Caracterización del comportamiento reproductivo de nuevos cultivares cítricos Proyecto ANII FMV-6997 Facultad de Agronomía-INIA

Contexto internacional • Variedades patentadas • Consorcios comercializadores • Restricciones de superficie, plantas o exportación • Requerimiento específico de calidad: semillas

Situación nacional Plan estratégico de la Citricultura Recambio varietal

• Introducción de variedades • Prospección de materiales locales • Programa de Mejoramiento genético (INIA-Facultad de Agronomía) Ingreso Mercado Estados Unidos

Objetivos • Determinar el tipo de compatibilidad de nuevos cultivares de cítricos • Analizar características reproductivas: - capacidad germinativa del polen - viabilidad de polen y óvulos - presencia de semillas en condiciones de polinización abierta y dirigida

Materiales en estudio • Introducido Mandarina Tango

• Prospección nacional a) Naranjas Valencia Victoria Late Paylate b) Limón INIA-Ana Claudia

• Programa de Mejoramiento genético

a) Híbridos Ellendale x Satsuma M9 (seedling) B30 b) Híbridos Ellendale x Page F2P4 F6P8

Métodos • Aislamiento de ramas o árboles con mallas antiabejas • Ramas similares o árboles en polinización abierta • Conteo de flores y frutos cuajados con y sin malla • Análisis de germinación de polen in vitro e in vivo • Análisis de viabilidad de polen y óvulos • Cuantificación de semillas en frutos cosechados

Métodos • Germinación de polen in vitro: colecta estambres, 24 horas en silica gel, siembra en medio Brewbaker y Kwack, 25°C, 5 repeticiones, 48-72 horas • Viabilidad de polen: test de tetrazolio, 3 repeticiones, promedio de granos contados por cultivar: 3000 • Germinación in vivo: marcado y embolsado de flores en estado 59 (Escala BBCH). Cada 3 días, colecta y preparación de flores para análisis de germinación en estigma, en microscopio de fluorescencia

Métodos • Polinizaciones manuales con variedades comerciales, autopolinización, emasculación • Evaluación de presencia de semillas

Limón INIA-Ana Claudia, Azucitrus

Valencia Paylate, Sandupay

Victoria Late, INIA SG

F2P4, San Antonio FAGRO

Mandarina Tango, INIA SG

Resultados

Mandarina Tango

Testigo polinización abierta Enmallado

Frutos sin Frutos con 1 semilla 2 semillas 3-5 semilla (%) semilla (%) (%) (%) semillas ( %) 88 12 9,5 2,2 0,3

100

0

Semillas/fruto: 0,15 Germinación de polen in vitro: 0,18% Germinación de polen in vivo: 0% Viabilidad de óvulos (9 DPA): 97%

-

-

-

Mandarina M9

Testigo polinización abierta Enmallado

Frutos sin semilla (%)

Frutos con semilla (%)

1 semilla (%)

80,4

19,6

8,9

5,4

5,3

98

2

0

2

0

Semillas/fruto: 0,57 PA – 0,04 Malla Germinación de polen in vitro: 4,2% Germinación de polen in vivo: 5,6% (15 DPA) Viabilidad de óvulos (12 DPA): 23%

2 semillas >3 semillas (%) ( %)

Test de viabilidad de polen en M9

Viabilidad: 38%

Frutos de M9 en condiciones de polinización abierta

M9 Testigo

Frutos de M9 en condiciones de autopolinización

M9 Malla A1R1

Mandarina híbrida B30 Frutos con semilla (%)

1 semilla (%)

Testigo polinización abierta

16

84

4

12

32

36

Enmallado

100

0

-

-

-

-

Semillas /fruto: 6,4 PA

Germinación de polen in vitro: 0,4% Germinación de polen in vivo: 0 Viabilidad de óvulos (12 DPA): 34%

2 semillas 3-5 (%) semillas ( %)

≥6 semillas (%)

Frutos sin semilla (%)

Frutos de B30 en condiciones de autopolinización

Frutos de B30 en condiciones de polinización abierta

Victoria Late

Testigo polinización abierta Enmallado

Frutos sin semilla (%)

Frutos con semilla (%)

1 semilla (%)

