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TUBOS PARA MANTENIMIENTO DE CEPAS CONGELADAS Tubos para el almacenamiento de microorganismos a largo plazo, a bajas temperaturas. Cada caja contiene 20 crioviales (pequeños tubos de plástico aptos para la congelación). En cada criovial hay aproximadamente 10 perlas y un crioprotector. Las perlas están lavadas al ácido y son de naturaleza porosa, permitiendo que los microorganismos se adhieran a su superficie.

PREPARACIÓN 1. Preparar un cultivo del microorganismo que queramos congelar, en un medio sólido, adecuado y no selectivo, del cual se recogerá para resuspenderlo en el medio de suspensión. 2. Como medio para la suspensión se puede utilizar Solución Ringer (Ref. 6-073), Agua de Peptona (Ref. 3-156) o Caldo Nutritivo (Ref. 2-140). Para los halófilos o alcalófilos, se utiliza el medio apropiado para su crecimiento. 3. La suspensión debe ser densa ya que así se reduce el riesgo de pérdida de viabilidad. Se prepara recogiendo el crecimiento de la placa con 1-2 ml del medio de suspensión y emulsionándolo con una asa de Drigalski, hasta hacer una crema espesa y homogénea. También puede hacerse arrastrando directamente las colonias con una asa y depositándolas directamente en el criovial, pero en muchas ocasiones si se hace de esta forma la disolución es más difícil. 4. Una vez preparada la suspensión de la bacteria que se va a congelar, se toma con una pipeta y se vierten de 0,5 a 1 ml en el criovial. Se tapa el criovial y se agita con fuerza para emulsionar bien el crioprotector con la suspensión. Luego con una pipeta se aspira el exceso de líquido, procurando dejar las perlas casi secas. Es importante que las cuentas se peguen lo menos posible unas a otras. Rotular correctamente el vial, protegiendo la etiqueta con una vuelta de celo.

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5. Los viales se colocan en una bandeja y se llevan al congelador. Para que posteriormente sea fácil la extracción de las perlas se recomienda que la congelación se haga con el vial plano. Una vez congelados ya se pueden colocar en el congelador de forma más cómoda, gradillas por ejemplo. La temperatura de congelación debe ser de -20°C a -70°C.

RECUPERACIÓN 1. Para la recuperación y control de las cepas congeladas se toma una cuenta mediante una espátula pequeña flameada y se deposita sobre un medio sólido adecuado, devolviendo el vial al congelador lo más rápido posible. Con la ayuda de una asa de siembra, se hace rodar la cuenta por encima del agar hasta la total descongelación y luego se incuba. También se puede sembrar directamente la perla en un caldo adecuado, incubar 24 h. y luego pasar al medio sólido. Normalmente los microorganismos se recuperan mejor en un medio líquido. 2. Después de su extracción, las perlas no deben nunca ser devueltas al criovial bajo razón alguna. 3. Se recomienda preparar por lo menos un par de viales de cada cepa, uno para el uso rutinario y el otro de reserva, para prever los accidentes. Este segundo vial, incluso debería mantenerse en diferente congelador, si fuera posible. 4. Es conveniente hacer la comprobación de uno de los viales al poco tiempo de la congelación, para asegurarnos de que todo está correcto antes de desprendernos de la cepa en forma vegetativa. 5. Debe procurarse que durante el traslado del vial desde el congelador a la poyata no se descongele todo, para lo cual debe procurarse un sistema isotermo. Si no se dispone de nieve carbónica, se recomienda el transporte en bloque de parafina congelada, que tiene mucha inercia térmica y mantiene la temperatura casi una hora. La parafina se prepara vertiendo parafina caliente en una bandeja hasta hacer un bloque de la altura de 2/3 del vial. Cuando haya solidificado se perforan huecos del tamaño de los viales y se mantiene siempre en el congelador junto a los viales, usándose sólo como sistema de transporte. Utilizando este sistema de conservación la mayoría de bacterias pueden mantenerse hasta unos 2-5 años sin grandes problemas. El tiempo de supervivencia dependerá de la cepa y de la temperatura de congelación.

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REFERENCIA

DESCRIPCIÓN

CADUCIDAD

064-TA0124

Tubos para mantenimiento de cepas congeladas

2 años

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PRESENTACIÓN 1x20 u.

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CEPAS LIOFILIZADAS Conjunto de microorganismos liofilizados para su uso en programas de control de calidad y de aseguramiento de la calidad. Amplio catálogo de cepas procedentes de la mayor colección norteamericana: ATCC (American Type Culture Collection). La lista de microorganismos incluye las cepas comúnmente usadas en el laboratorio, tanto en el ámbito industrial como el clínico. Se trata de un producto de máxima calidad desarrollado y fabricado bajo las directrices de la FDA (Food and Drug Administration): Quality System Regulation; 1996 (QSR), de acuerdo con los artículos de la normativa ISO 9001:2000 y cumpliendo los requisitos de la marca CE. Todos los productos de MICROBIOLOGICS se suministran con instrucciones detalladas y certificado de análisis que garantiza su autenticidad, la trazabilidad y el número de subcultivos hechos desde el cultivo de referencia original.

PUEDE CONSULTAR MÁS INFORMACIÓN EN: www.microbiologics.com

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CEPAS DE REFERENCIA ATCC Cepas liofilizadas que debidamente procesadas, mantenidas y subcultivadas proporcionan al laboratorio microorganismos con características establecidas y predecibles que permiten al microbiólogo disponer de una forma simple y sencilla de una fuente fiable de cultivos puros de referencia para su uso en controles de calidad, educación, industria, investigación y desarrollo, etc. Son de uso muy sencillo y ahorran al usuario el laborioso proceso de preparación, mantenimiento y almacenaje de una colección de cepas de referencia. Ofrecemos más de 500 cepas de referencia, disponibles en tres presentaciones:

LYFO-DISK® Envasados en un vial que contiene 10 “pellets” (pastillas) liofilizados de una única cepa de microorganismo y un desecante para evitar la presencia adversa de humedad. Son de muy fácil uso y muy versátiles en cuanto a sus aplicaciones. No necesita preincubación, la rehidratación y la inoculación son rápidas. Cada preparado de microorganismos liofilizados ha sufrido como mínimo 4 resiembras desde el cultivo de referencia ATCC. Para recuperar o rehidratar los microorganismos LYFO-DISK se requieren 0,5 mL de un fluido estéril: TSB (caldo triptona y soja, referencia Scharlau: 2-200), BHI (caldo cerebro y corazón, referencia Scharlau: 2-102), solución salina (Ringer, referencia Scharlau: 6-073) o agua desionizada. Pídanos la cepa que desea adjuntando el número de colección americana o española. En caso de duda consúltenos. Cada referencia contiene 4 digitos variables según la cepa seleccionada, y una letra final que difiere según presentación: REFERENCIA TIPO LYFO-DISK: 660-0XXXXV (X = 4 NÚMEROS SEGÚN CEPA) continua en la página siguiente ➜

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CEPAS DE REFERENCIA ATCC LYFO-DISK® MODO DE EMPLEO 1

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Sacar del lugar de almacenamiento y esperar a que adquiera la temperatura ambiental. Coger el “pellet” con pinzas estériles. No sacar el desecante. Introducir el “pellet” en un tubo con 0,5 ml de fluido estéril. Aplastar el “pellet” con un escobillón. Saturar el escobillón con la suspensión hidratada. Primero inocular una placa petri haciendo rodar el escobillón en una área circular de unos 25 mm de diámetro. A continuación, y con una asa estéril, sembrar a partir de la zona inoculada extendiendo la siembra para facilitar el aislamiento colonial. 8. Usar contenedores de bioseguridad adequados donde depositar los restos de material rehidratado (ver capítulo de “Material de seguridad”). 9. Incubar la placa rápidamente. 10. La preservación de los “pellets” restantes depende de su correcto almacenamiento. 11. Tapar el vial y almacenar entre 2°C y 8°C.

