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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 175 430 kInt. Cl. : A01N 33/12, A01N 37/02

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˜ ESPANA

A01N 25/30, A23K 3/03 A23B 9/26, A23L 3/3517

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 97930543.0 kFecha de presentaci´on: 18.07.1997 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 926 952 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 07.07.1999

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54 T´ıtulo: Composici´ on antimicrobiana y procedimiento de preparaci´ on.

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73 Titular/es: KEMIRA CHEMICALS OY

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72 Inventor/es: Ahln¨ as, Thomas

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74 Agente: Ungr´ıa L´ opez, Javier

30 Prioridad: 19.07.1996 FI 962908

P.O. Box 330 00101 Helsinki, FI

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

16.11.2002

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 175 430 T3

16.11.2002

Aviso:

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 175 430 T3 DESCRIPCION Composici´ on antimicrobiana y procedimiento de preparaci´ on. 5

La invenci´on se refiere a composiciones antimicrobianas mejoradas basadas en ´acidos org´ anicos, su preparaci´ on y su utilizaci´on para combatir microbios perjudiciales, en el tratamiento y conservaci´ on de material org´ anico y en la desinfecci´on de superficies de material.

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Un factor de calidad importante en los alimentos y piensos para ganado bovino y aves es la ausencia en los mismos de Salmonella, Listeria, E. coli y otras bacterias, como causantes del envenenamiento de los alimentos.

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La Salmonella se combate por lo general en los piensos para aves por utilizaci´on de mezclas de ´acidos org´ anicos, en particular a´cidos propi´ onico y f´ormico, o mezclas de ´acidos org´ anicos y sus sales de amonio, o sales de ´acidos org´anicos (Poultry International, julio de 1994, p´ aginas 40-42). Los productos est´an en soluci´on o son s´ olidos.

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Seg´ un la Patente estadounidense US-5 234 703, se desinfectan los cuerpos de animales del matadero, tales como los cuerpos de pollos, por tratamiento con una soluci´ on que, adem´ as de ´acido ac´etico, propi´ onico, c´ıtrico y clorh´ıdrico, contiene a´cidos de cadena media-larga, tales como a´cidos grasos de C10 . Se se˜ nala que la mezcla es eficaz contra, por ejemplo, Salmonella typhimurium y Escherichia coli

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Por la publicaci´ on WO 92/21239 se conoce una composici´ on antimicrobiana contra, por ejemplo, Salmonella. Esta composici´on contiene un a´cido monocarbox´ılico de C5 -C14 poliinsaturado, tal como ´acido s´ orbico o derivado del mismo, en combinaci´on con un a´cido carbox´ılico arom´ atico sustituido o sin sustituir, tal como a´cido benzoico o sal o ´ester del mismo. Las composiciones pueden contener tambi´en ´acidos org´ anicos o inorg´ anicos.

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Son muy conocidos como agentes bactericidas los compuestos de amonio cuaternario superficialmente activos, que se conocen tambi´en por ser eficaces frente a, por ejemplo, Salmonella. Por tanto, seg´ un la publicaci´ on de Patente US- 5 145 853, se utiliza un agente, tal como por ejemplo cloruro de cetiltrimetilamonio, para combatir enfermedades intestinales, por ejemplo salmonelosis, en aves y cerdos, a˜ nadiendo el compuesto de amonio a los piensos con los que se alimentan los animales Se sabe que en general el efecto microbicida de compuestos de amonio cuaternario se debilita en presencia de agentes superficialmente activos ani´onicos y pol´ımeros, as´ı como de prote´ınas y sangre (Conservantes antimicrobianos utilizados en la industria cosm´ etica, de K.H. Wallh¨ auser, p´ aginas 605-745 en Cosmetic and Drug preservation de J. J. Kabara (Ed.), Marcel Dekker, 1984). Sin embargo, en ciertas aplicaciones, por ejemplo, en agentes de limpieza microbicidas, se han formulado tambi´en junto con un detergente superficialmente activo ani´ onico o jab´ on, por ejemplo, en la publicaci´on de Patente US-3 560 390 (Gaines). La publicaci´ on de Patente DD-291 914 (Luthard y col.) describe sales de compuestos de amonio cuaternario alif´ aticos o arom´aticos con aniones salicilato sustituidos o sin sustituir que tienen actividad fungicida y bactericida, utilizables en agricultura y horticultura. Los compuestos incluyen salicilato de etanoldietilamonio, salicilato de alquil(C12-C18 )dimetilamonio, salicilato de alquil(C12-C18 )trimetilamonio, salicilato de alquil(C12-C18 ))dimetilbencilamonio, y salicilato de alquil(C16-C18 )amonio. Las composiciones no contienen ´acidos libres. Por la publicaci´ on US-3 578 667 (Wakeman & Coates) se conoce la utilizaci´on de compuestos de amonio cuaternario y ciertos a´cidos dicarbox´ılicos alic´ıclicos, preparados en una relaci´ on molar de 1:1 y 1:2, como preparaciones microbicidas contra, por ejemplo, Staphylococcus y Salmonella. Por la publicaci´ on de patente CA-2 082 994 se conocen sales de fosfonio y amonio cuaternarios en cuya preparaci´ on un contra-i´ on haluro est´ a reemplazado por varios iones org´ anicos hidrosolubles, y su utilizaci´on como agentes protectores frente a microbios da˜ ninos en aplicaciones industriales. Las composiciones no contienen ´acidos libres. Por la publicaci´ on de patente EP-127 131 (Hofinger) se conoce la preparaci´ on de compuesto de amonio cuaternario (R1 R2 R3 )N+ (CH2 CH2 O)x A− y su utilizaci´on como desinfectante no corrosivo para metal, compuesto en el que R1 y R2 son grupos alquilo de C8 -C12 , R3 es un grupo alquilo de C1 -C4 , y el contraonico, a´cido glic´olico, a´cido tartr´ onico, i´on ani´ onico A− est´a constituido por a´cido ac´etico, ´acido propi´ 2

ES 2 175 430 T3 ´cido m´ a alico, a´cido tart´ arico, a´cido c´ıtrico, a´cido maleico y a´cido fum´ arico. No hay a´cidos libres presentes en las composiciones.

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La solicitud de patente EP-537 426 (Makino y col.) describe tambi´en compuestos germicidas y fungicidas, que son menos corrosivos que los cloruros de amonio cuaternario, para aguas de refrigeraci´on de m´aquinas de procesado, sistemas de acondicionamiento de aire y otras aplicaciones similares, compuestos en los que el contra-i´on haluro ha sido reemplazado por ´ester alqu´ılico de ´acido fosf´ orico, ´ester de ´acido fosf´ orico de ´eter polioxietilenalqu´ılico, o diversos ´acidos carbox´ılicos. No se describen composiciones que contengan a´cidos libres.

