BIOAUMENTACION EN CULTIVO DE CAMARON (PENAEUS MONODON FAB): EFECTOS DE ACCELOBAC AG EN LA CALIDAD DEL AGUA Y SOBREVIVENCIA DE VARIAS ETAPAS DE CRECIMIENTO DEL CAMARON CULTIVADO BAJO CONDICIONES SEMI-CONTROLADAS1 Por: J. B. Pantastico y J. P. Baldia2

Resumen

Tres experimentos fueron conducidos para determinar los beneficios específicos derivados de la aplicación de Accelobac AG in en un sistema de cultivo semi-controlado con camarones en crecimiento. En el primer experimento, Accelobac AG fue aplicado a 1.0, 0.5 y 0.3 g/metro cubico en el medio de cultivo del camarón en etapa poslarval, PL18. Mejoras significativas en la calidad del agua fueron obtenidas en los lotes inoculados con el producto vs. El grupo control. La población bacteriana y el contenido total de solidos del agua fue también monitoreado. La sobrevivencia del camarón en la etapa post-larval luego de 20 días fue de 85.3% con la aplicación de Accelobac AG comparado con el control, el cual fue 54.3%. El Segundo experimento demostró la eficiencia de la inoculación de Accelobac AG en el medio de crecimiento de camarones adultos (Etapa I: 37-dias; Etapa II: 50-dias; Etapa III: 76-dias; Etapa IV: 96-dias). El nitrito y los niveles de amonio fueron reducidos significativamente con la inoculación bacteriana (NO2 = 0.156 a 0.213 ppm; NH3 = 0.073 a 0.093 ppm) comparado con el control (NO2 = 0.483 a 0.563 ppm; NH3 = 0.413 a 0.674 ppm). Independientemente de la edad de los camarones, los parámetros de calidad del agua fueron mantenidos dentro de los límites óptimos para los organismos. El porciento de supervivencia de los lotes inoculados con bacterias fueron de 96.7% (Etapa II) y 86.7% (Etapa III) comparado con el control el cual fue de 43.3% y 40% para los estados II y III respectivamente. Varias concentraciones de Accelobac AG fueron analizados para crecimiento a los 61dias y luego a los 100-dias. La aplicación de Accelobac AG a solo 0.5 g/metro cubico. fue igualmente efectiva como en las concentraciones más altas de entre 1.0 y 1.5 g/metro cubico. La buena calidad del agua y la alta sobrevivencia del camarón fueron obtenidas con la inoculación bacteriana. 1

Investigación comisionada por G.L. Whang de Nu-Genes Technologies, Inc. Este ensayo fue presentado en el “Simposio Internacional para la Aplicación de Métodos Biotecnológicos y Logros Recientes de Valor Económico en Asia” en Bangkok, Thailand.

2

Consultores, Nu-Genes Technologies, Inc.

ESQUEMA BIOGRAFICO J. B. Pantastico Grado Doctoral en Ficología fue conectado con el Centro de Desarrollo de la Pesca de Sureste Asiático (SEAFDEC) y el consejo de Investigación y Desarrollo Marino (PCAMRD). Dr. Pantastico obtuvo su grado doctoral en Ciencias Botánicas con concentración en Ficología mediante la beca de viaje Fulbright-Hays a la Universidad de California, Davis en 1967. Ella era la Profesora Asociada en el Departamento de Botánica U.P. U.P. Los Banos hasta 1976. Ella se unió al Centro de Desarrollo de la Pesca de Sureste Asiático (SEAFDEC), al Departamento de Acuacultura y estableció el Laboratorio de Alimentos Naturales en colaboración con las operaciones de camarón y peces de escama. En 1988, ella sirvió como la Directora de División del Consejo de Investigación y Desarrollo Marino (PCAMRD). Mr. Jose P. Baldia obtuvo su bachillerato en U.P. Los Banos y su maestría en Microbiología en U.P. Diliman con becas de SEAFDEC. Como investigados por 11 años en SEAFDEC, AQD, el se especializa en los campos de Enfermedades de Peces, Producción de Alimento Natural, Limnologia y Acuacultura. El ha atendido varios seminarios, talleres y simposios y ha publicado estudios científicos tanto en revistas científicas locales como internacionales. Actualmente, Mr. Baldia es un consultor para la Corporación de Desarrollo de Recursos Continentales y ha formulado proyectos de acuacultura.

Introducción

Los esfuerzos de investigación y desarrollo son grandemente necesarios para sostener el crecimiento de la industria del camarón en las Filipinas. En 1987, la producción de camarón mostro un promedio de 31% en volumen (15,500 MT) valorados en P3.2 billones. El empleo generado en este sector es tremendo considerando que al menos 20,000 hectáreas de estanques de agua salobre han sido convertidas en monocultivo de camarón. Sin embargo, la industria sufrió un gran revés dado al bajo precio del camarón en el mercado. Por estas razones, apoyo y asistencia en términos de investigadores con enfoque industrial es necesaria lo antes posible para mejorar la eficiencia de producción. Un área de investigación y desarrollo es el uso de cepas de microorganismos especialmente seleccionadas y adaptadas las cuales son inoculadas en los estanques para mejorar la calidad del agua y la taza de sobrevivencia de los camarones. Es en este contexto que la bioaumentacion de estas cepas bacterianas en el nuevo e innovador producto, Accelobac AG, fueron analizadas bajo condiciones semi-controladas. Resultados experimentales proveen información base para la eventual aplicación comercial del producto Accelobac AG en sistemas de cultivo de camarón. Primer Experimento:

Efectos de Accelobac AG en la Calidad de Agua y Sobrevivencia del camarón en etapa post-larval, PL 18.

Materiales y Métodos Cinco mil piezas de camarón en etapa post-larval (PL 18) obtenido en Calatagan, Batangas fue transportado a la estación experimental en doble bolsa con oxígeno. Poslarvas jóvenes fueron almacenadas en bolsas de 5,000 pcs que contenían 30 litros de agua durante el transporte. A la llegada, las poslarvas transportadas fueron colocadas en tanques de 100 litros conteniendo 20 litros de agua con una salinidad de 23 ppt. A estos tanques se le proveyó aireación moderada a vigorosa. Luego fueron condicionados al nuevo ambiente con la adición gradual de 20 ppt de agua salada. Luego de dos días, 50 pcs de cada poslarva fueron almacenadas en 12 unidades en tanques con capacidad de 100 litros los cuales contenían 30 litros de agua a 20 ppt. o una densidad de almacenamiento efectiva de 1,666.7 por metro cuadrado. La cantidad requerida de Accelobac AG fue aplicada mediante la preparación de solución madre de 1 gramo de Accelobac AG en un litro de agua. Las cantidades de alícuotas fueron añadidas en cada tanque, ej. 30 ml, 15 ml, y 9 ml cada una para tratamiento I, II y III. Los lotes no inoculados sirvieron como grupo control.

Dosis g/metro cubico

Tratamiento I II III IV

1.0 0.5 0.3 0

g/30 l.

0.030 0.015 0.009 0

Las poslarvas de camarón fueron alimentadas con alimento “SMI-President” para etapas iniciales dando un 3% del peso corporal (BW). La comida fue preparada mediante la mezcla de una parte de alimento y 5 partes de agua mezclada y tamizada mediante redes de plancton de 80 micrones La ración de alimento para el día fue dividida en 6 partes iguales y alimentada a los camarones en intervalos de cada cuatro horas. Los parámetros fisicoquímicos del agua de cría fueron cercanamente monitoreados. Estos consistieron en nitratos, nitritos, amonio, sulfito de hidrogeno, oxígeno disuelto (D.O.), pH, solidos totales y conteo de bacterias. Las muestras fueron tomadas inicialmente y luego cada dos días utilizando métodos estándares. No cambio de agua fue hecho por la duración total del experimento (20 días) Las dimensiones iniciales y finales así como también la sobrevivencia final de los animales analizados fue reportada. Resultados y Discusión Niveles de Nitritos y Nitrato en el Agua (Figs. 1 & 2)

