COLESTEROL. El Colesterol en suero es objeto de estudio tanto en personas enfermas como sanas. Para el estudio en clínica, la determinación aislada del mismo no tiene mayor importancia , sin embargo su concentración tiene rangos de variación predecibles en gran número de condiciones clínicas. El Colesterol es un factor contribuyente en la formación de ateromas (Placa dura), y además que el riesgo de contraer enfermedades cardiacas coronarias en individuos que presentan colesterolemia <= 2,10 g/l es 3 veces menor que aquellos individuos con más de 2,30 g/l y 6 veces menor que individuos con más de 2,60 g/l. Sin embargo, es de vital importancia conocer la distribución de las lipoproteínas encargadas del transporte, como lo son las HDL (High Density Lipoprotein), consideradas como Factor Protector, ya que es el ancargado de recolectar el colesterol de los tejidos y llevarlos al higado para su procesamiento, por otro lado están las LDL (Low Density Lipoproteín), consideradas como Factor de Riesgo. Para tener índices predictivos de un proceso patológico es necesario conformar un Perfíl Lipídico con los valores de colesterol total, colesterol de LDL y colesterol de HDL. La determinación de colesterol total incluye la medición de las formas libres y esterificadas del esteroide. En el suero o en el plasma 2/3 del colesterol total se encuentran como éster y el resto en forma libre. Esto tiene cierta importancia analítica ya que en algunas reacciones químicas, el éster del colesterol desarrolla un color más intenso que el colesterol libre, lo cual puede provocar un sesgo positivo. Por esta razón es de suma importancia el conocimiento de la química de los diversos métodos para colesterol y el reconocimiento de sus limitaciones en la elección del método que se empleara en el laboratorio. METODO DE RUTINA (CHOD−PAP ENZIMÁTICO EN UNA SOLA ETAPA) Fundamento El Colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa (CHOD), previa hidrólisis enzimática de los ésteres mediante una lipasa de origen fungal. El Agua oxigenada (H2O2) generada en la oxidación permite la union oxidativa del fenol con la 4−aminoantipirina mediante una reacción catalizada por la peroxidasa (POD). El indicador final es la quinoneimina. Reacción CE Colesterol−esterificado Colestrol + Ac. Grasos libres CHO Colesterol + O2 Colesten−3−ona + H2O2 POD H2O2 + 4−aminoamtipirina + fenol Complejo coloreado 1

Muestra Suero ó Plasma Heparinizado o con EDTA. Ayuno del paciente mínimo 12 horas. Peso Corporal estable Si la muestra es plasma , no usar fluoruro, citrato y oxalato pueden causa un pasaje considerable de agua desde los eritrocitos la plasma, generando dilución de sus componentes. Linealidad. El test es lineal hasta concentraciones de colesterol de 600 mg/dl. A concentraciones superiores, diluir la muestra 1+1 con solucion fisiologica. Repetir el ensayo y multiplicar los resultados por 2. Valores de referencia. Suero/Plasma: 150−260 mg/dl Consideraciones. El reactivo de trabajo puede desarrollar un ligero color rosado que no afecta los resultados siempre que se procese un blanco con cada lote nuevo. Deshechar cuando las lecturas del blanco sean superiores a 0,160 D.O. ó los del estándar sean anormalmente bajos. El test no es influenciado por valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de Bilirrubina hasta 5 mg/dl. Es importante controlar el Agua destilada, pues pueden tener agentes oxidantes que aumenten el color de la reacción. Es necesario que se incube por 5 minutos a 37° C, debido a que el tiempo y la temperatura es vital para que se desarrollen el total de las reacciones acopladas por las 2 enzimas (CHOD y POD). MÉTODO DE REFERENCIA Método de ABELL y col. Este método consiste en la hidrólisis de los ésteres de colesterilo, extracción con etere de petroleo y desarrollo del color con un reactivo de ácido acético−anhídrico acético −ácido sulfúrico . Con el equipo apropiado y buena habilidad técnica se pueden obtener resultados exactos y precisos. La preparación consiste en la extracción del colesterol con Zeolina, hidrólisis química de los ésteres (Saponificación) y medición del colesterol total por la reacción de Liebermann−Burchard , la desventaja que tiene es que es un método muy laborioso. MÉTODO ALTERNATIVO. Método enzimático de punto final. Fundamento.− 2

