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TALLER DE DIAGNÓSTICO Y VACUNAS VETERINARIAS / DIAGNOSIS AND VETERINARY VACCINES WORKSHOP PRESENTACIONES ORALES / ORAL PRESENTATIONS VACD-O-1. CSF IN THE EUROPEAN UNION. DIAGNOSTIC AND VACCINES POLICIES / PESTE PORCINA CLÁSICA EN LA UNIÓN EUROPEA. DIAGNOSTICO Y POLÍTICAS DE VACUNACIÓN. Volker Moennig, Institute of Virology, Hannover, Germany VACD-O-2. RTq-PCR IN VETERINARY DIAGNOSTIC/ PCR-RTq EN EL DIAGNÓSTICO VETERINARIO. Stefanie Schmeiser, Institute of Virology, Hannover, Germany VACD-O-3. INFLUENZA PORCINA: EMERGENCIA E IMPACTO / SWINE INFLUENZA: EMERGENCY AND IMPACT. Heidy Díaz de Arce, CENSA, Cuba. VACD-O-4. AVANCES EN EL DIAGNÓSTICO DE LOS MICIOPLASMAS. EXPERIENCIA DE CUBA EN LA TEMATICA Evelyn Lobo Jefe de MYCOLAB [email protected]

(Laboratorio

de

diagnóstico

de

micoplasmas),

CENSA.

Los micoplasmas fueron aislados por primera vez, en 1899, de bovinos que padecían la Pleuroneumonia contagiosa biovina, desde entonces y hasta la actualidad han sido aislados de especies de animales, plantas, cultivos celulares y productos biofarmacéuticos de aplicación biomédica, hoy se conocen más de 200 especies de estos micoorganismos. La última década se ha caracterizado por numerosos avances en el esclarecimiento de los factores de virulencia de las bacterias, con excepción de los micoplasmas, una vez que los estudios sobre su patogenicidad se han quedado muy atrás de otros modelos experimentales. La única excepción ha sido con respecto al estudio de la variabilidad antigénica. El descubrimiento de la impresionante capacidad que los micoplasmas poseen para mantener una arquitectura de superficie que es antigénicamente y funcionalmente versátil situó a estos microorganismos en el grupo de ―elite‖ de bacterias patógenas y parásitos, distinguiéndose por su sorprendente variabilidad antigénica. Esta versatilidad constituye una estrategia de supervivencia de los micoplasmas en los organismos que parasitan. Para su diagnóstico y caratcerización se han desarrollado técnicas que van desde el cultivo microbiológico hasta el empleo de técnicas moleculares. En Cuba fueron aislados por primera vez a inicio de los 80s y desde entonces se han reportado afectando a bovinos, aves, cerdos y otras especies de interés veterinario. MYCOLAB es el único laboratorio, a nivel nacional, que realiza investigaciones en el tema de la micoplasmología, cuenta con un sistema de calidad bajo la norma ISO/IEC: 17025 para laboratorios

157 acreditados y ha desarrollado un sistema de diagnóstico que incluye técnicas de diagnóstico desde el cultivo microbiológico, pruebas bioquímicas, serológicas y varios ensayos moleculares como la Hibridación de acidos nucleicos (HAN) y diversos ensayos de PCR (simple, anidado, RFLP, RAPD, DGGE). La aplicación de estas técnicas ha permitido la detección, aislamiento y caracterización filogenética de estos microorganismos que afectan a especies de interes económico. El presente trabajo tiene como objetivo mostrar las experiencias de Cuba en el aislamiento y caracterizacion de micoplasmas que afectan especies de interés económico. VACD-O-5. DIAGNÓSTICO Y CARACTERIZACIÓN MOLECULARES EN BACTERIOLOGÍA VETERINARIA EN CUBA Ivette Espinosa Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Cuba Los métodos convencionales que se utilizan en el diagnóstico bacteriológico se basan en la detección de características fenotípicas como las propiedades culturales, tintoriales y bioquímicas. Estos ensayos pueden resultar subjetivos e ineficientes, fundamentalmente cuando se trata de entidades microbianas que provienen de poblaciones heterogéneas donde existe una microflora comensal abundante, incluso cuando podrían estar presentes cepas avirulentas de la especie de interés. Los procedimientos basados en la detección de marcadores específicos en el genoma, orientan la detección de los aislados con potencialidades genéticas de expresar factores que contribuyen a su virulencia. En nuestras condiciones la utilización de ensayos moleculares como la reacción en cadena de la polimerasa ha permitido la detección de diferentes genotipos de Streptococcus suis y Pasteurella multocida, entidades asociadas a diferentes manifestaciones clínicos en cerdos. Los aislados de S.suis del genotipo cps2j-serotipo2 que provenían de animales con procesos invasivos resultaron negativos para los tres marcadores suilisina (syl), factor extracelular (ef) y muramidasa (mrp), mientras los aislados de pulmón de este serotipo evidencian los tres marcadores génicos. Estos datos contribuyen al conocimiento de la enfermedad, al diagnóstico diferencial de los procesos respiratorios en el cerdo y al desarrollo de medidas encaminadas a su control. VACD-O-6. Conferencia Dr. Andrew Potter, Director Vaccine and infectious Disease Organization (VIDO) Canada VACD-O-7. MicroRNAs CODIFICADOS POR VIRUS QUE AFECTAN AL CERDO / MicroRNAs ENCODED BY VIRUSES AFFECTING SWINE. Jose Ignacio Nuñez, CReSA, España

158 VACD-O-8. UNMASKING THE PROTECTIVE MECHANISMS AGAINST CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS: IMPLICATIONS FOR VACCINE DEVELOPMENT / DESENMASCARANDO LOS MECANISMOS DE PROTECCIÓN CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE PORCINA CLÁSICA: IMPLICACIONES PARA EL DESARROLLO DE VACUNAS. Llilianne Ganges, CReSA, España VACD-O-9. COMPUTER AIDED IDENTIFICATION OF POTENTIAL ANTIBACTERIAL VACCINE TARGETS J.A. Agüero*, L. Aguilar-Bultet*, Y. Estévez-Diepa**, Y. Abreu-Jorge** and A. LageCastellanos*** *Microbial Genomics and Bioinformatics Laboratory. Molecular Biology Department. Microbiology Direction. National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. [email protected] **Computer Science Department, Direction of Technological Innovation Management, National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. *** Statistics and Mathematics Department, Cuban Neuroscience Center. Havana. Cuba. Vaccinology has proved to be very effective in preventing infectious bacterial diseases. However, there are several human and animal pathogens for which vaccines have not yet been discovered. The advent of the genomic era has recently led to a new generation of rationally designed vaccines developed using reverse vaccinology. This approach reduces the time required for the identification of candidate vaccines and provides new solutions for those vaccines which have been difficult or impossible to develop. A candidate vaccine should be highly expressed, available for immune surveillance, and possess epitopes that the host recognises. For this reasons the pathogenic genome should be scanned for open reading frames, sub-cellular location of predicted proteins, their functions and antigenic characteristics of them. Predicting such diverse properties remains challenging. No one method is universally applicable and successful; rather we need to integrate several approaches in our research. An appraisal of a possible methodology to access these issues is presented and discussed. VACD-O-10. AVANCES EN LA GENERACIÓN DE LAS VACUNAS VETERINARIAS Y SU PERSPECTIVA DE DESARROLLO INDUSTRIAL. Siomara Martínez, B. Corona Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). [email protected] La vacunación continúa siendo la vía más sostenible y de mayor impacto en el control de enfermedades infecciosas, dado por la mayor factibilidad económica, a lo que se agrega el problema que representa la resistencia de los patógenos a antibióticos. En este sentido, las vacunas resultantes de la biotecnología desempeñan un papel importante en el control y la vigilancia de algunas de las enfermedades animales más importantes, zoonosis y