Nivel de NO2-N (ppm)

Los niveles de nitrito en el medio de crecimiento de las poslarvas jóvenes PL 18, fueron mantenidos a pH bien bajos en todos los tratamientos con inoculaciones bacterianas (0.3, 0.5 y 1.0 g/metros cúbicos.). Los 0.7 valores obtenidos al día 20 del periodo de cultivo estaban 0.6 por debajo de 0.2 ppm NO2 0.5 0 g/metro comparado con el control nocubico 0.4 inoculado el cual alcanzo 0.3 g/metro 0.592 ppm y 0.648 ppm cubico 0.3 0.5 g/metro durante los días de cultivo 18 cubico 0.2 al 20, respectivamente. Estos resultados demuestran la 0.1 efectividad de Accelobac AG 0 en la reducción del nivel de 0 4 8 12 16 20 nitrito del agua aun a una, DIAS DE CULTIVO muy baja concentración. Fig. 1. Contenido de nitrato en el agua inoculada con varias concentraciones de Accelobac AG

de 0.3 g/metros cúbicos para poslarvas jóvenes. La misma tendencia fue observada en los niveles de nitrato en el agua. (Fig. 1 and 2).

Análisis estadísticos demostraron que las inoculaciones bacterianas de varios niveles proveyeron muchos efectos beneficiosos y son significativamente diferentes del control sin la inoculación de bacterias. Contenido de amonio en el Agua (Fig.3) fue también efectivo en mantener el nivel de amonio del agua de cultivo de las post-larvas jóvenes dentro de los parámetros óptimos. Este efecto fue el más 0 g/metros cubicos pronunciado comenzando el día 12 del cultivo cuando el control no-inoculado mostro un 0.3 incremento drástico en los niveles de amonio. g/metros Sin embargo, las condiciones son diferentes en cubicos camarones adultos donde la acumulación de 0.5 g/metros amonio en el control alcanzo niveles tóxicos de cubicos hasta 3.2 ppm (vea los resultados del segundo y 1.0 tercer experimentos). Con post-larvas jóvenes g/metros 4 8 12 16 20 PL18, el valor más alto de NH3-N en el control cubicos Dias de Cultivo sin la inoculación bacteriana es solamente 0.316 ppm lo cual sigue en el límite de nivel óptimo

La inoculacion de bacteria

NO3-N Nivel (ppm)

0.32 0.3 0.28 0.26 0.24 0.22 0.2 0.18 0.16 0.14 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0

NO3-N Nivel (ppm)

0.55 0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 4

8

12

16

20

Dias de Cultivo

Fig. 2.

0.3 g/metro cubico 0.5 g/metro cubico 1.0 g/metro cubico

Fig. 3. Nivel de amonio del agua inoculada con varias concentraciones de Accelobac AG

Los niveles de nitrato del agua inoculada con varias concentraciones de Accelobac AG

Para el camarón. Este resultado puede ser explicado por el hecho de que post-larvas jóvenes se les da menos comida en comparación con larvas adultas. Oxígeno Disuelto en el Agua (Fig.4)

Los niveles de oxígeno disuelto de ambos el control y los lotes tratados fueron altos durante el periodo experimental. Los valores se encontraron desde 6.28 hasta 7.02 ppm luego de dos días de cultivo. Las lecturas de oxígeno disuelto (D.O.) fueron mantenidas dentro de estos altos valores hasta 20 días sin ningún cambio de agua y no fotosíntesis. El D.O. está bien dentro de los limites óptimos para camarones los cuales estaban establecidos a un valor más alto de 3.5 ppm. Los valores altos de D.O. obtenidos en el control comparados con los lotes tratados puede ser debido a que la composición de oxigeno por parte de las bacterias durante la descomposición de la comida no digerida y la materia 7.1 fecal excretada por las postlarvas en crecimiento. 7 El ensayo de múltiple rango 0 g/metro 6.9 (Duncan) mostro no diferencia cubico 6.8 significativa entre los lotes 0.3 g/metro cubico tratados y los del grupo control. 6.7 Oxigeno Disuelto (ppm)

