PRODUCCION DE ALEVINES DE RODABALLO (Scophthalmus maximus)

MARIO RODRIGUEZ ALVARIÑO Doctor Ingeniero Agrónomo Departamento Producción Animal, E.T.S.I. Agrónomos Madrid ORLANDO DIAZ MARTINEZ Ingeniero Agrónomo Consellería de Agricultura, Xunta de Galicia

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MINISTERIO DE AGRICULTURA PESCA Y AUMENTACION SECRETARIA GENER.AI DE ESTRUCTURAS AGRARIAS

PRODUCCION DE ALEVINES DE RODABALLO (Scophthalmus maximus) La producción de especies marinas a través de su cultivo ha experimentado un importante crecimiento en los últimos años, basado en técnicas de obtención y engorde de alevines. Nuestro país. se ha incorporado a este proceso, desarrollando técnicas adaptadas a nuestras condiciones específicas. En el caso del rodaballo, la producción se ha basado, en gran medida, en el engorde de alevines obtenidos mayoritariamente fuera de España, aprovechando los buenos crecimientos que permiten las aguas de las costas gallegas.

La producción de alevines de rodaballo ha sido objeto de investigación sistemática desde 1970 en centros de Gran Bretaña. Hoy día se puede decir que los trabajos experimentales realizados en varios países permiten su producción en gran escala, aunque siguen existiendo limitaciones técnicas que impiden un rendimiento satisfactorio. Una consecuencia inmediata ha sido la proliferación de empresas dedicadas exclusivamente al engorde de rodaballo, especialmente a partir de 1985. La tendencia actual es la especialización, bien como hatchery productora de alevines o bien como granja de engorde. En los siguientes apartados se describen, de modo general, las técnicas que son utilizadas hoy de modo rutinario para producción de alevines de rodaballo. PRODUCCION DE GAMETOS EI ciclo de producción del rodaballo en granjas marinas se muestra esquemáticamente en la figura 1, partiendo de reproductores capturados en el mar o de los obtenidos cerrando el ciclo en las granjas. 2

Núcleo reproductor Hembras

Machos

Huevos

Esperma

Manipulación Fotoperíodo

Día 0

Fecundación

Renovación 10-30% anual

Vida útil entre 4 y 12 años

6 días a 16°C.

Incubación

•

Día 6

Hatching ♦

Alimento vivo Rotíferos/Artemia

Desarrollo embrionario ♦

Se inicia entre los 15 v 35 días a 22°C. Tamaño final: 22-45 mm.

Metamorfosis

Selección

1

^

Destete

Alevines de I-2 g. de 40-90 días. Pienso seco o ^cmihúmedo

^ Desde 2 a 40-100 g.

Preengorde

F,n[re 100 g. y I-2 kg.

Engorde

1 Venta

1

Fig. l.- Esquema de la producción de Rodaballo en granjas marinas con ciclo cerrado.

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El rodaballo alcanza la madurez sexual entre el tercer y quinto año de vida, con un peso entre dos y tres kilos. La variación se debe, fundamentalmente, a distintas velocidades de crecimiento según la temperatura del agua en que se desarrollan los futuros reproductores. La época de puesta depende, fundamentalmente, del fotoperíodo. En condiciones naturales la maduración sexual está potenciada por fotoperíodos crecientes de primavera y es inhibido por el fotoperíodo decreciente del otoño. El estímulo luminoso desencadena el desarrollo de huevos y esperma, de modo que unos tres meses más tarde se encuentran reproductores preparados para la emisión de gametos. El período de puesta varía entre abril y julio en las costas de Escocia y entre mayo y agosto en las costas de Galicia.

En condiciones controladas el núcleo reproductor puede ser manipulado para producir gametos en otras épocas del año. La manipulación se realiza modificando el ciclo anual de luz, de modo que la estimulación debida a fotoperíodos crecientes no coincida con la primavera. Si, por ejemplo, se obliga a que el intervalo entre el día más corto y el más largo sea de tres meses (en lugar de los seis propios de un ritmo anual), las hembras comienzan la puesta en diciembre en lugar de marzo, como ocurre en condiciones naturales. De acuerdo con las necesidades de los centros de producción, se utilizan distintos métodos para modificar la época de puesta: - Retrasar la puesta manteniendo los reproductores bajo fotoperíodos cortos (ocho horas de luz/día), pasando a 18 horas de luz/día unos tres meses antes de la época deseada de puesta. El método es fiable cuando el retraso no supera en seis meses a la época natural de puesta. La eficacia mejora si se eleva la temperatura del agua a 15-16° C. - Someter a los reproductores a fotoperíodos largos permanentemente (18 horas de luz/día), con lo que la puesta ocurre aproximadamente cada ocho meses. Si se comienza con dos núcleos reproductores desfasados cuatro meses se pueden conseguir gametos casi permanentemente. - Comprimir el ritmo de luz anual en un ritmo cíclico con 4

variación cada nueve meses. Disponiendo de tres núcleos reproductores (al menos con 15 hembras cada uno), desfasados entre sí cuatro meses, es posible disponer de gametos prácticamente todo el año, tal como se refleja en el organigrama de la figura 2. Modificación de puesta inicial

Puesta temprana inducida por fotoperíodo largo Puesta normal Puesta tardía retrasada por fotoperíodo corto

Primer año

Puesta a intervalos de 9 meses Segundo año

Tercer año

Marzo y diciembre

Septiembre

Junio

Junio

Marzo y diciembre

Septiembre

Septiembre

Junio

Marzo y diciembre

Fig. 2.-Esyuema para control de la producción de gametos de rodaballo, comprimiendo el fotoperíodo anual en un ciclo de 9 meses.

FECUNDACION CONTROLADA La madurez de los gametos al llegar la época de puesta provoca engrosamiento del ovario y testículo, lo que se traduce en una hinchazón visible externamente. La región ovárica o testicular es flexible, cediendo a la presión de la mano. Un masaje suave, dirigido hacia el orificio genital, permite liberar huevos o espermatozoides. Los reproductores son mantenidos normalmente en tanques, donde se los recoge para realizar in situ el masaje genital. El líquido expulsado por la hembra es abundante y blanquecino, con una alta concentración de huevos. La puesta media es de 165.000 huevos de 1 mm de diámetro, alcanzándose en puestas óptimas la cifra de 300.000 huevos. No obstante, la producción de cada hembra está asociada a su peso, habiéndose dado cifras de un millón de huevos por kilogramo de peso vivo en la temporada de reproducción, con puestas separadas entre sí unos tres días. El color claro del líquido es un indicador de buena calidad de la 5

puesta. Si el color es oscuro, la recogida se ha hecho demasiado tarde, los huevos están sobremaduros y la capacidad de ser fecundados muy disminuida. La recogida se realiza en una cubeta de plástico que contiene varios litros de agua del tanque, con la misma temperatura a que se encuentran los reproductores. También se puede realizar la fecundación en seco, sin añadir agua inicialmente, siempre que se asegure una buena mezcla de los huevos y espermatozoides. La emisión del macho es de escaso volumen, 2 a 4 ml, con un color blanquecino. El eyaculado se recoge en jeringas de 1 ml y se diluye inmediatamente en un litro de agua. Una proporción razonablemente segura es emplear dos machos para cada hembra, recogiendo 2 ml a cada uno. Otra posibilidad es mezclar la recogida de todos los machos y repartirla entre las cubetas de las diferentes hembras. Realizada la mezcla de huevos y espermatozoides, la fecundación tendrá lugar en diez minutos. La capacidad de los huevos para ser fecundados se pierde si transcurren más de 20 minutos tras la puesta. Unos 15-20 minutos después de la mezcla se procede a completar las cubetas con agua de los tanques hasta diez litros, para permitir la separación de los huevos en mal estado, de color blanco, que se hunden y son retirados sifonando el fondo de la cubeta. La eficacia de la fecundación se valora observando los huevos con lupa (diez aumentos) a las 2-2,5 horas. La primera división habrá tenido lugar y debe alcanzar al 80-90% de los huevos. Si la división es observada en menos del 50% de los huevos, la totalidad de la puesta de esa hembra será desechada. Por otra parte, se realizan observaciones sobre la forma de los huevos, aspecto, gota de grasa (que asegura la flotabilidad)..., que contribuyen a calificar la calidad de la puesta. En la figura 3 se muestran huevos recogidos en septiembre procedentes de hembras que han sufrido manipulación del fotoperíodo, y que han experimentado ya la primera división, tres horas después de la mezcla con el eyaculado. Algunos huevos no están divididos, ya que la fecundación no ha tenido lugar y degenerarán en corto período de tiempo. 6

Un dato de interés es la cantidad total de huevos producidos por hembra y puesta, que permite comparar la eficacia de fecundación, eclosión y desarrollo de larvas y alevines. Se puede determinar, aproximadamente, tomando una muestra de 100 ml de la cubeta de fecundación después de homogeneizar su contenido agitando suavemente. Esta muestra se diluye hasta 1 litro y se toman 100 ml, cuyo contenido en huevos se determina por conteo al trasluz en tubos de ensayo. El número así determinado se multiplica por 1.000 y se obtiene el número total de huevos de la puesta. El número de huevos en desarrollo se obtiene al restar los que no flotan y se extraen por sifonado.

INCUBACION Los huevos en desarrollo son transferidos a las incúbadoras, donde permanecerán hasta la eclosión, que tiene lugar seis días después. Los tanques de incubación suelen tener una capacidad de

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Fig. 3.-Huevos de rodaballo en su primera división. Los huevos no fecundados muestran indicios de degeneración en la periferia de la célula.

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30 a 140 litros. En 80 litros se puede realizar la incubación simultánea de hasta 500.000 huevos. Existen diversos diseños de tanques, con modificaciones sobre el modelo que se describe a continuación y que se muestra esquemáticamente en la figura 3: - Cubeta de polietileno con fondo cónico, de 80 litros, preparada para salida del contenido por la parte inferior. - Entrada de agua al nivel superficial, con drenaje a través de una tubería central perforada y protegida por una red de 300 µ. Una segunda tubería dentro de la anterior obliga al agua a un drenaje a nivel superficial regulando el nivel de recirculación. - Aireación a través de un anillo perforado situado en la base del tanque, con lo que se crea una corriente de burbujas que evita la adhesión de los huevos al 61tro de drenaje. Recirculación de agua por una bomba sumergible situada en un tanque de 500 litros y con un filtro de 5 µ, que abastece a ocho tanques de incubación. En algunos modelos no se recircula el agua, siendo conveniente la adición de antibióticos. - Regulación de la temperatura del agua a 15-16°C mediante un calentador de inmersión controlado por un termostato.

Fig. 4.-Esquema de un incubador (A) y detalle del sistema de aireación y drenaje (B). Las flechas con[inuas indican flujos de agua, y las discontinuas, flujos de aire.

