UNIDAD DE EXPERIMENTACION ANIMAL CENTRO DE INSTRUMENTACIÓN CIENTÍFICA CIBM

UNIVERSIDAD DE GRANADA Informe Técnico y Sanitario

SPEA/CIC/UGR. Noviembre, 2010

Informe Técnico-Sanitario Introducción Animales - Procedencia - Especies - Identificación Condiciones ambientales en módulos de alojamiento. - Ventilación - Temperatura - Humedad - Iluminación - Presión diferencial - Niveles de amoniaco Cuidados - Habitáculo - Alimentación - Agua - Camas - Limpieza, desinfección y esterilización - Programa Sanitario - Cuarentena Destino de los animales Registros Emitido por: Dña. Ana Nieto. Veterinaria. Colegiado nº 949. Responsable de Bienestar y Sanidad del Servicio de Producción y Experimentación Animal (SPEA). D. Jesús M. Zúñiga, responsable de la SPEA/UGR UEA/CIBM UNIVERSIDAD DE GRANADA

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INTRODUCCIÓN La investigación en el área biomédica, requiere del estudio de diversos parámetros y variables en los animales utilizados como biomodelos. Dadas las técnicas cada vez más sofisticadas y costosas que se emplean, el riesgo de dispersión de los datos por factores que no se deban al propio desarrollo de la aproximación experimental a los objetivos, debe ser minimizado. En este sentido el desarrollo de animales de experimentación estandarizados, homogéneos, definidos y cada vez más particularizados para líneas concretas de investigación es cada día más necesario. El mantenimiento de este tipo de animales solo puede ser posible en instalaciones que reúnan una serie de requisitos y barreras que salvaguarden estos animales de afecciones que puedan alterar su respuesta a los diferentes estímulos y por tanto puedan poner en peligro las investigaciones que con ellos se desarrollan. Por otra parte, la legislación en el área de sanidad y bienestar animal está cambiando paulatinamente tanto por el proceso de adaptación y acercamiento de nuestro ordenamiento jurídico al de los países de nuestro entorno, como por consideraciones éticas.

ANIMALES Especies Los animales que se mantendrán y producirán en la UEA se han indicado en el Anexo .3. (Memoria Descriptiva Procedimientos), fundamentalmente diferentes cepas, líneas o variedades genéticas de ratas, ratones y conejo. Se ha planteado una instalación de acuarios para pez Cebra. Sin embargo es difícil concretar las cepas de ratones fundamentalmente transgénicos, que la Unidad va a albergar, puesto que está condicionado por el tipo de investigaciones que se llevarán a cabo por los diferentes usuarios. Se estima en unas 40 líneas diferentes. Procedencia Todos los animales que no son producidos en la UEA, son y serán adquiridos de empresas especializadas autorizadas que suministran animales específicamente para investigación y otras finalidades científicas y con categoría sanitaria de animales Libres de Gérmenes Patógenos Específicos (SPF) de la especie para el caso de los roedores y lagomorfos. Todos los lotes deben ser enviados con certificado sanitario para su aceptación. En un segundo nivel parte de los animales provendrán de otros Centros de investigación y/o Universidades, con diferentes grados de calidad sanitaria, que serán necesario someter a control y/o rederivación en la correspondiente Cuarentena, antes de su entrada final a la Barrera. Dependiendo del número de animales que se produzcan y de las características genéticas de la cepa (cepas consanguíneas o no), se realizará un recambio o renovación genética periódica de los progenitores, bien adquiriendo sólo machos o adquiriendo tanto machos como hembras. Esto afecta principalmente a Roedores.

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Métodos de Identificación Roedores:  Identificación en grupo: para animales en producción, mediante etiqueta en la propia jaula (tarjeta de cartón en placa de inox.).  Identificación individual en experimentación: rotulador indeleble en cola, ácido pícrico diluido en dorso), numeración o pequeño circulo tatuado en oreja. Lagomorfos: los conejos se solicitan tatuados en la cara interna de la oreja con número identificativo. No se producirán en la UEA. Se realiza y realizará un control de las existencias, cruces, nacimientos y bajas, anotadas en las bases de datos específicas del software ANYBIO (Programa de Control y Planificación). Ver en Registros

CONDICIONES AMBIENTALES DEL ALOJAMIENTO DE LOS ANIMALES En el Anexo .2. se resumen las características técnicas de los sistema de climatización que garantizan las condiciones de ambientales fundamentales y se hace mención a las otros parámetros ambientales controlados. Existe un sistema de control de las variables ambientales, Control ambiental 

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Los valores de Tª y HR% permanecen dentro de un estrecho rango de 20 + 2 ºC y 45 + 5 %. En la actualidad existe un control de lectura continua mediante sondas conectadas a DELTA-T LOGGER con lectura en software LOGGER. Conexión a grupo electrógeno. Al menos 3 veces/semana se contrastan valores al azar en unos 20 puntos mediante termo-higrómetro digital. El equipo de climatización: dispone de un contrato de mantenimiento con garantía de reparación las 24 horas. Los niveles de luz se miden mediante luxómetro. Al menos 1 vez/mes. Diferentes puntos de muestreo. Los niveles de ruido mediante sonómetro. Al menos 1 vez/2 meses. Diferentes puntos de muestreo. En puntos localizados de los modelos experimentales existen sondas de medición del nivel de NH3 Todas las variables ambientales se recopilan y registran en tiempo real, mediante un software (sistema Demótico).

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CONDICIONES DE PRODUCCIÓN Y MANTENIMIENTO - Cepas no consanguíneas: sistema de cruce rotativo (Poyley, consanguinidad 1%), - Cepas isogénicas y consanguíneas: cruce hermano x hermana (en "línea paralela", "línea sencilla"). Líneas híbridas: se mantiene la F1 evitando cruce entre híbridos. - Líneas mutantes: dominante cruce al azar ; recesiva (herno x herna) colonia primaria, se parte de lotes de reproductores procedentes de empresas privadas, con categoría certificada de libres de gérmenes patógenos(SPF) y mantenidos en condiciones de Barrera Tipo-II para animales SPF (ILAR). Condiciones Sanitarias: controles propios según lo establecido por FELASA (ver más adelante).

Habitáculo Los animales son y serán alojados en jaulas dependiendo de la especie y edad del animal, teniendo en cuenta las recomendaciones del Consejo Europeo del 18 de marzo de 1986. Según la tabla adjunta Fuente: Peso (g) Ratón > 20 Rata < 200 Gerbil < 40 Hámster < 60 Cobaya < 200

ETS 123, Anexo .A., 2000 cm2 cm 330 12 800 18 1200 18 800 14 1800 23

Superficie/animal cm2 60 200 150 150 200

Tabla .5. Requerimientos de espacio mínimo para roedores en stock o durante experimentación. Superficie (cm2) y altura (cm) mínima de la cubeta.

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Todos los animales, excepción hecha de los conejos, se alojan en jaulas de makrolón, APEC o polisulfano limpias y autoclavadas, con una superficie acorde con el peso del animal y el número de animales por jaula. Estas jaulas tienen una rejilla en su parte superior por donde se suministra el pienso y donde se introduce el chupón del biberón que contiene el agua. Se priorizan las condiciones de bienestar, estableciendo grupo harmoniosos y evitando conflictos de jerarquía . En el caso de ratones se añaden sistema de madrigueras e igloo

Los conejos están alojados en jaulas de acero inoxidable autoclavable dispuestas en estanterías fabricadas en igual material inoxidable con guías para la sujeción de las jaulas y bandejas de recogida. Conejos de gran tamaño para la obtención de complejo antígeno-anticuerpo se mantienen en jaulas doble. Los animales especialmente sensible a agentes patológicos (como inmunodeficientes), o los infectados experimentalmente, son introducidos en armarios aisladores dentro de sus jaulas, realizándose el cambio de la cama de estos animales en cabinas de flujo laminar.

Igualmente disponemos de sistema de aisladores y sistemas de Racks microventilados, para garantizar la ausencia de patógenos y contaminaciones cruzadas entre diferentes cepas de ratón.

Alimentación Todo el alimento que se suministra a los animales es pienso adquirido a casas comerciales autorizadas y adecuado para a la especie y características del animal. El pienso en el caso de los roedores es pasteurizado previamente, para prevenir el contagio de cualquier enfermedad o parasitosis a través del mismo.

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Ciertas líneas de investigación pueden requerir del uso de dietas con ciertas características especiales, que se fabrican en la Unidad de Producción de Dietas existente en el Servicio. Generalmente la comida se suministra ad libitum a no ser que la experimentación que se esté llevando a cabo aconseje otro tipo de suministro. Este es el caso de los animales mantenidos en envejecimiento, sometidos a restricción calórica (40% o 60% ) o en estudios de actividad metabólica oxidativa. Periódicamente se hace análisis proximal de contraste y vitaminas (A y D3), para verificar su adecuado estado nutricional. Igualmente se hacen análisis microbiológico pre y postpasteurización.

Agua El agua suministrada es potable, de la red de suministro. Es filtrada por filtros de porosidad decreciente y en último término pasa por un tubo de luz ultravioleta para eliminar posibles gérmenes. Se verifica periódicamente su estado microbiológico y es tratada mediante sistema de osmosis inversa previamente descalcificada. Se somete en todos los casos a un proceso de esterilización en el interior de autoclave de vapor. El agua se dispensa en los biberones de makrolón autoclavados, de forma que los animales siempre tengan agua fresca y abundante. Camas La cama consiste en virutas de madera especialmente tratadas para este propósito. Sufre diferentes tratamientos para evitar que contengan polvo y para maximizar su grado de absorción de purines. Toda la viruta que se pone en contacto con los roedores, es esterilizada en autoclave de vapor para eliminar cualquier agente infeccioso o insectos que pudiera contener. En el caso de hembras pre-parturientes de Roedores, se les proporciona viruta especial para la realización de nido. En el caso de los conejos, estos no reposan sobre cama sino sobre el suelo de rejilla de la jaula. Las deyecciones van a parar a la bandeja inferior que lleva papel absorbente o viruta. Limpieza, desinfección y esterilización La limpieza de las jaulas y biberones se realiza en Lava-racks con detergente y de rivado de ácido cítrico, biodegradables y atóxicos para los animales. Se usan otros desinfectantes fundamentalmente derivados de peritrinas y amonios cuaternario. Existe un control periódico de la dureza del agua realizado por la propia firma suministradora de los detergentes para seleccionar así los agentes anti-calcáreos que haya que disponer en el lavaracks.

