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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k ES 2 082 959 kInt. Cl. : A61K 31/565, A61K 31/57

11 N.◦ de publicaci´ on: 6

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˜ ESPANA

C07D 209/30, C07D 457/02 //(A61K 31/57, A61K 31:565)

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 91830402.3 kFecha de presentaci´on : 27.09.91 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 483 077 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 29.04.92

T3

86 86 87 87

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54 T´ıtulo: Procedimiento para desarrollar la s´ıntesis de una droga contraceptiva y de control del

ciclo menstrual que tiene propiedades anticinet´ osicas, oncost´ aticas y terap´ euticas para el tratamiento de los tumores de mama y melanomas.

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30 Prioridad: 28.09.90 IT 21596 /90

11.12.90 IT 22338 /90 16.09.91 IT MI912438

I.F.L.O. S.a.s. di Giorgio e Aldo Laguzzi Via Prandina, 7 I-20127 Milano, IT

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72 Inventor/es: Fraschini, Franco;

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74 Agente: L´ opez Marchena, Juan Luis

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.04.96

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

01.04.96

ES 2 082 959 T3

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73 Titular/es:

Aviso:

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Duranti, Ermanno; Di Bella, Luigi; Stankov, Bojidar y Laguzzi, Aldo

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 082 959 T3 DESCRIPCION Antecedentes de la invenci´ on 5

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La presente invenci´on se refiere a procedimientos para desarrollar la s´ıntesis de una droga contraceptiva y de control del ciclo menstrual que tiene propiedades anticinet´ osicas, oncost´aticas y terap´euticas para el tratamiento de los tumores de mama y melanomas, a partir de la melatonina. Despu´es de a˜ nos de estudios y experimentos, relacionados con el mecanismo de acci´on de la melatonina, este indol se considera en la actualidad como el producto hormonal m´ as importante de la gl´andula pineal. Los avances en el campo de la investigaci´on de los receptores han llevado a la localizaci´on de dos centros receptores importantes de la melatonina en el SNC: la pars tuberalis de la gl´ andula pituitaria, y los n´ ucleos supraquiasm´ aticos (NSC) del hipot´ alamo. Estudios en profundidad han permitido descubrir la base biol´ ogica del mecanismo de acci´on de la melatonina y sus dos derivados halogenados (2-bromo y 2-yodomelatonina).

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Algunos experimentos realizados por diversos grupos de investigadores han confirmado parte de los descubrimientos anteriores, y han demostrado que la capacidad de la melatonina para inhibir la reproducci´ on, en condiciones experimentales dadas, puede estar relacionada con una acci´on directa del indol en los elementos responsables de la hormona en el SNC y la gl´ andula pituitaria.

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As´ı, por la investigaci´ on anterior se sabe que la melatonina puede utilizarse potencialmente como droga contraceptiva humana.

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De hecho, la investigaci´ on realizada recientemente ha demostrado la posibilidad del uso de la melatonina en asociaci´on con un compuesto progest´ınico (noretisterona), como potente contraceptivo que, adem´as, proporciona varias ventajas, tales como un bajo riesgo de concepci´ on (inferior al 1%), menor riesgo de alteraciones vasculares (no se utiliza ning´ un compuesto estrog´enico) y per´ıodos pre-menstruales y menstruales menos dolorosos, as´ı como per´ıodo premenop´ ausico menos molesto (se sabe que la melatonina y sus agonistas tienen efectos sedantes).

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En los u ´ltimos a˜ nos, se han utilizado como contraceptivos la noretisterona sola, as´ı como otros derivados progest´ınicos, conocidos generalmente con el nombre de “minip´ıldora”.

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La noretisterona, cuando se utiliza en forma de “minip´ıldora”, no ha proporcionado sin embargo resultados notables para prevenir embarazos indeseados (hay un riesgo de concepci´ on de aproximadamente un 2,35%). Se ha comprobado que otros compuestos progest´ınicos, tales como el 1-norgestrel, proporcionan mejores resultados con dosis reducidas (de 0,08 a 0,16 mg). Por otro lado, se ha observado que, para poder expresar su acci´ on contraceptiva, la melatonina necesitaba dosis comparativamente elevadas (100-200 mg).

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Resumen de la invenci´ on As´ı, la finalidad de la presente invenci´on es la de proporcionar un procedimiento para la preparaci´ on de 2-yodomelatonina y 2-bromomelatonina, potentes agonistas de la melatonina.