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TENEMOS A DISPOSICIÓN DE NUESTROS CLIENTES UN SERVICIO DE ASESORÍA TÉCNICA O BIOCONSULTING, DONDE PODEMOS AYUDARLE CON SU ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO LÍNEA GRATUITA: 900 10 18 98

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CEPAS DE REFERENCIA ATCC KWIK-STIK™, LISTOS AL USO Cada unidad contiene un “pellet” (pastilla) liofilizado de una única cepa de microorganismo, un recipiente de fluido hidratante y un escobillón de inoculación (hisopo). Cada aparato está sellado dentro de una bolsa aluminizada que contiene un desecante. No necesita preincubación. Cada preparado de microorganismos liofilizados ha sufrido como mínimo 4 resiembras desde el cultivo de referencia ATCC.

Existen dos presentaciones: KWIK-STIK™ CANISTERS: CONTIENE 10 ESCOBILLONES

REF. TIPO: 660-0XXXXS (X = 4 NÚMEROS SEGÚN CEPA)

KWIK-STIK™ DUO PACK: CONTIENE 2 ESCOBILLONES

REF. TIPO: 660-0XXXXP (X = 4 NÚMEROS SEGÚN CEPA)

Pídanos la cepa que desea adjuntando el número de colección americana o española. En caso de duda consultenos. Cada referencia contiene 4 digitos variables según la cepa seleccionada, y una letra final que difiere según presentación. 2

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MODO DE EMPLEO “PELLET” CON EL 1. Romper la bolsa por la muesca y sacar el Kwik-Stik. MICROORGANISMO 2. Sacar la parte de la etiqueta con la información para seguimiento LIOFILIZADO y control de calidad y engancharla en la placa de petri. 3. Apretar la parte superior para romper la ampolla que contiene el fluido hidratante. 4. Sostener en posición vertical para permitir el paso del fluido a la parte inferior del “pellet”. 5. Apretar el “pellet” para permitir la mezcla con el fluido. 6. A continuación, saturar el escobillón con la suspensión. 7. Primero inocular una placa petri haciendo rodar el escobillón en una área circular de unos 25 mm de diámetro. 8. A continuación, y con una asa estéril, sembrar a partir de la zona inoculada extendiendo la siembra para facilitar el aislamiento colonial. 9. Usar contenedores de bioseguridad adequados donde depositar los restos de material rehidratado (ver capítulo de “Material de seguridad”). 10. Incubar la placa rápidamente.

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MICROORGANISMOS DE CONCENTRACIÓN CONOCIDA PARA CONTROL Cepas liofilizadas derivadas de cultivos de referencia y manufacturadas con el fin de obtener una concentración predeterminada. Debidamente procesadas, mantenidas y almacenadas proporcionan al laboratorio una concentración conocida o premedida de microorganismos con características bien conocidas y predecibles. Se presentan con certificado de análisis incluido en una etiqueta autoadhesiva y separable (peel-off).

Presentaciones:

EZ-CFU™ 10 - 100 UFC/0,1 ml Preparaciones de concentración conocida de microorganismos que cumplen las indicaciones de la USP (Farmacopea americana) y que proporcionan una referencia contrastada para evaluar medios de cultivo empleados en los ensayos de esterilidad. Cada kit contiene:

2 viales, cada uno con 10 “pellets” de una única cepa liofilizada 10 viales, con 2 ml de fluido hidratante

El proceso de producción de estos microorganismos obtiene un valor promedio de ensayo dentro del siguiente rango: 1000-10000 UFC por “pellet”. Después de un simple proceso de rehidratación consistente en una dilución 1:10, se alcanza un rango de: 10-100 UFC/0,1 ml.

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Pídanos la cepa que desea adjuntando el número de colección americana o española. En caso de duda consultenos. Cada referencia contiene 4 digitos variables según la cepa seleccionada, y una letra final que difiere según presentación: REFERENCIA TIPO: 660-0XXXXC (X = 4 NÚMEROS SEGÚN CEPA)

MODO DE EMPLEO 2

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1. 2. 3. 4. 5. 6.

