ANEJO. FOTOGRAFÍAS DEL DESARROLLO DEL ESTUDIO En este anejo se muestran diversas fotos que ilustran el desarrollo del Proyecto en sus distintas fases. Se han estructurado por bloques, mostrándose en un inicio aquellas fotografías que ilustran el montaje de las instalaciones y luego las relacionadas con el desarrollo de las distintas experiencias.
Se incluye para cada foto una leyenda explicativa.
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Foto 5. Preparación del filtro biológico: disposición de espuma filtrante en el fondo de la cubeta
Foto 6. Preparación del filtro biológico: disposición de perlón en capa intermedia
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Foto 7. Preparación del filtro biológico: enrejado superior colocado para evitar la flotación de espuma filtrante y perlón.
Foto 8. Preparación del filtro biológico: disposición de sacos del carbón activado colocados en la parte superior de la cubeta.
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Foto 9. Llenado del filtro biológico con agua. Se aprecia los sacos con carbón activado y las bombas de impulsión instaladas, una con destino al refrigerador y al acuario y otra con destino a las cubetas de experimentación.
Foto 10. Instalación de las cubetas de ensayo: preparación de materiales.
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Foto 11. Instalación de las cubetas de ensayo: cubetas de experimentación sobre soporte de madera.
Foto 12. Instalación de las cubetas de ensayo: colocación de rebosaderos en las cubetas de ensayo.
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Foto 13. Instalación de las cubetas de ensayo: colocación de tubería de desagüe.
Foto 14. Instalación de las cubetas de ensayo: disposición de tuberías de entrada y salida a las cubetas de ensayo. Las llaves instaladas permiten la retirada puntual de una de las cubetas de ensayo para realizar operaciones de mantenimiento o muestreo.
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Foto 15. Instalación de cubetas de ensayo: llenado de las cubetas con agua de mar.
Foto 16. Adaptación de la instalación de cubetas para la realización de experimentos con distintos fotoperiodos
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Foto 17. llenado del acuario con agua de mar
Foto 18. Instalación de depósito de seguridad junto al filtro biológico. Este se tuvo que instalar dado que en caso de corte eléctrico, al dejar de funcionar las bombas, el agua se salía del filtro biológico.
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Foto 19. Recogida de agua de mar en las instalaciones del IEO: planta de cultivo de Monte.
Foto 20. Depósito de 1000 l. de capacidad utilizado como reserva de agua de mar para su uso en el transcurso de las experiencias.
Foto 21. Lámpara de esterilización por rayos ultravioletas. Esterilización del agua previa al comienzo de las experiencias en la planta piloto.
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Foto 22. Pequeño laboratorio montado en las instalaciones de la planta piloto para la realización de analíticas de agua y pesado de especimenes.
Foto 23. Espectrofotómetro utilizado en la realización de las analíticas de agua
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Foto 24. Instalación de estanque exterior: preparación de la estructura para montaje de tejado. Este se tuvo que montar dado que al no contar con una fuente regular de agua, se tenía que evitar la dilución del agua de experimentación por el agua de lluvia.
Foto 25. Pintado de la estructura con capa de pintura antioxidante y pintura plástica para evitar la corrosión de los materiales.
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Foto 26. Aspecto final del tejado y comienzo del montaje del filtro de sedimentos y conchas. Para ello se preparó una estructura con cajones de distintas alturas hechos con perfiles angulares, tratados con pintura antioxidante y forrados con plástico de polietileno negro.
Foto 27. Instalación de estanque de cultivo obtenido de un distribuidor comercial. Aspecto final del filtro de sedimentos y conchas
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Foto 28. Detalle del fondo del estanque y del tubo de desagüe por sistema de rebosadero.
Foto 29. Montaje del circuito hidráulico en la instalación de cultivo en estanque exterior
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Foto 30. Detalle del sistema de salida del agua del estanque.
Foto 31. Bomba centrífuga encargada de mover el agua de ensayo. Esta se instaló aprovechando el hueco bajo una de las cubetas de ensayo a fin de protegerla del agua de lluvia.
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Foto 32. Lavado de la grava empleada como elemento filtrante en la primera cubeta del filtro de sedimentos.
Foto 33. Arena empleada como elemento filtrante en la segunda cubeta del filtro de sedimentos.
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Foto 34. Conchas de ostras empleada como elemento regulador del carbonato en la tercera cubeta del filtro de sedimentos.