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Por otra parte existen en la zona de limpieza pilas de inox para la limpieza y desinfección de materiales previos a su introducción en el lavarcks y autoclaves. El Área de limpieza o técnica comunica con los pasillos de la Zona de Mantenimiento y zona Experimental por sendas SAS para extracción del material sucio. La limpieza y desinfección de todos los alojamientos destinados a los animales así como de las estanterías donde se encuentran las jaulas y demás aparatos se lleva cabo por el personal al cuidado de los animales. Periódicamente se realizan desinsectaciones y desinfecciones mediante termonebulización parciales en la zona de animales y zonas de limpieza. Trimestralmente se realiza un vacío sanitario, sin presencia de animales, de los diferentes módulos, realizando una limpieza y desinfección en profundidad y posterior aplicación de desinfección absoluta mediante H2O2 en medio gaseoso mediante el equipo Clarus. Todas las normas de higiene y desinfección para cada tipo de material, así como las referentes a la utilización, mantenimiento, limpieza y calibración de los aparatos y enseres utilizados en la limpieza, desinfección y esterilización, y los correspondientes a la higiene y limpieza que debe observar el personal, se hacen constar por escrito por medio de Instrucciones Técnicas incluidas en el Procedimiento General de la Instalación, según cumplimiento de normas ISO 9001. Cuarentena A pesar de que los animales son adquiridos de centros especializados donde se le someten a rigurosas pruebas sanitarias, es obligado el que todos los animales adquiridos en el exterior sean introducidos en salas especiales separadas del resto de módulos de producción y/o experimentación, durante el cual los animales se aclimatan a su nuevo alojamiento. Los animales de categoría SPF sólo se adquieren de empresas especializadas que adjuntan un certificado sanitario exhaustivo en el que se indican todos los parásitos, bacterias y virus de los que deben estar exentos. Normalmente y ante infecciones de las colonias de origen somos avisados antes de adquirir los animales El tiempo de duración de esta cuarentena es variable dependiendo de la especie animal en concreto, la duración del transporte y la edad del animal, Además, en este periodo de cuarentena los animales serán observados diariamente para comprobar su estado sanitario y se realizarán en todos los casos pruebas diagnósticas de posibles endo y/o ectopárasitos. La presencia de alteraciones o signos evidentes de patología hacen obligado un control previo. Una vez transcurrido el tiempo de cuarentena, estos animales se llevan a través de SAS a los módulos de producción o mantenimiento correspondientes. Destino de los animales La nueva UEA dentro del Servicio de Producción y Experimentación Animal de la Universidad de Granada, debe ser tanto Centro Productor como Usuario de animales de experimentación según las definiciones del Real Decreto 223/1988, por tanto el destino de los animales es diferente según sean utilizados o no en el propio Centro.

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Los animales destinados a ser utilizado en otros Centros Usuarios, se introducen en embalajes especiales de transporte de un solo uso y distribuidos periódicamente, manteniéndose menos de 1 hora en el vehículo. En los casos de transporte superior a 1 hora, se les proporciona un gel hidratante (pienso molido mezclado con gelatina). Se envían por medio de empresas de transporte especializadas. En servicios urgentes - Experimentación Los animales que hayan sido utilizados en los procedimientos en el Centro, y que no hayan sido sacrificados dentro del propio procedimiento experimental, se sacrifican mediante técnicas eutanásicas, según la especie de que se trate y siguiendo las recomendaciones que a este respecto dictan las organizaciones internacionales.

CONEJO Pentobarbital sódico, vía intraperitoneal e intravenosa RATON, RATA, COBAYA:  Sobredosis de barbitúrico Vía IP  CO2 + O2 (sobredosis en cámara cerrada)  Dislocación cervical  Decapitación en guillotina. Todos los cadáveres de estos animales de experimentación se introducen en bolsas hasta su posterior incineración. Restos de animales procedentes de estudios con infecciosos se someten a esterilización previa. Este servicio, de eutanasia y posterior incineración es empleado por otros centros usuarios. Registros La Unidad dispone de un sistema informatizado de recogida de datos y de gestión de las diferentes colonias mediante software según demanda estimada, por software PRODUC. Gestión y organización del stock y mantenimiento por BPL y registro mediante software ANYBIO. Gestión de la colonia/población animal:  Permite identificación colectiva o individual de la población.  Control y archivo de los procesos de mantenimiento y producción realizados  Permite establecer los sistemas de control de partos, destetes, stock de renovación y selección de reproductores según modelos experimentales (reubicaciones, destinos, cruces, partos, destetes).  Permite la reconstrucción de la historia un animal durante su permanencia en el Centro: origen, parentesco, controles rutinarios, reubicaciones, cruces, destino.  Seguimiento y control de los lotes experimentales (destino, tratamiento, eutanasia).

