANA

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A61P 9/10

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 95902689.9 kFecha de presentaci´on: 22.11.1994 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 741 567 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 13.11.1996

T3

86 86 87 87

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54 T´ıtulo: Inhibici´ on de la migraci´ on y proliferaci´ on de c´ elulas musculares lisas con compuestos de

hidroxicarbazol.

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73 Titular/es: BOEHRINGER MANNHEIM

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72 Inventor/es: Yue, Tian-Li;

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74 Agente: Carpintero L´ opez, Francisco

30 Prioridad: 24.11.1993 US 157588

PHARMACEUTICALS CORPORATIONSMITHKLINE BEECHAM CORPOR. LIMITED PARTNERSHIP NO. 1 101 Orchard Ridge Drive Gaithersburg, MD 20878, US

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.05.2003

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 185 691 T3

01.05.2003

Aviso:

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Ohlstein, Eliot H. y Feuerstein, Giora, Z.

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 185 691 T3 DESCRIPCION Inhibici´ on de la migraci´on y proliferaci´on de c´elulas musculares lisas con compuestos de hidroxicarbazol. 5

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Campo de la invenci´ on La presente invenci´on se refiere a un nuevo uso m´edico de los compuestos de hidroxicarbazol de f´ ormula (I), preferiblemente los metabolitos hidroxilados de 1-(carbazol-4-iloxi-3-[[2-(o-metoxifenoxi)etil]amino]2-propanol) (carvedilol), para inhibir la migraci´ on y proliferaci´on de las c´elulas del m´ usculo liso. La presente invenci´on proporciona un nuevo uso de los compuestos de hidroxicarbazol de f´ ormula (I) para prevenir la reestenosis que ocurre tras una angioplastia coronaria percut´ anea transluminal (PTCA), suprimir la progresi´ on de la hipertrofia vascular relacionada con la hipertensi´ on y prevenir el desarrollo de la aterosclerosis.

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on de que al menos uno de entre R1 -R9 sea R1 -R9 son, independientemente, -H o -OH, con la condici´ OH. Antecedentes de la invenci´ on

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La migraci´on y proliferaci´on anormal del m´ usculo liso vascular est´a relacionada con trastornos cardiovasculares como por ejemplo aterosclerosis, hipertensi´on y otros procedimientos endovasculares. La migraci´on y proliferaci´on anormal del m´ usculo liso vascular es una complicaci´ on habitual de la angioplastia coronaria percut´ anea transluminal (PTCA). La frecuencia de la reestenosis cr´ onica como resultado de la proliferaci´ on del m´ usculo liso vascular despu´es de la PTCA se ha rese˜ nado como un 40-45 % en 3-6 meses. Capron, L., Huedes, D., Chajara, A. and Bruneval, P. (1991) J. Cardiovasc. Pharmacol., 18, 207-211; Bourassa, M. (1992) J. Am. Coll. Cardiol., 19, 1410-1411. Diversos factores neurohumorales, entre los que se incluyen la angiotensina II y la norepinefrina, as´ı como factores de crecimiento, entre los que se incluyen el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento b´ asico de fibroblastos (FGF), se han visto implicados en el desarrollo de la reestenosis vascular in vivo. Bourassa, M. et al. supra; Powell, J.S,m Clozel, J.P., Muller, R.K.M., Khun, H., Hefti, F., Hosang, M. y Baumgartner, H.R. (1989) Science, 245, 186-198; Clozel, J.P., Hess, P., Michael, C., Schietinger, K. y Baumgartner, H.R. (1991) Hypertension, 18 (Suppl. II) 1155-1159; Fingerle, J., Sanders, K.H. y Fotev, Z. (1991) Basic Res. Cardiol., 86, 75-81; Forney-Prescott, M., Webb, R.L. y Reidy, M.A. (1991) Am. J. Pathol., 139, 1291-1296; Kauffman, R.F., Bean, J.S., Zimmerman, K.M., Brown, R.F. y Steinberg, M.I. (1991) Life Sci., 49, 223-228; Azuma, H.Y. y Hamasaki, H. (1992) Br. J. Pharmacol., 106, 665-671; Ferns, G.A.A., Raines, E.W., Sprugel, K.H., Motani, A.S., Reidy, M.A. y Ross, R. (1991) Science, 253, 1129-1132 y Lindner, V. y Reidy, M.A. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 88, 3739-3743. La alta frecuencia de la reoclusi´ on vascular relacionada con la PTCA ha llevado al desarrollo de modelos animales de reestenosis in vivo y a la b´ usqueda de agentes para prevenir la reestenosis. Los antagonistas del receptor de angiotensina II, los inhibidores de la enzima conversora de angiotensina (ACE), los antagonistas de adrenoreceptores-α y los anticuerpos del factor de crecimiento han producido, en general, solo una modesta reducci´on (10-50 %) de la reestenosis vascular en dichos modelos animales. Powell, J.S., et al., supra; Fingerle, J. et al., supra; Forney-Prescott, M. et al., supra; y Kauddman, R.F., et al., supra. Estudios cl´ınicos con inhibidores de ACE (que han mostrado s´ olo un efecto protector moderado de la reestenosis en modelos animales) han fallado a la hora de demostrar una eficacia significativa en la prevenci´ on de la reestenosis definida angiogr´ aficamente en seres humanos. Popma, J.J., Califf, 2