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Seg´ un un aspecto de la presente invenci´ on, esta finalidad, junto con otros objetos que aparecer´ an con mayor claridad en la exposici´on que sigue, se alcanzan con los procedimientos ense˜ nados en las reivindicaciones independientes. En las sobre-reivindicaciones se definen otras caracter´ısticas de los procedimientos en cuesti´on. M´ as concretamente, los procedimientos inventivos para la s´ıntesis de la 2-bromo- y la 2-yodomelatonina se realizan bas´andose en los siguientes esquemas funcionales:

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ES 2 082 959 T3 S´ıntesis de la 2-bromomelatonina (N-acetil-2-bromo-5-metoxitriptamina) 5

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A una soluci´ on de melatonina (1,16 g; 5 mM) en a´cido ac´etico anhidro (10 ml) se a˜ nade lentamente, bajo agitaci´ on, una soluci´ on de bromosuccinimida (NBS: 0,89 g; 5 mM), en a´cido ac´etico anhidro (30 ml).

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La mezcla de reacci´on se agita bajo nitr´ ogeno a temperatura ambiente durante tres horas. Al cabo de este tiempo, se enfr´ıa en ba˜ no de hielo y se neutraliza a un pH de 7 con una soluci´ on al 50% de NaOH, igualmente bajo nitr´ ogeno; se obtiene de ese modo una suspensi´ on cremosa.

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La fase acuosa se extrae cuatro veces con cloroformo; las fases org´ anicas combinadas se lavan dos veces con una soluci´on saturada de NaCl y se secan sobre sulfato s´ odico anhidro. El disolvente se retira a presi´ on reducida, a fin de que se proporcionen 2 g de un producto bruto en la forma de un aceite marr´ on-amarillento. El producto bruto se purifica por cromatograf´ıa de centelleo (gel de s´ılice; EtOAc; ciclohexano; 8:2), obteni´endose as´ı 0,70 g (rendimiento 45%) del producto.

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Se cristaliza con EtOAc: hexano; temperatura de fusi´on: 146-149 ◦ C (en Kofler). La reacci´on puede ir seguida por CLT, con el uso de acetato de etilo como fase m´ovil. El espectro NMR confirma la estructura del producto obtenido.

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S´ıntesis de la 2-yodomelatonina (N-acetil-2-yodo-5-Metoxitriptamina) 40

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A una soluci´ on de melatonina (2,32 g: 10 mM) en cloroformo (70 ml), enfriada a -20 ◦ C, se a˜ nade N-yodosuccinimida (NIS: 2,25 g: 10 mM): la mezcla de reacci´on se agita a -20 ◦ C durante 4,5 horas. La soluci´on org´ anica se lava con soluci´ on saturada de carbonato s´ odico (1 vez) y con agua (dos veces) y a continuaci´on se seca sobre sulfato s´odico anhidro.

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El disolvente se retira a presi´on reducida y la materia bruta se purifica por cromatograf´ıa de centelleo (al´ umina anhidra; EtOAc), obteni´endose as´ı 0,5 g de un producto que se recristaliza con EtOAc, con trazas de hexano. Se obtienen 0,4 g (rendimiento 10-12%) de un producto que tiene una t. f. de 142 ◦ C. El espectro NMR confirma la estructura del producto obtenido.

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ES 2 082 959 T3 Toxicidad: En el caso espec´ıfico de la melatonina, se han realizado ensayos de toxicidad aguda con: 5

1) Ratas, DL50 por v´ıa intraperitoneal = superior a 462 mg/Kg 2) Ratas, DL50 por v´ıa oral = superior a 800 mg/Kg 3) Conejos, DL50 por v´ıa intravenosa = superior a 394 mg/kg

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(per´ıodo de observaci´on, 14 d´ıas) y la toxicidad subaguda en: 15

anea = superior a 192 mg/Kg 4) Ratas, DL50 por v´ıa subcut´ (per´ıodo de observaci´on, 25 d´ıas).

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Las pruebas hematol´ ogicas, bioqu´ımicas y electrofor´eticas, y los ensayos para determinar el estado y peso de o´rganos, m´edula o´sea y an´alisis histol´ ogicos no muestran ninguna toxicidad particular y, de acuerdo con estas observaciones, que muestran la baja toxicidad de cada compuesto individual y de sus asociaciones, puede darse una opini´ on favorable en cuanto al comienzo de la experimentaci´on cl´ınica. En lo que se refiere a la toxicidad de la 2-yodomelatonina y la 2-bromomelatonina, las pruebas de toxicidad aguda se realizaron: 1) en ratas por v´ıa oral: DL50 superior a 200 mg/Kg 2) en ratones por v´ıa oral e intraperitoneal: DL50 superior a 100 mg/Kg.