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Gestión de la población animales (salidas): Control de archivos de los servicios prestados por el Centro de producción a los investigadores con codificación del tipo y número de animales utilizados según el art. 13 de la Directiva 86/609/CEE, correspondiente al control estadístico.  Determinación de los animales asignados a un investigador, con datos de sus ubicaciones.  Generación de archivos y resúmenes temporales utilizables en otras aplicaciones de gestión de información antes de ser enviada a la autoridad competente. Control de acceso al programa: 

Control y archivo personalizado y codificado de las operaciones realizadas . Selección de usuarios con acceso a los módulos de aplicación. Archivos históricos, donde se incluye la información enviada a la autoridad competente, no modificables. Gestión y organización:  

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Establecimiento temporizado y generación de las tareas rutinarias y su validación según BPL. Definición de los PNTs rutinarios y su periodicidad en producción, mantenimiento o investigación. Indicación, una vez establecida, de la periodicidad de cada tarea, con indicación del técnico que debe realizarla, la fecha de ejecución y validación del responsable. Cada PNT incluye un archivo de texto explicativo de cómo debe realizarse. Incluye un apartado donde se recopila toda la información generada por los controles ambientales, sanitarios y screening realizada en el Servicio.

PROGRAMA HIGIÉNICO 1. Controles microbiológicos de superficie Para realizar este control se utiliza equipos de protección individual. Para el control de la carga microbiológica del ambiente y/o superficies, se utilizan portas flexibles con medios de cultivo (laminocultivos) o placas de contacto que tienen medios de cultivo para aerobios (PCA o TBS) y levaduras y hongos (Rosa de Bengala o Saboureaud). Se incubaran en estufa de cultivo a 37º C durante 48 horas, para la valoración de colonias bacteriana y a 25ºC durante 5-7 días para la valoración de hongos y levaduras. Se tomarán las muestras de aquellos lugares en los que la desinfección sea más delicada o en rincones donde la posibilidad de que el desinfectante no haya podido penetrar sea mayor. Los resultados se anotarán en la parte correspondiente del libro de registro siguiendo el modelo detallado en la correspondiente IT. 2. Controles microbiológicos ambientales Como en el control de superficies para realizarlo será necesario utilizar equipos de protección individual. Para el control de la carga microbiológica del ambiente se utilizarán placas de cultivo microbiológicas TSA para bacterias aerobias y Saboureaud para hongos y levaduras y el muestreador MAS-100 ECO. El programa preseleccionado realiza una filtración de 1000 litros de aire en 10 minutos. Las placas de cultivo se incubarán a 37º C durante 48 horas, para la valoración de colonias bacterianas y se prolongará la incubación hasta 5 días a 25ºC para la valoración de hongos y levaduras. El número total de colonias se puede calcular mediante unas tablas en función del número de colonias formadas y los 400 agujeros de filtración del MAC-100 Eco. Los resultados se anotarán en la parte correspondiente del libro de registro siguiendo el modelo detallado en el procedimiento normalizado de trabajo (PNT)