159 seguridad alimentaria. La obtención de las nuevas generaciones de vacunas a ciclo cerrado, deben pasar por diferentes requerimientos que transitan desde la investigación básica, pasando por pruebas de concepto que demuestren su robustez pero considerando imperativos comerciales, requerimientos locales con respecto a la enfermedad así como las perspectivas globales del control de la misma. A esto debe agregarse las regulaciones cada vez mayores de bioseguridad y Calidad. Otros criterios a tener en cuenta están relacionados con que las

producciones de

las vacunas dirigidas a los animales

de

producción se caracterizan por ser grandes pero obtenidas a bajo costo. Sobre las vacunas de nuevas generaciones existen presiones regulatorias y legales cada vez mayores sobre todo las que contienen organismos vivos genéticamente modificados así como fuertes medidas de Bioseguridad relacionadas con las enfermedades zoonóticas, liberación al ambiente y los patógenos transmitidos por alimentos. Uno de los aspectos que más inciden en la factibilidad de producción de las vacunas dirigidas a los animales son los relacionados con los sistemas productivos donde las regulaciones cada vez mayores, las Buenas Prácticas de Producción, así como los retos de las producciones de antígenos a gran escala unido a cambios en los Sistemas productivos y

las nuevas

formulaciones de los medios de cultivo, encarecen los mismos. En el trabajo se realiza un análisis de las tendencias de las nuevas generaciones de Vacunas Veterinarias desde una Perspectiva Industrial. VACD-O-11. 3RS ALTERNATIVE METHODS FOR POTENCY AND SAFETY TESTING OF VETERINARY VACCINES: A CURRENT OVERVIEW AND NEW TRENDS / 3R MÉTODOS ALTERNATIVOS PARA LAS PRUEBAS DE POTENCIA Y LA SEGURIDAD DE LAS VACUNAS VETERINARIAS: UNA VISIÓN ACTUAL Y NUEVAS TENDENCIAS. Mario Landys, Instituto Finlay, Cuba

PRESENTACIONES EN CARTELES / POSTER PRESENTATIONS VACD-1. FACTIBILIDAD DEL USO DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE VP3 DE GUMBORO EN UN ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO TIPO ELISA A. Alfonso y J. Noda Dirección de Microbiología, Grupo de Virología Animal. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. Correo electrónico: [email protected] Nuestro objetivo fue demostrar la factibilidad del empleo de la proteína recombinante VP3 del virus de la enfermedad de Gumboro para el desarrollo de un ELISA indirecto que permita detectar anticuerpos específicos a esta proteína. Los sueros positivos se obtuvieron por inoculación experimental. Se empleo el formato de ELISA indirecto y se titularon los reactantes por el método de tablero de ajedrez. Para la realización del ELISA

160 indirecto una placa de 96 pozos fue recubierta con la proteína recombinante VP3 a razón de 5 ug/ml y se emplearon diluciones de suero y conjugado de 1:100 a 1:600 y de 1:12500 a 1:100000 respectivamente. Los resultados arrojaron una excelente diferenciación entre los sueros positivos y negativos en las diferentes diluciones, sobre todo en las diluciones inferiores. Se apreció una disminución progresiva de la densidad óptica del suero positivo con el aumento de las diluciones del mismo y del conjugado, a excepción del negativo, demostrando una reacción específica del analito (IgY) por la proteína VP3. Pudimos determinar que tanto los reactivos, metodología y protocolos seleccionados nos permiten distinguir muy bien entre los sueros positivos reactivos a VP3 y los negativos, demostrándose además que dicho ensayo poseía una tendencia a dar muy poco fondo. Con estos resultados podemos concluir que el uso de la proteína recombinante VP3 de Gumboro es factible para su empleo en el desarrollo de un ensayo inmunoenzimático tipo ELISA. VACD-2. DETECCIÓN DE BRONQUITIS INFECCIOSA Y METAPNEUMOVIRUS AVIAR MEDIANTE RT-PCR EN MUESTRAS CLÍNICAS DE AVES CON PROCESOS RESPIRATORIOS Ana M. Acevedo*, M. Colás**, Y. Burgher*, D. Relova*, A. Merino**, J. Noda*. *Grupo de Virología Animal, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. [email protected] ** Laboratorio de Investigación y Diagnóstico Aviar (LIDA. La Habana. Cuba. El virus de la bronquitis infecciosa y el metapneumovirus aviar son dos agentes infecciosos virales con manifestaciones clínicas muy semejantes que provocan un impacto económico severo en la industria avícola. Para identificar la posible presencia de estos agentes en aves con clínica respiratoria, se obtuvieron muestras de tráquea pulmón y exudados traqueales procedentes de cinco granjas de ponedoras. El diagnóstico virológico se realizó por aislamiento viral en embrión de pollo y la identificación por RT-PCR específico para bronquitis y metapneumovirus aviar. Se obtuvo aislamiento viral de bronquitis en tres de las granjas evaluadas y la detección directa del virus por RT-PCR tanto a partir de la muestra clínica como de los aislados obtenidos. En las poblaciones evaluadas no se detectó metapneumovirus aviar, no obstante se cuenta con la metodología de diagnóstico para la detección e identificación por métodos moleculares y convencionales de este agente, no disponible anteriormente en el país.

161 VACD-3. COMPORTAMIENTO DE LA RABIA HUMANA EN HUAMBO, ANGOLA EN LOS AÑOS 2008-2009 A.M.A.F. Pereira*, J. Morais*, M.A. Abeledo**, E. Roque***, J. Álvarez ***, A. José**** B.C.N Canele***** *Facultad de Medicina Veterinária Huambo-Universidad José Eduardo dos Santos, Huambo, Angola **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba ***Universidad Agraria de la Habana, Cuba ****Dirección General del Instituto de los Servicios de Veterinaria *****ADRA-Angolana Acción para el Desarrollo Rural y Ambiente correo electrónico: [email protected] La rabia es una zoonosis reportada por la Organización Mundial de la Salud con una elevada mortalidad en África e Asia. Estudios realizados en Angola en las décadas de 1930- 1960 hacen mención a los perros como principales transmisores de la enfermedad diagnosticada en caninos salvajes en el laboratorio. En los últimos años se registra un número elevado de casos en el país, lo que crea un impacto de gran importancia para la salud pública. En este trabajo se analiza el comportamiento de la rabia humana en los años 2008 y 2009 en Huambo y para ello se obtuvieron los datos de los registros del Hospital General de Huambo, Departamento de Salud Pública de Huambo, informes anuales de la Dirección General y Provincial de Huambo del Instituto de los Servicios de Veterinaria, e Informes Síntesis del Municipio Sede do Huambo. Los indicadores analizados fueron los casos de rabia humana, número de personas mordidas y la cobertura vacunal animal. El mayor número de casos se registro en el municipio de Huambo sede y la franja etaria más afectada fue el grupo de 1-10 años. La tasa de mortalidad calculada en humanos fue de 0,96 % en 2008 y se incrementó a 1% en 2009, a pesar de registrarse un incremento del número de animales vacunados. Se concluye que es necesario incrementar la vigilancia epidemiológica y el control de esta zoonosis en la provincia de Huambo, así como implementar labores educativas en las comunidades.