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R.M. y Topol, E.J. (1991) Circulation, 84, 426-1436. Esta protecci´on limitada o insignificante contra la reestenosis vascular, que puede ser afectada por agentes con mecanismos de acci´on espec´ıficos refleja, con mayor verosimilitud, la compleja naturaleza de la patofisiolog´ıa existente tras la reestenosis vascular. Se cree que en esta respuesta a las heridas en las paredes vasculares est´an implicados una multiplicidad de factores quimiot´ acticos y mit´ogenos, y es probable que el interferir la acci´on de uno solo de estos factores sea algo beneficioso. Por tanto, son muy convenientes los agentes terap´euticos antimit´oticos que reducen o inhiben la migraci´ on y proliferaci´on anormal de las c´elulas del m´ usculo liso relacionadas con trastornos cardiovasculares como por ejemplo aterosclerosis e hipertrofia vascular relacionada con hipertensi´on, o como resultado de las complicaciones que pueden surgir tras una PTCA y causar reestenosis cr´ onica. Sumario de la invenci´ on

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En primer lugar, la presente invenci´on proporciona un nuevo uso m´edico de los compuestos de hidroxicarbazol de f´ ormula (I), preferiblemente los metabolitos hidroxilados de 1-(carbazol-4-iloxi-3-[[2(o-metoxifenoxi)etil]amino]-2-propanol) (de aqu´ı en adelante denominado carvedilol) como agentes antimit´ oticos para inhibir el crecimiento de las c´elulas del m´ usculo liso.

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on de que al menos un R1 -R9 sea OH. R1 -R9 son, independientemente, -H o -OH, con la condici´ En segundo lugar, la presente invenci´on proporciona tambi´en un procedimiento de tratamiento para inhibir la reestenosis que ocurre tras la PTCA, para suprimir la progresi´on de la hipertrofia vascular relacionada con la hipertensi´ on y prevenir el desarrollo de la aterosclerosis en mam´ıferos, que comprende administrar internamente a un mam´ıfero que lo necesite, preferiblemente un ser humano, una cantidad eficaz de un compuesto seleccionado entre aquellos que consisten esencialmente en compuestos de f´ormula (I) o sus sales farmac´euticamente aceptables. Descripci´ on detallada de la invenci´ on

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La solicitud de patente U.S. No 4.503.067 (de aqu´ı en adelante “la patente 067”) describe compuestos de carbazolil-(4)-oxipropanolamina de f´ ormula II:

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ES 2 185 691 T3 R1 es hidr´ ogeno, alcano´ılo inferior de hasta 6 ´atomos de carbono o aro´ılo seleccionado entre benzo´ılo y nafto´ılo;

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ogeno, alquilo inferior de hasta 6 a´tomos de carbono o arilalquilo seleccionado entre bencilo, R2 es hidr´ feniletilo y fenilpropilo; ogeno o alquilo inferior de hasta 6 a´tomos de carbono; R3 es hidr´

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ogeno o alquilo inferior de hasta 6 a´tomos de carbono o cuando X es ox´ıgeno, R4 junto con R4 es hidr´ R5 pueden representar -CH2 -O-; X es un enlace de valencia, -CH2 , ox´ıgeno o azufre; Ar se selecciona entre fenilo, naftilo, indanilo y tetrahidronaftilo;