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Adem´ as, todos los detalles relacionados con la administraci´on, as´ı como las dosis indicadas, pueden cambiarse seg´ un los pacientes espec´ıficos que deben ser tratados, sin apartarse por ello del a´mbito de la invenci´on, que se basa fundamentalmente en procedimientos para la s´ıntesis de la 2-yodomelatonina o la 2-bromomelatonina y sus derivados, bien sea individualmente como en asociaci´ on con un progesteno en la terapia contraceptiva y en la terapia para el control del ciclo menstrual, as´ı como en la terapia preventiva oncost´ atica de tumores de mama y melanoma y en la terapia anticinet´ osica.

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ES 2 082 959 T3 REIVINDICACIONES

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1. Procedimiento para realizar una s´ıntesis de la 2-yodomelatonina (es decir, la N-acetil-2-yodo-5metoxitriptamina) para obtener una droga con propiedades anticinet´ osicas, oncost´aticas, preventivas y terap´euticas, para el tratamiento de tumores de mama y melanomas, caracterizado porque la citada s´ıntesis se define por la f´ ormula siguiente:

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2. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-yodomelatonina seg´ un la Reivindicaci´ on 1, caracterizado porque el citado procedimiento comprende los pasos de proporcionar una soluci´ on de melatonina (2,32 g: on enfriada 10 mM) en cloroformo (70 ml), enfriar esta soluci´on a -20 ◦ C; introducir en la citada soluci´ N-yodosuccinimida (NIS: 2,25 g: 10 mM) a fin de proporcionar una mezcla de reacci´ on; agitar la citada on org´ anica con soluci´ on saturada mezcla a -20 ◦ C durante un per´ıodo de 4,5 horas; lavar la citada soluci´ de carbonato s´ odico (1 vez) y agua (2 veces), y a continuaci´on secar la citada soluci´ on org´ anica lavada en sulfato s´ odico anhidro. 3. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-yodomelatonina seg´ un la Reivindicaci´ on 1, caracterizado porque dicho procedimiento comprende los pasos adicionales de retirar el disolvente de dicha mezcla a presi´on reducida, de manera que se proporcione una materia bruta; purificar la citada materia bruta por cromatograf´ıa de centelleo (al´ umina anhidra; EtOAc) a fin de proporcionar una cantidad deseada (0,5 g) de un producto que se recristaliza a partir de EtOAc con trazas de hexano, de manera que se obtengan 0,4 g (rendimiento, 10-12%) de un producto que tiene una t. f. de aprox. 142 ◦C. 4. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina (N-acetil-2-bromo-5-metoxitriptamina), caracterizado porque dicha s´ıntesis de define por la f´ ormula siguiente:

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5. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina, seg´ un la Reivindicaci´ on 4, caracterizado porque dicho procedimiento comprende los pasos de introducir lentamente, en una soluci´ on de melatonina (1,16 g; 5 mM) en a´cido ac´etico anhidro (10 ml), bajo agitaci´ on, una soluci´ on de bromosuccinimida (NBS: 0,89 g: 5 mM) en ´acido ac´etico anhidro (30 ml).

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6. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina, seg´ un la Reivindicaci´on 4, caracterizado porque dicho procedimiento comprende el paso de agitar dicha mezcla de reacci´ on para nitr´ ogeno a temperatura ambiente durante tres horas; enfriar dicha mezcla en ba˜ no de hielo y neutralizar la mezcla enfriada a un pH de 7 con el uso de una soluci´ on de NaOH al 50%, bajo nitr´ ogeno, a fin de proporcionar una suspensi´on cremosa.

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7. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina, seg´ un la Reivindicaci´ on 4, caracterizado porque dicho procedimiento comprende adem´ as el paso de extraer cuatro veces la fase acuosa con cloroformo y lavar dos veces las fases org´anicas combinadas con una soluci´ on saturada de NaCl, secar las fases org´ anicas combinadas en sulfato s´ odico anhidro y retirar el disolvente a presi´on reducida de manera que se obtengan 2 g de un producto bruto en forma de aceite marr´ on-amarillento. 8. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina, seg´ un la Reivindicaci´on 4, caracterizado porque el citado procedimiento comprende el paso adicional de purificar el producto bruto por cromatograf´ıa de centelleo (gel de s´ılice; EtOAc: ciclohexano; 8:2), de manera que se obtengan 0,70 g 5

ES 2 082 959 T3 (rendimiento, 45%), de un producto, y cristalizar acto seguido dicho producto (EtOAc: hexano): t. f. andose la reacci´on por CLT, con el uso de acetato de etilo como eluyente. 146-149 ◦ C (en Kofler), efectu´ 9. Compuesto caracterizado por el hecho de que consiste en la 2-bromomelatonina. 5

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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