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Este sistema permite una limpieza diaria del tanque, retirando los huevos muertos (blancos y que no flotan), sifonando el fondo tras permitir su decantación al cortar la aireación unos minutos. Otra posibilidad es elevar el sistema de drenaje hasta permitir la salida de los huevos muertos por arrastre a través del orificio del fondo del tanque. La salinidad debe ser regulada para asegurar la flotabilidad, pudiendo ser incrementada hasta 35-36°/,N,. No obstante, algunos autores encuentran buenas tasas de eclosión con salinidades del 15-20°%^„ si bien las mejores tasas de larvas viables se alcanzan para salinidades del 25-35"/,x,. Una salinidad del 5°%x^, resulta letal para los huevos. La duración de la incubación puede ser modificada por la temperatura a que se desarrolla el proceso. Si se toma como punto de referencia la temperatura de 16°C, se ha observado un retraso de la eclosión de 130 horas cuando se incuba a 10°C, así como un adelanto de 33 horas cuando la temperatura de incubación es de 20°C. Las mejores tasas de eclosión se obtienen con temperaturas de incubación entre 14,5 y 17,5°C. Por debajo de ] 0°C se produce un rápido aumento de la mortalidad de los huevos. Las incubadoras pueden ser sometidas a iluminación natural o a iluminación artificial (1.500-2.000 lux) durante un tiempo de 8 a 10 horas diarias. Durante el período de incubación se pueden transportar los huevos sin daños durante períodos de hasta 24 horas. El transporte se realiza en bolsas de plástico, selladas y con oxígeno, a una densidad de 500 huevos por litro. El período más favorable es en mitad de la incubación (días 3-4), cuando se ha superado el estado de mórula y se alcanzan los de gástrula y neúrula. No obstante, ello implica una pérdida importante de huevos, que puede alcanzar el 66% tras enfriamiento a 5°C durante 48 horas, además de sufrir un retraso de 44 horas en la eclosión. En la figura 5 se pueden observar huevos que han experimentado la segunda división, presentando cuatro células con una disposición simétrica. En la figura 6 la tercera división ha tenido lugar y pueden observarse huevos con 6 u 8 células, con 9

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Fig. 5. -Huevos de rodabalio en segunda división, presentando cuatro células. Se observan algunos huevos que no han sido fecundadn;.

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Fig. 6.-Huevos de rodaballo en tercera división. Se observan grupos de 6 células yue corresponden a núcleos embrionarios de 8 células.

una disposición irregular a causa de la falta de uniformidad en la velocidad de división de las células hijas. Las fases de segunda y tercera división se alcanzan aproximadamente 5 y 7 horas después de la fecundación. Las figuras 7 y 8 muestran fases del desarrollo embrionario correspondientes a los días 4 y 5 de incubación, en los que es posible identificar órganos como corazón, ojos y sistema nervioso. La figura 9 muestra la eclosión (hatching) por ruptura de la membrana externa del huevo y salida de la larva, que conserva un voluminoso saco vitelino que le permite alimentarse en los primeros días de su vida.

DESARROLLO DE LARVAS Y ALEVINES Las larvas de rodaballo recién eclosionadas alcanzan una longitud de 2,2 a 3,0 mm. El saco vitelino posee un glóbulo simple de grasa que asegura la flotabilidad de la larva cabeza abajo, 10

cerca de la superficie del agua durante las primeras 6-12 horas de vida. En este período las larvas son bastante inactivas, aunyue ocasionalmente realizan enérgicos movimientos de contracción de la cola. La larva es inicialmente simétrica. El saco vitelino dura 3-4 días tras la eclosión, durante los que es reabsorbido y transformado en tejido corporal, dando lugar a cambios morfológicos en cabeza, ojos, branquias e intestinos. A partir de aquí, consumido el vitelo, la larva se denomina alevín. En una segunda fase de desarrollo, de 8-10 días de duración, se produce el desarrollo del intestino y de la vejiga natatoria, apareciendo espinas óseas en los opérculos y en torno a la órbita de los ojos. En una tercera fase, con una duración de 2-3 días, aparecen las espinas de la aleta caudal (las larvas miden menos de 6 mm). En la cuarta fase se inicia la metamorfosis, que implica asimetría y emigración del ojo derecho hacia arriba para situarse en posición dorsal, al tiempo que se desarrollan las espinas de las aletas caudal, anal y dorsal. La fase cuarta dura unos 10-15 días y es seguida por una quinta

Fig. 7.- Aspecto embrionano en el día 4 de incubacióa Se otuervan 2 huevcn en degeneración.

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Fig. 8.-Desarrollo embrionario en día 5 de incubación.

