Guía de Calibración del Motic Images Plus 2.0ML & Motic Images Advanced 3.2 “Calibración con punto” Paso 1: Una vez hayamos activado la ventana de captura, seleccionar el modo “auto” en el apartado exposición. “Debemos de tener en cuenta que nuestro criterio sobre la imagen es importante, y que por ese motivo el modo auto exposición no siempre es el mejor ajuste, y que este puede ser corregido/ajustado en modo manual mediante la barra destinada a tal efecto”.

Pasó 2: Realizaremos el balance de blancos, para obtener mejor representación de los colores. Seleccionamos un área sobre la imagen apretando el botón izquierdo del ratón y arrastrando, dentro de esta área no debe de aparecer ningún color (solo luz) y clic en la opción “Aplicar Balance de Blanco”

Paso 3: En el menú de opciones sobre la cámara, clic en “Ajustes Avanzados” y clic en “Tabla de Calibración”. En esta tabla podemos encontrar varios objetivos, estos objetivos que aparecen por defecto en la instalación del software no están calibrados, y por ese motivo lo más recomendable es eliminarlos, para eliminar un objetivo de la tabla lo seleccionamos y “clic en botón derecho del ratón”, aparece la opción eliminar, clic en “eliminar”. *Nunca debemos de eliminar la línea “From_Host” ya que esta realiza un vínculo con la otra tabla de calibración que se utiliza para las mediciones sobre las imágenes ya capturadas.

Paso 4: Para realizar esta calibración, hemos utilizado el microscopio. Lo primero que debemos de hacer, es con la preparación de calibración situarla en el microscopio y enfocar nítidamente con el objetivo que vayamos a calibrar, en este caso 10X y el punto de la preparación de 600 µm, cuando comprobemos en la imagen del PC que está perfectamente enfocado, clic en “calibración” se abrirá una nueva ventana, capturando automáticamente la imagen, ahora Clic en la “lista de objetivos” y seleccionaremos el objetivo que hemos utilizado (10X), clic en la lista de “Diámetro” y seleccionaremos el diámetro del punto que hemos escogido para la calibración (600 µm), y clic en “Aceptar”.

Paso 5: Se abrirá una nueva ventana, en el apartado “New Sing” introduciremos el nombre del nuevo objetivo que vamos a crear, en este caso como ejemplo “10X MOTIC” y clic en “Guardar”. *Después de clic en guardar, es muy importante que rápidamente antes de seleccionar cualquier otra función capturemos una imagen, clic en” capturar” (esto hará que la calibración realizada de traspase a la tabla de calibración II que se utiliza para las mediciones sobre las imágenes ya capturadas “según paso 11”) realizando este paso evitaremos calibrar nuevamente la tabla II.

Paso 6: Comprobaremos que el punto utilizado para la calibración aparece en su totalidad coloreado en verde, esto significa que el patrón ha sido correctamente memorizado.

Pasó 7: Si el punto de calibrado después del procedimiento de calibración (según muestra esta imagen) no aparece en su totalidad en verde, esta calibración seria incorrecta, y deberíamos de intentar sobre la imagen que muestra en pantalla realizar los ajustes necesarios para que el punto obtenga el máximo contraste en la imagen. Realizar de nuevo el procedimiento de calibración.

Pasó 8: Clic en “Tabla de Calibración”, podremos observar que el nuevo objetivo creado aparece en la tabla “10X MOTIC”. Seleccionamos este objetivo y ya podemos insertar escalas o cuadriculas sobre la imagen a tiempo real, siempre y cuando utilicemos este objetivo y previamente lo hayamos seleccionado en la tabla.

Paso 9: Clic en “regla” y Clic en “Ajuste”, se abre una nueva ventana en la que podemos configurar según nos interese las dos escalas, podemos seleccionar la medida, color, grosor y tamaño de la letra. (En este caso seleccionamos 600 µm que es el que hemos utilizado en la calibración del objetivo de 10X).

Paso 10: Podemos comprobar, ya que en este caso el punto utilizado en la calibración era de 600 µm, que las escalas horizontal y vertical coinciden perfectamente con la medida del punto. Una prueba más de confirmación que la calibración se realizo correctamente. *Para desplazar las barras nos situaremos encima de esta con el cursor, clic, mantener y “arrastrar” hasta el lugar que deseamos colocar.

Paso 11: Ahora veremos cómo realizar mediciones sobre las imágenes ya capturadas. Cerrar Ventana de Captura. Deben de recordar que en el paso 5, justo después de la calibración, mencionaba que era muy importante que directamente capturásemos una imagen, para que la calibración que habíamos realizado se traspasase a la tabla II de mediciones y no tuviésemos que realizar nuevamente la calibración de la segunda tabla. Ahora utilizaremos la tabla II. Esta imagen ya capturada que es la del punto de 600 µm, hacemos “clic sobre la imagen” y esta pasara a estar activa, en ese momento nos aparecerá una nueva barra de opciones inferior, clic en “mediciones” y podremos comprobar que el objetivo creado anteriormente durante la calibración “10X MOTIC” nos aparece en la lista (tabla II). Clic en “10X MOTIC”.

Paso 12: Clic en el icono de mediciones “Línea”.

Pasó 13: Para realizar la medición de la longitud total del punto, clic mantener y “arrastrar” hasta el lugar que deseamos finalizar la medición. Podemos comprobar nuevamente en la medición que el resultado de esta es perfecto.

NOTAS: Estos pasos que hemos mostrado en la calibración de ejemplo, deberá de realizarlos nuevamente para cada uno de los objetivos de su microscopio o estereomicroscopio. También deberá de tener en cuenta que el punto de referencia para la calibración siempre deberá de aparecer en su totalidad dentro del área de imagen. Le aconsejamos, que según la preparación de calibración suministrada con su producto digital MOTIC la cual está compuesta de 4 puntos y una escala, utilice estos puntos como referencia para la calibración del software y de los distintos objetivos según la tabla siguiente; Objetivo 4X punto de 1500 µm. Objetivo 10X punto de 600 µm. Objetivo 40X punto de 150 µm. Objetivo 100X punto de 70 µm.