162 VACD-4. ESTABLECIMIENTO DE UN PROGRAMA DE EDUCACIÓN SANITARIA SOBRE LA RABIA EN LA PROVINCIA DE HUAMBO, ANGOLA A.M.A.F Pereira*, J. Morais*, M.A. Abeledo**, E. Roque***, J. Álvarez***, B.C.N Canele***** *Facultad de Medicina Veterinária Huambo-Universidad José Eduardo dos Santos, Huambo, Angola. [email protected] **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba. ***Universidad Agraria de la Habana, Mayabeque, Cuba. ****Dirección General del Instituto de los Servicios de Veterinaria. *****ADRA – Acción Angolana para el Desarrollo Rural y Ambiente. La rabia es considerada una zoonosis mundial, siendo África e Asia los continentes que registran el mayor número de casos. Se estima una mortalidad humana mundial de la rabia canina de 55.000 muertes al año. Varios son los factores que concurren para el fracaso del combate contra

esta zoonosis siendo los principales: el nivel bajo de

compromiso político, la falta de datos cuantitativos y el bajo nivel de educación de la población. En este trabajo se presentan los resultados de un programa de educación comunitaria en el municipio Huambo sede, que contó con la integración de los líderes tradicionales, profesores (las escuelas), dirigentes políticos, y técnicos de salud y veterinaria con el objetivo de sensibilizar a la población, principalmente niños e jóvenes de los riesgos, prevención y actuación durante la exposición a la enfermedad. VACD-5. DETERMINACION DE LA EXTENSIDAD DE INVASION POR FASCIOLA SPP. EN REBAÑOS BOVINOS EN HUAMBO, ANGOLA Kialanda M. Monteiro-Noel*, L. Mutaquileno-Lucas*, E. Roque-López**, R. CastilloTorres***, M. I. Percedo-Abreu**** *Universidade José Eduardo Dos Santos, Faculdade Medicina Veterinaria, Huambo, Angola. [email protected] **Faculdad de Medicina Veterinaria, Universidad Agraria de la Habana (UNAH), Cuba ***Universidad de Matanzas, Faculdad de Medicina Veterinaria, Matanzas, Cuba. ****Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Mayabeque, Cuba En Angola están identificadas las especies Fasciola hepatica y F. gigantica afectando a los rebaños bovinos. Con el objetivo de determinar el nivel de infestación por Fasciola spp. en la provincia de Huambo se realizó muestreo coprológico en rebaños bovinos de sistemas extensivos de producción

de carne, por ser este el principal tipo de ganadería en el

territorio. Los muestreos se realizaron durante el período de noviembre/2009 a noviembre/2010. Las muestras de heces fecales se tomaron directamente del recto de los animales de diferentes categorías zootécnicas (terneros, novillas y adultos). Se investigó el 49 % del total de bovinos de los rebaños objeto de estudio, de los cuales 1101 resultaron positivos (864 adultos, 173 novillas y 74 terneros), para un 76,14 % de extensión de invasión (E.I) por Fasciola spp. Aunque la E.I fue mayor en unos municipios que en otro,

163 en general fue muy alta la prevalencia de animales infectados en todos ellos. Por otra parte, la mayor EI se observó en los rebaños estudiados en los meses de noviembre y diciembre de 2009, correspondientes a la época de lluvia. VACD-6. ANÁLISIS DE CEPAS DE ANAPLASMA MARGINALE UTILIZANDO LAS SECUENCIAS REPETIDAS DE LA PROTEÍNA PRINCIPAL DE SUPERFICIE 1A (MSP1A) Belkis Corona, A. Rodríguez, S. Martínez Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. [email protected] Anaplasma marginale es un patógeno del ganado bovino, que causa severas pérdidas económicas en las regiones tropicales y subtropicales. Las proteínas principales de superficie de los cuerpos iniciales de este hemoparásito están involucradas en las interacciones patógeno-hospedero y garrapata-patógeno y han sido utilizadas como marcadores para la caracterización genética de cepas de Anaplasma marginale y estudios filogenéticos. La proteína MSP1a varía entre cepas de regiones geográficas diferentes en el número y secuencias de las regiones repetidas en tandem en la región amino-terminal. En el presente estudio caracterizamos 24 cepas de Anaplasma marginale utilizando la secuencia descrita para la proteína MSP1a. Estos resultados corroboran la heterogeneidad de cepas de Anaplasma marginale en regiones endémicas y que el análisis filogenético de las secuencias repetidas en tandem de esta proteína MSP1a no resulta en clusters relacionados con el origen geográfico de las cepas, pero contribuye a entender la diversidad genética y la evolución de A. marginale. VACD-7. DETECCION DE ANAPLASMA MARGINALE EN BUFALOS (BUBALUS BUBALIS) DE LA REGIÓN OCCIDENTAL DE CUBA MEDIANTE UN ENSAYO DE NPCR. D. Obregón*, E. Roque*, M. Santos**, S. Martinez**, A.H. Fonseca***, B. Corona** *Universidad Agrária de La Habana, Autopista Nacional Km 23 ½, Mayabeque, Cuba. [email protected] **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Autopista Nacional, Km 23 ½, Mayabeque, Cuba ***Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR 465, Km 7, Seropédica,R.J, Brasil. La especie bubalina fue introducida en Cuba recientemente, mostrando excelentes resultados productivos y reproductivos. La situación de salud en ellos ha sido poco estudiada, aunque se reconoce su resistencia natural a varias enfermedades reportadas en el país, incluidas las hemoparasitosis. Los búfalos también son susceptibles a la infección por Anaplasma marginale, pero la anaplasmosis clínica difícilmente se presenta,

164 permaneciendo como portadores asintomáticos, lo que facilita la trasmisión a los bovinos. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la presencia de A. marginale en búfalos de la región occidental de Cuba. Para ello se desarrolló un ensayo de nPCR, a partir de la amplificación del gen msp5 de este hemoparásito. Se analizaron 52 muestras de ADN, extraído de sangre de animales, seleccionados al azar en 6 granjas del occidente de Cuba, a los que se le realizó Frotis Sanguíneo. Del total de muestras analizadas, 47 (90,4%) muestras resultaron positivas por el nPCR, visualizándose en todos los casos una banda de 345 pb, mientras que solo 5 animales (9,6%) fueron positivos en el Frotis Sanguíneo, sin diferencias significativas entre las proporciones, según las granjas de procedencia, o las categorías de los animales, confirmándose la presencia de A. marginale en búfalos en esta región. VACD-8. A SYBR GREEN-BASED REAL-TIME RT-PCR ASSAY FOR THE DETECTION OF AVIAN H5 HEMAGGLUTININ SUBTYPES Carmen L. Perera*, L.J. Pérez*, H. Díaz de Arce*, F. Cilloni**, A. Salviato**, S. Marciano**, A. Salomoni**, M.S. Beato**, A. Romero**, I. Capua**, G. Cattoli** *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Mayabeque, Cuba **Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, Research and Development Department, OIE/FAO and National Reference Laboratory for Newcastle Disease and Avian Influenza, OIE Collaborating Centre for Epidemiology, Training, and Control of Emerging Avian Diseases, Viale dell‘Università 10, Legnaro, Padova, Italy Accurate and rapid detection and subtyping of avian influenza outbreaks allows measures to be implemented at a time when the disease situation is more amenable to control. In this study a SYBR Green real time reverse transcription-PCR (RRT-PCR) was developed for the detection of avian H5 hemagglutinin (HA) subtype. Sequence analysis of the Mexican lineage H5N2 isolates (subgroup B) revealed several mismatches in the primer/hydrolysis probe set reported in a previous RRT-PCR. To circumvent the challenge that these viruses represent for the molecular diagnosis the present assay have been designed to detect all North American H5 avian influenza isolates published in GenBank at present including the low pathogenic H5N2 Mexican lineage.

