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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 115 163 kInt. Cl. : A61K 31/445

11 N´ umero de publicaci´on: 6

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˜ ESPANA

A61K 31/40 A61K 31/38 A61K 31/55

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 94307526.7 kFecha de presentaci´on : 13.10.94 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 652 003 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 10.05.95

T3

86 86 87 87

k

54 T´ıtulo: Procedimiento para inhibir la proliferaci´ on de c´ elulas de m´ usculos lisos y la restinosis.

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73 Titular/es: Eli Lilly and Company

k

72 Inventor/es: Cullinan, George Joseph;

k

74 Agente: Carpintero L´ opez, Francisco

30 Prioridad: 15.10.93 US 138296

Lilly Corporate Center Indianapolis, Indiana 46285, US

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

16.06.98

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 115 163 T3

16.06.98

Aviso:

k k

Singh, Jai Pal y Wood, Dan Lee

k

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 115 163 T3 DESCRIPCION

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La proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos desempe˜ na un papel importante en enfermedades tales como aterosclerosis y restinosis. La restinosis vascular despu´es de una angioplastia coronaria transluminal percut´anea (PTCA) se ha demostrado que es una respuesta de los tejidos caracterizada por una fase temprana y otra tard´ıa. La fase temprana, que se produce horas a d´ıas despu´es de la PTCA, se debe a una trombosis con algunos vasoespasmos, mientras que la fase tard´ıa parece estar dominada par una proliferaci´ on y migraci´on excesivas de c´elulas de m´ usculos lisos. En esta enfermedad, la movilidad y colonizaci´on celulares aumentadas por c´elulas y macr´ofagos de m´ usculos lisos contribuye significativamente a la patog´enesis de la enfermedad. La proliferaci´ on y migraci´on excesivas de c´elulas vasculares de m´ usculos lisos puede ser el mecanismo primario para la reoclusi´on de arterias coronarias a continuaci´ on de PTCA, aterectom´ıa, angioplastia l´ aser y cirug´ıa de implante de derivaci´ on (bypass) arterial. V´ease la publicaci´on “Intimal Proliferation of Smooth Muscle Cells as an Explanation for Recurrent Coronary Artery Stenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty”, Austin et al., Journal of the American College of Cardiology 8:369-375 (Agosto 1985). La restinosis vascular sigue siendo una complicaci´on a largo plazo importante que sigue a una intervenci´on quir´ urgica de arterias bloqueadas por angioplastia coronaria transluminal percut´ anea (PTCA), aterectom´ıa, angioplastia l´ aser y cirug´ıa de implante de derivaci´ on arterial. En aproximadamente 35 % de los pacientes que experimentan PTCA, se produce una reoclusi´on dentro de los tres a seis meses que siguen a los procedimientos. Las actuales estrategias para tratar la restinosis vascular incluyen la intervenci´ on mec´anica mediante dispositivos tales como sondas o terapias farmacol´ogicas que incluyen heparina, heparina de bajo peso molecular, cumarina, aspirina, aceite de pescado, antagonista de calcio, esteroides y prostaciclina. Estas estrategias no han conseguido contener la velocidad de reoclusi´on y han sido ineficaces para el tratamiento y prevenci´ on de la restinosis vascular. V´ease “Prevention of Restinosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty: The Search for a ’Magic Bullet”’, Hermans et al., American Heart Journal 122: 171-187 (Julio 1991). En la patog´enesis de la restinosis se producen una proliferaci´on y migraci´on celulares excesivas como consecuencia de factores de crecimientos producidos por constituyentes celulares en la sangre y en la pared de los vasos arteriales deteriorados que act´ uan como intermediarios en la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos en la restinosis vascular. Los agentes que inhiben la proliferaci´ on y/o migraci´on de c´elulas de m´ usculos lisos son u ´ tiles en el tratamiento y prevenci´ on de la restinosis. La presente invenci´on proporciona la utilizaci´ on de compuestos como inhibidores de la proliferaci´on de c´elulas de m´ usculos lisos. La invenci´on proporciona el uso de un compuesto de f´ ormula

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ES 2 115 163 T3 O O k k en las que R1 y R3 son independientemente hidr´ ogeno, -CH3 , -C-(alquilo de C1 -C6 ) , o -C-Ar, , en donde Ar es fenilo opcionalmente sustituido; 5

R2 es

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y R4 es hidr´ ogeno o -OR1 , y sales y solvatos farmac´euticamente aceptables del mismo para la preparaci´ on de un medicamento u ´til para inhibir de la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos y para inhibir la restinosis. La presente invenci´on se refiere al descubrimiento de que un grupo selecto de compuestos, los de f´ ormula I y II, son u ´ tiles para inhibir la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos y la restinosis. Los usos proporcionados por esta invenci´ on se ponen en pr´ actica administrando a un ser humano u otro mam´ıfero que lo necesite una dosis de un compuesto de f´ ormula I o II, o una sal o solvato farmac´euticamente aceptables del mismo, que es eficaz para inhibir la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos o restinosis. El t´ermino “inhibir” se define para incluir su significado generalmente aceptado, que incluye tratar de forma profil´ actica un ser humano que padece proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos o restinosis y refrenar y/o tratar la proliferaci´ on existente de c´elulas de m´ usculos lisos o restinosis. Como tal, el presente uso incluye el tratamiento tanto m´edico terap´eutico como el profil´ actico, en la medida apropiada. Generalmente, el compuesto se formula con excipientes, diluyentes o veh´ıculos comunes, y se comprime en forma de comprimidos, o se formula en forma de elixires o soluciones para una conveniente administraci´on oral, o se administra mediante las v´ıas intramuscular o intravenosa. Los compuestos se pueden administrar por v´ıa tansdermal, y se pueden formular como forma de dosificaci´ on de liberaci´ on sostenida y similares. Los compuestos de f´ ormula I utilizados en los usos de la presente invenci´ on se pueden preparar seg´ un procedimientos establecidos, tales como los detallados en las patentes de EE.UU. nos 4.133.814, 4.418.068 y 4.380.635, todas las cuales se incorporan como referencia a la presente invenci´on. En general, el procedimiento comienza con un benzo[b]tiofeno que tiene un grupo 6-hidroxilo y un grupo 2-(4-hidroxifenilo). El compuesto de partida se protege, se alquila y se desprotege para formar los compuestos de f´ormula I. Ejemplos de la preparaci´ on de tales compuestos se proporcionan en las patentes de EE.UU. anteriormente expuestas. Los compuestos de f´ormula II se pueden preparar como se describe en las patentes de EE.UU. nos 4.230.862 y 4.232.707, incorporadas como referencia a la presente memoria descriptiva. En la invenci´on se incluye el uso de los siguientes compuestos:

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ES 2 115 163 T3 Grupos fenilo sustituidos incluyen grupos fenilo sustituidos una o dos veces con alquilo de C1 -C6 , alcoxi de C1 -C4 , hidroxi, nitro, cloro, fluoro o tri(cloro o fluoro)metilo. 5

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Los compuestos utilizados en los procedimientos de esta invenci´on forman sales por adici´ on de a´cidos y basas farmac´euticamente aceptables con una amplia diversidad de a´cidos y bases org´anicos e inorg´ anicos, e incluyen las sales fisiol´ogicamente aceptables que se utilizan a menudo en qu´ımica farmac´eutica. Tales sales son tambi´en parte de esta invenci´on. Acidos inorg´ anicos t´ıpicos utilizados para formar tales sales incluyen clorh´ıdrico, bromh´ıdrico, yodh´ıdrico, n´ıtrico, sulf´ urico, fosf´ orico, hipofosf´ orico y similares. Se pueden utilizar tambi´en sales derivados de ´acidos org´ anicos, tales como ´acidos alif´aticos mono- y dicarbox´ılicos, ´acidos alcanoicos fenil-sustituidos, a´cidos hidroxialcanoicos e hidroxialcanodioicos, ´acidos arom´aticos, ´ acidos sulf´onicos alif´aticos y arom´aticos. Tales sales farmac´euticamente aceptables incluyen, por tanto, acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitribenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, bromuro, isobutirato, fenilbutirato, β-hidroxibutirato, butino-1,4-dioato, hexino-1,4-dioato, caprato, caprilato, cloruro, cinamato, citrato, formiato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bisulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, clorobencenosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, metano-sulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-toluenosulfonato, xilenosulfonato, tartrato y similares. Una sal preferida es la sal de hidrocloruro. Las sales por adici´on de a´cidos farmac´euticamente aceptables se forman t´ıpicamente haciendo reaccionar un compuesto de f´ ormula I con una cantidad equimolar o en exceso de a´cido. Los reactantes se combinan generalmente en un disolvente mutuo tal como dietil-´eter o benceno. La sal normalmente se separa por precipitaci´ on de la soluci´on en aproximadamente una hora a 10 d´ıas y se puede aislar mediante filtraci´ on, o el disolvente se puede eliminar mediante medios convencionales. Bases com´ unmente utilizadas para la formaci´ on de las sales incluyen hidr´ oxido de amonio e hidr´ oxidos, carbonatos y bicarbonatos de metales alcalinos y alcalino-t´erreos, as´ı como aminas alif´ aticas y arom´aticas, diaminas alif´ aticas e hidroxi-alquil-aminas. Bases especialmente u ´tiles en la preparaci´on de sales por adici´on incluyen hidr´ oxido de amonio, carbonato de potasio, bicarbonato de sodio, hidr´ oxido de calcio, metilamina, dietilamina, etilen-diamina, ciclohexilamina y etanolamina. Las sales farmac´euticamente aceptables tienen generalmente caracter´ısticas mejoradas de solubilidad comparadas con el compuesto del que derivan y, por tanto, a menudo son m´ as f´ aciles de llevar a una formulaci´ on en forma de l´ıquidos o emulsiones. Las formulaciones farmac´euticas se pueden preparar mediante procedimientos bien conocidos en la t´ecnica. Por ejemplo, los compuestos se pueden formular con excipientes, diluyentes o veh´ıculos comunes, y se pueden formar como comprimidos, c´apsulas, suspensiones, polvos y similares. Ejemplos de excipientes, diluyentes y veh´ıculos que son adecuados para tales formulaciones incluyen los siguientes: cargas y diluyentes tales como almid´on, az´ ucares, manitol y derivados sil´ıcicos; agentes aglutinantes tales como carboximetil-celulosa y otros derivados de celulosa, alginatos, gelatina y polivinilpirrolidona; agentes humectantes tales como glicerol; agentes disgregantes tales como agar-agar, carbonato de calcio y bicarbonato de sodio; agentes para retardar la disoluci´ on tales como parafina; aceleradores de resorci´ on tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes tensioactivos tales como alcohol cet´ılico, monoestearato de glicerol; veh´ıculos adsorbentes tales como caol´ın y bentonita; y lubricantes tales como talco, estearato de calcio y magnesio y poli(etil-glicoles) s´olidos.

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Los compuestos se pueden formular tambi´en como elixires o soluciones para una conveniente administraci´on oral o como soluciones apropiadas para administraci´ on parenteral, por ejemplo, mediante las v´ıas intramuscular, subcut´ anea o intravenosa. Adicionalmente, los compuestos son bien adecuados para ser formulados como formas de dosificaci´ on de liberaci´ on sostenida y similares. Las formulaci´on pueden estar constituidas de forma que liberen el ingrediente activo solamente o preferentemente en una parte particular del tracto intestinal, posiblemente durante un per´ıodo de tiempo. Los revestimientos, envolturas y matrices protectoras se pueden hacer, por ejemplo, de sustancias pol´ımeras o ceras. La dosificaci´ on particular de un compuesto de f´ ormula I necesaria para inhibir la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos y la restinosis seg´ un esta invenci´on depender´ a de la gravedad del estado, la v´ıa de administraci´ on y factores relacionados que ser´an decididos por el facultativo encargado. Generalmente, dosis diaria aceptadas y eficaces ser´an de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1.000 mg/d´ıa, y m´as 4

ES 2 115 163 T3 t´ıpicamente de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg/d´ıa. Tales dosificaciones se administrar´ an a un sujeto en necesidad de tratamiento de una a tres veces cada d´ıa, o m´as a menudo en la medida necesaria para inhibir eficazmente la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos o restinosis. 5

El suministro local de cantidades inhibitorias de compuesto activo para el tratamiento de la restinosis puede ser mediante una diversidad de t´ecnicas que administran el compuesto en el sitio de proliferaci´on o cerca de ´el. Los ejemplos de t´ecnicas de suministro local no est´ an destinados a limitar las t´ecnicas disponibles, sino a ilustrarlas. Ejemplos incluyen cat´eteres de suministro local, veh´ıculos espec´ıficos para el sitio, implantes, inyecci´ on directa o aplicaciones directas.

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El suministro local mediante un cat´eter permite la administraci´ on de un agente farmac´eutico directamente a la lesi´on de proliferaci´on. Ejemplos de suministro local utilizando un cat´eter con bal´ on se describen en los documentos EP-383.492 A2 y patente de EE.UU. 4.636.195 (Wolinsky, 13 de Enero de 1.987). 15

El suministro local mediante un implante describe la colocaci´on quir´ urgica de una matriz que contiene el agente farmac´eutico en la lesi´on de proliferaci´on. La matriz implantada libera el agente farmac´eutico mediante difusi´ on, reacci´on qu´ımica o activadores de disolventes. Lange, Science 249: 1527-1533 (Septiembre, 1990). 20

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Un ejemplo de suministro local mediante un implante es la utilizaci´on de una sonda. Las sondas est´ an dise˜ nadas para impedir mec´ anicamente el colapso y reoclusi´on de las arterias coronarias. La incorporaci´on de un agente farmac´eutico en la sonda suministra el f´armaco directamente al sitio de proliferaci´ on. El suministro local mediante esta t´ecnica se describe en la publicaci´on de Kohn, Pharmaceutical Technology (Octubre, 1990). Otro ejemplo es un sistema de suministro en el que un pol´ımero que contiene el agente farmac´eutico se inyecta en la lesi´on en forma l´ıquida. Seguidamente el pol´ımero se cura para formar el implante in situ. Esta t´ecnica se describe en el documento PCT WO 90/03768 (Donn, 19 de Abril de 1990).

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Otro ejemplo es el suministro de un agente farmac´eutico mediante sellado pol´ımero endoluminal. Esta t´ecnica utiliza un cat´eter para aplicar un implante pol´ımero en la superficie interior del lumen. El agente farmac´eutico incorporado en el implante pol´ımero biodegradable se libera as´ı en el sitio quir´ urgico. Se describe en el documento PCT WO 90/01969 (Schindler, 23 de Agosto de 1.989). 35

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Un ejemplo final de suministro local mediante un implante es por inyecci´ on directa de ves´ıculas o micropart´ıculas en el lugar de proliferaci´on. Estas micropart´ıculas pueden estar compuestas por sustancias tales como prote´ınas, l´ıpidos, carbohidratos o pol´ımeros sint´eticos. Estas micropart´ıculas tienen el agente farmac´eutico incorporado por todas las micropart´ıculas o sobre las micropart´ıculas en forma de un revestimiento. Sistemas de suministro que incorporan micropart´ıculas se describen en la publicaci´on de Lange, Science 249: 1527-1533 (Septiembre, 1990) y Mathiowitz, et al., J. App. Poly. Sci., 26:809 (1981).

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El suministro local mediante veh´ıculos espec´ıficos para el sitio describe unir el agente farmac´eutico a un veh´ıculo que dirigir´ a el f´ armaco al lugar de proliferaci´ on. Ejemplos de esta t´ecnica de suministro incluyen la utilizaci´on de veh´ıculos tales como ligandos proteicos o anticuerpos monoclonales. Lange, Science 249:1527-1533 (Septiembre).

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El suministro local mediante aplicaci´ on directa incluye la utilizaci´ on de aplicaciones t´opicas. Un ejemplo de un suministro local mediante aplicaci´ on directa es aplicar el agente farmac´eutico directamente al implante de derivaci´ on arterial durante el procedimiento quir´ urgico.

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Habitualmente se prefiere administrar un compuesto de f´ ormula I en forma de una sal por adici´ on de a´cidos, como es habitual en la administraci´ on de productos farmac´euticos que llevan un grupo b´ asico, tal como el anillo piperidino. Tambi´en es ventajoso administrar tal compuesto por la v´ıa oral a un ser humano de edad avanzada (por ejemplo, una mujer post-menopausal). Para tales fines, est´ an disponibles las siguientes formas de dosificaci´on oral. Formulaciones

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En las formulaciones que siguen, “ingrediente activo” significa un compuesto de f´ ormula I o II.

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ES 2 115 163 T3 Formulaci´ on 1 C´ apsulas de gelatina 5

Se preparan c´ apsulas de gelatina dura utilizado lo siguiente: Ingrediente Ingrediente activo Almid´ on, NF Polvo fluido de almid´ on Fluido de silicona de 350 centistokes

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Cantidad (mg/c´ apsula) 0,1 - 1000 0 - 650 0 - 650 0 - 15

Los ingredientes se combinan, se hacen pasar a trav´es de una tamiz de malla U.S. n◦ 45 y se introducen en c´apsulas de gelatina dura. Ejemplos de formulaciones espec´ıficas de c´apsulas del compuesto de f´ ormula 1 en el que el compuesto es raloxifeno, incluyen los que se muestran a continuaci´on: Formulaci´on 2 C´ apsula de raloxifeno

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Ingrediente Raloxifeno Almid´ on, NF Polvo fluido de almid´ on Fluido de silicona de 350 centistokes

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Cantidad (mg/c´ apsula) 1 112 225,3 1,7

Formulaci´ on 3 C´ apsula de raloxifeno Ingrediente

Cantidad (mg/c´ apsula)

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Raloxifeno Almid´ on, NF Polvo fluido de almid´ on Fluido de silicona de 350 centistokes

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5 108 225,3 1,7

Formulaci´ on 4 50

C´ apsula de raloxifeno Ingrediente

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Cantidad (mg/c´ apsula)

Raloxifeno Almid´ on, NF Polvo fluido de almid´ on Fluido de silicona de 350 centistokes

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ES 2 115 163 T3 Formulaci´on 5 C´ apsula de raloxifeno 5

Ingrediente

Cantidad (mg/c´ apsula)

Raloxifeno Almid´ on, NF Polvo fluido de almid´ on Fluido de silicona de 350 centistokes

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Las formulaciones espec´ıficas anteriores se pueden cambiar de conformidad con las variaciones razonables proporcionadas. 15

Una formulaci´ on de comprimidos se prepara utilizando los ingredientes de a continuaci´on: Formulaci´on 6 20

Comprimidos Ingrediente Ingrediente activo Celulosa microcristalina Di´oxido de silicio, pirof´orico Acido este´arico

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Cantidad (mg/comprimido) 0,1 - 1000 0 - 650 0 - 650 0 - 15

Los componentes se combinan y se comprimen para formar comprimidos. De forma alternativa, se preparan comprimidos que contienen cada uno 0,1 - 1000 mg de ingrediente activo como sigue:

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Formulaci´on 7 Comprimidos

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Ingrediente

Cantidad (mg/comprimido)

Ingrediente activo Almid´ on Celulosa microcristalina Polivinilpirrolidona (como soluci´on al 10 % en agua) Carboximetil-celulosa de sodio Estearato de magnesio Talco

0,1 - 1000 45 35 4 4,5 0,5 1

El ingrediente activo, el almid´ on y la celulosa se hacen pasar a trav´es de un tamiz de malla U.S. n◦ 45 y se mezclaron a fondo. La soluci´on de polivinilpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes, que anulos as´ı producidos se seguidamente se hacen pasar a trav´es de un tamiz de malla U.S. n◦ 14. Los gr´ secan a 50◦ -60◦C y se hacen pasar a trav´es de un tamiz de malla U.S. n◦ 18. El carboximetil-almid´on de sodio, estearato de magnesio y talco, previamente pasador a trav´es de un tamiz de malla U.S. n◦ 60, se a˜ naden seguidamente a los gr´ anulos que, despu´es de mezclar, se comprimen un una m´aquina de comprimidos para producir los comprimidos. Se prepararan suspensiones que contienen cada una 0,1 - 1000 mg de medicamento por 5 ml de dosis como sigue:

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ES 2 115 163 T3 Formulaci´ on 8 Suspensiones 5

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Ingrediente

Cantidad (mg/5 ml)

Ingrediente activo Carboximetil-celulosa de sodio Jarabe Soluci´ on de a´cido benzoico Aroma Colorante Agua purificada hasta

0,1 - 1000 mg 50 mg 1,25 mg 0,10 ml c.v. c.v. 5 ml

El medicamento se hace pasar a trav´es de un tamiz de malla U.S. n◦ 45. y se mezcla con la carboximetilcelulosa de sodio y el jarabe para formar una pasta blanda. La soluci´ on de a´cido benzoico, el aroma y el colorante se diluyen con algo de agua y se a˜ naden con agitaci´ on. Seguidamente, se a˜ nade suficiente agua para producir el volumen necesario. Procedimiento de ensayo