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PROGRAMA SANITARIO En un Centro como el que nos ocupa, destinado a la experimentación animal, la sanidad está basada en la prevención de enfermedades. Sólo en casos excepcionales y con el consentimiento del investigador se realizarán tratamientos antiparasitarios. El animal no recibe tratamiento alguno puesto que estos tratamientos en determinados casos pueden interferir con los ensayos que se estén realizando. La prevención de la aparición de procesos patológicos se lleva a cabo mediante todo el sistema de barreras tanto físicas (sistemas antiinsectos, autoclavado, desinfecciones periódicas, filtración de aire etc.) como referente a la higiene del personal (cambio de vestuario, utilización de guantes, desinfección de manos etc). Los sistemas de barrera existentes en el Centro permiten mantener unas condiciones sanitarias excelentes que posibilitan el que algunos animales sean mantenidos libres de patógenos específicos de la especie o estado sanitario (SPF). Controles Programa Sanitario En un Centro como el que nos ocupa, destinado a la producción de animales de experimentación, la sanidad del animal está basada básicamente en la prevención de enfermedades. El animal, salvo excepciones programadas, no recibe tratamiento alguno puesto que estos tratamientos en determinados casos pueden interferir con los ensayos que se estén realizando. La prevención de la aparición de procesos patológicos se lleva a cabo mediante todo el sistema de barreras tanto físicas (sistemas anti-insectos, autoclavado, desinfecciones periódicas, filtración de aire etc.), como referentes a la higiene del personal (cambio de vestuario, utilización de guantes, desinfección de manos etc.), como organizativas (circuito de los materiales, circuitos del personal, cuarentenas etc.). Los sistemas de barrera existentes en el Centro permiten mantener unas condiciones sanitarias excelentes que posibilitan el que los animales sean mantenidos libres de patógenos específicos de la especie o estado sanitario SPF. El Servicio dispone de una unidad de Biopatología. Se realiza periódicamente un chequeo completo de una muestra de animales de cada módulo a nivel de parásitos internos-externos. Una muestra de animales se somete a necropsia ante posibles indicadores de patología a nivel de órganos o tejidos. Periódicamente se hace análisis de Micoplasma en roedores. Las colonias de cría de roedores, en caso de parasitosis se pueden someter a tratamientos en agua (piperacina e ivermectina)o o en pienso (fenbendazol). La aplicación de antibioterapia si fuera necesaria, se hace siempre que no afecte a resultados experimentales posteriores. En el caso de signos evidentes de patología, o bien se diagnosticara algún proceso patológico que afecte a una colonia de animales se actuará según sea conveniente. En ciertos casos se utilizará esta colonia en procedimientos o experimentos que no se vean afectados en sus resultados por la infección concreta y se procederá a realizar un paulatino recambio de la cepa en cuestión. En otros casos, si la enfermedad detectada es muy contagiosa para el resto de animales de la misma u otra especie, se procede a la eliminación de este colectivo, desinfección, vacío sanitario y renovación de los progenitores de esta cepa concreta. En algunos casos de enfermedades que afectan a rata y ratón, el agente infeccioso puede eliminarse mediante cese de la cría durante un cierto tiempo y utilización de animales inmunes para la creación de la nueva colonia. Y por último, en algunos casos, en animales valiosos y cuando la patología no se transmita por vía placentaria, se procederá a la eliminación del agente etiológico de

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la enfermedad mediante transferencia de embriones o mediante cesárea aséptica previa al parto y adopción de los fetos por madre nodriza sana. Sólo en casos muy concretos, generalmente cuando se trata de animales que por alguna circunstancia sean únicos y por tanto tengan un valor intrínseco muy elevado, se aplica el tratamiento adecuado a la patología concreta que presenten previa consulta con los investigadores interesados. En el caso de los conejos, estos son adquiridos igualmente en empresas que suministran estos animales SPF (libres de patógenos específicos de especie). Igualmente en este caso el control sanitario se basa fundamentalmente en la adopción de barreras que impidan la entrada de los agentes patógenos, aunque en caso de presentarse patología en estos animales se suministra el tratamiento adecuado previa consulta con el investigador involucrado. e realiza periódicamente un chequeo completo de una muestra de animales de cada módulo consistente en: 1. Control de visum Durante el manejo es imprescindible identificar los animales enfermos. Se realizará la observación diaria de los animales para detectar la enfermedad en éstos y actuar con rapidez comunicándolo al veterinario con objeto de reducir o impedir contagios y evitar que el animal sufra. 2. Controles sanitarios 2.1. Agentes a testar. Según las recomendaciones de FELASA, los controles periódicos a realizar son:

