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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Número de publicación: 2 250 130

51 Int. Cl. : C07D 403/04

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C07D 407/14 A61K 31/517 A61P 15/10

ESPAÑA

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TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 00927199 .0

86 Fecha de presentación : 08.05.2000

87 Número de publicación de la solicitud: 1177190

87 Fecha de publicación de la solicitud: 06.02.2002

54 Título: Uso de antagonistas selectivos del receptor adrenérgico α1b para el tratamiento de la disfunción se

xual. 30 Prioridad: 07.05.1999 IT MI99A0995

73 Titular/es: Recordati Ireland Limited

Raheens East Ringaskiddy, County Cork, IE

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

16.04.2006

72 Inventor/es: Leonardi, Amedeo;

Motta, Gianni; Testa, Rodolfo y Sironi, Giorgio

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Manresa Val, Manuel

ES 2 250 130 T3

16.04.2006

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

ES 2 250 130 T3 DESCRIPCIÓN Uso de antagonistas selectivos del receptor adrenérgico α1b para el tratamiento de la disfunción sexual. 5

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Campo de la invención La invención se refiere a los antagonistas selectivos novedosos del receptor adrenérgico α1b y a la utilización de estos y de otros antagonistas selectivos del receptor adrenérgico α1b en la preparación de medicamentos para el tratamiento de la disfunción sexual en humanos. La invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que contienen los antagonistas selectivos del receptor adrenérgico α1b y de forma opcional contienen también prostaglandinas, vasodilatadores directos o inhibidores de la fosfodiesterasa 5 de cGMP. Por último, la invención se refiere a un método de identificación de compuestos útil en el tratamiento de pacientes que padecen de disfunción sexual. Antecedentes de la invención

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La disfunción sexual se presenta a partir de diferentes mecanismos en hombres y mujeres. En la impotencia masculina es la incapacidad de conseguir y mantener una erección suficiente para tener relaciones sexuales. La erección es conseguida como resultado de la afluencia de la sangre hacia el interior de la corpora cavernosa del pene, lo cual produce una ingurgitación de la corpora cavernosa, y posteriormente la erección del pene. Se estima que hasta 30 millones de hombres Americanos experimentan algún grado de disfunción eréctil, y cuya frecuencia aumenta con la edad. Las causas de la impotencia pueden estar divididas en dos subcategorías: 1) orgánicas y 2) psicológicas. Los aspectos orgánicos de impotencia son provocados por una enfermedad vascular subyacente tal como aquella asociada con la hipertensión, la diabetes mellitus y la prescripción de medicamentos. Alrededor de la mitad de todos casos de impotencia son de origen vascular. Debido a que el proceso fisiológico de la erección es iniciado por un incremento del flujo de la sangre a través de las arterias del pene y la derivación de la sangre al interior de los espacios vasculares de la corpora cavernosa, la disfunción eréctil puede ser resultado de la incapacidad de las arterias del pene para dilatar, impidiendo de este modo el flujo de la sangre hacia el interior del tejido eréctil.

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Las vías del sistema simpático juegan un papel fundamental en el control neural de la erección del pene. Por lo general, está reconocido que en el estado detumescente, la liberación de noradrenalina (NA), actuando sobre receptores α1 post-sinápticos en las arterias cavernosas y sobre la corpora cavernosa contribuye a mantener el músculo suave del pene contraído. De manera inversa, la inyección por vía intracavernosa de antagonistas α1 como la fenoxibenzamina, la fentolamina y la moxisilita produce tumescencia y erección. La respuesta eréctil a la prazosina por vía transuretral en varones hombres ha sido publicada recientemente, por ejemplo en la Patente n. WO 96/28142, así como el efecto relajante de este antagonista en tejido peneal aislado y vasos en el varón hombre, perro y rata.