0

0 g/metro cubico

0.5 g/metro cubico

6.6 6.5 6.4 0

4

8

12

Dias de cultivo

16

20

Fig. 4. Niveles de oxígeno disuelto del agua inoculación varias concentraciones de Accelobac AG.

pH del agua (Fig.5) La misma tendencia fue observada para ambos lotes tratados y controlados. Los valores comenzaron a un pH de 7.0 y fueron disminuyendo gradualmente (pH 6.4 etc) mientras el experimento progresaba. El rango de pH de ambos el grupo control y los tratados hasta el día 16 de cultivo sin cambio de agua permaneció dentro del límite óptimo establecido para los camarones. (pH 6.5 to pH 8.7). Fig. 5. pH del agua inoculada con varias concentraciones de Accelobac AG

7.1 7 6.9

0 g/metro cubico 0.3 g/metro cubico 0.5 g/metro cubico

pH

6.8 6.7 6.6 6.5

Sobrevivencia de la Poslarva (Fig.6)

6.4 6.3 6.2 0

4

8

12

16

20

Luego de 20 días, alto porciento de sobrevivencia fue obtenido en todos los tratamientos inoculados con Accelobac AG comparados con el control. La concentración más alta de bacterias aplicadas (1.0 g/metros cúbicos), dio un alto porciento de sobrevivencia de 85.3% comparado con la inoculada (grupo control) la cual fue 54.3% solamente. El ensayo de múltiple rango (Duncan) mostro diferencias significativas entre el control y los lotes tratados.

Porciento (%) Sobrevivencia

Dias de Cultivo

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Control

Exp. 0.3 Exp. 0.5 Exp. 1.0

Nivel de Inoculo(g/metros cubicos)

Fig. 6. Porciento de sobrevivencia del camarón post-larval (PL18) crecido en medio inoculado con concentraciones variables de Accelobac AG

Población Bacteriana (Fig.7) La población bacteriana fue significativamente más alta en los lotes inoculados que en el grupo control. Este efecto fue más aparente en el día 14 de cultivo. Esto puede ser explicado por el hecho de que la bacteria inoculada se multiplicó en número porque la acumulación de material orgánica en el medio de cultivo. De otro lado, la población de bacterias no, especifica indígena en el control no mostro aumento en número.

Fig. 7. Población de Bacterias en el agua inoculadas a varias concentraciones de Accelobac AG

Numeros Bacteriales (cel/mL) ( X 1,000)

100

Solidos Totales (Fig.8)

90 80

0 g/metro cubico 0.3 g/metro cubico 0.5 g/metro cubico 1.0 g/metro cubico

70 60

50 La eficiencia de inoculación 40 bacteriana fue reflejada en el 30 contenido de solidos totales 20 del medio. En los lotes 10 control, había una 0 acumulación de materia 0 4 8 12 16 20 orgánica en forma de heces y DIAS DE CULTIVO comida no digerida. Con la inoculación bacteriana, la degradación estaba surgiendo eficientemente en el sistema de manera que el contenido de solidos totales en el medio permaneció bajo. Este efecto fue más aparente comenzando en el día 12 de cultivo.

