Guía de Interpretación

3 Petrifilm™

Placas para Recuento de Coliformes Esta guía sirve para familiarizarse con los resultados obtenidos en las placas 3M™ Petrifilm™ para Recuento de Coliformes (CC). Para más información, contactar con el distribuidor oficial de Productos 3M Microbiology. Las placas Petrifilm CC contienen los nutrientes del Violeta Rojo Bilis (VRB) modificado, un agente gelificante soluble en agua fría y un indicador de tetrazolio que facilita la enumeración de colonias. El film superior atrapa el gas producido por la fermentación de la lactosa por los coliformes. • La ISO define los coliformes por su capacidad de crecer en medios específicos y selectivos. El método ISO 4832, que enumera los coliformes por la técnica del recuento de colonias, define los coliformes por el tamaño de las colonias y la producción de ácido en el Agar VRB con lactosa (VRBL). En las placas Petrifilm CC, estos coliformes productores de ácido se muestran como colonias rojas con o sin gas (ver Círculo 1). El método ISO 4831, que enumera los coliformes por el método del Número Más Probable (NMP), define los coliformes por su capacidad de crecer y producir gas a partir de la lactosa en un caldo selectivo. En las placas Petrifilm CC, estos coliformes se muestran como colonias rojas asociadas a gas (ver Círculo 2). • La AOAC INTERNATIONAL y la FDA (Food and Drug Administration) / BAM definen los coliformes como bacilos Gram negativos que producen ácido y gas a partir de la lactosa durante la fermentación metabólica. Las colonias de coliformes que crecen en las placas Petrifilm CC producen ácido que provoca que el indicador de pH oscurezca el color del gel; el gas atrapado alrededor de las colonias indica coliformes (ver Círculo 2).

El tiempo y temperatura de incubación, así como la interpretación de las placas Petrifilm CC puede variar con el método. La AOAC®, la AFNOR y la NMKL han validado el uso de las placas Petrifilm CC bajo condiciones específicas. Ver páginas 2 y 3 de esta Guía de Interpretación.

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1 Recuento de colonias productoras de gas : 75 Recuento de colonias no productoras de gas : 24 Recuento total : 99

Interpretación de las Placas 3M Petrifilm CC según los protocolos descritos por las siguientes organizaciones: AOAC®, NMKL y AFNOR Lectura según los AOAC®‚ Official MethodsSM (986.33, 989.10 y 991.14) Incubación : • Enumeración de coliformes en leche, leche cruda y productos lácteos (Métodos Oficiales 986.33 y 989.10) : incubar 24h +/- 2h a 32ºC +/- 1ºC. • Enumeración de coliformes en todos los productos, excepto los arriba mencionados (Método Oficial 991.14) : incubar 24h +/- 2h a 35°C +/- 1°C. Interpretación : • Coliformes : Contar todas las colonias rojas con gas.

1A 65 coliformes, AOAC® Official Methods

Lectura según el método validado por la NMKL (147.1993) Incubación : 24h +/- 2h a 37ºC +/- 1ºC Interpretación : • Coliformes : Contar todas las colonias rojas con gas.

1B 67 coliformes, método validado NMKL.

Lectura según la aprobación AFNOR para coliformes totales (certificados número 3M 01/2-09/89A y 3M 01/2-09/89B) Incubación : 24h +/- 2h a 30°C +/- 1°C Interpretación : • Comparación con el método ISO 4832 (certificado 3M 01/2-09/89A) : Contar todas las colonias rojas con o sin gas • Comparación con el método ISO 4831 (certificado 3M 01/2-09/89B) : Contar sólo las colonias rojas con gas.

1C 97 coliformes, método aprobado AFNOR comparado con el método ISO 4832 72 coliformes productores de gas, método aprobado AFNOR comparado con el método ISO 4831.

Lectura según la aprobación AFNOR para coliformes termotolerantes (certificados número 3M 01/2-09/89C) Incubación : 24h +/- 2 a 44°C +/- 1°C Interpretación : • Comparación con el método NF V08-017 : Contar todas las colonias rojas con o sin gas.

1D 21 coliformes, método aprovado AFNOR comparado con el método NF V08-017.

Placas 3MTM PetrifilmTM Recuento de Coliformes Al incrementar el recuento de coliformes, el color del gel se oscurece, como se muestra en las figuras 2 a 6.

1 3 2

2 Recuento de colonias = 0 Las burbujas de fondo son una característica del gel y no resultado del crecimiento de coliformes. Las burbujas de fondo son pequeñas o puntiformes y no tienen una colonia asociada.

3 Recuento de colonias no productoras de gas : 7 Recuento de colonias productoras de gas : 8 Recuento total : 15 La Figura 3 muestra como la forma de las burbujas puede variar. Algunas veces el gas deforma la colonia y hace que la colonia “perfile” la burbuja (ver Círculos 1 y 2). Estas burbujas de gas tienen aproximadamente el diámetro de una colonia. Pueden aparecer burbujas como artefactos debidas a una inoculación inadecuada de la placa Petrifilm CC o de aire atrapado en la muestra. Las burbujas tienen forma irregular y no están asociadas a una

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4 colonia. (ver Círculo 3). Recuento de colonias productoras de gas : 29 Recuento de colonias no productoras de gas : 83 Recuento total : 112 El intervalo óptimo de recuento (colonias totales) en las placas Petrifilm CC es 15 - 150 colonias. No contar las colonias que aparecen sobre la zona blanca ya que no están bajo la influencia selectiva del medio (ver Círculo 1).

5 Recuento total estimado : 310 El área de crecimiento circular de la placa Petrifilm CC es de aproximadamente 20 cm2. Se pueden hacer estimaciones en placas con más de 150 colonias contando el número de colonias en uno o varios cuadrados representativos y obteniendo el promedio. Multiplicar dicho número por 20 para obtener el recuento estimado por placa Petrifilm CC. Para obtener un recuento más preciso, diluir más la muestra.

Placas TNTC Demasiado Numerosas Para Contar Para obtener un recuento más preciso, diluir más la muestra.

6 Placas TNTC (Demasiado Numerosas Para Contar) Las placas Petrifilm CC con colonias TNTC tienen una o más de las características siguientes: muchas colonias pequeñas, muchas burbujas de gas, y un oscurecimiento del color del gel

7 Colonias productoras de gas : 4 Cuando un alto número de microorganismos no-coliformes, tales como Pseudomonas, están presentes en las placas Petrifilm CC, el gel puede virar a amarillo.

Burbujas

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8 Colonias productoras de gas : 2 Las partículas alimentícias tienen forma irregular y no están asociadas a burbujas de gas (ver Círculo 1).

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9 Arriba se muestran varios ejemplos de burbujas asociadas a una colonia. Todos ellos se deben contar.

3M™ Petrifilm™ Placas para Recuento de Coliformes

Instrucciones de uso

Para Advertencias, Precauciones, Responsabilidad del Usuario, Garantía Limitada, Almacenamiento y Eliminación, e Instrucciones de Uso, ver el folleto del producto.

Almacenamiento

Petrifilm

Petrifilm

Petrifilm

1

Conservar las bolsas cerradas a ≤ 8°C. Usar antes de la fecha de caducidad impresa en la bolsa. En zonas con alta humedad donde puede haber condensación, es mejor dejar que las bolsas alcanzen la temperatura ambiente antes de abrirlas.

2

Para cerrar las bolsas que se están utilizando, doblar los extremos y cerrarlos con celo.

3

Mantener las bolsas una vez cerradas a ≤ 25ºC, a HR