The method successfully detected a range of

different avian influenza strains belonging to subtype H5 from both Eurasian and North American lineages representing different avian H5 clades from various geographic locations. The linear ranges of the SYBR Green RRT-PCR assay span within 107-103 EID50/mL and 4.2 x 105-4.2 x 100 gene copies/µl. The analytical sensitivity of the RRT-PCR, relative to the detectable infectious virus titer, was consistently observed to be 0.1 EID50/mL, and in terms of HA gene copy number, the limit of detection for the H5 reference viruses was 4.2 gene copies/µl of in vitro transcribed RNA. The assay proved to be useful

165 for the detection of H5 avian influenza viruses in clinical samples from experimental and natural infected birds. VACD-9. REASSORTANT LOW PATHOGENIC AVIAN INFLUENZA H5N2 VIRUSES IN AFRICAN WILD BIRDS Chantal J.Snoeck*, A.T. Adeyanju**, S. De Landtsheer*, U. Ottosson***, S. Manu**, W. Hagemeijer****, T. Mundkur****, C.P.Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel.: +352 490604 220, Fax: +352 490686. [email protected] **AP Leventis Ornithological Research Institute, University of Jos, Jos, Nigeria ***Ottenby Bird Observatory, Degerhamn, Sweden ****Wetlands International, Wageningen, the Netherlands Although wild birds are the major reservoir of low pathogenic avian influenza (LPAI) and migratory flyways connect wildlife from Northern and Southern hemisphere, the presence and persistence of avian influenza in African birds is poorly understood. As part of the surveillance for highly pathogenic avian influenza (HPAI) H5N1 viruses in Africa, we monitored avian influenza in wild and domestic birds in two different regions in Nigeria. We found low pathogenic avian influenza (LPAI) H5N2 viruses in three Spur-winged Geese (Plectropterus gambensis) in the Hadejia-Nguru Wetlands. Phylogenetic analyses revealed that all genes, except NS, of the LPAI H5N2 viruses were more closely related to genes recently found in wild and domestic birds in Europe. The NS genes formed a sister group to other African NS genes. This suggested that the Nigerian LPAI H5N2 viruses found in wild birds were reassortants exhibiting a NS gene that circulated for at least 7 years in African birds, and is part of the African influenza gene pool, and genes that were more recently introduced into Africa from Eurasia most probably by intercontinental migratory birds. Interestingly the HA and NA genes formed a sister branch to HPAI H5N2 strains found in the same wild bird species in the same wetland only one year earlier. The presence of LPAI H5N2 in wild birds in the Hadejia-Nguru Wetlands where wild birds and poultry occasionally mix provides ample opportunities for infections across species boundaries with the potential risk of generating HPAI viruses after extensive circulation in poultry. REFERENCES 

CJ Snoeck, AT Adeyanju, S De Landtsheer, U Ottosson, S Manu, W Hagemeijer, T Mundkur, CP Muller. Reassortant low pathogenic avian influenza H5N2 viruses in African wild birds. J Gen Virol. Epub ahead of print

166 

MF Ducatez, CM Olinger, AA Owoade, S De Landsheer, W Ammerlaan, HGM Niesters, ADME Osterhaus, RA Fouchier, CP Muller. 2006. Avian flu: multiple introductions of H5N1 in Nigeria. Nature 442, 37.



MF Ducatez, CM Olinger, AA Owoade, Z Tarnagda, MC Tahita, A Sow, S De Landtsheer, W Ammerlaan, JB Ouedraogo, ADME Osterhaus, RA Fouchier, CP Muller. 2007. Molecular and antigenic evolution and geographical spread of H5N1 highly pathogenic avian influenza viruses in western Africa. J Gen Virol 88, 2297-306. VACD-10. NEUTRALIZING ANTIBODIES AGAINST PANDEMIC (H1N1) 2009, SEASONAL H1N1 2007/2008 AND AVIAN-LIKE H1N1 SWINE INFLUENZA VIRUS IN SWINE CONTACTS, WESTERN-EUROPE Nancy A. Gerloff*, L. Nina*, P. Weicherding**, C.P Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel.: +352 490604 220, Fax: +352 490686. [email protected] **Health Inspection, Health Directorate, 5A rue de Prague, L-2348 Luxembourg, GrandDuchy of Luxembourg Serological studies for swine influenza viruses (SIVs) in humans with occupational exposure to pigs have only been reported from the Americas, but not from Europe. Human infections with SIV have been rare and mostly reported in contacts with swine (Myers, Olsen et al. 2007), as serological studies suggest that swine workers are at increased risk of zoonotic infection with SIV (Gray, McCarthy et al. 2007) (Newman, Reisdorf et al. 2008). In this study, we analyzed neutralizing antibodies against pandemic H1N1 2009 influenza virus, a 2007/2008 seasonal H1N1 virus and an avian-like, enzootic H1N1 SIV in 211 swine contacts in Luxembourg compared to a matched general population. We showed that swine workers have more often and higher titers of antibodies against pandemic flu and SIV than the control population, and that these titers cannot be explained by cross-reactivity with antibodies at least from recent seasonal flu. Antibodies against SIV and pandemic correlated with each other but not with the 2007/2008 seasonal H1N1. Antibodies neutralizing SIV were also found in the Luxembourg swine population. Sequential infections with variants of human seasonal H1N1 viruses may have increased the chance of serological cross-reaction with the antigenically distinct H1N1 viruses tested for. We assume that these cross-reactive antibodies may provide some level of cross-protection but further studies are required to determine to what extent the serological responses correlate with infection.

167 REFERENCES 

Gray, G. C., T. McCarthy, et al. 2007. "Swine workers and swine influenza virus infections." Emerg Infect Dis 13(12): 1871-8.

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Myers, K. P., C. W. Olsen, et al. 2007. "Cases of swine influenza in humans: a review of the literature." Clin Infect Dis 44(8): 1084-8.



Newman, A. P., E. Reisdorf, et al. 2008. "Human case of swine influenza A (H1N1) triple reassortant virus infection, Wisconsin." Emerg Infect Dis 14(9): 1470-2. VACD-11. UNUSUAL HEPATITIS B VIRUS SUBGENOTYPE A AND ABSENCE OF TYPICAL WEST AFRICAN GENOTYPES IN AFRICAN DESCENDANTS, HAITI Iris E. Andernach*, C. Nolte**, J.W. Pape**, C.P. Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel. : +352 490604 220, Fax : +352 490686. [email protected], **Les Centres GHESKIO, B.P. 15727, Port-au-Prince, Haiti In sub-Saharan Africa Hepatitis B virus (HBV) is highly endemic and most infections are caused by genotype E and A. The low genetic diversity of genotype E, suggesting its short natural history in Africa, is however difficult to reconcile with (a) its high prevalence and extensive geographic spread and (b) a long natural history of genotype A in Africa. In Haiti, with >90% of the population descending from African slaves, HBV infections were mostly caused by genotype A1, today mainly found in East-Africa. Surprisingly, 20% belong to a rare subgenotype A5, which so far was only found in the former Bight of Benin, a primary slave trading post. A sizeable portion also belonged to genotype D (D4 and D3). Phylogenetic analyses also indicate that Haitian A subgenotypes separated early from their African ancestors and that similar genotype D3/D4 strains (and prevalences) are found in Rwanda. In contrast, the most prevalent sub-/genotypes in West Africa of today (E and A3) are very rare in Haiti. This strongly indicates that this genotype emerged in the general population in Africa only after the transatlantic slave trade had come to an end, e.g. within the last 200 or 300 years, and explains the low genetic diversity of genotype E. The high prevalence of HBV genotype E in large part of Africa further suggests that HBV hyperendemicity is a recent phenomenon, and probably the result of the extensive use of unsafe needles, therefore shedding new light on the current African genotype E puzzle in Africa. REFERENCES

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Andernach, I. E., J. M. Hubschen, and C. P. Muller. 2009. Hepatitis B virus: the genotype E puzzle. Rev Med Virol 19:231-40.

168 

Andernach, I. E., C. Nolte, J. W. Pape, and C. P. Muller. 2009. Slave Trade and Hepatitis B Virus Genotypes and Subgenotypes in Haiti and Africa. Emerg Infect Dis 15:1222-8.