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Por la publicaci´ on de patente DE-2 344 887 (Eucken & Baginsky) se conocen composiciones destinadas a conservar frescas las flores cortadas, composiciones que contienen 20-64 % en peso de sac´aridos, 0,04-10 % en peso de ´acido mineral fuerte no-oxidante, 0,01-0,5 % en peso de ´acido s´ orbico, y 0,01-0,05 % de cloruro de alquildimetilbencilamonio cuaternario, y pueden llevar tambi´en 0,1-5 % en peso de ´acido succ´ınico y/o ´acido gliox´ılico, y 35-80 % en peso de agua. Las composiciones no contienen a´cidos carbox´ılicos de C1 -C4 . El documento WO-A-9316611 describe composiciones para conservaci´ on del forraje que contienen como agente antimicrobiano 5-25 % de a´cido benzoico o sus ´esteres, 60-95 % de ´acido propi´ onico y a´cido f´ ormico, ´acido propi´ onico y a´cido ac´etico o ´acido propi´ onico, f´ ormico y ac´etico. El ´acido benzoico es estabilizado por un componente (3) tal como un compuesto nitrogenado org´ anico, entre otros muchos posibles estabilizantes citados, que se se˜ nalan como inhibidores de la cristalizaci´on del a´cido benzoico. Existe a´ un una serie de deficiencias en los agentes basados en a´cidos carbox´ılicos de bajo peso molecular y sus mezclas, utilizados para combatir la Salmonella y otros microbios da˜ ninos y para conservaci´ on de materiales de origen vegetal y animal. Los productos en forma l´ıquida se roc´ıan sobre el material objetivo por dispersi´ on del producto en gotas muy finas mediante toberas con el fin de hacer que se distribuya lo m´as uniformemente posible sobre el material que est´a siendo tratado. Sin embargo, cuando el tama˜ no de la gota decrece, aumenta la proporci´ on del producto que se pierde en la corriente de aire, en cuyo caso el problema del mal olor se une al de la p´erdida. Tambi´en es deseable la reducci´on de la corrosi´on causada por los productos. Las cantidades de ´acido utilizadas podr´ıan asimismo reducirse por una mejor eficacia del producto. Un objeto de la invenci´on es reducir las deficiencias antes mencionadas.

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La invenci´on incluye adem´as modos de realizaci´on del objetivo que consiste en una etapa de aplicaci´ on para producir un efecto de acidificaci´ on microbicida a corto plazo sobre el material diana de desinfecci´ on, por ejemplo, superficies de material de construcci´ on, ruedas de veh´ıculos, calzado protector, y similares, y dejar despu´es de esto sobre las superficies una delgada capa protectora oleosa o cerosa que inhibe el crecimiento microbiano y protege de la corrosi´on. Los problemas antes mencionados se han resuelto ahora con una nueva composici´on antimicrobiana que se caracteriza porque comprende un componente antimicrobiano que contiene como sub-componentes:

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a) aproximadamente 50-99,9 % en peso de ´acido monocarbox´ılico de C1 -C4 sustituido o sin sustituir y b) aproximadamente 0,1-50 % en peso de compuesto nitrogenado org´ anico cati´ onico microbicida o microbiost´atico.

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La invenci´on se basa en la observaci´on, entre otras cosas, de que un compuesto nitrogenado cati´ onico microbicida o microbiost´atico es m´as capaz de ejercer su efecto cuando act´ ua sobre microbios da˜ nados por as, a pH bajo, el material de origen animal o vegetal que se va a tratar ´acidos carbox´ılicos de C1 -C4 . Adem´ tiene una menor cantidad de grupos funcionales ani´ onicos que se unen a este agente activo cati´onico de forma ineficaz que tendr´ıan sin la presencia de a´cido carbox´ılico de C1 -C4 ; de esta manera el ´acido potencia as´ı las propiedades antimicrobianas de los agentes cati´ onicos. Los compuestos nitrogenados cati´onicos seg´ un la invenci´ on tambi´en cambian la carga de las peque˜ nas gotas en la direcci´on cati´ onica y mejoran al mismo tiempo su adherencia a un biomaterial cargado ani´ onicamente pincipalmente, con lo que mejora la eficacia de la composici´on y se reducen las p´erdidas. Por utilizaci´ on de una combinaci´ on de agente cati´onico activo y un compuesto ani´ onico, se hace al producto m´ as eficaz sobre las superficies del material org´ anico que est´ a siendo tratado, con lo que se mejora la acci´ on antimicrobiana, con lo que, por ejemplo, se puede mejorar la eficacia de un producto a base de a´cido f´ ormico en la conservaci´on de un material vegetal a granel, tal como grano completo, y reducirse su acci´on corrosiva. Adem´as, el agente activo cati´onico o la combinaci´on de agente activo cati´ onico y compuesto ani´ onico reduce la tensi´ on superficial 3

ES 2 175 430 T3 de la mezcla, facilitando con ello la formaci´ on de peque˜ nas gotas en las toberas y una distribuci´ on m´ as uniforme del producto.

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La invenci´on hace por tanto que se pueda potenciar la eficacia de composiciones conservantes que ninos contienen ´acido monocarbox´ılico de C1 -C4 antimicrobiano contra Salmonella y otros microbios da˜ por adici´ on a las mismas de un compuesto nitrogenado org´anico cati´ onico. El primer subcomponente a) del componente antimicrobiano en la composici´ on antimicrobiana seg´ un la invenci´on es un a´cido monocarbox´ılico de C1 -C4 , sustituido o sin sustituir, en una cantidad de aproximadamente 50-99,9 % en peso, preferiblemente 60-99 % en peso, del peso del componente antimicrobiano. El a´cido monocarbox´ılico de C1 -C4 , sustituido o sin sustituir, se puede seleccionar, por ejemplo, entre los siguientes: a´cido f´ ormico, ´acido ac´etico, ´acido propi´ onico, a´cido n-but´ırico, ´acido isobut´ırico, ´acido glic´ olico, a´cido l´ actico, ´acido hidroxibut´ırico, ´acido pir´ uvico, a´cido acetoac´etico, y sus mezclas. Los ´acidos preferidos son: ´acido f´ ormico, ´acido ac´etico, ´acido propi´ onico, a´cido l´ actico o sus mezclas, en particular ´acido f´ ormico o una mezcla de ´acido f´ ormico y ´acido propi´ onico. El segundo subcomponente b) del componente antimicrobiano en la composici´ on antimicrobiana seg´ un la invenci´on es un compuesto nitrogenado org´ anico cati´ onico que tiene acci´on microbicida o microbiost´atica. Su significado en la presente invenci´ on es el de un compuesto a cuya porci´ on cargada cati´onicamente va enlazado el nitr´ ogeno a al menos una cadena o anillo org´ anicos. La carga cati´onica del compuesto puede tener lugar, en la composici´ on seg´ un la invenci´ on bajo el efecto del a´cido monocarbox´ılico de C1 -C4 presente. La cantidad de este subcomponente es preferiblemente de aproximadamente 0,1-10 % en peso, y m´as preferiblemente de aproximadamente 0,5-5 % en peso, del peso del componente antimicrobiano.

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En la invenci´ on, es posible utilizar, como subcomponente b) de inhibici´ on del crecimiento microbiano, numerosos compuestos nitrogenados org´ anicos cati´ onicos diferentes o compuestos que forman tales cationes en un medio ´acido, ya sean solos o en diversas combinaciones. Por cadena de alquilo de Cn -Cm se entiende, de aqu´ı en adelante, un grupo alif´ atico, alic´ıclico o alquil arom´ atico de cadena lineal o ramificada, saturada o sin saturar, sustituida o sin sustituir, ya sea cada longitud de cadena por separado o cualquier combinaci´on de ellas. Entre los compuestos de amonio u ´ tiles, se incluyen aquellos cuyo cati´on tiene la forma R1 -N+ (R2 ,R3 , 1 R ), donde R es una cadena de alquilo o hidroxialquilo de C2 -C22 , R2 es una cadena de alquilo o hidroxialquilo de C2 -C22 que es la misma o diferente de la R1 , o es un grupo bencilo o un grupo alquil(C1 ogeno; R3 y R4 son grupos C4 )bencilo, un grupo alquilo o hidroxialquilo de C1 -C4 o un a´tomo de hidr´ ogeno. Si el componente antimicrobiano consiste susalquilo o hidroxialquilo de C1 -C4 o ´atomos de hidr´ tancialmente solo en ´acido monocarbox´ılico de C1 -C4 y un compuesto de amonio, R1 es preferiblemente una cadena de alquilo de C8 -C22 . 4

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El compuesto nitrogenado cati´ onico puede ser tambi´en un compuesto con un anillo que contiene nitr´ ogeno, tal como un anillo de piridilo, donde el nitr´ ogeno est´a cargado positivamente de la misma manera que en los compuestos de amonio. A diferencia de los compuestos de amonio “normales”, estos compuestos se pueden llamar compuestos de amonio heteroc´ıclicos, y est´an por tanto dentro del marco de la invenci´on. Algunos ejemplos de compuestos nitrogenados adecuados para el sub-componente b) son los haluros de alquiltrimetilamonio, tales como cloruro de cetil-trimetilamonio, cloruro de miristiltrimetilamonio, cloruro de coco-alquiltrimetilamonio; haluros de dialquildimetilamonio, tales como cloruro de dioctildimetilamonio, cloruro de didecildimetilamonio, cloruro de dilaurildimetilamonio, cloruro de dicoco-alquildimetilamonio, cloruro de dimiristildimetilamonio, cloruro de dicetildimetilamonio, cloruro de diestearildimetilmonio, cloruro de dimetil(sebo hidrogenado)amonio; haluros de bencilamonio, en particular haluros de alquil(C12-C16 )dimetilbencilamonio, tales como cloruro de dodecildimetilbencilamonio o cloruro de dodeciletilbencil-dimetilamonio; aminas terciarias, tales como decildimetilamina, laurildimetilamina, miristildimetilamina, cetildimetilamina, palmitildimetilamina; aminas secundarias, tales como dioctilamina, didodecilamina, etc; aminas primarias tales como octilamina, decilamina, dodecilamina, oleilamina, hidrocloruro de alquildiaminoetilglicina; compuestos de amonio c´ıclicos tales como ciclohexilamina; o sales de derivados alqu´ılicos de piridina, imidazol, pirrol, isoquinolina o morfolina, estando entre sus ejemplos cloruro de cetilpiridinio y cloruro de laurilisoquinolinio; compuestos de amonio policati´onico, tal como hidrocloruro de polihexametilenbiguanidina. En los citados compuestos de amonio, el cloruro puede estar reemplazado tambi´en por otro ani´ on, por ejemplo, bromuro, formiato o acetato, el u ´ ltimo de los cuales puede formar el sub-componente a) y mezclarse cada uno con amina. Adem´ as de 4

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los compuestos enumerados, los compuestos adecuados para su utilizaci´on incluyen tambi´en compuestos cuyas longitudes de cadena alqu´ılica se desv´ıan de las mencionadas, o donde, en lugar de uno o m´ as grupos metilo, hay, por ejemplo, un grupo etilo o un grupo hidroxietilo. Las cadenas alqu´ılicas de los compuestos cati´ onicos pueden contener tambi´en hetero´atomos, tales como grupos ´ester o amida, o dobles enlaces que favorezcan la biodegradabilidad del compuesto. Los compuestos nitrogenados, ya sean solos o en diversas combinaciones, se utilizan como subcomponente b) de las formulaciones.

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En particular, cuando se emplea subcomponente c) en la composici´ on seg´ un la invenci´ on de la manera descrita en el p´ arrafo siguiente, el sub-componente b) puede ser tambi´en preferiblemente un compuesto amina de peso molecular relativamente bajo en el que el grupo R1 es, preferiblemente, un alquilo o hidroxialquilo de C2 -C18 . Algunos ejemplos son trietilamina, ciclohexilamina, dimetilamino2-metil-1-propanol, dietilaminoetanol, 2-amino-2-metil-1-propanol, amino-butanol, monoetanolamina, dimetilamino-etanol, dietanolamina, 2-amino-2-etil-1,3-propanodiol, morfolina, trietanolamina, piperazina, aminoetiletanolamina, etilendiamina, N.N,N’,N’-tetracis(2-hidroxipropil)-etilendiamina, y muchos otros de este tipo..

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Seg´ un un modo de realizaci´ on de la presente invenci´ on, el subcomponente adicional c) que es un a´cido org´ anico que contiene un grupo alquilo de C5 -C22 o arilo de C5 -C22 , preferiblemente a´cido carbox´ılico, se utiliza en la composici´on seg´ un la invenci´ on en una cantidad de aproximadamente, 0,1-10 % en peso, preferiblemente aproximadamente 0,5-5 % en peso.

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Como subcomponente c) se pueden emplear numerosos ´acidos org´anicos diferentes, ya sean solos o en combinaci´on . Entre estos a´cidos se incluyen a´cidos mono- y policarbox´ılicos, sustituidos o sin sustituir, e hidroxi´ acidos que tienen una cadena de hidrocarburo de aproximadamente C5 -C22 , tales como ´acido caproico, ´acido capr´ılico, ´acido c´ aprico, a´cido l´ aurico, a´cido mirist´ılico, ´acido miristoleico, a´cido palm´ıtico, ´acido palmitoleico, ´acido este´arico, a´cido oleico, ´acido ela´ıdico, ´acido lin´ olico, a´cido linoleico, ´acido linoela´ıdico, ´acido araquid´ onico, a´cido ab´etico, ´acido s´ orbico, a´cido asc´orbico, a´cido cin´amico, ´acido tart´ arico, ´acido m´ alico, acido benzoico, a´cido p-hidroxibenzoico y a´cido salic´ılico. Especialmente u ´ tiles son aquellos ´acidos que tienen por si mismos propiedades de inhibici´ on del crecimiento microbiano, tales como ´acido benzoico, a´cido para-hidroxibenzoico, a´cido salic´ılico, ´acido s´ orbico, a´cido capr´ılico, ´acido c´ aprico, a´cido l´aurico, a´cido mir´ıstico, ´acido miristoleico, a´cido palm´ıtico, ´acido palmitoleico, ´acido lin´ olico, a´cido linoleico o ´acido araquid´ onico. Entre los ´acidos que son u ´ tiles tambi´en se incluyen ´acidos aminocarbox´ılicos y ´acidos alquilaminocarbox´ılicos, por ejemplo, a´cido dodecilaminopropi´ onico. Tambi´en son u ´ tiles los ´acidos policarbox´ılicos polim´ericos, tales como ´acido poliacr´ılico, o ´acidos copolim´ericos formados por a´cidos acr´ılicos y compuestos insaturados polimerizables con ellos. Junto con los a´cidos carbox´ılicos, son u ´ tiles tambi´en otros ´acidos org´ anicos sustituidos o sin sustituir, cuyos aniones son, por ejemplo, sulfonatos, sulfatos o fosfatos. Con respecto a los compuestos enumerados, por cadena de alquilo de Cn -Cm se entiende un grupo alif´ atico, alic´ıclico o alquil arom´ atico, sustituido o sin sustituir, de cadena lineal o ramificada, saturada o no-saturada, cada longitud de cadena por separado o cualquier combinaci´ on de ellas. Los compuestos de sub-componente c) se pueden a˜ nadir a las composiciones en la forma de ´acidos o sales, por ejemplo, en la forma de sales de metal alcalino o sales de amonio, o ´esteres.

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Es preferible seleccionar el sub-componente c) de entre compuestos que tengan ellos mismos propiedades microbicidas o microbioest´ aticas.

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Seg´ un un modo de realizaci´ on particularmente preferido de la invenci´ on, la composici´on comprende un componente antimicrobiano que contiene: a) aproximadamente 50-99,9 % en peso de a´cido monocarbox´ılico de C1 -C4 sustituido o sin sustituir b) aproximadamente 0,1-10 % en peso de compuesto nitrogenado org´ anico cati´ onico microbicida

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c) aproximadamente 0,1-10 % en peso de un ´acido org´ anico que contiene grupo alquilo o arilo de C5 -C22 d) aproximadamente 0-30 % en peso de agua.

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Las composiciones seg´ un la invenci´ on se pueden preparar por simple mezclado de los subcomponentes a) y b). Seg´ un un modo de realizaci´ on preferido, se hacen reaccionar aparte el sub-componente b) y el subcomponente c) entre s´ı de manera que se forme entre el cati´on del subcomponente b) y el ani´ on del 5

ES 2 175 430 T3 subcomponente c) un compuesto de adici´ on, un complejo ani´ on-cati´ on, un compuesto “ancat” (ani´ oncati´on) o “catan” (cati´ on-ani´ on) o sal, que aqu´ı se citar´ a como un compuesto ancat, compuesto que se mezcla entonces con el sub-componente a). 5

El compuesto ancat se puede preparar, por ejemplo, por mezclado de los subcomponentes b) y c) juntos en la relaci´on molar deseada, ya sea sin un medio o utilizando un disolvente adecuado, por ejemplo, agua, como medio. La preparaci´ on se puede llevar a cabo, por ejemplo, por los siguientes m´etodos 1, 2 y 3.

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En el m´etodo 1, se mezclan juntos el sub-componente b) y el sub-componente c) a la relaci´on molar deseada, calent´andose cuidadosamente cuando es necesario. Este m´etodo es adecuado especialmente cuando el sub-componente b) es una amina primaria y el sub-componente c) es un a´cido org´ anico.

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El m´etodo 2 es particularmente adecuado para la preparaci´ on de sales mutuas de compuestos cati´onicos hidrosolubles y compuestos ani´ onicos hidrosolubles. El componente ani´ onico c) y el componente cati´onico b) se disuelven en agua por separado, despu´es de lo cual se combinan las soluciones. En una mezcla de relaci´on molar pr´ oxima a 1:1, el compuesto ancat se separa de la fase acuosa como sedimento oleoso o tipo pastoso o como un sedimento ceroso, dependiendo de la temperatura y de las materias primas, y se puede separar de la fase acuosa por cualquiera de los m´etodos conocidos. Cuando es necesario, los componentes iniciales se separan del producto por lavado con agua. En relaci´ on con este m´etodo, es posible tambi´en emplear un disolvente auxiliar que es dif´ıcilmente soluble en agua, en cuyo caso la fase org´ anica con el compuesto ancat se separa de la fase acuosa y el disolvente org´ anico se elimina, cuando es necesario, por evaporaci´on, antes de combinar el producto con sub-componente a).

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M´etodo 3. El componente ani´ onico c) y el componente cati´onico b) se disuelven por separado en un disolvente org´ anico similar o diferente y las soluciones se combinan, o se disuelven sucesivamente o simult´aneamente en el mismo disolvente o mezcla de disolventes y por ´ultimo los disolventes se eliminan por evaporaci´ on.

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El m´etodo 2 da lugar a un producto libre de hal´ ogeno en la m´ axima medida; la capa de ancat oleosa o cerosa que se forma de ´el sobre superficies met´ alicas despu´es de la evaporaci´on del componente a´cido a) tiene propiedades ventajosas en t´erminos de corrosi´ on.