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En las mujeres, la respuesta sexual comienza con una estimulación la cual provoca vasocongestión y resulta en la lubricación de la vagina como preparación para la introducción del pene. La lubricación es debido a la formación de una exudación lo cual, junto con la congestión genital, produce la llamada plataforma orgásmica que es el preludio del orgasmo. En resumen, la disfunción sexual femenina puede ser debido a interferencias con las diferentes etapas de las relaciones sexuales y puede estar relacionada lo mismo a causas orgánicas o funcionales, o ambas. Muchas razones incluidas el estrés, la ansiedad, la depresión, la fatiga, los conflictos interpersonales entre las parejas o más sencillamente por razones de edad, pueden conducir al fallo de la respuesta de la vasocongestión, impidiendo de este modo, la lubricación normal vaginal. Las mujeres en estas condiciones pueden ser incapaces de conseguir una respuesta sexual normal sin la utilización de un tratamiento adecuado. Ha sido confirmado recientemente que lo mismo la vasocongestión vaginal como la erección clitoral dependen del incremento del flujo de la sangre. Además, según ha sido obtenido por el órgano sexual masculino, ha sido demostrado que una inyección local en la vagina de antagonistas adrenérgicos α1 tales como la fentolamina puede incrementar el flujo de la sangre y el aumento de la presión intravaginal hasta niveles comparables con aquellos conseguidos por medio de la estimulación del nervio pélvico. Estos datos demuestran claramente que la noradrenalina juega un papel importante en el mantenimiento de la flacidez del órgano que también afecta en el tracto sexual femenino. Por lo tanto, es importante, identificar nuevos productos que tengan una actividad antagonista adrenoceptor α1 ,lo cual puede ser útil en la promoción de la vasodilatación de las arterias en las paredes vaginales y el clítoris, mejorando de esta manera y ayudando a la continuación del acto sexual. Estudios farmacológicos, bioquímicos y de fijación de radioligandos han mostrado tres subtipos diferentes de receptores α1 con una alta afinidad por la prazosina, concretamente α1A -(α1a -), α1B - (α1b -) y α1D - (α1d -), con minúsculas en subíndice siendo utilizadas para los receptores recombinantes y los subíndices en mayúsculas para los receptores en tejidos nativos. En estudios funcionales, los receptores α1 con una baja afinidad por la prazosina han sido también identificados y denominados receptores α1L -. Diversos estudios han demostrado la presencia de estos subtipos de receptores α1 adrenérgicos en los tejidos 2

ES 2 250 130 T3 cavernosos en animales y humanos. En la hibridación in situ con sondas específicas de oligonucleótido y técnicas de ensayo de protección han demostrado que los tejidos del cuerpo cavernoso (corpus cavernosum) de los humanos y las ratas expresan los tres subtipos de receptores α1 adrenérgicos clonados. 5

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Por otro lado, hay estudios funcionales en el tejido peneal de varones humanos que son polémicos, indicando que la participación de los tres subtipos α1 -ADR clonados, o que el subtipo α1 -ADR es el principal mediador de las contracciones inducidas por noradrenalina (NA) en este tejido. De forma inversa, no se conoce nada hasta aquí acerca de los vasos vaginales. Evidencias farmacológicas para la inequívoca presencia de subtipo(s) de receptores α1 adrenérgicos bien definidos en el tejido peneal o vaginal representaría un gran avance en el campo del tratamiento de la disfunción sexual en hombres y mujeres, permitiendo la posibilidad del uso de antagonistas selectivos α1 . La Patente n. WO 95/25726 describe inter alia el compuesto designado aquí como Compuesto A, y muestra que es selectivo para el receptor α1b sobre el receptor α1a y el receptor α1d . Giardiná et al, en ambos J. Med. Chem., 36 (6), 690-698 (1993) y J. Med. Chem., 39 (23), 4602-4607 (1996), describe inter alia cis-ciclazocina designado aquí como Compuesto B. Este compuesto es también mencionado por Leonardo et al en J. Med. Chem., 42 (3), 427-437 (1999), en donde se ha mencionado que es un antagonista selectivo adrenérgico α1b . En la Patente WO 97/11698 se describe inter alia el compuesto designado aquí como Compuesto C, y muestra ser selectivo para el receptor α1b sobre el receptor α1a y el receptor α1d . Ninguna de estas especificaciones hace alguna mención a la disfunción sexual. Boolell et al en Int. J. Impotence Res., 8 (2), 47-52 (1996) y Israel et al en The Pharmaceutical Journal, 261, 164165 (1998) describen el uso de sildenafil, un inhibidor de la fosfodiesterasa específica de GMP cíclico tipo 5 eficaz por vía oral, en el tratamiento de la disfunción eréctil peneal.