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Hubschen, J. M., J. Mugabo, C. A. Peltier, J. C. Karasi, A. Sausy, P. Kirpach, V. Arendt, and C. P. Muller. 2009. Exceptional genetic variability of hepatitis B virus indicates that Rwanda is east of an emerging African genotype E/A1 divide. J Med Virol 81:435-40. VACD-12. EFFECT OF COILED-COIL PEPTIDES ON A TYPE III SECRETORY SYSTEM MEDIATED MODEL OF BACTERIAL PATHOGENICITY M. Larzábal*, E. Zotta***, B.C. Rabinovitz**, Elsa C. Mercado**, Á. Cataldi*. *Instituto de Biotecnología and **Instituto de Patobiología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Los Reseros y Las Cabañas, (1712) Castelar, Buenos Aires, Argentina. [email protected] ***Laboratorio de Fisiopatogenia, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Paraguay 2155 (1121) C.A. Buenos Aires, Argentina. Many animal and human pathogenic gram-negative bacteria such as Salmonella, Enterohmorrhagic (EPEC) and Enteropathogenic (EHEC) Escherichia coli, Yersinia possess a type III secretion system (TTSS) that is used to deliver virulence proteins directly into the host cell. In this study we assayed coiled-coil peptides, previously tested as effective against TTSS from EPEC and EHEC, in a mice model of Citrobacter rodentium infection. For this, a group of 5 C57BL/6J mice (Group 1) was orally treated daily with CoilA and CoilB peptides prior to challenge with C. rodentium and for 6 days after inoculation (dpi). Group 2 was the untreated control. Both groups were orally inoculated on day 8 with 5 x 109 CFU of a strain of C. rodentium. Stool samples were recovered at different dpi to determine the number of CFU/g of feces. Group 1 excreted a smaller amount of CFU/g during the first 3 dpi, compared to Group 2. After sacrifice at 13 dpi, small and large intestine samples were taken for histological analysis. Colon samples of the untreated group showed areas with loss of superficial epithelium, damaged cells and endoluminal mononuclear inflammatory infiltrate, consistent with histological lesion induced by C.rodentium. Mice treated with peptides CoilA and CoilB kept normal the surface epithelium showing a similar structure as an uninfected control group. These results suggest that pretreatment with coiled-coil peptides prevents colon damage of mice inoculated with C. rodentium. These encouraging results prompted us to test coiled-coil peptides as treatment or vaccines in other models of bacterial infections. REFERENCES

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Larzábal M, Mercado EC, Vilte DA, Salazar-González H, Cataldi A, Navarro-García F. 2010. Designed coiled-coil peptides inhibit the type three secretion system of

169 enteropathogenic

Escherichia

coli.

PLoS

ONE;

5(2):

e9046.

doi:10.1371/journal.pone.0009046. 

Vilte DA, Larzábal M, Cataldi AA, Mercado EC. 2008. Bovine colostrum contains immunoglobulin G antibodies against Intimin, EspA, and EspB and inhibits hemolytic activity mediated by the type three secretion system of attaching and effacing Escherichia coli. Clin Vaccine Immunol; 15:1208-13.

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Johnson-Henry KC, Nadjafi M, Avitzur Y, Mitchell DJ, Ngan BY, Galindo-Mata E, Jones NL, Sherman PM. 2005. Amelioration of the effects of Citrobacter rodentium infection in mice by pretreatment with probiotics. J Infect Dis; 191:2106–17. VACD-13. VIRULENCE GENES OF ESCHERICHIA COLI STRAINS ISOLATED FROM CALVES IN BUENOS AIRES, ARGENTINA D.A. Vilte, B.C. Rabinovitz, A.M. Elizondo, Elsa C. Mercado Instituto de Patobiología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Los Reseros y Las Cabañas, (1712) Buenos Aires, Argentina. [email protected] Several virulence factors homologous to those identified in Escherichia coli pathogenic for humans, have been recognized in E. coli isolated from diarrheic calves, and eventually, healthy animals. In this study we investigated the virulence profile of E. coli strains isolated from 137 diarrheic or septicemic calves less than 90 days old submitted for diagnostic by 38 farms during 2007-2010. Three multiplex PCRs were used to determine 15 virulence genes on 410 E. coli isolates. P, Afimbrial Afa-8, F17 and S adhesins were identified in 52%, 42%, 29% and 3% of animals, respectively. The gene eae, associated to a type 3 secretion system, was detected in 12% of animals, while the Cytolethal Distending Toxin III and IV, Cytotoxic Necrotizing Factor (CNF) 2 and Shiga toxin (Stx) encoding genes were detected in isolates from 18%, 7%, 13% and 12% of animals, respectively. F5, F41, heat-stable enterotoxin a, Stx2 and CNF1 encoding genes were not detected. Aerobactin gene was identified in isolates from 50% of animals. Enterohemolysin and alfa-hemolysin were produced by isolates from 14% and 8% of animals, respectively. E. coli isolates showed adhesins that allow them to colonize and in some cases destroy the bovine intestinal microvilli, and toxins that are highly cytotoxic to epithelial cells. These results suggest that the strains of E. coli isolated in Argentina from diarrheic or septicemic calves do not belong to a pathotype stable characteristic, such as enterotoxigenic, but have a variable profile of virulence. That should be taken into account to design new vaccines. REFERENCES

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Van Bost S, Jacquemin E, Oswald E, Mainil J. 2003. Multiplex PCRs for identification of necrotoxigenic Escherichia coli. J Clin Microbiol, 41:4480-2.

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Franck SM, Bosworth B, Moon HW. 1998. Multiplex PCR for enterotoxigenic, attaching and effacing, and Shiga toxin-producing Escherichia coli strains from calves. J Clin Microbiol, 36:1795-7. VACD-14. 16S rDNA PCR - DENATURING GRADIENT GEL ELECTROPHORESIS (DGGE) AND AMPLIFICATION OF INTERGENIC SPACER REGION 16S- 23S rRNA GENE IN STUDY OF CUBAN ISOLATE OF MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE Evelyn Lobo*, C. Poveda**, A. Suárez**, Y. Hernández*, A. Ramírez**, J.B. Poveda** *Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas (MYCOLAB), grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA, Cuba. [email protected] **Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas, Instituto Universitario de Sanidad Animal (IUSA), Universidad de Las Palmas de Gran Canarias, España In Cuba has been detected in the presence of Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) from lungs with lesions typical of enzootic pneumonia, but never there has been a study of molecular characterization of this microorganism. The aim of this study was to investigate the heterogeneity of isolates of M. hyopneumoniae by DGGE technique (denaturing gradient gel electrophoresis). The results obtained in the characterization of isolates of M. hyopenumoaniae, determined the presence of at least three different genotypes circulating in the western and central regions of the country. The difficulties in the identification by traditional breeding techniques in the case of porcine mycoplasmas and the advantages of DGGE in the rapid detection and differentiation of isolated makes this technique a very useful tool for studies of characterization of these microorganisms VACD-15. COMPARACIÓN FILOGENÉTICA DE AISLADOS DE MYCOBACTERIUM BOVIS OBTENIDOS DE GANADO SACRIFICADO EN RASTROS DE BAJA CALIFORNIA C. Martínez-Vidal*, S. Hori-Oshima*, A. De la Mora-Valle*, R.M. Bermúdez-Hurtado*, L. Galván-Lara**, T.B. Rentería-Evangelista*, G. López-Valencia*, G.E. Medina-Basulto*. *Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias UABC. Obregón y Julián Carrillo S/N Col. Campestre CP. 21386, Mexicali Baja California, México. Tel/Fax: (686) 5 63 69 06. [email protected] **Rastro TIF 54. Km. 9.5 Carret. Mexicali-San Felipe S/N Col. Colorado VII, Mexicali Baja California, México. En México, la Tuberculosis bovina (TBB) es uno de los principales problemas que enfrenta la ganadería y es un serio problema de salud pública. Las diferentes técnicas de genotipificación pueden ayudar a establecer la relación que existe entre las diferentes cepas presentes en una región y determinar algunos factores que incidan posteriormente en los programas de control y erradicación de la enfermedad. En el presente trabajo se