El contenido de solidos totales del medio de cultivo fue significativamente más bajo en los lotes inoculados comparado con el control. 40

Solidos Totales(mg/li) ( X 1,000)

35 30

0 g/metro cubico 0.3 g/metro cubico 0.5 g/metro cubico 1.0 g/metro cubico

25 20 15 10 5

Fig. 8. Contenido de solidos totales del medio inoculado con varias concentraciones de Accelobac AG

0 0

4

8

12

16

20

DIAS DE CULTIVO

Segundo Experimento: Efecto de Accelobac AG en cuatro etapas de crecimiento de camarón (juveniles de 37, 50, 76, y 96 días) Materiales y Métodos El transporte de camarones adultos fue hecho usando las bolsas plásticas dobles usuales (50 x 70 cm.) las cuales fueron llenadas con oxígeno. Se utilizó el agua tomada del estanque donde los camarones juveniles fueron criados. Camarones más grandes (i.e. 76 y 96 días), fueron transportados en bolsas de 25 pcs/bolsa mientras que los más pequeños (i.e. 37 y 50 días) fueron transportados en 50 pcs./bolsa. Para cada bolsa se añadieron 5 gramos de Accelobac AG para mantener Buena calidad de agua durante el transporte ya que los camarones no fueron acondicionados apropiadamente (i.e. no en ayunas durante al menos 12 horas) previo al transporte. No hubo mortandad durante el trasporte y luego de 24 horas se observaron. El tiempo

de trasporte a la estación experimental fue de 3 horas y 10 minutos. viniendo desde Nasugbu, Batangas y 4 horas y 15 min. viniendo desde Pagbilao, Quezon. A la llegada a la estación experimental, los camarones transportados fueron colocados en tanques de 100 litros los cuales contenían 40 litros de agua de estanque con salinidades de 20 y 18 ppt para los camarones provenientes de Nasugbu, Batangas y Pagbilao, Quezon respectivamente. Se añadió un sistema de aireación pequeño. Los animales experimentales fueron acondicionados a su Nuevo ambiente por 24 horas. Ellos fueron gradualmente aclimatados a una salinidad de agua de 18 ppt previo a la conducción del experimento. Camarones representando las cuatro etapas como se indica a continuación fueron almacenados a 10 pcs. Cada uno en 24 unidades de tanques de 100 litros los cuales contenian20 litros de agua a 18 ppt o una densidad de almacenamiento efectiva de 42 por metro cuadrado. Las diferentes etapas de crecimiento fueron designadas como sigue: Etapas de crecimiento Etapa I Etapa II Etapa III Etapa IV

Fuente

37 días 50 días 76 días 96 días

Nasugbu, Batangas Pagbilao, Quezon Nasugbu, Batangas Pagbilao, Quezon

Accelobac AG fue añadido a razón de 1.19 g/tanque o a una dosis de 5 g/metro cubico Los lotes control fueron aquellos sin inoculación bacteriana. El ensayo experimental fue provisto con moderada aireación y piezas de red las cuales sirvieron de santuario para los camarones durante la muda. El experimento fue conducido en un Diseño de Bloque Completo con tres replicas por tratamiento. Los camarones fueron alimentados con alimentos SMI-President como en el primer experimento dado a los siguientes proporciones: Estado de Crecimiento Etapa I Etapa II Etapa III Etapa IV

% Peso corporal 20% BW 20% BW 12% BW 5% BW

Tipo de Alimento Inicial Inicial Crecimiento Crecimiento

La taza de alimentación designada fue dividida en seis partes iguales y alimentada a los camarones a intervalos cada cuatro horas. Para determinar la actividad de Accelobac AG, conteo bacteriano del agua de cultivo fueron tomados inicialmente y cada (2) dos días después de eso a través del Método del Número más Probable (MPN) utilizando agar nutritivo como medio. Los parámetros fisicoquímicos del agua como pH, D.O., nitrito, amonio y solidos totales (material fecal y alimento sin consumir) fueron también tomados inicialmente y cada dos días luego de eso utilizando los métodos estándares. (APHA, 1976).