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ogeno, fl´ uor, cloro, bromo, hidroxilo, alquilo inferior R5 y R6 se seleccionan individualmente entre hidr´ de hasta 6 a´tomos de carbono, un grupo -CONH2 , alcoxi inferior de hasta 6 a´tomos de carbono, benciloxi, alquiltio inferior de hasta 6 ´atomos de carbono, alquilsulfinilo inferior de hasta 6 a´tomos de carbono y alquilsulfonilo inferior de hasta 6 a´tomos de carbono; o 20

R5 y R6 juntos representan metilenodioxi; y las sales farmac´euticamente aceptables de los mismos. 25

En esta patente se describe tambi´en un compuesto de f´ ormula II, m´ as conocido como carvedilol, 1-(carbazol-4-iloxi-3-[[2-(o-metoxifenoxi)etil]amino]-2-propanol), que tiene la estructura mostrada en la f´ ormula III:

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Los compuestos de la patente 067, de los que el carvedilol es un ejemplo, son nuevos medicamentos de acci´on m´ ultiple que se utilizan en el tratamiento de la hipertensi´ on leve a moderada y que tienen utilidad en la angina y la insuficiencia cardiaca congestiva (ICC). Se sabe que el carvedilol es tanto un antagonista competitivo de los adrenoceptores β como un vasodilatador y, a altas concentraciones, act´ ua tambi´en como antagonista de los canales de calcio. Cuando se utiliza en el tratamiento de la hipertensi´ on, la actividad vasodilatadora del carvedilol es el resultado, en primer lugar, de un bloqueo del adrenoceptor α1 , mientras que la actividad de bloqueo del adrenoceptor β del medicamento evita la taquicardia refleja. Estas acciones m´ ultiples del carvedilol son responsables de la eficacia antihipertensora del medicamento en animales, particularmente en seres humanos, as´ı como para su uso en el tratamiento de la angina y la insuficiencia card´ıaca congestiva. V´ease Willette, R.N., Sauermelch, C.F. & Ruffolo R.R., Jr. (1990) Eur. J. Pharmacol., 176, 237-240; Nichols; A.J., Gellai, M. & Ruffolo R.R., Jr. (1991)Fundam. Clin. Pharmacol., 5, 25-38; Ruffolo, R.R., Jr., Gellai, M., Hieble, J.P., Gillette, R.N. & Nichols, A.J. (1990) Eur. J. Clin. Pharmacol., 38, S82-S88; Ruffolo, R.R., Jr., Boyle, D.A., Venuti, R.P. & Lukas, M.A. (1991) Drugs of Today, 27, 465-492; y Yue, T.L., Cheng, H., Lysko, P.G., McKenna, P.J., Feuerstein, R., Gu, J., Lysko, K.A., Davis, L.L. & Feuerstein, G. (1992) J. Pharmacol. Exp. Ther., 263, 92-98. La acci´on antihipertensora del carvedilol est´a mediada, principalmente, por un descenso total de la resistencia vascular perif´erica sin causar cambios reflejos concomitantes en la frecuencia cardiaca que suelen relacionarse con otros agentes antihipertensivos. Willette, R.N. et al. supra; Nichols, A.J. et al. supra; Ruffolo, R.R., Jr., Gellai, M., Hieble, J.P., Willette, R.N. & Nichols, A.J. (1990) Eur. J. Clin. 4

ES 2 185 691 T3 Pharmacol., 38, S82-S88.