96

4

4

100

0

-

Semillas/fruto: 0,04 Germinación de polen in vitro: 0,01% Germinación de polen in vivo: 0 % Viabilidad de óvulos (12 DPA): 77%

2 3-5 semillas ( %) semillas (%) 0 0

-

-

Test de viabilidad de polen en naranja Victoria

% de viabilidad: 0

Crecimiento del tubo polínico en estigma de flores de M9

Valencia Paylate Frutos sin semilla (%)

Frutos con semilla (%)

1 semilla (%)

Testigo polinización abierta

77

23

4

4

15

Enmallado

100

0

-

-

-

Semillas/fruto: 1 Germinación de polen in vitro: 0,5% Germinación de polen in vivo: 0 % Viabilidad de óvulos (12 DPA): 59%

2 semillas 3-8 semillas (%) ( %)

Limón INIA-Ana Claudia

Testigo polinización abierta Enmallado

Frutos sin Frutos con 1 semilla 2 semillas >3 semillas semilla (%) semilla (%) (%) (%) ( %) Cosecha Junio 63 37 22,6 11,3 3,1

76

24

16,1

Semillas/fruto: 0,4 PA - 0,5 Malla Germinación de polen in vitro: 1,9% Germinación de polen in vivo (3 DPA): 23 % Viabilidad de óvulos (12 DPA): 35%

2,5

5,4

Limón INIA-Ana Claudia

Germinación de polen in vivo (3 DPA): 23 %

Cuajado de frutos en condiciones de autopolinización y polinización abierta Cultivar

Cuajado (%)

M9 Autopolinización Polinización abierta

3,8 3,0

B30 Autopolinización Polinización abierta

2,7 3,5

Victoria Autopolinización Polinización abierta

3,3 2,8

Paylate Autopolinización Polinización abierta

1,3 1,6

Número promedio de frutos por planta en autopolinización y polinización abierta (mandarina Tango y limón Ana Claudia) Cultivar

Tango Autopolinización Polinización abierta Ana Claudia Autopolinización Polinización abierta

N° de frutos por planta 652 676 61 97

Capacidad polinizadora, expresada como porcentaje de frutos cosechados con semillas Variedad/polinizador

Afourer

Limón Criollo

Valencia CV 64

Autopolinizado

Tango

10

24

31

0

M9

33

-

0

0

B30

100

67

100

0

-

0

0

Victoria

62,5

Conclusiones • M9, B30, Paylate y Victoria, son autoincompatibles, mientras que Inia-Ana Claudia, es autocompatible • Tango es autoincompatible, pero no presenta esterilidad absoluta, alcanzando 12% de frutos con semillas en libre polinización • En similares condiciones, M9 y Victoria presentan un muy bajo número de frutos con semillas, similar al de Tango, siendo las más promisorias en ese aspecto • Tango, B30, Victoria y Paylate presentaron mínima capacidad de germinación de polen in vitro y nula in vivo

Conclusiones • Tango, M9 y Victoria, presentan alta habilidad partenocárpica, cuajando en forma similar en condiciones de autopolinización que en polinización abierta • B30 resultó la variedad con mayor presencia de semillas en polinización abierta y manual • Las tres variedades polinizadoras utilizadas indujeron la formación de semillas en la mayoría de las situaciones estudiadas • Tango presentó semillas con los tres polinizadores utilizados

Agradecimientos Carlo Roggero (Caputto) Pablo Rodríguez (Azucitrus) Personal de campo INIA-SG

Equipo de Trabajo Facultad de Agronomía Ing.Agr. (Dra.) Giuliana Gambetta Ing.Agr. Ana Paula Mautone Ing.Agr. Beatriz Vignale (asesora en selección de materiales a evaluar) Ing.Agr. Florencia Rey Ing.Agr. Carolina Fasiolo Ing.Agr. Virginia Pereira das Neves Bach. Natalia Guimaraes INIA Ing.Agr. (Dr.) Fernando Rivas (asesor en selección de materiales a evaluar)

Capacidad polinizadora, expresada como porcentaje de frutos cosechados con semillas

Viabilidad polen /Polinizador Porcentaje

Afourer 8

Limón 18

Valencia 11

Viabilidad polen/Polinizador

M9

B30

Tango

Victoria

Porcentaje

38

19

0

0