No se realizaron cambio de agua por la entera duración del experimento el cual duro 14 días. Resultados y Discusión Nivel de Nitrito en el Agua (Fig.9-A&B)

2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1

Etapa 3, Inoculado Etapa 3 Control Etapa 4, Inoculado Etapa 4, Control

0

2

4

6

8

10

12

14

La efectividad de Accelobac AG en el medio inoculado se demostró aún más por el hecho de que independientemente de la edad del camarón, el nivel de nitrito bajo fue mantenido. Esto significa que la cantidad de alimento dado a los camarones más adultos, la bacteria inoculada fue capaz de degradar el alimento no digerido y metabolitos como si no hubiera habido acumulación de nitrito en el medio. A medida que los camarones fueron creciendo, mayor el porcentaje de alimento, resultando en grandes cantidades de comida no digerida y Fig. 9-A

Dias de Cultivo

mayor proporción de nitrito en el agua. Esto fue cierto para ambos medios de cultivo los inoculados y los no inoculados. Sin embargo, debe enfatizarse que el nivel de nitrito en el medio de cultivo inoculado Accelobac AG permaneció por debajo de niveles peligrosos, (para camarones los niveles tóxicos son mayores de 5 ppm). Por otra parte, el control (no inoculado) alcanzó un valor de 2.13 ppm. Fig. 9-B Fig. 9. A&B Nivel de Nitrito en el Medio de Cultivo para cuatro etapas de crecimiento de los camarones inoculados con Accelobac AG

Análisis estadístico demostró diferencias significativas entre los lotes tratados y los control los cuales fueron obtenidos entre los días 2 hasta el 14 de cultivo para todas las etapas de crecimiento de los camarones. Contenido de Amonio en el Agua (Fig.10 A & B)

Nivel deNO2-N (ppm)

Nivel de NO2-N (ppm)

Inoculación de NS Series en el medio de cultivo con camarones en varias etapas de desarrollo mejoro la calidad del agua. Esto es evidente tan temprano con los primeros 2 días donde los niveles de nitrito fueron considerablemente bajos (0.156 – 0.213 ppm) que en el medio no inoculado (control) (0.483 – 0.563 ppm). Los niveles de nitrito fueron mantenidos a un valor significativamente más bajo en los lotes tratados que en el control por la duración del experimento el cual duro dos (2) semanas. (Debe observarse que no hubo cambios de agua durante el periodo experimental). Por otra parte, el nivel de nitrito en el grupo control (no inoculado) incrementó dramáticamente. En general, la bacteria inoculada fue efectiva reduciendo el nivel de nitrito en el medio de cultivo con camarones por tanto como 481%. Esto se vuelve aparente en el día 14 cuando el nivel de nitrito alcanzo 2.133 ppm el control mientras que en el medio con la bacteria so lo fue de 0.493 ppm. Esta data fue observada en el medio donde camarones de 96 días (Estado IV) fueron almacenadas.

2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1

Etapa 1, Inoculado Etapa 1, Control Etapa 2, Inoculado Etapa 2, Control

0

2

4

6

8

10

DIAS DE CULTIVO

12

14

La misma tendencia fue observada en la efectividad de Accelobac AG en mantener buena calidad de agua para el cultivo del camarón. Los niveles de amonio hasta el sexto día de cultivo fueron relativamente bajos y seguros para el cultivo de camarones para ambos lotes (control, bacteria). Los valores oscilaron desde 0.073 hasta 0.093 ppm para el medio inoculado con camarones en los estados I al IV mientras que en el control sin inoculación de bacteria los valores se mantuvieron altos oscilando entre 0.413 a 0.674 ppm. Comenzando en el día 8 y de ahí hasta 2 semanas, el amonio se acumuló a muy altos niveles para todos los lotes control. Durante el mismo periodo, la bacteria inoculada mantuvo el nivel de amonio por debajo de 1 ppm lo cual se considera tolerable para los camarones. A excepción de los lotes tratados, el lote I el cual era de camarones de 37 días, los niveles de amonio permanecieron muy por debajo de valores estresantes. (0.23-0.54 ppm). En contraste los lotes control (no inoculados) tenían amonio acumulándose en el medio a niveles extremadamente altos de hasta 3.2 ppm. Informes anteriores de Chiu (1987) establecieron que la exposición prolongada de camarones a 0.1 ppm NH3-N puede tener efectos adversos. Fig.10-A

