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UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE VALENCIA DEPARTAMENTO DE CIENCIA ANIMAL

“Simplificación de los métodos de superovulación en ovejas de la raza Corriedale”

TESIS DOCTORAL

Laura Simonetti

Director: Dr. Fernando Forcada

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La

Tesis

titulada

“SIMPLIFICACIÓN

DE

LOS

MÉTODOS

DE

SUPEROVULACIÓN EN OVEJAS DE LA RAZA CORRIEDALE” es presentada como parte de los requisitos para optar al grado académico de Doctor en Ciencia Animal, de la Universidad Politécnica de Valencia, España.

El Doctorando Fda. Laura Simonetti

El Director de Tesis Fdo. Fernando Forcada

El Tutor de Tesis Fdo. Jose S. Vicente Antón

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PREFACIO

Esta Tesis es presentada como parte de los requisitos para optar al grado académico de Doctor en Ciencia Animal, de la Universidad Politécnica de Valencia, España, y no ha sido presentada previamente para la obtención de otro título en esta Universidad u otras. La misma contiene los resultados obtenidos en investigaciones llevadas a cabo en: - “Departamento de Producción Animal”, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Lomas de Zamora (UNLZ), Argentina. - “Reserva Ovina Nº8” y “Laboratorio de Reproducción Animal”, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Argentina (INTA), dentro del marco del convenio entre la UNLZ y el INTA. - “Departamento de Producción Animal y Ciencia de los Alimentos”, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, España.

La Tesis ha sido financiada por los proyectos 13/A151 (Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Lomas de Zamora, Argentina) y CICYT AGL2004-00432 (Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, España)

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AGRADECIMIENTOS

Deseo expresar mi más profundo agradecimiento al Dr. Fernando Forcada por su contribución científica y guía en este proceso de aprendizaje. Pero por sobre todo, por su apoyo incondicional y ánimo inagotable. Siempre presente con sus palabras de aliento, haciéndome notar lo tanto que habíamos avanzado … lo poco que restaba. Por su infinita paciencia. Al grupo de Reproducción Ovina del “Departamento de Producción Animal y Ciencia de los Alimentos”, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, España, quienes durante mi estancia tan lejos de mi tierra me brindaron su calidez. Especialmente a Macu, compañera incansable de RIAs y ELISAs al son de una música. A Zaragoza, esa ciudad blanca, que por esos días supo ser mi casa.

A la Estación Experimental INTA-Balcarce, particularmente a la “Reserva Ovina” y al grupo de “Reproducción Animal” por todas las facilidades materiales y humanas que me proporcionaron. Con especial énfasis al Dr. Ricardo Alberio y al Ing. Carlos Solanet, que año tras año me dieron la bienvenida para la realización de mi trabajo y se preocuparon por hacer posible hasta lo difícil.

Al aporte invalorable de mis compañeros Oscar Rivera y Néstor Carou, quienes dejando de lado sus ocupaciones, “metieron mano” en las laparotomías haciendo el trabajo con tanto empeño como si fuera suyo.

A los entonces alumnos de grado, hoy colegas, que todos los años se sumaron con su “presente” al equipo de trabajo y le metieron garra al asunto. Que se esforzaron más allá del cansancio. Que aportaron su humor fresco. A todos ellos:

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Marina Ganchegui, Jonathan Camarasa, Rodrigo Buceta, Mariana Castillón, Carlitos Muñoz, Julia Mauriño y María Paula Diez.

A mi segundo hogar, la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de Lomas de Zamora (Argentina), que me vió transitar todo este tiempo desde que tímida y adolescente ingresé a sus aulas. A las autoridades de dicha institución, que me brindaron la posibilidad de seguir perfeccionándome.

A la Universidad Politécnica de Valencia (España) que hizo posible un Programa de Doctorado de jerarquía a nuestro alcance. Al Dr. José Salvador Vicente Antón, quien gentilmente aceptó ser mi tutor en Valencia y me brindó la oportunidad de trabajar junto al Dr. Forcada.

A mi mamá y mi papá que desde siempre me inculcaron la importancia del conocimiento y me abrieron las puertas del saber, haciéndome ver que lo que debiera ser por derecho es una oportunidad para no tantos.

A mis amigos, que son mis “hermanos”, mis afectos sin compromiso ni lazo de sangre. Ese tesoro que vale más que cualquier conocimiento. Por su cariño, por saber escuchar, comprender y compartir.

Y finalmente, a vos, Marcelo … mi gran compañero de vida. Tenía todas las palabras ensayadas en mi mente … pero sucede que llegado el momento final, se me traban y no logro hilvanarlas … a veces las palabras no alcanzan.

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PUBLICACIONES DERIVADAS

Parte de los resultados de esta Tesis han sido publicados en los siguientes trabajos:

Simonetti, L., Rivera, O, Carou, N., 2003. Superovulación en ovejas Corriedale mediante diferentes tratamientos hormonales. Proc. “XII Congreso Mundial de Corriedale”, Montevideo, Uruguay (Trabajo completo).