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Un estudio de la eficacia de combinaciones de la prazosina-alprostadil y alprostadil por vía transuretral en el tratamiento de la disfunción eréctil peneal fue emprendido por Peterson et al y registrado en J. Urology, 159 (5), 15231527 (1998). Vaidanathan et al registró el hecho de una erección peneal prolongada en un paciente con una lesión de médula espinal siendo tratado con terazosin. Ninguno de estos artículos menciona los subtipos de receptores α1 . Goepel et al, J. Urology, 162 (5), 1793-1797 (1999) ha estudiado los subtipos de adrenoceptor α al nivel proteínico en el cuerpo cavernoso (corpus cavernosum) de los humanos, hallando que el receptor α1b está presente aunque en cantidades menores que los receptores α2a − y α1a − . Ellos apuntaron que “los antagonistas del adrenoceptor α no son muy eficaces en el tratamiento de la disfunción eréctil”. Los antagonistas α que son utilizados en la actualidad para el tratamiento de la impotencia en varones en su mayoría sufren de efectos secundarios no deseados tales como priapismo, una erección dolorosa de una duración excesivamente larga lo cual puede resultar en fibrosis del tejido cavernoso. Otros efectos secundarios son el dolor peneal y la hipotensión. La invención tiene como objetivo la satisfacción de la necesidad considerada por los antagonistas α1 selectivos lo cual no expone al varón impotente a los efectos secundarios de los tratamientos conocidos, en particular del tipo cardiovascular. Resumen de la invención

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La invención se refiere al tratamiento de la disfunción sexual. Con este propósito, la invención proporciona el uso de un compuesto que tiene la fórmula general I 50

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en donde A representa un grupo 2-furil, 2-furil sustituido, 2-tetrahidrofuril, alcoxi sustituido o fenoxialquil sustituido, y B representa uno de los siguientes grupos de la fórmula B1 , B2 o B3 : 60

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ES 2 250 130 T3 a condición de que si B representa el grupo B1 entonces A representa un grupo de fenoxialquil sustituido, o de un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal un compuesto, 5

para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la disfunción sexual. El medicamento puede contener también prostaglandina, un vasodilatador directo o un inhibidor de la fosfodiesterasa 5 de cGMP. Algunos de los compuestos I son novedosos. Por lo tanto la invención también proporciona compuestos que tienen la fórmula general II.

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en donde A representa un grupo 2-tetrahidrofuril, 2-furil sustituido, alcoxi sustituido o fenoxialquil sustituido, 30

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y enantiómeros, diastereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables de tales compuestos. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto II, o un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, y un diluyente o portador farmacéuticamente aceptables están también incluidos en la invención. De este modo, también hay composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto I, o un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal un compuesto, y una prostaglandina, un vasodilatador directo o un inhibidor de la fosfodiesterasa 5 de cGMP, y un diluyente o portador farmacéuticamente aceptables. En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un compuesto el cual

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a) enlaza a receptores adrenérgicos α1b en mamíferos con una afinidad de al menos alrededor de 10−8 M y b) enlaza a receptores adrenérgicos α1b en mamíferos con una afinidad de al menos 10 veces mayor que la afinidad con la cual el compuesto enlaza a receptores adrenérgicos α1a o α1d o α1L en mamíferos

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para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la disfunción sexual. En otro aspecto, la invención proporciona un método para identificar un compuesto útil para el tratamiento de la disfunción sexual. El método comprende los pasos de

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a) la medición por separado de la afinidad de enlace de los compuestos de prueba para un receptor adrenérgico α1b en mamíferos y un receptor adrenérgico α1a o α1d en mamíferos por medio de las técnicas de enlace de radiorreceptor, b) medición de la afinidad para un receptor adrenérgico α1L en mamíferos por medio de la antagonización del efecto contráctil en receptores adrenérgicos α1 en tejidos selectivos de mamífero, y c) identificando aquellos compuestos los cuales 1) enlazan a un receptor adrenérgico α1b con una afinidad de al menos alrededor de 10−8 M, y

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2) enlazan a un receptor adrenérgico α1b con una afinidad de al menos 10 veces mayor que la afinidad con la cual el compuesto enlaza a receptores adrenérgicos α1a o α1d o α1L en mamíferos.