171 aplicó la técnica de VNTR a 11 aislados provenientes de ganado sacrificado en un rastro de Mexicali B.C. y a 10 aislados de ganado sacrificado en un rastro de Tijuana B.C. Se utilizaron oligonucleótidos específicos para amplificar los loci ETR-A, ETR-B, QUB11a, QUB11b, QUB1895, QUB26, QUB3232 y QUB3336, determinándose el parentesco relativo entre las cepas aisladas, así como el poder discriminatorio para cada locus en particular y para todos los loci en su conjunto. Se obtuvieron 14 perfiles alélicos al utilizar los 8 loci con un poder discriminatorio de 0.90 siendo el locus QUB 3336 el que mostró el mayor poder discriminatorio (h=0.72) en tanto el locus ETR-B mostró un nulo poder discriminatorio (h=0.00). En un dendrograma, se observaron 6 grupos genéticos, en los cuales se encuentran indistintamente aislados de Tijuana y Mexicali Baja California, sin embargo, se encontraron genotipos específicos para cada una de las dos regiones. Los resultados sugieren que aúnque el movimiento de ganado y la compra venta en la región han provocado la dispersión de cepas en estas dos áreas, se puede discernir el origen de la mayoría de los aislados. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

Martinez LR, Harris B, Black IV WC, Meyer RM, Brennan PJ, Vissa VV, Jones RL. 2008. Genotyping North American animal M. bovis isolates using multilocus variable number tandem repeat analisis. J Vet Diagn. Invest; 20: 707-715.

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Roring S, Alistair NS, Hewinson RG, Neill SD, and Robon AS. 2004. Evaluation of variable number tandem repeat (VNTR) loci in molecular typing of Mycobacterium bovis isolates from Ireland. Vet. Microbiol; 101: 65-73. VACD-16. DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A NOVEL SYBR GREEN 1 REALTIME RT-PCR ASSAY FOR DETECTION OF CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS VALIDATED IN DIFFERENT REAL-TIME PCR PLATFORMS Heidy Díaz-de Arce*, L.J. Pérez*, J. Tarradas**, R. Rosell**,***, C.L. Perera*, M. Muñoz**, M.T. Frías*, J.I. Nuñez**, Ll. Ganges**. *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), La Habana, Cuba. **Centre de Reserca in Sanitat Aimal (CReSA), UAB Bellaterra, 08193 Barcelona, Spain. ***Departament d´Agricultura, alimentación i Acció Rural de la Generalitat de Catalunya 10 (DAR), Spain. Classical swine fever is a highly contagious viral disease causing severe economic losses in pig production almost worldwide. The rapid dissemination of the virus and the variability of the clinical signs demand the adoption of rapid and accurate methods for CSFV detection as basis for the implementation of effective control measures. Here we describe the development and evaluation of a novel quantitative real time RT-PCR assay for the detection of CSFV based on SYBR-Green coupled to melting curve analysis. The analytical

172 and diagnostic performances of the method using two real time PCR instruments were compared. The assay was specific and proved to detect the major genotypes of CSFV. The assay limit of detection in cell culture medium and serum was 0.1TCID50/reaction and 1 TCID50/reaction in tissue homogenate for both platforms. The limit of detection was 1, 10 and 102 gene copies/µL when nuclease free water, serum and tissue homogenate were used as sample matrices, repectively, for both instruments. The assay analysis of 108 tissue homogenate and serum samples from naturally and experimentally CSFV infected and non-CSFV infected animals proved that the SYBR-Green real time RT-qPCR for diagnosis and quantification of CSFV provides a highly sensitive and specific method for classical swine fever diagnosis. VACD-17. ESTUDIO RETROSPECTIVO DE AGENTES INFECCIOSOS QUE AFECTAN LA REPRODUCCION BOVINA EN EL DEPARTAMENTO DEL CAQUETÁ, COLOMBIA J.L. Motta-Giraldo*, I. Y. Waltero-García**, M. A. Abeledo***, O. Fernández*** *Florencia, Caquetá, Colombia. [email protected] **Laboratorio de Diagnóstico Veterinario ICA, Florencia, Caquetá, Colombia. ***Dirección de Salud y Producción Animal, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba. Los agentes infecciosos que afectan la reproducción bovina causan un gran efecto sobre la producción, amenazando la potencialidad pecuaria de cualquier región. Para conocer el comportamiento de los agentes infecciosos que afectan la reproducción, se analizaron los resultados de las investigaciones serológicas para brucelosis, leptospirosis, herpesvirus bovino -1 (HVB-1), diarrea viral bovina (DVB) y Neospora caninum, de los casos enviados al laboratorio por los propietarios de los hatos bovinos en el departamento del Caquetá, Colombia, en los años 1999 - 2009. La información fue obtenida de la base de datos del ICA (Instituto Colombiano Agropecuario), seccional Caquetá. Los mayores porcentajes de animales seropositivos se concentraron en los municipios del norte, centro y oriente del departamento, mientras que al sur fue menor. Los animales seropositivos en promedio por meses durante los 11 años fueron estables para brucelosis; para IBR y DVB se acumularon principalmente en los meses del segundo semestre, mientras que para Leptospirosis entre Junio y Septiembre. En el caso de Neospora, las investigaciones comenzaron en 2007 y en los 3 años solo se trabajaron 36 muestras, de las cuales 12 fueron positivas (33,3%). Se concluye que aunque la tasa investigación fue baja, los agentes infecciosos que afectan la reproducción parecen ser de importancia en el departamento de Caquetá y es necesario profundizar en su papel entre las causas de problemas reproductivos.

173 VACD-18. MOLECULAR DETECTION OF TORQUE TENO SUS VIRUS IN LYMPHOID TISSUES IN CONCOMITANT INFECTIONS WITH OTHER PORCINE VIRAL PATHOGENS L.J. Pérez*, Heidy Díaz-de Arce*, M.T. Frias*, C.L. Perera*, Ll. Ganges*, J.I Núñez ** *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), La Habana, Cuba **Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autònoma de Barcelona, 08193 Bellaterra, Barcelona, Spain In this study, 40 pigs with respiratory and wasting disorders from Cuban swine herds were screened by PCR for the presence of TTSuV1, TTSuV2, PCV-2, PPV and CSFV in spleen samples. Besides, the variability of the porcine TTSuV sequences obtained was investigated by phylogenetic analysis. The current study showed for the first time the presence of TTSuV1 and TTSuV2 in Cuban swine herds. The investigation revealed the following infection rates: TTSuV1 40%, TTSuV2 37.5%, PCV-2 70%, PPV 37.5% and CSFV in 52.5%. The presence of two or more of these viruses in different rates in the same spleen samples was revealed. Also, a higher genetic diversity of TTSuV2 sequences was observed regarding TTSuV1 sequences. VACD-19. GESTIÓN DE LA SEGURIDAD BIOLÓGICA EN EL LABORATORIO DE VIROLOGÍA DEL CENSA Marvis E. Suárez-Romero, V.V. Barceló-Pérez, L. Pastor-Chirino. Centro Nacional de Seguridad Biológica, CSB, ORASEN-CITMA. Calle 28 No. 502, CP 11300, Playa, C. Habana, Cuba. Telf. 2023255. [email protected] El trabajo en las instalaciones destinadas a la sanidad animal presentan riesgos de contaminación para el trabajador y el medio ambiente, situación que la bioseguridad debe considerar para establecer criterios de seguridad que han de tenerse en cuenta durante su diseño y explotación (Rodríguez J, 2007) Se reconoce internacionalmente que los agentes biológicos utilizados en dichas instalaciones pudieran tener efectos adversos sobre la salud humana, animal y la biodiversidad si no son manipuladas correctamente en sus diferentes actividades o conservadas en instalaciones no seguras. El Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria solicitó autorización al Centro Nacional de Seguridad Biológica (CSB) para la explotación del laboratorio de virología, en el cual se llevan a cabo actividades con cepas virales veterinarias para el diagnóstico y la obtención de vacunas. Dicho laboratorio fue sometido a una evaluación de riesgo teniendo en cuenta el diseño del mismo, el cumplimento de las prácticas y procedimientos y el empleo de los equipos de seguridad (Menéndez, JC et al. ,2005). Los resultados de la evaluación realizada declararon que se debía perfeccionar básicamente la gestión de la bioseguridad