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La amina del sub-componente b) puede reaccionar en ciertos casos con el a´cido del sub-componente c) para formar tambi´en la correspondiente amida en el compuesto ancat. Los compuestos ancat o los sub-componentes de los mismos est´an en estado disuelto, emulsionado o disperso en una fase continua que consiste en subcomponente a). Hay que se˜ nalar que, cuando el compuesto ancat, se mezcla con el sub-componente a) que contiene ´acidos m´as fuertes que el sub-componente c), el compuesto ancat se descompone de manera que el sub-componente c) est´a presente principalmente en forma de a´cido en el producto seg´ un la invenci´on. Cuando el sub-componente a) llega a absorberse en el material diana en uso o se evapora, el compuesto ancat puede volverse a formar sobre la superficie tratada. Por medio del compuesto ancat es posible mejorar la solubilidad de sub-componentes dif´ıcilmente solubles, tales como ´acido benzoico o ´acido salic´ılico, en composiciones seg´ un la invenci´ on y para inhibir su precipitaci´ on. Los compuestos ancat preferidos para composiciones seg´ un la invenci´ on incluyen benzoato, parahidroxibenzoato o salicilato de alquilpiridinio, benzoato, para-hidroxibenzoato o salicilato de alquilbencildimetilamonio, benzoato, para-hidroxibenzoato o salicilato de alquiltrimetilamonio, o benzoato, parahidroxibenzoato o salicilato de alquilamonio primario. A temperaturas convencionales, los conservantes seg´ un la invenci´ on est´an en forma de soluci´ on o en forma s´ olida. El estado s´ olido tiene la ventaja de, por ejemplo, una mayor seguridad en el transporte, menos olor y m´ as f´ acil dispensaci´on. Seg´ un un modo de realizaci´ on preferido de la invenci´ on, la composici´on comprende, adem´ as del componente antimicrobiano, tambi´en un soporte s´ olido en part´ıculas. En este caso, es preferible, que la relaci´ on mutua en peso de componente antimicrobiano a soporte en part´ıculas est´e dentro del intervalo de 1:10-10:1, preferiblemente dentro del intervalo de 3,7-7,3. Trat´ andose de la impregnaci´ on de un soporte en part´ıculas con una soluci´on l´ıquida de a´cido, la superficie espec´ıfica del soporte en part´ıculas debe ser grande, o ser de otra forma absorbente. El tama˜ no medio de part´ıcula del soporte en part´ıculas es, preferiblemente, de aproximadamente 0,01-20 mm. 6

ES 2 175 430 T3

5

10

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40

La sustancia en part´ıculas es preferiblemente una o varias de las siguientes sustancias inorg´anicas en part´ıculas basadas en o´xidos de silicio y/o aluminio, tales como tierra sil´ıcea, material refractario aislante, ´acido sil´ıcico, s´ılice, al´ umina, bentonita, montmorillonita, perlita, esteatita, clorita, vermiculita expandida, silicato de calcio, silicato alum´ınico s´odico, zeolitas, sales inorg´anicas dif´ıcilmente solubles en agua y a´cidos org´anicos, y sustancias org´ anicas, tales como pol´ımeros sint´eticos, almid´ on, celulosa, derivados de celulosa, lignina, derivados de lignina, y materias primas s´ olidas para piensos. Las composiciones s´olidas se preparan por impregnaci´ on de un material absorbente inorg´ anico u org´ anico, tal como s´ılice, minerales de arcilla y celulosa, o mezclas de ellos, con una composici´on en forma de soluci´on como tal. Se pueden preparar tambi´en composiciones s´olidas por impregnaci´on de materiales absorbentes similares o diferentes con ingredientes l´ıquidos de la composici´on o combinaciones l´ıquidas de ingredientes, mezcl´andose por u ´ltimo los materiales absorbentes entre s´ı. Al mismo tiempo, es posible a˜ nadir sub-componentes s´olidos b) y c), si los hay, del componente antimicrobiano, y tambi´en es posible hacerlo con otros ingredientes s´olidos, tales como nutrientes animales y otros componentes de piensos. Por u ´ ltimo, la invenci´ on se refiere a la utilizaci´on de cualquier composici´on de las descritas antes como sustancia inhibidora del crecimiento de microbios da˜ ninos en materia prima de piensos y preparaciones y similares. En este caso se puede efectuar la adici´on de la composici´on como sustancia de tratamiento o aditivo a una materia prima para piensos o al mismo pienso para animales. La composici´ on se puede utilizar tambi´en para ensilado o conservaci´on de grano, o para la desinfecci´on de materiales de envasado, aparatos y equipo, veh´ıculos y otro equipo y materiales industriales, calzado y otros medios protectores, as´ı como naves para animales, silos y otros locales. Las composiciones seg´ un la invenci´ on pueden contener tambi´en, adem´ as de los ingredientes antes mencionados, otros compuestos que potencien la eficacia de la conservaci´ on, por ejemplo, un ´ester formado por un a´cido benzoico sustituido o sin sustituir, tal como a´cido benzoico o ´acido hidroxibenzoico, con un alcohol de C1 -C4 , por ejemplo, benzoato, para-hidroxibenzoato o salicilato de metilo, etilo, propilo o butilo; monoglic´eridos de ´acidos carbox´ılicos de C8 -C16 , u otros compuestos tensioactivos bactericidas o bacteriost´aticos; sales, por ejemplo, sales de magnesio, zinc y cobre, nutrientes animales; o compuestos para control del contenido de sal de la mezcla o para tamponado de su pH, por ejemplo, fosfato de amonio o sulfato de potasio; imidazolidinil urea, compuestos fen´ olicos y a´cidos sulf´onicos, por ejemplo, lignosulfonatos; o aldehidos, por ejemplo, formaldehido. Es posible adem´ as a˜ nadir a la mezcla componentes que sirven como antioxidantes, por ejemplo, hidroxianisol butilado o hidroxitolueno o ´esteres de ´acido g´ alico. Pueden contener adem´ as agentes complejantes conocidos, por ejemplo, por la publicaci´ on de J.R. Hart, Agentes quelantes como potenciadores de conservantes, p´ aginas 323-337 en J.J. Kabara (ed.) Cosmetic and drug preservation. Marcel Dekker 1984, para sensibilizar microbios hacia el efecto de compuestos de amonio cuaternario. Algunos ejemplos de agentes complejantes adecuados son a´cido nitriloac´etico, ´acido etilendiaminotetraac´etico, ´acido hidroxietiletilendiaminotriac´etico, ´acido dietilentriaminopentaac´etico y ´acido ciclohexanodiaminotetraac´etico. Cuando es necesario, tambi´en se pueden utilizar en las composiciones otros aditivos, por ejemplo, para mejorar sus propiedades de transporte, disoluci´ on o humectaci´ on, tales como alcoholes, aminoalcoholes, az´ ucares, sales y agentes tensioactivos.

