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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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˜ ESPANA

C12N 15/82, C12N 15/70 C12N 15/11, C12N 9/10 C12N 5/10, A01H 5/00

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TRADUCCION DE REIVINDICACIONES DE SOLICITUD DE PATENTE EUROPEA

kN´umero de solicitud europea: 98926456.9 kFecha de presentaci´on de la solicitud: 10.06.1998 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 991 766 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 12.04.2000

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71 Solicitante/s:

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72 Inventor/es: Conkling, Mark A.;

30 Prioridad: 12.06.1997 US 49471 P

NORTH CAROLINA STATE UNIVERSITY 1 Holladay Hall, Box 7003 Raleigh, NC 27695-7003, US

43 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

16.04.2001

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Mendu, Nandini y Song, Wen

46 Fecha de publicaci´ on de la traducci´ on de las rei-

vindicaciones:

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16.04.2001

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74 Agente: Polo Flores, Carlos

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54 T´ıtulo: Regulaci´ on de la expresi´ on de la quinolato fosforribosil transferasa.

Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

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12. Una c´elula vegetal que contiene una construcci´ on de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ´o 5. 13. Una planta transg´enica que contenga c´elulas vegetales de acuerdo con la reivindicaci´on 12 14. Un p´eptido con SEQ ID NO:2. 15. Un p´eptido codificado por una secuencia de ADN seleccionada del grupo formado por: (a) SEQ ID NO:1,

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(b) secuencias de ADN que hibridan con ADN aislado del enunciado (a) anterior y que codifican la enzima quinolato fosforribosil transferasa, y

REIVINDICACIONES Una mol´ecula aislada de ADN que contiene una secuencia seleccionada del grupo formado por:

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(a) SEQ ID NO:1, (b) secuencias de ADN que codifican una enzima con SEQ ID NO:2, (c) secuencias de ADN que hibridan con ADN aislado de los enunciados (a) o (b) anteriores y que codifican la enzima quinolato fosforribosil transferasa, y (d) secuencias de ADN que difieren de los enunciados (a), (b) o (c) anteriores debido a la degeneraci´ on del c´ odigo gen´etico. 2. Una construcci´ on de ADN que contiene un vector de expresi´on, cuya construcci´ on contiene, en la direcci´on de 5’ a 3’, un promotor que funciona en c´elulas vegetales y un fragmento de ADN de acuerdo con la reivindicaci´ on 1 situado cadena abajo de dicho promotor y asociados de forma funcional. 3. Una construcci´ on de ADN que contiene un vector de expresi´on, cuya construcci´ on contiene, en la direcci´on de 5’ a 3’, un promotor de plantas y un fragmento de ADN de acuerdo con la reivindicaci´on 1 situado cadena abajo de dicho promotor y asociados de forma funcional, teniendo dicho fragmento de ADN una orientaci´ on antisentido. 4. Una construcci´ on de ADN que contiene, en la direcci´on de 5’ a 3’, un promotor que funciona en c´elulas vegetales y un ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, dicho ADN asociado de forma funcional con dicho promotor. 5. Una construcci´ on de ADN que contiene, en la direcci´on de 5’ a 3’, un promotor que funciona en c´elulas de plantas y un ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, teniendo dicho ADN una orientaci´ on antisentido y estando asociado de forma funcional con dicho promotor. 6. Una construcci´ on de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ´o 5, cuyo promotor es activo de forma constitutiva en c´elulas vegetales. 7. Una construcci´ on de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 o´ 5, en la que dicho promotor es activo de forma selectiva en c´elulas de tejidos de las ra´ıces de plantas. 8. Una construcci´ on de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 o´ 5, en la que dicho promotor es activo de forma selectiva en c´elulas de tejidos de la corteza de las ra´ıces de plantas. 9. Una construcci´ on de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 o´ 5, en la que dicha construcci´ on comprende adem´ as un pl´ asmido. 10. Una construcci´ on de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ´o 5 incluida en un vector de transformaci´ on de plantas. 11. Una construcci´ on de ADN de acuerdo con las reivindicaciones 2, 3, 4 ´o 5 incluida en un vector de transformaci´ on de plantas donde el vector de transformaci´ on de plantas es un vector deAgrobacterium tumefaciens. 2

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(c) secuencias de ADN que difieren de los enunciados (a) o (b) anteriores debido a la degeneraci´on del c´ odigo gen´etico. 16. Un procedimiento para generar una c´elula vegetal transg´enica con una expresi´on reducida de quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa), dicho procedimiento consta de: obtener una c´elula vegetal de alg´ un tipo que se sepa que expresa la quinolato fosforribosil transferasa, obtener una construcci´ on de ADN ex´ ogeno, cuya construcci´on contiene, en direcci´on de 5’ a 3’, un promotor que funciona en una c´elula vegetal y ADN que incluye parte de una secuencia que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa, dicho ADN se asocia de forma funcional con dicho promotor, y transformaci´ on de dicha c´elula vegetal con dicha construcci´ on de ADN para generar c´elulas transformadas, dicha c´elula vegetal tiene una expresi´on reducida de QPRTasa en comparaci´on con la c´elula no transformada. 17. El procedimiento de la reivindicaci´ on 16, en el que dicho ADN, que contiene parte de una secuencia que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa, tiene una orientaci´on antisentido. 18. El procedimiento de la reivindicaci´ on 16, en el que dicho ADN, que contiene parte de una secuencia que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa, est´a orientado en el sentido normal de la traducci´on del gen (sentido). 19. El procedimiento de la reivindicaci´ on 16, en el que dicha c´elula vegetal es Nicotiana tabacum. 20. El procedimiento de la reivindicaci´ on 16, que incluye adem´ as la regeneraci´on de una planta a partir de dicha c´elula vegetal transformada. 21. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicho promotor es activo de forma constitutiva. 22. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicho promotor es activo de forma selectiva en c´elulas de tejidos de las ra´ıces de plantas. 23. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicho promotor es activo de forma selectiva en c´elulas de tejidos de la corteza de las ra´ıces de plantas. 24. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicho paso de transformaci´on se lleva a cabo bombardeando dicha c´elula

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vegetal con micropart´ıculas que llevan dicha construcci´ on de ADN. 25. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicho paso de transformaci´on se lleva a cabo infectando dicha c´elula vegetal con un Agrobacterium tumefaciens que contiene un pl´ asmido Ti que lleva dicha construcci´ on de ADN. 26. Un procedimiento para producir semillas de tabaco transg´enico, que comprende la recolecci´on de semillas de plantas de tabaco transg´enicas generadas por medio del procedimiento de la reivindicaci´on 19. 27. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicha secuencia de ADN ex´ogeno es complementaria a dicho ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRT ARNm) expresado en dicha c´elula vegetal en una regi´ on seleccionada entre: la secuencia del extremo 5’ no traducida de dicho QPRT ARNm, la secuencia del extremo 3’ no traducida de dicho QPRT ARNm, y la regi´ on traducida de dicho QPRT ARNm. 28. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicha secuencia de ADN ex´ogeno es complementaria con al menos 15 nucle´otidos de dicho ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa expresada en dicha c´elula vegetal. 29. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicha secuencia de ADN ex´ogeno es complementaria con al menos 200 nucle´otidos de dicho ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa expresada en dicha c´elula vegetal. 30. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 16, en el que dicha secuencia de ADN ex´ogeno contiene una secuencia que codifica la quinolato fosforribosil transferasa seleccionada entre las secuencias de ADN de la reivindicaci´on 1. 31. Una planta transg´enica del g´enero Nicotiana que tiene una expresi´ on reducida de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, dicha planta transg´enica comprende las c´elulas vegetales transg´enicas que contienen: una construcci´ on de ADN ex´ ogeno que contiene, en la direcci´on de 5’ a 3’, un promotor que funciona en dicha c´elula vegetal y un ADN que contiene un fragmento de una secuencia de ADN que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, estando dicho ADN asociado de forma funcional con dicho promotor, dicha planta muestra una expresi´ on reducida de la QPRTasa en comparaci´on con una planta control no transformada. 32. El procedimiento de la reivindicaci´ on 31, en el que dicho fragmento de ADN comprende un fragmento de una secuencia de ADN que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa y que presenta una orientaci´ on antisentido. 33. El procedimiento de la reivindicaci´ on 31, en el que dicho fragmento de ADN comprende un fragmento de una secuencia de ADN que codifica el ARNm de la quinolato fosforribosil transferasa y est´a orientado en el sentido normal de la tra-

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ducci´ on del gen (sentido). 34. Una planta transg´enica del g´enero Nicotiana que tiene una expresi´ on reducida de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, en la que dicha planta transg´enica es descendiente de una planta de acuerdo con la reivindicaci´ on 31. 35. Semillas de una planta transg´enica del g´enero Nicotiana que tienen una expresi´ on reducida de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, en la que dicha planta transg´enica es una planta de acuerdo con la reivindicaci´ on 31 o una descendiente de ella. 36. Una cosecha formada por diferentes plantas de acuerdo con la reivindicaci´on 31 plantadas juntas en un campo de cultivo. 37. Un procedimiento para conseguir una expresi´on reducida del gen de la quinolato fosforribosil transferasa en una c´elula vegetal, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una c´elula vegetal transformada para que contenga ADN ex´ogeno, en el que una cadena transcrita de dicho ADN ex´ ogeno es complementaria al ARNm end´ ogeno de la quinolato fosforribosil transferasa de dicha c´elula, en el que la transcripci´ on de dicha cadena complementaria reduce la expresi´on de dicho gen de la quinolato fosforribosil transferasa. 38. Un procedimiento para producir plantas del tabaco con niveles disminuidos de nicotina en las hojas de dicha planta del tabaco, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una planta del tabaco, o de sus plantas descendientes, en el que dicha planta contiene c´elulas que contienen una construcci´ on de ADN que contiene una regi´ on de iniciaci´ on de la transcripci´ on funcional en dicha planta y una secuencia de ADN ex´ogeno asociado de forma funcional con dicha regi´ on de iniciaci´ on de la transcripci´on, en la que la cadena transcrita de dicha secuencia de ADN es complementaria al ARN mensajero de la quinolato fosforribosil transferasa en dichas c´elulas. 39. Un procedimiento para generar una c´elula vegetal transg´enica con una expresi´on aumentada de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa), dicho procedimiento consta de: conseguir una c´elula vegetal de alg´ un tipo que se sepa que expresa la quinolato fosforribosil transferasa, conseguir una construcci´ on de ADN ex´ogeno, esta construcci´on comprende, en la direcci´ on de 5’ a 3’, un promotor que funciona en una c´elula vegetal y una secuencia de ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa, dicha secuencia de ADN se asocia de forma funcional con dicho promotor, y transformaci´ on de dicha c´elula vegetal con dicha construcci´ on de ADN para generar c´elulas transformadas, dicha c´elula vegetal tiene una expresi´on aumentada de la QPRTasa en comparaci´on con una c´elula no transformada. 40. Una planta transg´enica del g´enero Nicotiana que tiene una expresi´ on aumentada de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, dicha planta transg´enica contiene c´elulas vegetales 3

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transg´enicas que contienen: una construcci´ on de ADN ex´ ogeno que contiene, en la direcci´on de 5’ a 3’, un promotor que funciona en dicha c´elula vegetal y una secuencia de ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa de plantas, dicho ADN se asocia de forma funcional con dicho promotor, dicha planta muestra una expresi´on aumentada de la QPRTasa en comparaci´ on con una planta control no transformada. 41. Una planta transg´enica del g´enero Nicotiana que tiene una expresi´ on aumentada de la quinolato fosforribosil transferasa (QPRTasa) respecto a una planta control no transformada, en la que dicha planta transg´enica es descendiente de una planta de acuerdo con la reivindicaci´ on 74. 42. Un procedimiento para aumentar la expresi´on del gen de la quinolato fosforribosil transferasa en c´elulas vegetales, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una c´elula vegetal transformada para que contenga ADN ex´ogeno, en el que dicho ADN ex´ ogeno codifica la quinolato fosforribosil transferasa. 43. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 83, en el que dicha planta transformada

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se obtiene por medio de un procedimiento que comprende: integraci´ on en el genoma de una c´elula vegetal hu´esped de una construcci´on que contiene, en la direcci´on de la transcripci´ on, un promotor funcional en dicha c´elula vegetal, una secuencia de ADN que codifica la quinolato fosforribosil transferasa funcional en dicha c´elula, dicha secuencia de ADN asociada de forma funcional con dicho promotor y una regi´ on de terminaci´ on de la transcripci´ on funcional en dicha c´elula, en el que se obtiene una c´elula vegetal transformada. 44. Un procedimiento para producir una planta de tabaco que tiene niveles aumentados de nicotina en las hojas de la planta de tabaco, dicho procedimiento consta de: crecimiento de una planta de tabaco, o de sus plantas descendientes, en el que dicha planta contiene c´elulas que contienen una construcci´ on de ADN que contiene una regi´ on de iniciaci´ on de la transcripci´ on funcional en dicha planta y una secuencia de ADN ex´ogeno unido de forma funcional a dicha regi´ on de iniciaci´on de la transcripci´on, en el que dicha secuencia de ADN codifica la quinolato fosforribosil transferasa funcional en dichas c´elulas.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales.

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Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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