174 en relación al diseño de la instalación, la cual fue cumplida por la entidad a partir de los señalamientos realizados. Es objetivo de nuestro trabajo mostrar el proceso de identificación e implementación de medidas que debió cumplir el laboratorio de virología para reducir el riesgo a un nivel aceptable, el cual trajo consigo el otorgamiento de la licencia de seguridad biológica para la explotación del mismo.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

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Menéndez, JC y Rodríguez, J. Evaluación de Riesgo. En: Menéndez, JC et al. Manual de Inspección de Seguridad Biológica. Ciudad Habana: Editorial Academia, 2005. p.88. VACD-20. IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ESTRONGÍLIDOS GASTROINTESTINALES EN CAPRINOS DEL VALLE DEL CAUTO EN LA PROVINCIA DE GRANMA Niurky Rojas-Gámez*, M. La O-Arias*, J. Arece-García**, M. Carrión-Muchulí*, C. San Martín-Acosta*, K. Pérez-Corría* y P. Valerino-Cambar*** *Instituto de Investigaciones Agropecuarias‖ Jorge Dimitrov‖ km 16 y ½ Carretera Manzanillo Bayamo. CP. 85100. Granma. Cuba. [email protected] **Estación Experimental de Pastos y Forrajes ―Indio Hatuey‖. Central España Republicana. CP. 44280. Matanzas, Cuba. ***Universidad de Granma km 17 Carretera Manzanillo Bayamo. C.P: 85100. Granma Este trabajo se realizó con el objetivo de identificar y caracterizar las especies de estrongilidos gastrointestinales que afectan los caprinos del Valle del Cauto en la provincia de Granma, así como aportar elementos cognoscitivos, relacionados con su diagnóstico. Para el mismo se separaron los diferentes compartimientos del tracto digestivo (cuajar, intestino delgado e intestino grueso) y se colectaron todos los parásitos adultos para su posterior caracterización e identificación. Los géneros se identificaron sobre la base de la morfología general y las especies en función de las características morfométricas de las espículas de los machos, la identificación estructural de la corona cervical y la vesícula cefálica. En el caso del género Haemonchus, por la similitud de las especies que lo conforman, se midió el largo total de las espículas, distancia de la punta de la espícula derecha a su respectivo gancho y distancia de la punta de la espícula izquierda a su respectivo gancho. En el caso de las demás especies se observaron y cuantificaron las estructuras claves para su identificación. Los resultados obtenidos determinaron que los caprinos del Valle del Cauto se encuentran infestados por cuatro especies de estrongílidos gastrointestinales

Oesophagopstomun

columbianum,

Trichostrongylus

colubriformis,

175 Haemonchus contortus y Haemonchus placei con espículas de 797, 171, 398 y 429 µm respectivamente. La identificación de la especie Haemonchus placei en el ganado caprino implica variaciones en las estrategias de prevención y control para la especie y no para el género. En la población de parásitos del género Haemonchus se encontraron particularidades en el diagnóstico de las especies, dada por el largo de las espículas. VACD-21. FEEDING PERFORMANCE OF TWO SPECIES OF IXODIDAE TICKS ATTACHED ON RESISTANT RABBITS P.H. Nunes*, K.C.S. Furquim**, G.H. Bechara**, M.I. Camargo-Mathias*** *Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina, Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS/FMVZ/USP), Universidade de São Paulo (USP), Av. Prof. Orlando Marques de Paiva, 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, Brazil, CEP 05508270. **Departamento de Patologia Veterinária, FCAV, UNESP, Via de Acesso Prof. Paulo Castellane, s/n, CEP: 14884-900, Jaboticabal, S.P., Brazil. ***Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP, Av. 24 A, nº 1515, Cx. Postal 199, CEP: 13506-900, Rio Claro, S.P., Brazil. In certain tick-host relationships tick‘s saliva inoculation can induce resistance by the host as demonstrated by alterations in several alimentary and reproductive biological parameters of the ectoparasite (Jittapalapong et al., 2000). The aims of this study were to analyse the necessary feeding time to reach full engorgement and the engorgement weight of Amblyomma cajennense and Rhipicephalus sanguineus females tick fed on resistant rabbits. The resistance of hosts was induced by successive infestations (Amblyomma cajennense) and by inoculation of salivary gland extracts (SGE) (Rhipicephalus sanguineus). The results revealed that rabbits acquire resistance against A. cajennense from the second infestation as demonstrated by the increase in female feeding time to full engorgement and decrease in its engorgement weight. Concerning R. sanguineus, the results of the challenge test, the averages obtained did not present significant differences, except for the average weight of engorgement for females of the test group immunized with extract of salivary glands of females in the sixth day of feeding (p < 0.05) in relation to control group. The glandular extract of salivary glands of females in the sixth day of feeding (SGE6) was not efficient in the immunization against R. sanguineus infestation, instead induced the hosts to a response that significantly benefited the progression of females‘ feeding, even more than what was observed in control group. Supported by FAPESP

176 REFERENCES 

S Jittapalapong, RW Stich, JC Gordon, TE Wittum, OO Barriga. 2000. Performance of female Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) fed dogs exposed to multiple infestations or immunization with tick salivary gland or midgut tissues. J. Med. Entomol. 37(4), 601-611. VACD-22. HISTOLOGICAL DESCRIPTION OF THE SALIVARY GLANDS OF ADULT TICKS ORNITHODOROS BRASILIENSIS, ARAGÃO, 1923. L.F.S. Costa*, P.H. Nunes**, J.F. Soares**, M.B. Labruna**, J.R. Martins***, J.R. Júnior****, M.I. Camargo Mathias*. *Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, Unesp, Av. 24 A, nº 1515, CEP 13506900, Rio Claro, SP, Brazil. **Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina, Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS/FMVZ/USP), Universidade de São Paulo (USP), Av. Prof. Orlando Marques de Paiva, 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, Brazil, CEP 05508270. ***Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada do Conde nº 6000 / Acesso 02: BR 116, Km 291CEP: 92900-000 Eldorado do Sul / RS. ****Laboratório de Peptídeos e Enzimas Proteolíticas Universidade Federal do Rio Grande do Sul Centro de Biotecnologia. Rua Sarmento Leite, 245 – Centro Porto Alegre - RS, 90050-170. The ticks of the genus Ornithodoros are parasites of birds, reptiles and mammals, including man. Ornithodoros are vectors of borrélias that causes relapsing fever in different parts of the world and they are also potential reservoirs and vectors of other pathogens. The Ornithodoros brasiliensis that is found eventually parasitizing humans in the south area of Brazil was already described as being vector of the Borrelia brasiliensis. The objective of this work was of accomplishing the first histological description of the salivary glands of this species that can become a problem in the public health of the areas of its occurrence. The obtained results showed that the salivary glands of males and females of Ornithodoros brasiliensis present the same structure of other argasids species. They are formed by two types of acini, one of them agranular (type I) and the other granular (type II). The agranular acinus consists of a big central cell and smaller cells around it with a lot of membrane folds and, probably, have important role in the osmorregulation process. The granular acinus presents three types of secretory cells denominated as a, b and c as in other argasids species. These cells differ amongst themselves mainly as for the type of secretion granules present in its cytoplasm.