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ES 2 250 130 T3 Descripción detallada de la invención En los compuestos I, el grupo B2 tiene de forma preferente la siguiente estereoquímica 5

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y el grupo B3 tiene de forma preferente una estereoquímica cis, con los átomos de hidrógeno enlazados teniendo la misma orientación:

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siendo el primero el preferido. También en los Compuestos I, los grupos A de fenoxialquil sustituido preferidos tienen la fórmula 30

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en donde R1 representa una cadena alquil lineal o ramificada que tiene de 1 a 5 átomos de carbono y R2 representa un grupo alcoxi que tiene de 1 a 4 átomos de carbono; el grupo de fenoxialquil sustituido más preferido es el grupo 6isopropil-2-metoxifenoximetil. 45

Los compuestos I más preferidos incluyen: • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[4-[(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-1-piperazinil]-quinazolina (Compuesto A), • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(4aR,8aS)-4-(2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina (Compuesto B) y

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• 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[-3(S)-3-(t-butilo-carbamoil)-4-(2-furoil)-1-piperazinil]-quinazolina (Compuesto C).

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En los Compuestos II, el anillo de octahidroquinoxalina tiene preferiblemente la configuración (4aR, 8aS). Los grupos A de fenoxialquil sustituido preferidos son los mismos que aquellos preferidos en los Compuestos I. El alcoxi sustituido es benziloxi adecuado y el 2-furil sustituido es preferentemente 5-metil-2-furil. En particular los siguientes Compuestos II son preferentemente: • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina,

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• 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(5-metil-2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina, • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-tetrahidrofuroil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina, y • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-benziloxicarbonil-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina.

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Los métodos de preparación de los derivados de quinazolina de la fórmula I están descritos en las siguientes referencias: WO 95/25726; Giardinà D. et al., J. Med. Chem. 39, 4602-7 (1996); WO 97/11698. 5

ES 2 250 130 T3 La síntesis de los compuestos de la fórmula I puede ser llevada a cabo de acuerdo al siguiente esquema:

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El material inicial 1 está disponible comercialmente (por ejemplo, de Lancaster Synthesis Ltd., Eastgate, White Lund, Morecambe, Lancashire, LA3 3DY, Inglaterra) o de manera alternativa puede ser preparado tal como se describe por Althuis et al., J. Med. Chem. 20, 146-149 (1977). Las aminas H-B-H pueden estar en forma de mezcla racémica o de homoquiral donde sea adecuado y puede estar disponible comercialmente, tal como la piperazina, o puede ser preparado de acuerdo a los métodos descritos en material de información. Por ejemplo, la amina

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puede ser preparada tal como se describe por Brill et al., J. Org. Chem. 28, 1135-1138 (1963) o por síntesis estéreoselectiva tal como se describe por Brill et al., J. Org. Chem. 29, 579-581 (1964), y la amina 30

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puede ser preparada a partir de ácido 2-pirazina carboxílico por amidificación seguido por reducción y determinación como es descrito en Tetr. Lett. 35, 673-676 (1994). La reacción es llevada a cabo a 150-200ºC sin disolvente o en la presencia de un disolvente polar adecuado, tal como alcohol i-amílico o alcohol n-butílico, a temperatura de reflujo. 45

Los intermediarios ACOX están disponibles comercialmente o pueden ser preparados, cuando A = fenoxialquil, comenzando a partir del derivado de fenol correspondiente, por medio de la reacción con un éster de ácido haloalquil, seguido por hidrólisis y clorinación, por medio de los métodos conocidos por aquellos expertos en la materia y descritos en el Ejemplo 1 por