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El carvedilol tambi´en reduce significativamente el tama˜ no del infarto en modelos caninos, porcinos y de ratas de infarto agudo de miocardio, Ruffolo, R.R., Jr., et al., Drugs of Today, supra, posiblemente como consecuencia e su acci´on antioxidante para atenuar la peroxidaci´ on de l´ıpidos originada por radicales libres. Yue, T.L., et al. supra. Los compuestos de carbazoil-(4)-oxipropanolamina, el carvedilol en particular, se han descrito tambi´en como inhibidores de la migraci´on y proliferaci´on del m´ usculo liso en las solicitudes de patente correspondientes a la serie N◦ 08/026892. Se ha descubierto recientemente que los compuestos de hidroxicarbazol de f´ ormula (I), preferiblemente en los que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 es, independientemente, OH, son capaces tambi´en de bloquear la proliferaci´ on estimulada por mit´ ogenos de c´elulas de m´ usculo liso vascular de la aorta de rata cultivadas in vivo. Estos compuestos son potentes inhibidores, tanto de la migraci´ on, medida mediante PDGF, como on de la proliferaci´ on medida utilizando 3 H-timidina. Debido a que dichos compuestos inhiben la acci´ proliferativa de m´ ultiples est´ımulos mit´ogenos, la utilizaci´on de dichos compuestos, preferiblemente los on y compuestos en los que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 es, independientemente, OH, inhibe la migraci´ proliferaci´ on de c´elulas del m´ usculo liso y, por lo tanto, evita la secuela de dicha proliferaci´ on, que terap´euticamente es indeseable, tiene una clara ventaja sobre los antagonistas concretos del factor de crecimiento. Se ha descubierto tambi´en que los compuestos de f´ormula (I), preferiblemente en los que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 son, independientemente, OH, muestran unos mayores efectos protectores contra la migraci´on y proliferaci´on del m´ usculo liso vascular en los vasos sangu´ıneos. M´ as particularmente, los compuestos de f´ ormula (I) producen una potente inhibici´ on de la proliferaci´ on, migraci´on de las c´elulas del m´ usculo liso vascular y la proliferaci´on de la neo´ıntima en las arterias que sufren una herida aguda inducida por angioplastia de bal´ on. Para este fin, la presente invenci´on proporciona un uso para un compuesto seleccionado del grupo constituido esencialmente por los compuestos de f´ormula (I), preferiblemente aquellos compuestos en los que en los que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 es, independientemente, OH, o sus sales farmac´euticamente aceptables; dicha utilizaci´ on es para inhibir la proliferaci´ on y migraci´on de las c´elulas del m´ usculo liso en mam´ıferos, preferiblemente en seres humanos, particularmente para inhibir la reestenosis mediante la proliferaci´on de la neo´ıntima inducida por angioplastia en los vasos sangu´ıneos de los pacientes que sobreviven a la PTCA; para inhibir el desarrollo de la aterosclerosis; o para suprimir la progresi´ on de la hipertrofia vascular relacionada con la hipertensi´ on. La presente invenci´on proporciona un nuevo uso de los compuestos de f´ ormula I para inhibir la proliferaci´on y migraci´on de las c´elulas del m´ usculo liso en mam´ıfero, preferiblemente en seres humanos, en particular un procedimiento de tratamiento para evitar la reestenosis mediante la proliferaci´on de la neo´ıntima inducida por angioplastia en los vasos sangu´ıneos de los pacientes que sobreviven a la PTCA; para inhibir el desarrollo de la aterosclerosis; o para suprimir la progresi´ on de la hipertrofia vascular relacionada con la hipertensi´ on, que comprende administrar internamente a un paciente que lo necesite, una dosis eficaz de una composici´ on farmac´eutica que comprende un compuesto de f´ ormula (I), preferiblemente aquellos compuestos en los que en los que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 son, independientemente, OH, o una de sus sales farmac´euticamente aceptables. Como se muestra en los siguientes Ejemplos, los compuestos de f´ormula (I) inhiben significativamente la migraci´on de las c´elulas del m´ usculo liso vascular in vivo, e inhiben la mitog´enesis del m´ usculo liso vascular humano mediada por una amplia variedad de mit´ ogenos diferentes. La migraci´on quimiot´actica de las c´elulas del m´ usculo liso de la media a la ´ıntima es una primera etapa importante en la patog´enesis de la formaci´on de la neo´ıntima tras una angioplastia de bal´ on. Se cree que la PDGF es una sustancia clave para promover la migraci´on y proliferaci´on de c´elulas del m´ usculo liso. Ferns. G.A.A. et al., supra; Ross, R. (1986) N. Engl. J. Med. 314 488-500. Seg´ un la presente invenci´ on, los compuestos de f´ormula (I) inhiben la migraci´ on de las c´elulas del m´ usculo liso inducida por PDGF con on mecan´ıstica o valores de IC50 en el intervalo de 0,2 a 1,7 µM. Sin estar limitada por ninguna explicaci´ teor´ıa de operaci´ on, la capacidad de estos compuestos para inhibir la formaci´on de la mio´ıntima in vivo puede relacionarse, en parte, con la inhibici´ on directa de la migraci´ on f´ısica del m´ usculo liso vascular desde la t´ unica media hasta la t´ unica ´ıntima y tambi´en en parte con la actividad antioxidante de estos compuestos que puede inhibir el incorporaci´ on de macr´ofagos y monocitos hacia la zona herida. 5