Foto 35. Detalle del aspecto final del filtro biológico con el sistema de llenado y el sistema de desagüe. La última cubeta se había diseñado para albergar el skimmer, que finalmente se instaló colgado de una de las paredes del estanque, a fin de que su funcionamiento fuera continuo.
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Foto 36. Instalación de cuadro de control y maniobra de la bomba centrífuga y enchufes.
Foto 37. Llenado del estanque exterior con agua de mar previo al inicio de las experiencias
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Foto 38. Cubetas empleadas en el ensayo de densidades realizado en el estanque exterior. Para su realización se aprovecharon bidones de PE que fueron debidamente cortados para las necesidades del ensayo.
Foto 39. Corte de las mallas empleadas para cubrir de forma individual cada una de las cubetas para impedir la salida de los gusanos.
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Foto 40. Llenado de las cubetas de ensayo con arena silícica. Se aprecia también la cuerda dispuesta para facilitar la labor de extracción de las cubetas del fondo del estanque en la realización de los muestreos.
Foto 41. Colocación de doble capa de malla sobre las cubetas.
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Foto 42. Sujeción de la malla aprovechando un anillo de plástico obtenido del mismo tipo de bidones aprovechados para la realización de las cubetas.
Foto 43. Aspecto final de las cubetas de experimentación construidas para la realización del ensayo de densidades en el estanque exterior.
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Foto 44. Fondeo de las cubetas en el fondo del estanque exterior. Esta operación debe de realizarse despacio a fin de evitar la resuspensión del sedimento con la entrada del agua.
Foto 45. Aspecto final del estanque exterior con las doce cubetas de ensayo en el fondo del estanque.
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Foto 46. Aspecto final de la instalación de cultivo en estanque exterior. Se aprecian las mallas dispuestas para evitar la caída de hojas e insectos que pudieran alterar la calidad del agua.
Foto 47. Cartel de la planta de cultivo experimental.
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Foto 48. Esterilización del sedimento en horno previo a la realización de las experiencias de cultivo.
Foto 49. Disposición de sedimentos en las cubetas de ensayo.
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Foto 50. Gusanos obtenidos del medio natural preparados para el comienzo de las experiencias.
Foto 51. Deshumedificación de los gusanos y pesaje de los mismos previo al inicio de las experiencias.
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Foto 52. Liberación de los gusanos en las cubetas de ensayo. Estos rápidamente excavaban galerías en los que se enterraban.
Foto 53. Cubeta sin sedimento con gusanos. En esta primera experiencia se probó si los gusanos podían cultivarse en ausencia de sustrato pero se tuvo que renunciar a ello dado que los gusanos se apelotonaban entorno al alimento ya digerido.
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Foto 54. Masa de pienso digerido por los gusanos y gusanos apelotonados entorno a esta. En estas condiciones los gusanos muestran una alta competencia entre ellos apareciendo procesos de canibalismo.
Foto 55. Aspecto de las llaves originadas por los gusanos en la excavación de las galerías. Los gusanos salen por estos agujeros a la superficie del sedimento en busca de alimento y también usan la apertura para la ventilación de sus galerías.
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Foto 56. Molinillo empleado en la pulverización del pienso seco.
Foto 57. Envases con cantidades pesadas para el empleo en la experiencia de cultivo de densidades.
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Foto 58. Detalle de hongos formados sobre la superficie del sedimento como consecuencia del proceso de descomposición de los restos de alimento.
Foto 59. Operación de muestreo para determinar el estado de los gusanos en las cubetas.
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Foto 60. Cribado de la arena con un filtro de 500 µm y ejemplar de Nereis diversicolor.
Foto 61. Gusanos obtenidos de una de las cubetas de ensayo durante la realización del muestreo.
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Foto 62. Gusano con coloración verdosa (síntoma de su maduración sexual) obtenido en la realización de un muestreo.
Foto 63. Pesaje de los gusanos obtenidos de una de las cubetas durante la realización del muestreo.
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Foto 64. Aparición de las primeras llaves realizadas por crías de gusanos obtenidos por fertilización natural en las cubetas de ensayo. Esto se produjo prácticamente al mes de haber empezado la experiencia por lo que los gusanos que se obtuvieron del campo debían de estar bien dispuestos para el proceso de reproducción. Nos indica la idoneidad del sistema planteado para el desarrollo de las larvas de gusanos.
Foto 65. Cribado del sedimento para la separación de los gusanos juveniles. En este caso se realizó muy cuidadosamente para evitar la pérdida de gusanos. También se revisó el filtro biológico y el acuario donde se hallaron más crías de gusanos.