Nivel de NH3-N (ppm)

El contenido de amonio del agua es dependiente de pH y temperatura. A altos valores de pH, los problemas de toxicidad de amonio se tornaron más serios. Durante el experimento, no hubo un incremento en el nivel de pH para ambos el control y los lotes tratados (Figs. 11 A & B). Sin embargo en general, en el medio inoculado con bacteria, los valores 3.4 de pH fueron más bajos que en el 3.2 3 control. Esto nuevamente atribuyo Etapa 1, 2.8 Inoculado 2.6 no cambio de agua y la degradación 2.4 subsecuente de material orgánica a 2.2 Etapa 1, 2 Control CO2, H20 y tejido celular por la 1.8 1.6 bacteria inoculada en Accelobac Etapa 2, 1.4 Inoculado AG. 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

Etapa 2 Control

0

2

4

6

8

10

12

14

El ensayo de múltiple rango (Duncan) mostro diferencias significativas entre el control y lotes tratados desde el día 4 hasta el día 14.

Fig.10-B

Nivel de NH3-N (ppm)

DIAS DE CULTIVO

3.4 3.2 3 2.8 2.6 2.4 2.2 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

Etapa 3, Inoculado Etapa 3, Control Etapa 4, Inoculado Etapa 4, Control 0

2

4

6

8

10

12

14

DIAS DE CULTIVO

Figs. 10- A & B. Contenido de amonio del medio de cultivo de cuatro estados de cultivo de los camarones inoculados con Accelobac AG

7.3 7.2

Etapa1, Inoculado

7.1

Fig. 11-A

7

Etapa 1, Control

pH

6.9 6.8

Etapa 2, Inoculado

6.7 6.6

Etapa 2, Control

6.5 6.4 6.3 0

2

4

6

8

10

12

14

DIAS DE CULTIVO

pH

Fig. 11-B 7.4 7.3 7.2 7.1 7 6.9 6.8 6.7 6.6 6.5 6.4 6.3 6.2

Etapa 3, Inoculado Etapa 3, Control

Fig. 11 A & B. niveles de pH en el medio de cultivo de cuatro etapas de crecimiento con inoculación de Accelobac AG

Efectos en el oxígeno disuelto (Figs. 12 A & B)

Etapa 4, Inoculado Etapa 4, Control

Fig. 12-A

Nivel de Oxigeno Disuelto(ppm)

9 8.5 8 7.5 7 6.5 6 5.5 5 4.5 4

Etapa 3, Inoculad o Etapa 3, Control Etapa 4, Inoculad o 0

2

4

6

8 10 12 14

DIAS DE CULTIVO

Nivel de Oxigeno Disuelto(ppm)

Ambos el control y los lotes tratados mostraron altos valores de D.O. para el crecimiento de los 0 2 4 6 8 10 12 14 camarones. Debe ser enfatizado DIAS DE CULTIVO de todas formas que el experimento fue conducido bajo un sistema semi-controlado. Siendo este el caso, no hubo actividad fotosintética lo cual de otra forma incrementaría el contenido de D.O. en el agua. Por otra parte, la bacteria inoculada romperá la materia orgánica en el sistema, consumiendo oxígeno en el proceso. Esto explica los bajos valores de D.O. en los tratamientos inoculados de Accelobac AG. 7.4 7.2 7 6.8 6.6 6.4 6.2 6 5.8 5.6 5.4 5.2 5 4.8 4.6 4.4 4.2

Etapa1, Inoculado Etapa 1, Control Etapa 2, Inoculado Etapa 2, Control

0

2

4

6

8

10 12 14

DIAS DE CULTIVO

Fig. 12-B

Figs. 12-A & B. Oxígeno disuelto del medio de cultivo de los cuatro estados de crecimiento de los camarones inoculados con Accelobac AG