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Mientras que los sucesos moleculares que conducen a las acciones antiproliferativas y antimigratorias de los compuestos de f´ ormula (I) esperan una elucidaci´ on adicional, la nueva utilizaci´on m´edica de estos metabolitos hidroxilados de carvedilol y procedimiento de tratamiento utilizando estos metabolitos hidroxilados de carvedilol seg´ un la presente invenci´ on permiten una mayor protecci´ on de la formaci´ on de la ´ıntima y la estenosis que sigue a la angioplastia, en un modelo animal. Los compuestos de f´ ormula (I) pueden prepararse convenientemente seg´ un se describe en el Ejemplo

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1.

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Se pueden administrar composiciones farmac´euticas de los compuestos de f´ormula (I) a pacientes seg´ un la presente invenci´ on en cualquier modo aceptable para la medicina, preferiblemente parenteralmente. Para la administraci´on parenteral, la composici´ on farmac´eutica estar´a en forma de l´ıquido est´eril inyectable almacenado en un recipiente adecuado como por ejemplo una ampolla, o en forma de una suspensi´on l´ıquida acuosa o no acuosa. La naturaleza y composici´ on del veh´ıculo, diluyente o excipiente farmac´eutico depender´a, por supuesto, de la v´ıa de administraci´on deseada, por ejemplo mediante inyecci´on intravenosa o intramuscular.

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Para utilizar las composiciones farmac´euticas de los compuestos de f´ormula (I) seg´ un la presente invenci´on, pueden formularse ´estas como soluciones o polvos liofilizados para administraci´on parenteral. Los polvos se pueden reconstituir a˜ nadiendo un diluyente adecuado u otro veh´ıculo farmac´euticamente aceptable antes de su utilizaci´on. La formulaci´ on l´ıquida es, generalmente, una disoluci´ on acuosa isot´onica tamponada. Ejemplos de diluyentes adecuados son: soluci´ on salina isot´ onica normal, patr´ on dextrosa al 5 % en agua o disoluci´ on de acetato de sodio o amonio tamponado. Dicha formulaci´ on es especialmente adecuada para administraci´ on parenteral, pero se puede utilizar tambi´en para administraci´ on oral o contenida en un inhalador o nebulizador con una dosis medida para insuflaci´ on. Ser´ıa conveniente a˜ nadir excipientes como etanol, polivinil-pirrolidona, gelatina, hidroxicelulosa, goma ar´ abiga, polietilenglicol, manitol, cloruro de sodio o citrato de sodio.

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De manera alternativa, estos compuestos se pueden encapsular, comprimir o preparar como emulsi´ on o jarabe para administraci´ on oral. Se pueden a˜ nadir veh´ıculos s´olidos o l´ıquidos farmac´euticamente aceptables para potenciar o estabilizar la composici´ on , o para facilitar la preparaci´on de la composici´on. Entre los veh´ıculos l´ıquidos se incluyen jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, glicerina, soluci´on salina, etanol y agua. Entre los veh´ıculos s´olidos se incluyen almid´on, lactosa, calcio, sulfato dihidrato, terra alba, estearato de magnesio o a´cido este´arico, talco, pectina, goma ar´ abiga, agar o gelatina. El veh´ıculo puede incluir tambi´en un material de liberaci´ on controlada como por ejemplo monoesterato de glicerilo o diesterarato de glicerilo, solo o con una cera. La cantidad de veh´ıculo s´olido var´ıa, preferiblemente, de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 1 g por unidad de dosificaci´ on. Las preparaciones farmac´euticas se fabrican por t´ecnicas farmac´euticas convencionales que implican molienda, mezcla, granulaci´on y compresi´on, cuando sea necesario, para formar comprimidos; o molienda, mezcla y rellenado de c´apsulas duras de gelatina. Cuando se utiliza un veh´ıculo l´ıquido, la preparaci´ on estar´a en forma de jarabe, elixir, emulsi´ on o una suspensi´ on acuosa o no acuosa. Dicha formulaci´on l´ıquida se puede administrar directamente por v´ıa oral o rellenando una c´ apsula blanda de gelatina.

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La dosificaci´on para tratar la enfermedad en seres humanos seg´ un la presente invenci´ on no debe sobrepasar los, aproximadamente, 100 mg/d´ıa de los compuestos de f´ormula (I). Para prevenir la reoclusi´ on despu´es de la PTCA, el rango de dosificaci´ on preferido es la administraci´on de entre aproximadamente 12,5 mg/d´ıa a aproximadamente 100 mg/d´ıa de un compuesto de f´ ormula (I) en una dosis u ´nica o en varias dosis hasta tres veces al d´ıa antes, durante y hasta seis meses despu´es de la angioplastia; m´as preferiblemente la dosificaci´on es de aproximadamente 25 mg/d´ıa 3 veces al d´ıa. Debe entenderse que las dosificaciones reales preferidas de los compuestos utilizados en las composiciones de esta invenci´on variar´ an seg´ un la composici´on particular formulada, el modo de administraci´ on, el sitio particular de administraci´on, el hu´esped tratado y la enfermedad particular tratada.

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No se esperan efectos toxicol´ogicos inaceptables cuando los compuestos de f´ ormula (I) se utilizan seg´ un la presente invenci´on.

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En los siguientes Ejemplos, todas las temperaturas est´an en grados cent´ıgrados (◦ C). A menos que se indique otra cosa, todos los materiales de partida se han obtenido a partir de suministradores comerciales. Sin mayor elaboraci´ on, se cree que un experto en la t´ecnica puede, utilizando la descripci´ on precedente, utilizar la invenci´on en toda su extensi´ on. Se dan estos Ejemplos para ilustrar la invenci´ on, no para 6

ES 2 185 691 T3 limitar su alcance. Se hace referencia a las reivindicaciones para lo que se reserva para los inventores de aqu´ı en adelante. Ejemplos 5

Ejemplo 1 El compuesto de f´ ormula (I) en el que R3 es -OH y R1 -R2 y R4 -R9 son todos H se sintetiz´o de la siguiente manera y es un ejemplo de la v´ıa de s´ıntesis de los compuestos de f´ormula (I). 10

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3-Bencil-4-hidroxicarbazol Se a˜ nade per´ oxido de benzo´ılo (881 mg, 2,73 mmol) de una sola vez a una suspensi´ on de 4hidroxicarbazol (500 mg, 2,73 mmol) en 20 ml de CHCl3 a 25◦C. La mezcla se agita durante 2 horas y despu´es se lava con agua. La capa org´ anica se seca sobre sulfato de sodio y se concentra. La cromatograf´ıa ultrarr´ apida del residuo (s´ılice, cloruro de metileno) proporciona 15 mg de 3-benciloxi-4-hidroxicarbazol. MS (DCI/NH3 ):304,2 (M+H)+ . Las etapas posteriores para fabricar el producto se conocen bien: reacci´ on con epiclorhidrina, despu´es con 2-metoxifeniletilamina y finalmente saponificaci´ on del ´ester de benzo´ılo. Ejemplo 2 Migraci´ on del m´ usculo liso vascular

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El procedimiento para evaluar la migraci´on de las c´elulas del m´ usculo liso vascular ha sido descrito previamente en Hidaka, Y., Eda, T., Yonemoto, M. & Kamei, T. (1992) Atheroscler. 95, 87-94. Brevemente, c´elulas del m´ usculo liso vascular de la aorta de rata (secci´ on 3) se suspendieron en DMEM exento umina de suero bovino (Sigma). de suero (1 x 106 c´elulas/ml) complementado con un 0,2 % (m/v) de alb´ Los ensayos de migraci´on se llevaron a cabo en c´amaras de Boyden modificadas utilizando c´ amaras de cultivo celular Transwell (Costar, Cambridge, MA) con una membrana de policarbonato con un tama˜ no de poros de 8 µm. Se disuelve PDGF en DMEM y se coloca en el compartimento inferior en presencia, o ausencia, de compuestos de f´ ormula (I) en los que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 son, independientemente, OH. Las c´elulas del m´ usculo liso vascular (5 x 105 ) se cargan en el compartimento superior y se incuban osfera humidificada que contiene un 5 % de CO2 . Las c´elulas no durante 24 horas a 37◦ C en una atm´ migradas sobre la superficie superior se raspan suavemente y se lavan tres veces con PBS. Los filtros se fijan con metanol y se ti˜ nen con Giemsa. El n´ umero de c´elulas del m´ usculo liso vascular por 100 x campo de alta potencia (HPF) que han migrado a la superficie inferior de los filtros se determina microsc´opicamente. Se contaron cuatro HPF por filtro. Los experimentos se realizaron por duplicado o triplicado. El PDGF producido dependiente de la concentraci´ on aumenta en la migraci´ on de las c´elulas del m´ usculo liso vascular de ratas, obteni´endose el efecto m´aximo a una concentraci´on de 1 nM. Cuando los compuestos de f´ ormula (I) en los que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 son, independientemente, OH, se colocaron en la c´amara inferior con PDGF, la respuesta de migraci´ on se inhibi´ o significativamente de ormula (I) en los manera dependiente de la concentraci´ on. Los valores de IC50 para los compuestos de f´ que R1 , R2 , R3 , R5 , R6 , o R8 son, independientemente, OH, fueron los siguientes. Posici´on del grupo OH