Fig. 9.

Eclosión en día 6 de incubación.

fase en la que se completa la metamorfosis, caracterizada por la situación del ojo derecho en la cara dorsal, pérdida de pigmentación de la cara ventral, extensión de la aleta dorsal hasta la altura de los ojos, reabsorción de la vejiga natatoria y reabsorción de las espinas de la cabeza, al tiempo que se osifican los huesos craneales. El período que transcurre hasta la metamorfosis está en parte bajo control genético y en parte afectado por factores ambientales, como temperatura, dieta y calidad del agua. En consecuencia, se han encontrado distintas edades (45-90 días) y tamaños (22-45 milímetros) para que se complete la metamorfosis. Para temperaturas elevadas de cría (22°C) la metamorfosis se inicia entre IS y 35 días, mientras que a 13-18°C comienza a 45-75 días de edad, con una gran variabilidad individual. Una vez culminada la metamorfosis y los cambios de pigmentación, el alevín se limita a incrementar su tamaño, sin cambiar de apariencia. La portada muestra una larva de rodaballo dos días después 12

de la eclosión, correspondiente a la primera fase de desarrollo. La figura 10 corresponde a un alevín que ha iniciado la metamorfosis y la 11 a un alevín en una fase avanzada de metamorfosis. ALIMENTACION DE ALEVINES La transferencia desde las incubadoras a los tanques de cría se realiza antes de dos días después de la eclosión. La temperatura del agua está regulada para mantenerla a 20°C (18-24°C). Se aporta iluminación continua o 18 horas de luz/día (300-2.000 lux). Un tanque de 2.000 a 3.000 litros permite la cría de larvas procedentes de una misma fecundación, pudiendo albergar a los 35 días a un máximo de 60.000 alevines. No es necesario renovar el agua, siempre que se eliminen los sedimentos y alevines muertos y que la aireación asegure una saturación de oxígeno al 95-100%. Los tanques de color negro parecen facilitar la captura del alimento. El saco vitelino asegura la nutrición de la larva durante 2-3 días, por lo que se hace imprescindible suministrar alimento para la supervivencia del alevín a partir del día tres.

La alimentación se basa en el aporte de presas vivas. En una primera fase se suministran rotíferos ( Brachionus plicatilis), comenzando el día 3 y finalizando entre los días ]0-15 tras la eclosión. Esta fase puede reducirse hasta el día 8-9 o retrasarse hasta el día 20 en función del crecimiento de los alevines. En una

Fig. 10.- rAlevín en inicio de mctamorfosis.

Fig. I I.- Alevín en fase avanzada de metamorfosis.

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segunda fase los rotíferos son sustituidos por Artemia nauplii, que se introduce en la dieta a partir del día 8-10, con una sustitución progresiva. El desarrollo de los rotíferos requiere el cultivo de algas como fuente de alimentación. Las más utilizadas son Isochrysis galvana y Nannochloris atomus. Las algas se multiplican a partir de cultivos originales durante períodos de 7 semanas en matraces de un litro, para ser transferidos posteriormente a matraces de 5 litros y a bolsas de plástico de gran tamaño (400 litros) con aireación, desde donde se utiliza. Además de servir como elemento nutritivo, las algas permiten el oscurecimiento de los rotíferos, facilitando su identificación por parte de los alevines. A la vez se añaden 4 litros de cultivo de algas/día al tanque de cría para mantener la calidad del agua, reciclando el amoníaco y el anhidrido carbónico. La cantidad de rotíferos a administrar se determina en función del número de larvas presentes y de los restos de alimento no consumido, procurando ofrecer una concentración de 3-5 rotíferos por ml. Los rotíferos deben ser enriquecidos con ácidos grasos de cadena larga, que son añadidos junto con el cultivo de algas dos horas antes de la alimentación de los alevines. Ello se debe a que el rodaballo es incapaz de desaturar los ácidos grasos linoleico y linolénico, precursores del araquidónico y docosahexanoico, ácidos grasos insaturados de 20 y 22 átomos de carbono. Por tanto, la dieta (en este caso rotíferos) debe aportar estos elementos, ya que el alevín no puede utilizar directamente los contenidos en las algas. El aporte de artemia se realiza a partir de cultivos diarios de huevos (cistes) que se incuban a 26-30°C en agua de mar con aireación. La eclosión se produce unas 26 horas después y deben ser utilizados antes de 6 horas, para aprovechar al máximo su valor nutritivo. La incubación de 30 gramos de huevos de artemia se traduce en la eclosión de unos 4 millones de nauplios. Los huevos no eclosionados se retiran antes de suministrar la artemia. El suministro se realiza contando previamente los restos para ofertar una concentración de 2-3 nauplios por inl. Por debajo de un nauplio por mi se observa un drástico descenso del consumo. 14