Efecto de Sobrevivencia del Camarón (Fig. 13)

Análisis estadístico demostró diferencias significativas entre los lotes inoculados y los controles para todas las fases de crecimiento de los camarones. Fig. 13. Sobrevivencia de las cuatro etapas de Accelobac AG en el medio de cultivo

Solidos Totales: (Figs. 14 A & B)

Porciento (%) de Supervivencia

El tratamiento con Accelobac AG más efectivo en incrementar el porciento de sobrevivencia del os camarones. Esto fue observado en todos los estados de crecimiento aunque el efecto fue más pronunciado para los camarones de 50 días y 76 días (Etapas II y III). Altos valores de sobrevivencia de 96.7% y 86.67% fueron obtenidos para las etapas II y III respectivamente. Para los lotes control sin inoculación bacteriana, la sobrevivencia fue menor en el estado III (40%) y el estado III (43.3%). 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Inoculado Control

1

2

3

4

Estado de Crecimiento

La habilidad de la bacteria inoculada en descomponer la comida no digerida y materia fecal en el medio de cultivo es demostrado por el contenido de solidos totales en el agua. La cantidad de comida incrementa con la edad de los camarones en el medio de cultivo en los estados I al IV en los lotes control.

Solidos Totales (mg/L) (X 1,000)

Al finalizar el experimento, el medio de cultivo en los controles era muy turbio. El análisis de solidos totales presentes demostró que tanto como 1.87 g/li o 1,870 ppm acumulada en el control. Por otro lado, todo el medio tratado con Accelobac AG, mostro un agua 450 casi trasparente. Esta condición 400 Etapa 1, demuestra el hecho de que 350 Inoculado independientemente de la cantidad 300 Etapa 1, inoculada de bacteria dada a los Control 250 camarones, las bacterias inoculadas 200 Etapa 2, fueron capaces de descomponer el Inoculado 150 alimento eficientemente. El Etapa 2, 100 contenido de solidos totales en el Control agua con la inoculación bacteriana 50 no paso más allá de 0.28 g/li o 280 0 0 2 4 6 8 10 12 14 ppm luego de dos (2) semanas. DIAS DE CULTIVO

Numero de Bacterias(cel/mL) ( X 1,000)

80

Fig. 14-A

Solidos Totales (g/L)

Basada en la cantidad de Accelobac AG inoculado en el medio la cual era de 5 g/metros cúbicos el porciento de descomposición fue calculado a 117.21 mg/li/día por el Estado IV de camarones de 96 días.

70

Etapa 1, Inoculado

60

Etapa 1, Control

50 40

Etapa 2, Inoculado

30 20

Etapa 2, Control

10 0 0

2

4

1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0

Etapa 3, Inoculado Etapa 3, Control Etapa 4, Inoculado Etapa 4, Control

0

2

4

6

8

10

6

8

10 12 14

DIAS DE CULTIVO

12

Diferencias Significativas entre el control y los lotes tratados ocurrió en el cuarto día para todos los estados de crecimiento de los camarones basado en el ensayo de múltiple rango (Duncan) Fig. 14-B Fig. 14-A & B Solidos Totales en el medio de cultivo de las cuatro etapas de los camarones tratados con Accelobac AG.

Conteo Bacteriano (Figs. 15 A & B)

14

DIAS DE CULTIVO

La población bacteriana en el medio de cultivo incremento con el tiempo. Conteos de bacteria más altos fueron obtenidos en los lotes tratados lo cual era esperado debido a la inoculación bacteriana. La población bacteriana estaba baja en los lotes control. Por otra parte, el tipo de bacteria entre el control y los lotes tratados fueron diferentes como se había asumido. El ensayo de múltiple rango (Duncan) demostró esas diferencias en el conteo bacteriano y los lotes control para todas las etapas de crecimiento de los camarones la cuales fueron altamente significativas (p