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Foto 66. Gusanos juveniles obtenidos por cría natural en las instalaciones de la planta piloto.
Foto 67. Separación y pesaje de individuos juveniles para la realización de ensayo de crecimiento en diferentes sustratos.
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Foto 68. Detalle de los gusanos pequeños saliendo a comer tras la adición del pienso a las cubetas de ensayo.
Foto 69. Disposición de botes para la realización del ensayo de crecimiento bajo distintos fotoperiodos. En este ensayo se analizó el crecimiento individual de los gusanos para lo cual se dispuso un gusano en cada bote.
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Foto 70. Disposición de los botes en la cámara de fotoperiodo corto para el ensayo de crecimiento bajo distintos fotoperiodos.
Foto 71. Detalle a la lupa de uno de los gusanos juveniles obtenidos en la planta de cultivo piloto.
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Foto 73. Variante en el uso del estanque exterior. Tras la realización del ensayo de densidades se adecuó el estanque con una única capa de sedimento de unos 15 cm de profundidad para la realización de un ensayo de siembra y seguimiento de una población de gusanos obtenidos del medio natural.
Foto 72. Cría de gusano de unos 13 mm de longitud.
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Foto 74. Gusanos obtenidos del medio natural para su empleo en la realización de la experiencia de siembra y seguimiento de la población en estanque exterior.
Foto 75. Deshumectación de gusanos para su empleo en la realización de la experiencia de siembra y seguimiento de la población en estanque exterior.
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Foto 76. Deshumectación de gusanos previo a su pesado en balanza digital.
Foto 77. Parte de los gusanos obtenidos en la realización de las experiencias se obtuvieron directamente a partir de mariscadores profesionales.
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Foto 78. Reproductores distribuidos en placas Petri antes del inicio de las fecundaciones artificiales
Foto 79. Detalle de la incisión para la extracción de los gametos. Cuando el estado de maduración era el óptimo la extracción de los gametos se producía mediante suaves masajes sobre el ejemplar de Nereis diversicolor. En el ejemplar de la foto se observa que fue necesario amputarle la parte final del cuerpo para poder extraer los gametos y de esta manera sexarle, ya que se trataba de un individuo inmaduro.
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Foto 80. Detalle de la liberación de gametos femeninos por parte de una hembra de Nereis diversicolor. Obsérvese el color verduzco de los óvulos responsable en parte del cambio de pigmentación que se produce en estos gusanos durante la maduración.
Foto 81. Detalle de la puesta de un macho de Nereis diversicolor. Aunque la fotografía no permite observar detalles es importante destacar la liberación del esperma se producía desde la parte final del parápodo
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Foto 82. Tras la liberación de los gametos se procedía a comprobar el estado de los mismos mediante su observación al microscopio Letelix Labalux D. Los óvulos se medían con la ayuda de un ocular graduado, técnica que también se empleaba en la medición de los óvulos de Diopatra neapolitana.
Foto 83. Extracción de los óvulos y del esperma de las placas Petri con los individuos reproductores.
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Foto 84. Detalle de óvulos sin fecundar de Nereis diversicolor observador al microscopio con una aumento de 10X y con la ayuda de un ocular graduado.
Foto 85. Detalle de un óvulo fecundado al microscopio con un aumento de 10X. Obsérvese las divisiones internas del material citoplasmático que confirman el estado de fecundación, así como la membrana semitransparente que puede verse muy débilmente en la parte exterior del óvulo.
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Foto 86. Larva segmentada con tres pares de parápodos y el saco vitelino intacto.(Gránulo más oscuro en el centro de la larva)
Foto 87. Larva segmentada de siete segmentos setígeros observada a la lupa reptando entre unos granos de arena.
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Foto 88. Detalle de una larva segmentada de 10 segmentos setígeros observada a la lupa.
Foto 89. Juvenil de Nereis diversicolor con un tamaño de más de 20 segmentos setígeros. Las larvas segmentadas comienzan a considerarse juveniles a partir del 20ª segmento setígero momento en el cual ya tienen un comportamiento igual al de los adultos.
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Foto 90. Imagen al microscopio con un aumento de 10X y con la ayuda de un ocular graduado de dos óvulos inmaduros de Diopatra neapolitana. Obsérvese la presencia de células germinales en forma de flagelo en ambos óvulos, una característica clara de inmadurez.
Foto 91. óvulos de Diopatra neapolitana maduros observados al microscopio con un aumento de 10X