177 REFERENCES 

Mans B.J., Venter J.D., Coons L.B., Louw A.I., Neitz A.W. 2004. A reassessment of argasid tick salivary gland ultrastructure from an immuno-cytochemical perspective. Exp. Appl. Acarol. 33:119–129.

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Sonenshine, D.E. 1991. The female reproductive system. In: SONENSHINE, D.E. (Org.). Biology of Ticks. New York: Oxford University Press, p. 280-304. VACD-23. EVALUACIÓN DE LA TÉCNICA SEROLÓGICA AUBIODOT PARA EL DIAGNÓSTICO RÁPIDO DE LA LEPTOSPIROSIS CANINA R.L. García*, M.A. Abeledo**, H. Machado***, D. Feraud*. *Facultad de Medicina Veterinaria, UNAH; Mayabeque, Cuba. [email protected] **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba ***Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, La Habana, Cuba. La leptospirosisis es una enfermedad reemergente presente en muchos países, principalmente con clima húmedos tropicales. Dentro de las especies muy vinculadas al hombre se encuentran los caninos, los mismos han sido reconocidos como posibles reservorios presentando una infección subclínica. Ha sido el objetivo de este trabajo la evaluación de la técnica serológica rápida Aubiodot con el empleo del antígeno de Leptospira biflexa (saprófita), cepa patoc. Para ello se tomaron 84 muestras de suero a caninos recogidos aparentemente sanos y mantenidos en instalaciones. Las muestras fueron analizadas por la técnica de Aubiodot y después enviadas para su análisis y comparación con la Técnica Microaglutinación (MAT) de referencia, en el Centro Nacional de Epizootiología y Diagnóstico. Como resultado se obtuvo una coincidencia en 73 (86.9%), de estos 26 sueros como verdaderos positivos y en 47 como verdaderos negativos: Los indicadores mostraron una sensibilidad de 83.8% y una especificidad 88.6%, con un Valor Predictivo Positivo (81.2%) y el Coeficiente Kappa (0.72) aportó favorable correspondencia entre las dos técnicas. Predominó, el serovar canicola con 15 muestras (13%) y el serovar pomona en 9 muestras (8%) además en casos aislados los serovares australis, ballum y icterohaemorrhagiae. Se concluye que el Aubiodot es capaz de identificar en breve tiempo la leptospirosis canina de forma cualitativa, lo que permitirá aplicar con seguridad y rapidez las medidas terapéuticas en la Clínicas Veterinarias. Además, el empleo de una cepa no patógena disminuye los riesgos de contaminación en la manipulación.

178 VACD-24. DESARROLLO DE UN PCR ESPECIE ESPECÍFICO PARA LA DETECCIÓN DE MYCOPLASMA GALLISEPTICUM Y SU DIFERENCIACIÓN CON MYCOPLASMA IMITANS Y. Lozada*, Evelyn Lobo*, M Colas**, S. Martínez*. *Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas (MYCOLAB). Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA, Cuba. [email protected] **Laboratorio de Investigaciones y Diagnóstico Aviar. El Síndrome respiratorio crónico de las gallinas (SRC) es una enfermedad infecto contagiosa de curso crónico, su etiología es un complejo multifactorial donde intervienen varios agentes y factores, reconociéndose a Mycoplasma gallisepticum el agente etiológico principal, aunque en los últimos años se ha reportado la participación de cepas altamente virulentas de Mycoplasma synoviae produciendo lesiones típicas del SRC, incluso actualmente de reconoce que micoplasmas no patógenos bajo determinadas condiciones epizootiológicas pueden participar en la etiología del SRC, tal es el caso de Mycoplasma gallinarum y Mycoplasma imitans, quienes fueron capaces de inducir aerosaculitis, cuando se combinaron con el virus de la Bronquitis infecciosa aviar. En el siguiente trabajo nos propusimos evaluar un PCR especie específico para la detección de Mycoplasma gallisepticum utilizando como diana el gen mgc2. Como parte de este trabajo se llevó a cabo estudios de factibilidad en nuestras condiciones, también se evaluó la robustez empleando diferentes temperaturas de alineamiento, además se estimó la sensibilidad analítica del ensayo que resultó ser de 1 pg/µL. La utilización de cebadores diseñados sobre la base de la secuencia del RNAr 16S de los micoplasmas garantiza la especificidad de especie, en el caso particular de Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma imitans no se emplea ya que presentan en su genoma una alta homología alrededor de un 99%, por eso en nuestro trabajo se decidió emplear como diana el gen mgc2 lo que nos hace contar en nuestro laboratorio con un sistema altamente específico y nos evita diagnosticar muestras falsas positivas.

179 VACD-25. RELACIÓN DE LOS ÍNDICES DE INFESTACIÓN DE VARROA DESTRUCTOR CON LOS INDICADORES BIOMÉTRICOS LONGITUD DEL ALA ANTERIOR Y DIÁMETRO DE LAS CELDAS DE OBRERAS Anisley Pérez-Hernández, J. Demedio-Lorenzo Universidad Agraria de La Habana. Autopista Nacional y Carretera de Tapaste, San José de las Lajas, Provincia Mayabeque. Cuba. Telf. 047-86-0101. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootécnia. [email protected] Estudiando los primeros trabajos biométricos realizados en Cuba hace ya más de 20 años resulta del máximo interés poder evaluar los índices de infestación de Varroa destructor en colmenas maternas y paternas de un centro de crianza de reinas y determinar su relación con las características biométricas que permitan comprender los posibles cambios sufridos por la especie bajo la influencia de diversos factores en este período. El estudio se desarrolló en un Centro de Crianza de Abejas Reinas (CCR) de la provincia de La Habana, durante los meses de febrero/2007 a mayo/2008. No se apreció relación entre los índices de infestación por V. destructor y los indicadores longitud del ala y diámetro de las celdas de obreras. Hubo predominio de la coloración negra en las abejas de las colmenas maternas, procedentes de un mismo apiario de genética, donde se aplica como criterio de selección la baja tasa de infestación resultando un predominio de abejas de coloración negra. Se hizo evidente la necesidad de profundizar en los estudios biométricos, conductuales y moleculares de las abejas y los ácaros Varroa presentes en el país. VACD-26. PREVALENCIA DE NEUMONÍA EN CERDOS DE CEBA DESTINADOS A LA PRODUCCIÓN DE UN SURFACTANTE NATURAL C. Bulnes*, R. Durand*, A. Pérez** y E. Lobo*** *Dpto. Patología, **Dir. Calidad y ***Grupo de Bacteriología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). [email protected] Con el objetivo de estudiar la prevalencia de neumonía en cerdos de ceba criados bajo condiciones experimentales de explotación, para la producción de un surfactante natural, se trabajaron 615 animales del cruce comercial York-Shire, Landrace x Duroc que fueron sacrificados al arribar a los 87 ± 3Kg de masa corporal. Los cerdos correspondientes al grupo I, (459 animales) fueron mantenidos durante el periodo de preceba y ceba en una unidad experimental con control estricto de las condiciones de manejo y alimentación, el Grupo II (156 animales) proceden de una granja controlada con ciclo cerrado de producción que fue utilizada como control del ensayo. Los resultados evidenciaron la presencia de Neumonía en el 47% de los cerdos estudiados en el grupo I y de 98% en el grupo II (p