Esperar hasta obtener la temperatura ambiental en el vial con el “pellet” (22°C-25°C). Precalentar todos los fluidos hasta 35-37°C. Sacar 2 “pellets” en introducir en 2 ml del fluido de hidratación. Es conveniente tapar los viales que contienen los “pellets” que no van a utilizarse. Incubar a 35-37°C durante 30 minutos. Después de la incubación, agitar el material rehidratado hasta obtener una suspensión homogénea. Con una pipeta estéril, coger 1,0 ml de la suspensión rehidratada y transferirla al tubo de dilución que contiene 9 ml de tampón pH 7,2. 7. Agitar bien la dilución. 8. Con una pipeta estéril, coger 0,1 ml de la dilución e inocular el material que va a ser contrastado. 0,1 ml contienen 10-100 UFC. continua en la página siguiente ➜ 96

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MICROORGANISMOS DE CONCENTRACIÓN CONOCIDA PARA CONTROL EZ-FPC™ Preparaciones de concentración conocida de microorganismos que proporcionan una referencia contrastada para evaluar los protocolos cualitativos (presencia/ausencia) y cuantitativos (recuentos) en el ámbito se la seguridad y del control de calidad alimentarios. Cada kit contiene: 1 vial con 10 “pellets” (pastillas) de una única cepa liofilizada El proceso de producción de estos microorganismos obtiene un valor promedio de ensayo dentro del siguiente rango: Controles de proceso cualitativo: 100 - 1000 UFC por “pellet” Controles de proceso cuantitativo: 1000 - 10000 UFC por “pellet” Pídanos la cepa que desea adjuntando el número de colección americana o española. En caso de duda consúltenos. Cada referencia contiene 4 digitos variables según la cepa seleccionada, y una letra final que difiere según presentación: REFERENCIA TIPO: 660XXXXFPC (X = 4 NÚMEROS SEGÚN CEPA)

MODO DE EMPLEO

4-5-6

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1. 2. 3. 4. 5. 6.

Esperar hasta obtener la temperatura ambiental en el vial con el “pellet” (22°C-25°C). Precalentar todos los fluidos hasta 35-37°C. Coger 1 “pellet” e introducirlo en el caldo de preenriquecimiento (cuantitativo), o en el fluido de dilución. Es conveniente tapar los viales que contienen los “pellets” que no van a utilizarse. Incubar a 35-37°C durante 30 minutos. Después de la incubación, agitar el material rehidratado hasta obtener una suspensión homogénea. Ya se puede empezar el control de proceso cuantitativo. Para el control de proceso cualitativo, volver al paso de preenriquecimiento. continua en la página siguiente ➜

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MICROORGANISMOS DE CONCENTRACIÓN CONOCIDA PARA CONTROL TAMBIÉN ESTÁN DISPONIBLES LOS SIGUIENTES PRODUCTOS DE MICROBIOLOGICS:

KWIK-STIK™ Plus LISTOS AL USO Cada preparado de microorganismos liofilizados ha sufrido un número de resiembras menor o igual a 2 desde el cultivo de referencia. Se presenta en un envase con 5 escobillones.

E-POWER™ Útiles en controles de calidad que requieren un número conocido de microorganismos, principalmente en laboratorios industriales. Cada kit contiene: 1 vial con 10 “pellets” de una única cepa liofilizada. El proceso de producción de estos microorganismos obtiene un valor promedio de ensayo que varia según la referencia entre los dos siguientes rangos: 1000-1,0.107 UFC por “pellet”

EZ-PEC™

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2.106 - 9,9.106 UFC/0,1 ml Proporcionan una referencia contrastada para evaluación de la eficacia de sustancias antimicrobianas y para control de pruebas de eficacia de la conservación (Challenge Test). Cada kit contiene:

2 viales, cada uno con 10 “pellets” de una única cepa liofilizada 10 viales, con 2 ml de fluido hidratante

Como añadimos un 0,5 % o un 1 % de esta suspensión al producto que se va a ensayar, se obtiene una concentración final de 1,0.105 - 1,0.106 UFC por 0,1 ml.

ALMACENAMIENTO Y CADUCIDAD Los preparados de microorganismos deben ser almacenados a una temperatura entre 2°C y 8°C, en el interior de su envase original sellado o en la bolsa que contiene el desecante. Almacenado según estas instrucciones, el preparado de microorganismos liofilizado mantendrá sus características y rendimiento dentro de los límites establecidos hasta la fecha de caducidad especificada en la etiqueta nunca inferior a 9 meses.

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