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Los compuestos de la invenci´on tienen capacidad para inhibir la proliferaci´ on vascular de c´elulas de m´ usculos lisos. Esto se puede demostrar utilizando c´elulas lisas cultivadas derivadas de aorta de conejo, siendo determinada la proliferaci´ on mediante la medici´ on de la s´ıntesis de DNA. Las c´elulas se obtienen mediante el m´etodo de explante descrito en la publicaci´ on de Ross, J. of Cell Bio. 50: 172 (1971). Las c´elulas se depositan en placas de microtitulaci´on de 96 pocillos durante cinco d´ıas. Los cultivos se hacen confluentes y el crecimiento se detiene. Seguidamente, las c´elulas se transfieren a Medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) que contiene plasma escaso en plaquetas al 0,5 - 2 %, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 µl de estreptomicina, 1 µC/ml de H3 -timidina, 20 ng/ml de factor de crecimiento derivado de plaquetas y concentraciones variables de los compuestos. La soluci´on principal de compuestos se prepara en dimetil-sulf´ oxido y seguidamente se diluye hasta la concentraci´on apropiada (0,01-30 µM) en el medio de ensayo anterior. Seguidamente, las c´elulas se incuban a 37◦ C durante 24 horas bajo 5 % CO2 /95 % aire. Al final de las 24 horas, las c´elulas se fijan en metanol. Seguidamente, se determin´ o la incorporaci´ on de H3 -timidina en DNA mediante recuento de escintilaci´on como se describe en la publicaci´ on de Bonin et al., Exp. Cell Res. 181: 475-482 (1989). La inhibici´ on de la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos mediante los compuestos de la invenci´on se demuestra adicionalmente determinando sus efectos sobre c´elulas exponencialmente crecientes. C´elulas de m´ usculos lisos de aortas de conejo se siembran en placas de cultivo de tejidos de 12 pocillos en DMEM que contiene 10 % de suero bovino fetal, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina y 100 µg/ml de estreptomicina. Despu´es de 24 horas, las c´elulas se unen, el medio se sustituye con DMEM que contiene 10 % de suero, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina y las concentraciones indicadas de los compuestos. Las c´elulas se dejan crecer durante cuatro d´ıas. Las c´elulas se someten a tratamiento con tripsina y se determina el n´ umero de c´elulas en cada cultivo mediante recuento utilizando un contador ZM-Coulter. La actividad en los ensayos anteriores indica que los compuestos de la invenci´on son de utilidad potencial en el tratamiento de la restinosis.

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ES 2 115 163 T3 REIVINDICACIONES 1. El uso de un compuesto que tiene la f´ ormula: 5

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en las que R1 y R3 son independientemente hidr´ ogeno, -CH3 , donde Ar es fenilo opcionalmente sustituido; 35

O O k k -C-(alquilo de C1 -C6 ) , o -C-Ar , en

R2 es

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y R4 es hidr´ ogeno o -OR1 , y sales y solvatos farmac´euticamente aceptables del mismo, en la preparaci´on de un medicament u ´til para inhibir la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos. 45

2. El uso seg´ un la reivindicaci´ on 1, en la que dicho compuesto es la sal de hidrocloruro del mismo. 3. El uso seg´ un la reivindicaci´ on 1, en la que dicho compuesto es 50

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o su sal de hidrocloruro. 4. El uso seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la inhibici´on de la proliferaci´ on de c´elulas de m´ usculos lisos vasculares. 9

ES 2 115 163 T3 5. El uso de un compuesto que tiene la f´ ormula

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o 15

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25

30

en las que R1 y R3 son independientemente hidr´ ogeno, -CH3 , donde Ar es fenilo opcionalmente sustituido;

O k -C-(alquilo de C1 -C6 ) , o

O k -C-Ar en

R2 es 35

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R4 es hidr´ ogeno o -OR1 , y sales y solvatos farmac´euticamente aceptables del mismo, en la preparaci´on de un medicamento u ´ til para inhibir la restinosis. 6. El uso seg´ un la reivindicaci´ on 5, en la que dicho compuesto es la sal de hidrocloruro del mismo. 45

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ES 2 115 163 T3 7. El uso seg´ un la reivindicaci´ on 5, en la que dicho compuesto es

5

10

o su sal de hidrocloruro. 15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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