Simonetti, L., Forcada, F., Rivera, O., Carou, N., 2004. Simplificación de los tratamientos superovulatorios en ovinos. Revista Argentina de Producción Animal, "XXVII Congreso Argentino de Producción Animal", Tandil, Argentina (Abstract).

Simonetti, L., Forcada, F., Rivera, O., Carou, N., 2005. Evaluación de la respuesta superovulatoria y los niveles hormonales de cuatro tratamientos superovulatorios en ovinos. Revista Argentina de Producción Animal, "XXVIII Congreso Argentino de Producción Animal”, Bahía Blanca, Argentina (Abstract).

Simonetti, L., Rivera, O., Carou, N., Forcada, F., 2006. Comparación de diferentes tratamientos superovulatorios en ovinos. Revista Argentina de Producción Animal, "XXVIII Congreso Argentino de Producción Animal”, Mar del Plata, Argentina (Abstract).

Simonetti, L., Forcada, F., Abecia, A., Palacín, I., Rivera, O.E., Carou, N., Lynch, G.M., 2007. Efectos del tratamiento superovulatorio sobre la presentación de los celos, el pico preovulatorio de LH y la tasa ovulatoria en ovejas Corriedale.

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Revista Argentina de Producción Animal, "XXIX Congreso Argentino de Producción Animal”, Santiago del Estero, Argentina (Abstract).

Simonetti, L., Forcada, F., Rivera, O.E., Carou, N., Alberio, R.H., Abecia, J.A., Palacín, I., 2008. Simplified superovulatory treatments in Corriedale ewes. Anim. Reprod. Sci. 104, 227-237.

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GLOSARIO

•

AETA: “American Embryo Transfer Association”; “Asociación Americana de Transferencia Embrionaria”

•

AETE: “Association Europeenne de Transferí Embryonnaire”; “Asociación Europea de Transferencia Embrionaria”

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AMPc: adenosín monofosfato cíclico

•

CL: cuerpo lúteo

•

cm: centímetro

•

CETA: “Canadian Embryo Transfer Association”; “Asociación Canadiense de Transferencia Embrionaria”

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CNA: Censo Nacional Agropecuario

•

col.: colaboradores

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DS: desvío estándar

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E2: estradiol

•

eCG: gonadotrofina coriónica equina

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EDTA: ácido etilén diamino tetracético

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ELISA: enzimoinmunoensayo

•

ER: estructuras recuperadas (ovocitos sin fertilizar y embriones)

•

ET: embriones totales

•

EV: embriones viables

•

FAO: Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación

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•

FGA: acetato de fluorogestona

•

FLA: Federación Lanera Argentina

•

FP: folículo persistente

•

FSH: hormona folículoestimulante

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FSHo/PVP: hormona folículoestimulante disuelta en polivinilpirrolidona

•

FSHo: hormona folículoestimulante ovina

•

FSHo+eCG (Grupos A1 y A2): 176 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución salina y administradas en una única inyección i.m. 48h antes de la remoción de las esponjas, junto con 500 UI de eCG i.m.

•

FSHo_4di (Grupo B1): 176 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución salina y administradas en 4 dosis iguales i.m. a intervalos de 12 h, comenzando a las 24 h antes de la remoción de las esponjas.

•

FSHo/PVP (Grupo C1): 176 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución 30% de polivinilpirrolidona y administradas en una única inyección i.m. 24 h antes de la remoción de las esponjas.

•

FSHo_6di (Grupo D1): 176 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución salina y administradas en 6 dosis iguales i.m. a intervalos de 12 h, comenzando a las 48 h antes de la remoción de las esponjas.

•

FSHo3/4_4di+eCG (Grupo E1): 132 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución salina y administradas en 4 dosis iguales i.m. a intervalos de 12 h, comenzando a las 24 h antes de la remoción de las esponjas, y 500 UI de eCG i.m. administradas junto con la primer inyección de la FSHo.

•

FSHo3/4/PVP+eCG (Grupo F1): 132 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución 30% de polivinilpirrolidona y administradas en una única inyección i.m. 24 h antes de la remoción de las esponjas, junto con 500 UI de eCG i.m.

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•

FSHo3/4+eCG (Grupo B2): 132 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución salina y administradas en una única inyección i.m. 48 h antes de la remoción de las esponjas, junto con 500 UI de eCG i.m.

•

FSHo_8dd (Grupo C2): 176 unidades NIADDK-oFSH-17 de FSH ovina, disueltas en solución salina, y administradas en 8 dosis decrecientes i.m. a intervalos de 12 h, comenzando a las 72 h antes de la remoción de las esponjas.