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50

55

60

Adem´ as del sub-componente a) del componente antimicrobiano, las composiciones seg´ un la invenci´ on pueden contener tambi´en otros compuestos org´anicos e inorg´ anicos que dan reacci´on a´cida con agua, tales como ´acidos o poli´ acidos, o compuestos que forman a´cidos en soluci´ on. Los ´acidos inorg´ anicos adecuados incluyen a´cido fosf´ orico, a´cido sulf´ urico, ´acido clorh´ıdrico y a´cido n´ıtrico. Los a´cidos pueden estar tambi´en en forma parcialmente neutralizada. Los compuestos que forman a´cido incluyen las sales que dan reacci´on a´cida y los anh´ıdridos de a´cido. Las composiciones seg´ un la invenci´ on, se pueden utilizar por tanto para el tratamiento de un material de origen vegetal o animal destinado a piensos de animales, siendo su objetivo matar las bacterias que pasan al material o que pueden estar ya presentes en ´el, o para inhibir su proliferaci´ on en una medida tal que los microbios no puedan causar enfermedades en animales o en personas que entran en contacto con los piensos o con los animales. Los piensos que contienen las mayores concentraciones de ciertas composiciones seg´ un la invenci´ on pueden servir tambi´en para curar infecciones intestinales en animales. Para el tratamiento de piensos y de materia prima de piensos, el sub-componente b) y sub-componente c) que se pueden emplear se seleccionan, naturalmente, entre los compuestos que son los m´ as seguros posibles para animales dom´esticos y para personas y que est´ an principalmente dentro de los productos 7

ES 2 175 430 T3 qu´ımicos aprobados por la legislaci´ on y normativas para las aplicaciones dadas.

5

10

Cuando se utiliza una composici´ on seg´ un la invenci´ on, se pulveriza o roc´ıa, por ejemplo, en la materia prima del pienso. De esta forma, el sub-componente de bajo peso molecular a) impregna con relativamente mayor rapidez el material que se est´ a tratando, posiblemente queda neutralizado al menos parcialmente bajo la acci´on de los ingredientes b´ asicos de aquel o ingredientes del tamponado del pH, o se evapora. Los sub-componentes b) y c) permanecen en cantidades relativamente mayores sobre las superficies del material tratado, y tambi´en sobre las superficies de los microbios que se combaten. Sobre estos u ´ltimos, las composiciones seg´ un la invenci´ on tienden a formar una pel´ıcula de sal an-cat oleosa o cerosa. De esta forma, su capacidad para ser absorbida por la superficie es mayor que la de las composiciones sin subcomponente c). Las composiciones seg´ un la invenci´ on son adecuadas tambi´en para tratamiento de desinfecci´ on de diversos materiales, equipo y superficies, por ejemplo, en establos y otras naves para animales.

15

Las composiciones tambi´en se pueden emplear en otras aplicaciones de ´acidos carbox´ılicos de C1 -C4 .

20

Las composiciones son adecuadas para combatir o para inhibir muchos microbios, entre cuyos ejemplos est´an bacterias gram-negativas y gram-positivas, por ejemplo, Salmonella, Escherichia coli, Pseudomonas, Clostridium, Listeria, Campylobacter, y Yersinia, o mohos, levaduras y hongos, por ejemplo, Fusarium, Aspergilllus, Penicillium, Sacharomyces y Candida. A continuaci´ on se dan algunos ejemplos y ejemplos de referencia, cuyo u ´nico prop´ osito es ilustrar la invenci´on. Todos los porcentajes son porcentajes en peso.

25

Ejemplo Ensayo de evaporaci´ on 30

Se prepararon las siguientes composiciones (cantidades en % en peso) Ingrediente

A ref.

B

C

D

E

F

G

Acido f´ ormico Acido propi´ onico Acido benzoico Octilamina Etanolamina Agua

56 29 9 6

54,9 28,4 8,8 2 5,9

53,8 27,8 8,6 4 5,8

51,5 26,7 8,3 8 5,5

54,9 28,4 8,8 2 5,9

53,8 27,8 8,6 4 5,8

51,5 26,7 8,3 8 5,5

Relaci´ on molar (BA = a´cido benzoico) Octilamina:BA 0,21 0,44 0,91 Etanolamina:BA -

0,41

0,84

1,74

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40

45

Las mezclas permanecieron estables a temperatura ambiente. 50

Cuando se secaron las soluciones en placas Petri, cristaliz´o el ´acido benzoico s´olido desde la muestra A, en las muestras B-D el residuo era m´as o menos oleoso, y en las muestras E-G era ceroso. Se hizo tambi´en la correspondiente mezcla con ciclohexilamina seg´ un la invenci´ on y se obtuvo un residuo oleoso de ella. 55

Ejemplos de preparaci´ on Ejemplos 1-6 60

Se prepararon las siguientes composiciones disolviendo primero a´cido benzoico y luego octilamina en la mezcla que conten´ıa los dem´ as ingredientes (cantidades en % en peso)

8

ES 2 175 430 T3

Ingrediente

1

2

3

4

5

6

76,0 1,9 17,1 3,0 2,0

74,4 1,9 16,7 3,0 4,0

71,2 1,8 16,0 3,0 8,0

73,6 1,8 16,6 6,0 2,0

72,0 1,8 16,2 6,0 4,0

68,8 1,7 15,5 6,0 8,0

Relaci´ on molar octilamina:´ acido benzoico 0,63 1,26 2,52

0,32

0,63

1,26

Acido f´ ormico Acido fosf´ orico Agua Acido benzoico Octilamina

5

10

15

Ejemplo

En las composiciones de los Ejemplos 1-6, el ´acido benzoico permanec´ıa disuelto a temperatura ambiente, mientras que sin amina, el a´cido benzoico precipita ya en una hora. Diversas sales An-cat Ejemplo 7

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Acido benzoico - octilamina

25

Se disolvieron 0,4 g de a´cido benzoico en 0,4 g de n-octilamina mientras se calentaba la mezcla (relaci´ on molar octilamina:´ acido benzoico 1,06). Se obtuvo un compuesto oleoso, pegajoso. Al utilizarlo para la preparaci´ on de formulaciones a base de ´acido f´ ormico para la conservaci´on de piensos, se disolvi´ o al agitar la mezcla vigorosamente. Ejemplos 8-24

30

35

Las concentraciones inhibidoras m´ as bajas (Ensayos con Bioscreen) Para los ensayos, se prepararon series de diluci´on de cultivos microbianos en agua con peptona (pH 6) utilizando las diversas cantidades de los conservantes de la Tabla 1. Se sigui´ o con monitor el crecimiento bacteriano durante 48 horas utilizando un aparato Bioscreen (Labysystems, Finlandia). El aparato mide autom´ aticamente la turbidez de una serie de muestras, que indica el crecimiento bacteriano en funci´ on del tiempo. Se estudiaron mezclas de referencia 1-3 y composiciones de los ejemplos 8-24 seg´ un la invenci´ on. TABLA 1

40

45

Referencia 1 Referencia 2 Referencia 3 Referencia 8 Ejemplo 9

50

Ejemplo 10 Ejemplo 11

55

Ejemplo 12 Ejemplo 13

60

Ejemplo 14

80 % ´acido f´ ormico + 2 % H3 PO4 + 18 % agua 95 % mezcla de referencia 1 + 2,5 % benzoato de etilo + 2,5 % de benzoato de sodio 90 % mezcla referencia 1 + 5 % benzoato de etilo + 5 % de benzoato de sodio 95 % mezcla de referencia 1 + 2,5 % de benzoato de etilo + 2,5 % de cloramina T/ Cl− de benzalconio 92,5 % mezcla de referencia 1 + 5 % de benzoato de etilo + 2,5 % cloraminaT/ Cl− de benzalconio 90 % mezcla de referencia 1 + 5 % de benzoato de etilo + 5 % de Cloramina-T/ Cl− de benzalconio 95 % mezcla de referencia 1 + 2,5 % benzoato de etilo + 2,5 % Cl − de benzoato de Na/Cl− de cetilpiridinio 92,5 % mezcla de referencia 1 + 5 % de benzoato de etilo + 2,5 % de benzoato de Na/ Cl− de cetilpiridinio 90 % mezcla de referencia 1 + 5 % benzoato de etilo + 5 % de benzoato de Na/ Cl− de cetilpiridinio 95 % de mezcla de referencia 1 + 25 % de Ampholac YJH-40 + 2,5 % de benzoato de Na/ Cl− de cetilpiridinio

9

ES 2 175 430 T3 TABLA 1 (Continuaci´on) Ejemplo 15 5

Ejemplo 16 Ejemplo 17 10

Ejemplo 18 Ejemplo 19 15

Ejemplo 20 Ejemplo 21 20

Ejemplo 22

25

Ejemplo 23 Ejemplo 24

92,5 % de mezcla de referencia 1 + 5 % de Ampholac YJH-40 + 2,5 % de benzoato de Na/ Cl− de cetilpiridinio 90 % de mezcla de referencia 1 + 5 % de Ampholac YJH-40 + 5 % de benzoato de Na/ Cl− de cetilpiridinio 95 % de mezcla de referencia 1 + 2,5 % de Amphoteen 24 + 2,5 % de benzoato de Na/ Cl− de cetilpiridinio 92,5 % mezcla de referencia 1 + 5 % de Amphoteen 24 + 2,5 % de benzoato de Na/Cl− de cetilpiridinio 90 % de mezcla de referencia 1 + 5 % de Amphoteen 24 + 5 % de benzoato de Na/ Cl− de cetilpiridinio 95 % de mezcla de referencia 1 + 2,5 % de benzoato de etilo + 2,5 % de benzoato de Na/Cl− de cetilpiridinio 92,5 % de mezcla de referencia 1 + 5 % de benzoato de etilo + 2,5 % de benzoato de Na/Cl− de cetilpiridinio 90 % de mezcla de referencia 1 + 5 % de benzoato de etilo + 5 % de benzoato de Na/Cl − de cetilpiridinio 95 % de mezcla de referencia 1 + 5 % de Ampholac YJH-40 95 % de mezcla de referencia 1 + 5 % de Amphoteen 24

Ampholac YJH-40 es dipropionato de octildiamina y Amphoteen 24 es alquil(C12-C14 )dimetilbeta´ına. 30

Para el ensayo con Bioscreen se prepararon series de muestras que conten´ıan un in´ oculo de microbio, y se les a˜ nadi´ o microbicidas en cantidades de 0,02, 0,04, 0,06, 0,08 y 0,1 %. Se ensay´o la eficacia frente a los micro-organismos de la Tabla 2. TABLA 2

35

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50

Microbios utilizados en la investigaci´ on M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8

Salmonella infantis Salmonella agona Salmonella montevideo Salmonella schwartzgrund Salmonella seftenberg Salmonella 4.12-b Escherichia coli Listeria monocytogenes

Las concentraciones de inhibici´ on m´ as peque˜ nas fueron las mostradas en la Tabla 3

55

60

10

ES 2 175 430 T3 TABLA 3 Resultados con muestras de los Ejemplos 8-24 Microbio: Muestra

5

Ref. 1 Ref. 2 Ref. 3 Ej. 8 Ej. 9 Ej. 10 Ej. 11 Ej. 12 Ej. 13 Ej. 14 Ej. 15 Ej. 16 Ej. 17 Ej. 18 Ej. 19 Ej. 20 Ej. 21 Ej. 22 Ej. 23 Ej. 24

10

15

20

25

30

35

M1

M2

M3

M4

M5

M6

M7

M8

>0,1 >0,1 >0,1 0,06 0,06 0,04 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 >0,1 >0,1

>0,1 >0,1 >0,1 0,06 0,06 0,04 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 >0,1 >0,1

>0,1 >0,1 >0,1 0,06 0,06 0,04 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 >0,1 >0,1

>0,1 >0,1 >0,1 0,06 0,06 0,04 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 >0,1 >0,1

>0,1 >0,1 >0,1 0,06 0,06 0,04 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 >0,1 >0,1

>0,1 >0,1 >0,1 0,06 0,06 0,04 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 0,04 0,04 0,02 >0,1 >0,1

>0,1 >0,1 >0,1 0,04 0,04 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 >0,1 >0,1>

>0,1 >0,1 >0,1 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 >0,1 >0,1

Los resultados muestran que un compuesto microbicida cati´ onico trabaja tambi´en en presencia de un compuesto ani´ onico, y la eficacia es excelente si se compara con las muestras de referencia conocidas que contienen ´acido f´ ormico y benzoatos. Ejemplos 25-48 Las concentraciones inhibidoras m´ as bajas 2

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Se ensayaron las concentraciones inhibidoras m´as bajas de las siguientes formulaciones l´ıquidas frente a varios microorganismos, las combinaciones an-cat (ani´onicas-cati´onicas) utilizadas en las formulaciones se hicieron a una relaci´on molar de 1:1. Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo

25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38

97,5 % de ´acido f´ ormico + 2,5 % de (´acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 95 % de ´acido f´ ormico + 5 % de (´acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 97,5 % de ´acido l´ actico + 2,5 % de (´ acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 95 % de ´acido l´ actico + 5 % de (´acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 97,5 % de ´acido a´cido ac´etico+ 2,5 % de (´ acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 95 % de ´acido ac´etico + 5 % de (´acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 97,5 % de ´acido propi´ onico + 2,5 % de (´ acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 95 % de ´acido propi´ onico + 5 % de (´ acido octanoico + cloruro de cetilpiridina) 97,5 % de ´acido f´ ormico + 2,5 % de (´acido ad´ıpico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido f´ ormico + 5 % de (´acido ad´ıpico+cloruro de benzalconio) 97,5 % de ´acido l´ actico + 2,5 % de (´ acido ad´ıpico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido l´ actico + 5 % de (´acido ad´ıpico + cloruro de benzalconio) 97,5 % de ´acido ac´etico + 2,5 % de (´acido ad´ıpico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido ac´etico + 5 % de (´acido ad´ıpico + cloruro de benzalconio) 11

ES 2 175 430 T3

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Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo

39 40 41 42 43 44 45 46 47 48

97,5 % de ´acido propi´ onico + 2,5 % (´ acido ad´ıpico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido propi´ onico + 5 % de (´ acido ad´ıpico + cloruro de benzalconio) 97,5 % de ´acido f´ ormico + 2,5 % de (´acido octanoico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido f´ ormico + 5 % de (´acido octanoico + cloruro de benzalconio) 97,5 % de ´acido l´ actico + 2,5 % de (´acido octanoico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido l´ actico + 5 % de (´acido octanoico + cloruro de benzalconio) 97,5 % de ´acido ac´etico + 2,5 % de (´acido octanoico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido ac´etico + 5 % de (´acido octanoico + cloruro de benzalconio) 97,5 % de ´acido propi´ onico + 2,5 % de (´ acido octanoico + cloruro de benzalconio) 95 % de ´acido propi´ onico + 5 % de (´ acido octanoico + cloruro de benzalconio)

En lo anterior, “cloruro de benzalconio” es el nombre de un producto para una composici´ on consistente en una mezcla de cloruros de alquilbencildimetilamonio, principalmente cloruro de alquil(C12-C16 )dimetilbencilamonio (Referencia: CTFA Cosmetic Ingredients Dictionary, 3a¯ edici´on, The Cosmetic, Toiletry and Fragance Assotiation, USA, 1982) Para el ensayo (Bioscreen), se prepararon series que conten´ıan un in´ oculo de microbio y microbicidas al 0,02, 0,04, 0,06, 0,08 y 0,1 %. Los microbios estudiados fueron: M1 Salmonella infantis M2 Saccharomyces cerevisiae

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M3 Candida lambica M4 Listeria monocytogenes M5 Escherichia coli Las concentraciones inhibidoras m´as bajas en las soluciones de ensayo eran: Microbio: Muestra

M1

M2

M3

M4

M5

Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo Ejemplo

0,06 0,02 0,06 0,02 0,06 0,02 0,06 0,02 0,06 0,04 0,08 0,04 0,08 0,04 0,08 0,04 0,08 0,04 0,08 0,04 0,08 0,04 0,08 0,04

0,06 0,02 0,06 0,02 0,08 0,04 0,06 0,04 0,06 0,06 >0,1 (0,1) 0,1 0,08 0,08 -

0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 -

0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02

0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02 0,04 0,02

25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48

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ES 2 175 430 T3 Ejemplos 49-50 Ensayo de piensos 5

10

15

Se mezcl´o uniformemente un in´ oculo de Salmonella infantis en una cantidad de 1500-3000 bacterias/gramo de pienso en una preparaci´ on comercial de pienso para pollos en la que aproximadamente 2/3 era grano y el resto principalmente harina de pescado y soja. Se distribuy´ o la composici´on antimicrobiana de ensayo en el alimento contaminado lo m´as uniformemente posible en una cantidad que correspond´ıa a una dosis de 8 kg/tonelada m´etrica. Se verti´o agua con peptona en un matraz de control. Los cultivos se almacenaron a temperatura ambiente en matraces Erlenmeyer de litro cerrados con hoja de aluminio. Cada d´ıa de toma de muestras, se tomaron 2 muestras paralelas de 10 gramos de los cultivos y despu´es de agitar en Ultra-Turrax, se hicieron series de diluciones de las muestras. Desde las probetas de diluci´ on, se extendi´ o la muestra sobre placas de agar de 50 µl sobre discos Petri. Al cabo de 24 horas de incubaci´ on a 37◦ C, se contaron las colonias bacterianas formadas. Las composiciones de los Ejemplos 49-50 eran seg´ un la presente invenci´ on.

20

25

Medio

Referencia Referencia Ejemplo 49

agua con peptona soluci´on 1∗ ) 95 % de soluci´on 1 5 % de Cl− de cetilpiridinio 95 % de soluci´on 1 2,5 % de Cloramina-T 2,5 % Cl− de cetilpiridinio

Ejemplo 50 30 ∗

35

Tiempo durante el que desaparece la Salmonella (2 determinaciones paralelas)

Ejemplo

>30 d 7,7 d 5,5 d 5,1 d

) 80 % ´acido f´ ormico, 2 % ´acido fosf´ orico y 18 % de agua

Ejemplo 51 Ensayo de ensilado

40

45

Se prepar´ o una composici´ on de agente conservante seg´ un la invenci´ on por mezcla de 71,5 % de ´acido f´ ormico, 18 % de ´acido propi´ onico, 4,5 % de ´acido benzoico, 4,0 % de octilamina y 2 % de agua y se calent´ o la mezcla hasta disoluci´on del a´cido benzoico. La composici´on de referencia conten´ıa aproximadamente 56 % de ´acido f´ ormico, 29 % de ´acido propi´ onico, 9 % de a´cido benzoico, 5,5 % de agua, y 0,5 % de monoglic´erido para inhibir la cristalizaci´ on del a´cido benzoico. Se compararon los conservantes en el ensilado. Se extendieron los conservantes por el heno en una cantidad que correspond´ıa a una proporci´ on de 5 litros por tonelada m´etrica de pienso. Los ensilados se empaquetaron en bolsas de pl´ astico, que se cerraron herm´eticamente. En el ensayo cero no se utilizaron conservantes. Se obtuvieron los siguientes resultados:

50

55

60

13

ES 2 175 430 T3

pH, 1 semana 1 mes Acido l´actico, g/kg seco 1 semana 2 meses Acido ac´etico, g/kg seco 1 semana 2 meses Az´ ucares, g/kg seco 1 semana 2 meses Amoniaco ∗ ), % de prote´ına nutriente soluble 1 semana 2 meses Levaduras, cfu (unidades de formaci´ on de colonia)/gramo 1 semana 1 mes Mohos, cfu/gramo 1 semana 1 mes Lactobacilli, cfu/gramo 1 semana 1 mes

5

10

15

20

25

30

35

40

45

∗

Ensayo 0

Referencia

Invenci´on (Ejemplo 51)

4,1 3,9

4,3 4,0

4,1 4,2

46 84

28 54

38 42

18 22

8 15

4 7

19 20

140 97

126 120

5,4 15,6

5,0 6,0

5,0 5,0

300000 4400000