RATÓN Agente

Virus Virus de la hepatitis murina Rotavirus murino (EDIM) Parvovirus Virus minute murino Virus de la neumonía murina Virus Sendai Virus de la encefalitis murina (Theiler disease) Virus ectromelia Virus de coriomeningitis linfocítica Adenovirus murino tipo 1 (FL) Adenovirus murino tipo 2 (K87) Citomegalovirus murino Reovirus tipo 3 Otros virus adicionales Bacterias, micoplasmas y hongos Citrobacter rodentium Costridium piliforme (enfermedad de Tyzzer) Corynebacterium kutscheri Mycoplasma spp Pasterellaceae Salmonella spp Streptococci (β Haemolitico (no grupo D) Helicobacter spp Streptobacillus monoliformis Otras bacterias analizadas Parásitos Ectoparásitos (designar especie) Endoparásitos (designar especie) Otros parásitos analizados Lesiones macro y microscópicas observadas.

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Frecuencia Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Anual Anual Anual Anual Anual Anual Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Anual Anual Trimestral Trimestral

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RATA Agente

Vírus Parvovirus de rata Virus Kilham de rata Virus de Toolan H1 de rata Virus de la neumonía murina Virus Sendai Coronavirus sialodacrioadenitis Hantavirus Adenovirus murino tipo 1 (FL) Adenovirus murino tipo 2 (K87) Reovirus tipo 3 Otros virus adicionales Bacterias, micoplasmas y hongos Bordetella bronchiseptica Costridium piliforme (enfermedad de Tyzzer) Corynebacterium kutscheri Mycoplasma spp Pasterellaceae Salmonella spp Streptobacillus moniliformis Streptococci (β Haemolitico (no grupo D) Streptococcus pneumoniae Helicobacter spp Otras bacterias analizadas Parásitos Ectoparásitos (designar especie) Ácaros Endoparásitos (designar especie) Trichomonas Ascaris Helmintos Otros parásitos analizados Lesiones macro y microscópicas observadas

CONEJOS Agente

Frecuencia Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Anual Anual Anual Anual Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Trimestral Anual Trimestral Trimestral

Frecuencia

Virus Virus de la enfermedad Hemorrágica Trimestral Rotavirus del conejo Trimestral Otros virus analizados Bacterias Bordetella bronchiseptica Trimestral Clostridium piliformis (enfermedad de Tizzer) Trimestral Dermatofitos Trimestral Pasterella multocida Trimestral Otras Pasterellas Trimestral Salmonella spp Trimestral Otras bacterias analizadas Parásitos Ectoparásitos (designar especie) Trimestral Endoparásitos (designar especie) Trimestral Trichomonas /Ascaris/ Helmintos Encephalitozoon cuniculi Trimestral Otros parásitos analizados y Lesiones macro y microscópicas observadas

