Identificación y medición de la respuesta inmune

PRUEBAS SECUNDARIAS

La prueba a realizar depende de las características del Ag § SOLUBLE § PARTICULADO

PRECIPITACIÓN

AGLUTINACIÓN

§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO

FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

Comparación precipitación - aglutinación

Y

Antígeno PARTICULADO

Anticuerpo

Formación de “retículo”

PRECIPITACIÓN

“Amontonamiento”

AGLUTINACIÓN

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Antígeno SOLUBLE

Y

Y

PRECIPITACIÓN

Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones óptimas se insolubilizan dando una reacción de precipitación

Precipitación Exceso de Ag

Exceso de AC Proporciones óptimas

Ag SOLUBLE

PROPORCIÓN

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Ag/mg

Y

Y Y Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y YY YY Y

Y

MEDIO

Y

AC ESPECÍFICO

RETÍCULO SOLUBLE

Y

MEDIO LÍQUIDO

SÓLIDO

Test de Ascoli - Valente CARBUNCLO

•

DIFUSIÓN DOBLE

•

INMUNOELECTROFORESIS (IEF)

•

INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)

•

CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

DIFUSIÓN DOBLE

Inmunodifusión en Gel de Agar

Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión “doble”), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible

Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

Test de Coggins para AIE

Placa de Petri

1

3

5

2

5 2.Sacabocados

1

1 6

7 4

6

4. Suero testigo (+) (reactivo)

3. Suero problema

1. Agar gel

4

7 5. Antígeno específico (reactivo)

2

6

3

5

2 7 3 4

6

2

6

2

7

7

4

4

6.Cámara húmeda 48 hs

7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN A

6

D. NEGATIVO E. Fuertemente POSITIVO

2 7

C

4

B

F. POSITIVO G

D A. NEGATIVO B. POSITIVO C.

Débilmente POSITIVO

F

E

I

H

G. POSITIVO H. Banda INESPECÍFICA I. Banda INESPECÍFICA

APLICACIONES EN VETERINARIA

§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA § PIROPLASMOSIS EQUINA § LEUCOSIS BOVINA § BRUCELOSIS OVINA § BRUCELOSIS CANINA

AGLUTINACIÓN Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

FENÓMENO DE ZONA O PROZONA

Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

A G L U T I N A C I Ó N

AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN PASIVA COAGLUTINACIÓN HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

Antígeno particulado (reactivo)

Y

YY

Y Y

YY + YY Y

Proporción

AGLUTINACIÓN

Suero problema Medio

AGLUTINACIÓN

En PLACA

En TUBO

Salmonella Brucella Micoplasma

Brucella

BPA

SAT+2-ME

PAL

Aglutinación en placa: BPA Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado

1. Suero problema

Aglutinoscopio + placa de vidrio

2. Antígeno específico (reactivo)

8 MINUTOS

3. Mezclar

LECTURA E INTERPRETACIÓN

Con GRUMOS

AGLUTINACIÓN POSITIVA

Sin GRUMOS

Negativa

Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME

SAT (Seroaglutinación en Tubo)

Ig M

2- ME (2- Mercaptoetanol)

Ig G

Se realizan en simultáneo

En TUBO: SAT + 2- ME 2. Solución fisiológica fenicada (SFF) 1. Suero problema

3. Antígeno

60 MINUTOS SUERO BPA (+)

SAT

1/25

2. Solución 2-ME

1/50

1/100

1/200

Título

37ºC-48 hs

2-ME

LECTURA e INTERPRETACIÓN

37ºC-48 hs

POSITIVA

INCOMPLETA

NEGATIVA

Aglutinación en tubo: PAL PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE

Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno particulado coloreado, ambos se unirán, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y asciende con la nata

PAL

2. Antígeno (reactivo) 1. Leche problema

LECTURA e INTERPRETACIÓN

37ºC-1 hora

+

++

+++

++++

APLICACIONES EN R. A.

BRUCELOSIS BOVINA Prueba TAMIZ COMPLEMENTARIAS

BPA – ELISA I SAT + 2-ME – FPA ELISA C

DEFINITORIA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA

FC PAL - ELISA I

PRUEBAS TERCIARIAS v IN VITRO

NEUTRALIZACIÓN

v IN VIVO

PROTECCIÓN

NEUTRALIZACIÓN Fundamento: estimación de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biológica de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

PROTECCIÓN Fundamento: forma de análisis de neutralización que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo específico frente a su antígeno

RESPUESTA INMUNE CELULAR v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS