INDICE………………..…………………………………………………………04 RESUMEN……………………………...………………………………………08 ABSTRACT…………………………….……………………………………….09 INTRODUCCION………………………………………………………………10 ANTECEDENTES……………………………………………………………...13 MATERIALES Y METODOS………………………………………………….22
I.
Obtención de la Muestra Microalgal y su Aislamiento…..………………………………………………....22 1. Origen de la cepa…………………..………………………22 2. Clasificación taxonómica………………………………….22 3. Técnicas de colección algal……………….………………22 4. Manipulación de la muestra en laboratorio………..…….23 4.1 Tratamiento del agua de mar…………………………23 4.2 Limpieza y esterilización de material…..……………24 4.3 Medio de cultivo……………………….……………….25 4.4 Adaptación de la especie……………………..………25 5. Aislamiento…………………………………………………..26
1
5.1 Conteo………………………………………...………..26 5.2 Técnica de dilución ……………………………..…….26 5.3 Técnica de lavado de células…………….………….27
Instalación de Acuarios....………………….…..……………..30 1. Lugar de ejecución……………………..………………….31 2. Limpieza…………………………………………………….31 3. Especie elegida Cheiodactylus variegatus…………….. 31 4. Instalación…………………………………………………..31 5. Acondicionamiento
Realización de las Pruebas Mediante la Técnica de Agua Verde………………………………………..……………..……34 1. Acuarios de tratamiento………………….………………..34 2. Acuario control…………………..………………………….35 3. Parámetros físico-químicos……………………………….35 3.1 Oxígeno………………….……………………………..35 3.2 pH………………………………………………………..35 3.3 Amonio y nitritos………………...……………………..36 3.4 Temperatura……………………………………………36 4. Procedimiento/Registros por día………………………….36
2
4.1 Día 1……………………………….……………………36 4.2 Del día 2 al día 4……………………..………………..37 4.3 Día 5……………………………….……………………37
V.
Análisis Microbiológicos………...…………………….……….38 1. Colimetría………………………..………………………….38 1.1Preparación del Medio de cultivo y batería de tubos…………………………………………………...….38 1.2 Dilución de las muestras………..…………………….39 1.3 Siembra…………………………...…………………….39 2. Conteo de colonias………………….……………………..40 2.1 Incubación 37ºC………………....…………………….40 2.2 Incubación 20ºC………………….……………………40 3. Aislamiento de Vibrio……………………………………..41 3.1 Primera siembra. Caldo APA…………..……………..41 3.2 Segunda siembra. Agar TCBS………………………..42 3.3 Citocromo oxidasa……………………..………………42 3.4 Aislamiento. Agar TSA…………………………..…….43 4. Pruebas bioquímicas………………………………………43
VI.
Mediciones Morfométricas…………………………………….44
VII.
Estadística…………………………...…………………..……..44
RESULTADOS………………………………………………..………………..46 1. Adaptación y aislamiento………………………………….46 2. Flujo de cultivo……………………………………….……..47 2.1 Cultivo inicial……………………………………………47 2.2 Cultivo intermedio………………………………….…..47
4. Análisis microbiológicos………………………...…………49 4.1 Colimetría ………………………………………………49 4.2 Conteo de colonias……………………………..……..50 4.3 Identificación de Vibrio………………………………..50 4.4 Crecimiento y sobrevivencia………………………....51 DISCUSION…………………………………………………………………….53 CONCLUSIONES……………………………………………...………………60 REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA…..…………………………………………61 ANEXOS………………………………………………………………………..67
4
RESUMEN
Las microalgas han sido descritas como microorganismos con capacidad purificadora y en algunos casos actividad antimicrobiana. El género Tetraselmis es conocido por poseer dicha actividad, la cual se puso a prueba en este trabajo mediante la técnica de agua verde, que consiste en agregar cultivos microalgales a elevadas densidades celulares en cultivos de diferentes organismos acuáticos, en este caso fueron juveniles de Cheilodactylus variegatus “pintadilla”, y la especie microalgal fue Tetraselmis contracta. El experimento contó con cuatro acuarios de diez individuos cada uno, donde tres acuarios fueron réplicas del tratamiento con microalgas y uno sirvió de control sin microalgas. Se realizaron siete pruebas consecutivas en las cuales se midieron los parámetros físico-químicos (oxígeno, pH, amonio, nitritos, temperatura) en todas de ellas, y análisis microbiológicos en las últimas cuatro. Los resultados mostraron poco aumento de los niveles de amonio de los tratamientos con diferencia significativa (p