•

FSHp: hormona folículoestimulante porcina

•

GnRH: hormona liberadora de gonadotrofinas

•

h: horas

•

ha: hectárea

•

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•

IA: inseminación artificial

•

IETS: “Internacional Embryo Transfer Society”; “Sociedad Internacional de

I

Transferencia Embrionaria” •

i.m.: intramuscular

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INDEC: Instituto Nacional de Estadísticas y Censos

•

INTA: Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria

•

kg: kilogramo

•

LH: hormona luteinizante

•

MAP: acetato de medroxiprogesterona

•

min: minuto

•

mg: miligramo

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•

ml: mililitro

•

mm: milímetro

•

mm2: milímetro cuadrado

•

MOET : superovulación y transferencia embrionaria

•

n: cantidad

•

NIH-FSH-S1: unidades de hormona folículoestimulante

•

OIE:

“Oficce

International

des

Epizooties” ;

“Oficina

Internacional de

Epizootias” •

P4: progesterona

•

PBS: fosfato buffer salino

•

PGF2α: prostaglandina F2 alfa

•

PMSG: gonadotropina del suero de yegua gestante

•

PRE-RE: previo al retiro de las esponjas

•

PVP: polivinilpirrolidona

•

RIA: radioinmunoensayo

•

s.c.: subcutáneo

•

SAGPyA: Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentación

•

SAS: Statistical Analysis System

•

SEM: error estándar de medias

•

SRA: Sociedad Rural Argentina

•

TMB: cromógeno tetrametyl benzidina

•

UI: unidades internacionales

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•

UNLZ: Universidad Nacional de Lomas de Zamora

•

vs.: versus

•

µg: microgramo

•

µl: microlitro

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RESUMEN La superovulación permite aumentar la tasa de mejoramiento genético a través de las hembras. En ovinos, la raza Corriedale de doble propósito (lana, carne) es numéricamente importante en Argentina, donde se distribuye en toda su superficie y es criada bajo condiciones extensivas. Sin embargo, la información sobre la respuesta superovulatoria en ovejas Corriedale es escasa y no se han realizado estudios para el desarrollo de protocolos sencillos de estimulación apropiados para estos rebaños extensivos. El objetivo del estudio fue evaluar la viabilidad de simplificar los tratamientos superovulatorios en ovejas de la raza Corriedale durante la estación de cría. Se realizaron dos experimentos, utilizándose ovejas Corriedale dentro de la estación reproductiva del otoño. Las ovejas fueron sincronizadas con esponjas intravaginales con progestágeno y superovuladas según diferentes tratamientos. En el Experimento 1, se evaluaron protocolos simplificados de administración de FSH ovina (FSHo) en combinación o no con eCG: A1 (n=13): 176 unidades FSHo en una única inyección en vehículo salino junto con 500 UI eCG aplicadas 48 h antes de la retirada de las esponjas (PRERE); B1 (n=12): 176 unidades FSHo repartidas en 4 dosis iguales en vehículo salino cada 12 h comenzando 24 h PRE-RE; C1 (n=13): 176 unidades FSHo en una única inyección en vehículo retardante (polivinilpirrolidona; PVP) 24 h PRE-RE; D1 (n=14): 176 unidades FSHo repartidas en 6 dosis iguales en vehículo salino cada 12 h comenzando 48 h PRE-RE; E1 (n=7): 132 unidades FSHo repartidas en 4 dosis iguales en vehículo salino cada 12 h comenzando 24 h PRE-RE y asociadas a 500 UI eCG junto con la primera inyección; F1 (n=7): 132 unidades FSHo en una única inyección en PVP junto con 500 UI eCG, 24 h PRE-RE. En el Experimento 2, el protocolo simplificado que obtuvo los mejores resultados en el Experimento 1 (A1) fue seleccionado, A2 (n=16), y comparado con el mismo protocolo, pero usando una dosis de FSHo reducida (132 unidades), B2 (n=14), y con el protocolo más convencional de FSHo (176 unidades en 8 dosis decrecientes comenzando 72 h PRE-RE), C2 (n=17). Las ovejas fueron expuestas a carneros provistos de arneses marcadores y se registraron los celos cada 6 h a partir de la retirada de las esponjas. El intervalo al pico preovulatorio de LH y su magnitud

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fueron determinados a partir de muestras de sangre extraídas cada 6 h y analizadas mediante test inmunoenzimático de tipo sándwich (ELISA). La concentración de P4 al celo fue medida por RIA en muestras de sangre extraídas al inicio de los celos. Las laparotomías fueron realizadas 6 días tras el inicio de los celos. Se determinó el número de cuerpos lúteos (CL) y de folículos persistentes (FP). Se analizaron los porcentajes de ovejas ovuladas (al menos 1 CL funcional) y superovuladas (al menos 3 CL funcionales). Se lavaron los cuernos uterinos y se registraron las estructuras recuperadas (ER: ovocitos sin fertilizar y embriones). Los embriones (ET) fueron evaluados morfológicamente y se registraron aquellos viables (de calidad excelente o buena; EV). Se analizaron los porcentajes de recuperación (ER/CL), fertilización (ET/ER) y viabilidad (EV/ET). Se extrajo sangre para ser analizada por RIA y calcular P4 al momento de la recuperación de embriones. Las variables fueron analizadas por Chi-cuadrado o Test Exacto de Fisher, o por Análisis de Varianza según correspondiera. En el Experimento 1, al comparar A1, B1 y C1, se obtuvieron los resultados que se detallan a continuación. El inicio del celo y el pico de LH ocurrieron más temprano en aquellas ovejas en cuyo tratamiento se incluyó eCG (A1) (P