IC50 [µm]

R1

0,99

R2

0,41

R3

0,20

R5

0,18

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Posici´on del grupo OH

IC50 [µm]

R6

1,72

R8

0,36

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La descripci´on anterior describe ampliamente como fabricar y utilizar la presente invenci´ on. Sin embargo, la presente invenci´ on no est´ a limitada a la realizaci´on particular anteriormente descrita, sino que incluye todas las modificaciones de la misma comprendidas en el alcance de las reivindicaciones.

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ES 2 185 691 T3 REIVINDICACIONES 1. Uso de un compuesto de f´ ormula (I): 5

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en la que: R1 -R9 son, independientemente, -H o -OH, con la condici´on de que al menos uno de entre R1 -R9 sea OH,

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o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo, en la fabricaci´on de un medicamento para el tratamiento de pacientes humanos que sobreviven a una angioplastia coronaria percut´ anea transluminal (PTCA) para inhibir la reestenosis por la proliferaci´ on de la neo´ıntima inducida por angioplastia en los vasos sangu´ıneos tras la PTCA. 2. Uso seg´ un la reivindicaci´ on 1, en el que el medicamento est´a adaptado para administraci´ on parenteral. 3. Uso seg´ un la reivindicaci´ on 1 de un compuesto de f´ ormula (I), en la que:

30

R1 es OH y R2 -R9 son H; R2 es OH y R1 y R3 -R9 son H; R3 es OH y R1 , R2 y R4 -R9 son H;

35

R5 es OH y R1 -R4 y R6 -R9 son H; R6 es OH y R1 -R5 y R7 -R9 son H; R8 es OH y R1 -R7 y R9 son H.

40

4. Uso de un compuesto de f´ ormula (I):

45

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en la que: 55

R1 -R9 son, independientemente, -H o -OH, con la condici´on de que al menos uno de entre R1 -R9 sea OH, o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo, en la fabricaci´on de un medicamento para inhibir el desarrollo de la aterosclerosis en pacientes humanos.

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ES 2 185 691 T3 5. Uso seg´ un la reivindicaci´ on 4, en el que el medicamento est´a adaptado para administraci´ on parenteral. 6. Uso seg´ un la reivindicaci´ on 4 de un compuesto de f´ ormula (I), en el que: 5

R1 es OH y R2 -R9 son H; R2 es OH y R1 y R3 -R9 son H; R3 es OH y R1 , R2 y R4 -R9 son H;

10

R5 es OH y R1 -R4 y R6 -R9 son H; R6 es OH y R1 -R5 y R7 -R9 son H; R8 es OH y R1 -R7 y R9 son H.

15

7. Uso de un compuesto de f´ ormula (I):

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25

en la que: 30

R1 -R9 son, independientemente, -H o -OH, con la condici´on de que al menos uno de entre R1 -R9 sea OH, o una sal farmac´euticamente aceptable del mismo, en la fabricaci´on de un medicamento para suprimir la progresi´ on de la hipertrofia vascular relacionada con la hipertensi´ on.

35

8. Uso seg´ un la reivindicaci´ on 7, en el que el medicamento est´a concebido para administraci´ on parenteral. 9. Uso seg´ un la reivindicaci´ on 7, de un compuesto de f´ ormula (I) en la que: 40

R1 es OH y R2 -R9 son H; R2 es OH y R1 y R3 -R9 son H; R3 es OH y R1 , R2 y R4 -R9 son H;

45

R5 es OH y R1 -R4 y R6 -R9 son H; R6 es OH y R1 -R5 y R7 -R9 son H; R8 es OH y R1 -R7 y R9 son H.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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