La supervivencia de alevines desde la eclosión al fln de la metamorfosis es muy variable. Se han obtenido supervivencias entre el 0% y el 50% para idénticas condiciones, sin que las razones de esta variabilidad sean conocidas. Una tasa media del 5% de supervivencia puede ser considerada como satisfactoria. La mortalidad se distribuye en dos períodos críticos; en torno al inicio de la alimentación (días 2 a 7) y en torno al período de transición rotíferos-artemia (días 12 a 15). Sobre una mortalidad media de un 95%o se encuentra que un 30% de larvas mueren justo después de la transferencia al tanque de cría (días 2 y 3), un 20% no aceptan los rotíferos y mueren entre los días 4 y 7, y un 45% perecen por no aceptar la artemia entre los días 12 y 15. El transporte de los alevines puede ser realizado sin problemas, después de la metamorfosis, en bolsas de polietileno conteniendo 2-4 litros de agua, infladas con oxígeno y selladas. Se .debe evitar la formación de rincones en los que los alevines puedan quedar aprisionados. Normalmente el transporte se realiza tras el destete, cuando los alevines alcanzan un peso de 2 gramos y un tamaño de 4 a 5 cm, siendo aconsejable dejar de suministrar alimento 2 a 3 días antes para que se vacíe el aparato digestivo y se reduzca la expulsión de heces y metabolitos contaminantes. Los alevines se transfieren en grupos de 200 a bolsas de 4-6 litros, donde pueden permanecer sin comer 4-5 días sin problemas, siendo alimentados a la llegada al punto de destino.

MEJORA DE LA TECNICA Si bien la producción de alevines de rodaballo es hoy una técnica rutinaria utilizada a escala masiva. los resultados distan de ser satisfactorios. Por una parte, la mortalidad es muy elevada. Por otra, la repetibilidad de los resultados para las mismas condiciones de cultivo es muy baja, lo que indica que no se controlan factores que inciden de modo importante en la supervivencia. Los esfuerzos para mejorar los resultados deben orientarse hacia los siguientes apartados, algunos de los cuales se han traducido ya en líneas de investigación: IS

- Manipulación de reproductores combinando fotoperíodo e inducción hormonal de la maduración y puesta, mejorando la calidad de huevos y esperma. Conservación de gametos por refrigeración y criopreservación. Reducción de la mortalidad mejorando la dieta por suplemento de ácidos grasos. - Incorporación de copépodos (Eurytemora affmis) en lugar de rotíferos y artemia, a causa de su mayor contenido en ácidos grasos insaturados de 20 y 22 carbonos. - Desarrollo de dietas secas microencapsuladas, reduciendo 0 eliminando la utilización de alimento vivo. La investigación en estas áreas es una vía para la obtención autóctona de alevines en buenas condiciones de rentabilidad. España está objetivamente interesada en cerrar el ciclo de esta producción prometedora, controlando directamente la oferta de alevines para granjas de engorde y neutralizando su dependencia de las técnicas desarrolladas fuera de nuestro país.

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