El Fundamento es básicamente el mismo que el método descrito anteriormente en el Método de Rutina, salvo que se reemplaza la 4−aminoantipirina por 4−aminofenazona(4−AF), y el producto final de la unión oxidativa de éste con el fenol genera 4(P−benzoquinona monoimino) fenazona + 4H2O , lo que genera un complejo coloreado medible a 500 nm. Reacción.− Ésteres de colesterol colesterol + ac. grasos Lipasa Colesterol + O2 colest−en−3−ona + H2O2 CHOD H2O2 + 4−AF+fenol 4(p.benzoquinona monoimino) fenazona + 4H2O POD HDL−COLESTEROL La incidencia de las enfermedades cardiacas coronarias tiene una correlación inversa con el nivel sérico de HDL(High Density Lipoproteín) colesterol, osea que a mayor concentración de HDL−Colesterol, menor es la incidencia de la enfermedad y viceversa. Aparentemente la relación esta dada por el hecho que las HDL transportan el colesterol desde los tejidos perisfericos para ser metabolizados por el higado, evitando así la proliferación y crecimiento de lesiones ateromatosas. Existe HDL aumentado en mujeres , niños y negros. En la enfermedad de Tangierexiste déficit de síntesis de HDL, acumulando colesterol en los tejidos. El colesterol ligado a HDL es en promedio el 20 % del colesterol total en hombres y 22,5% en mujeres. MÉTODO DE RUTINA HDL−COLESTEROL Método Fosfotungstínico−Magnesio Fundamento. Los quilomicrones, VLDL(Very Low Density Liporpoteín) y LDL(Low Density Liporpoteín), son precipitados por adición de acido fosfotungstinico e iones magnesio. Luego de la centrifugación , la fracción HDL está contenida en el sobrenadante. La cuantificación posterior se realiza utilizando el reactivo para determinar colesterol. Muestra Suero, Plasma heparinizado o EDTA. Linealidad 3

El test solo debe ser realizado en pacientes con niveles de trigliceridos menores a 400 mg/dl. Consideraciones. Concentraciones elevadas de acido ascorbico (>2,5 mg/dl) puede arrojar valores bajos. Valores de Hemoglobina sobre 100 mg/dl y de Bilirrubina sobre 10 mg/dl interfieren en la metodología. Valores de referencia

Pronóstico favorable Niveles aceptables Indicador de riesgo

HDL colesterol Hombre >55 mg/dl 35−55 mg/dl <35 mg/dl LDL colesterol

Deseable Riego moderado Riesgo elevado

Mujer >65 mg/dl 45−65 mg/dl <45 mg/dl <130 mg/dl Entre 130−159 mg/dl >160 mg/dl

METODO DE REFERENCIA POR PRECIPITACIÓN En estos métodos, se emplean polianiones (Heparina, Dextránsulfato), Fosfotungstato, Polietilenglicol, en presencia de actiones bivalentes para precipitar las liporpoteinas más grandes, menos densas; las HDL se determinan en el sobrenadante como colesterol−HDL. Dentro de estos métodos se encuentran la determinación por medio de heparina−Cloruro de manganeso que es un reactivo de uso frecuente. CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE COLESTEROL LDL LDL= COLESTEROL TOTAL " COLESTEROL HDL − (TRIGLICERIDOS ) 5 UNIVERSIDAD DE ANTOFAGASTA FACULTAD Cs. DE LA SALUD DEPTO. TECNOLOGIA MEDICA UNIDAD DE QUIMICA CLINICA DETERMINACIÓN DE COLESTEROL, HDL Y LDL BIBLIOGRAFIA Título: Procedimientos Técnicos de Laboratorio Clínico Autor : Instituto de Salud Pública de Chile 4

Editorial: El Instituto Santiago Chile 1994 Título: Química Clínica Autor: Anderson, Shauna C. Cackyne, Susan. Editorial Interamericana. Mexico 1995 Título: Química Clínica Métodos. Autor: Pesce, Amadeo J. Kaplan, Lawrence A. Editorial Panamericana B.A 1991 Argentina.

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