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Además, se realizará un control sanitario de los animales que entren en las instalaciones durante el periodo de cuarentena cuando su origen y la información del certificado sanitario no sean de confianza. Si la frecuencia con la que se introducen animales en la Unidad Experimental es alta, se recomienda que la monitorización sea también más frecuente, incluso de forma mensual, con un número inferior de animales: entre 3-5. 2.2. Tamaño de la muestra El tamaño de la muestra depende en gran medida de la capacidad infectiva del agente, del sistema de alojamiento y del tipo de animales estabulados. Así, en general se emplean 3-5 animales por unidad microbiológica para realizar los análisis en un sistema de barrera convencional. Los animales se mantendrán en el módulo un mínimo de 4 semanas. En el caso de sistemas de estabulación con aisladores o cuando por su elevado valor intrínseco no se puedan utilizar animales de la misma colonia, se utilizarán centinelas cuya viruta de las camas, alimento y biberones han estado en contacto con los animales a controlar. Son animales de una fuente externa, testados para los agentes infecciosos y preferentemente de la misma base genética. El número puede ser de 3-5 animales, prestando una especial atención en el caso de los axénicos (sin flora microbiana asociada) y gnotobióticos (con flora microbiana conocida). 2.3. Pruebas Los análisis realizados serán una necropsia completa, ordenada y sistemática y la toma demuestras para análisis serológicos (virus y micoplasma), cultivos (bacterias) y parasitología. 2.4. Resultados Los resultados de las necropsias y los estudios realizados serán recogidos en los correspondientes informes e incluidos en el libro de registro. Cuando mediante el uso de las técnicas establecidas para los controles se obtenga un resultado positivo que afecte a una colonia de animales, será necesario confirmar este positivo con una técnica alternativa distinta de la primera. Si es también positivo, se actuará según sea conveniente. En ciertos casos se utilizará esta colonia en procedimientos o experimentos que no se vean afectados en sus resultados por la infección concreta y se procederá a realizar un paulatino recambio de la capa en cuestión. En otros casos, si la enfermedad detectada es muy contagiosa para el resto de animales de la misma u otra especie, se procederá a la eliminación de este colectivo, desinfección, vacío sanitario y renovación de los progenitores de esta cepa concreta. En algunos casos de enfermedades que afectan a rata y ratón, el agente infeccioso puede eliminarse mediante cese de la cría durante un cierto tiempo y utilización de animales inmunes para creación de la nueva colonia. En algunos casos de animales valiosos y cuando la patología no se trasmita por vía placentaria, se procederá a la eliminación del agente etiológico de la enfermedad mediante cesárea aséptica previa al parto y adopción de los fetos por madres nodrizas sanas. Sólo en algunos casos muy concretos, generalmente cuando se trate de animales que por alguna circunstancia sean únicos y por tanto, tengan un valor intrínseco muy elevado, puede intentarse el tratamiento adecuado a la patología concreta que presenten previa consulta de con los investigadores interesados.

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En el caso de los conejos, estos son adquiridos igualmente en empresas que suministran estos animales SPF (libres de patógenos específicos de especie). Igualmente en este caso, el control sanitario se basa fundamentalmente en la adopción de barreras que impidan la entrada de agentes patógenos, aunque en caso de presentarse alguna patología en estos animales, se podría suministrar el tratamiento adecuado previa consulta con el investigador involucrado. CUARENTENA Según el RD 1201/2005 sobre protección de los animales utilizados para experimentación y otros fines científicos, la cuarentena se realizará incluso en animales que presenten buena salud, como aclimatación. Su duración depende del estrés al que se haya sometido al animal que a su vez depende de la duración del transporte y edad del animal. En general, como recoge el RD 1201/2005, los días son: ESPECIE Ratón Rata Conejo Cobaya

DÍAS 5-15 5-15 20-30 5-15

Estos animales serán introducidos en salas especiales separadas del resto de los módulos. Durante este periodo, los animales serán observados diariamente para comprobar su estado sanitario y se realizarán en su caso las pertinentes pruebas diagnósticas de posibles parasitaciones o infecciones. Una vez transcurrido el tiempo de cuarentena, estos animales se llevan a través de SAS a los módulos correspondientes. DESTINO DE LOS ANIMALES Los animales que hayan sido utilizados en los procedimientos en la Unidad y no hayan sido sacrificados dentro del propio procedimiento experimental, serán sacrificados humanitariamente, según la especie de que se trate y siguiendo las recomendaciones que a este respecto dictan las organizaciones internacionales. Todos los cadáveres de estos animales de experimentación se introducirán en bolsas y serán congelados hasta su retirada por parte de empresa autorizada (CESPA_ECO). REGISTROS La UEA dispondrá de un libro se registro (base de datos de ANIBIO), recogiendo: 1. Animales no utilizados en procedimientos y muertos durante su estancia en el centro y sus causas. 2. Observaciones efectuadas durante el periodo de cuarentena. 3. Resultados de los exámenes periódicos sanitarios o de cualquier otro método de diagnóstico efectuado a los animales. 4. Resultados de las necropsias realizadas. 5. Casos de enfermedad y los tratamientos administrados.

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Firmado: Veterinaria, Responsable de Sanidad Animal (Categoría D2).

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