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La condensación para obtener I puede ser llevada a cabo por medio de la reacción de 2 con ACOX, en donde X representa un átomo de halógeno (por ejemplo clorina), en disolvente clorinado, tales como cloroformo o diclorometano, o en un solvente polar aprótico, tal como dimetilformamida, en la presencia de una base tales como trietilamina o diisopropilamina, de 0ºC a 40ºC. De forma alternativa, cuando X representa un grupo hidroxilo la condensación puede ser llevada a cabo en un disolvente polar aprótico o clorinado como fue antes mencionado, en la presencia de un agente condensante, tal como diciclohexilcarbodiimida, y de un agente promotor tal como 4-dimetilaminopiridina a una temperatura de 0ºC a 40ºC, u otro equivalente. 6

ES 2 250 130 T3 De manera alternativa, el siguiente esquema puede ser utilizado:

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Los acilo cloruros apropiados son sometidos a una reacción con compuestos HBH en disolventes polares tales como dimetilformamida, acetona o acetonitrilo, de forma opcional en la presencia de una base tal como potasio o carbonato de cesio o trietilamina, de 20-100ºC. Los intermediarios AC (O) BH son entonces sometidos a reacción con el compuesto 1 para obtener los compuestos I. Esta alquilación puede ser llevada a cabo en un disolvente polar prótico tal como alcohol i-amílico o alcohol nbutílico o en un disolvente aprótico tal como dimetilformamida, a 60ºC de temperatura de reflujo. Los enantiómeros de los compuestos I en los cuales B es B2 pueden ser obtenidos comenzando a partir de enantiómeros HB2 H adecuados, que son obtenido por medio de la salificación de la mezcla racémica con un ácido ópticamente activo, tal como ácido (S)-10-canforsulfónico en un disolvente adecuado o mezcla de disolvente, seguido por una separación de las sales diastereoisómeras por medio de la recristalización. De manera similar, los enantiómeros de los compuestos I en los cuales B es B3 pueden ser obtenidos por medio de la salificación del intermediario racémico 2 con un ácido ópticamente activo adecuado seguido por separación diastereoisómera. El cribaje de los compuestos candidatos para identificar aquellos que son útiles en la práctica de la invención implica la medición de la actividad de enlace específica de los compuestos hacia los diferentes receptores adrenérgicos neuronales α1 (tales como los subtipos α1a , α1b y α1d de acuerdo al método de Testa et al., Pharmacol. Comm. 6: 7986, 1995), que puede ser conseguido por medio del uso de cualquiera de una multiplicidad de métodos que son bien conocidos en el estado de la técnica, tal como el enlace competitivo a receptores clonados o nativos. Por regla general, una fuente biológica de, por ejemplo receptores adrenérgicos α1b es utilizada en la cual el receptor está presente a una concentración lo suficientemente alta de modo que el enlace de un ligando marcado es fácilmente apreciable. Esta fuente puede comprender un tejido o un fluído de mamífero (lo mismo in situ que después de sacarlo del animal) o una célula de cultivo de un tejido. El receptor objetivo puede ser expresado a partir de lo mismo un gen endógeno (nativo) que a partir de un gen recombinante que codifica para el receptor transfectado. Por ejemplo, el hígado de la rata es una fuente rica (nativa) de receptores adrenérgicos α1B (Taddei et al., Life Sci. 53 : PL177-PL181, 1993). De manera alternativa, el cDNA del receptor adrenérgico α1b del hámster puede ser expresado de forma transitoria en células COS-7 en cultivo (Cotecchia S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 7159-7163, 1988) y el cDNA del receptor adrenérgico α1b del humano puede ser expresado en células CHO en cultivo (Testa et al., Pharmacol. Comm. 6: 79-86, 1995).

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Además el cDNA del receptor adrenérgico α1d y α1a del humano ha sido expresado en células CHO (Testa et al., Pharmacol. Comm. 6: 79-86, 1995) mientras los clones del receptor adrenérgico α1a en bovinos (antes α1c ) (Schwinn et al., J Biol. Chem. 265: 8183-8189, 1990) y los clones del receptor adrenérgico α1d en ratas (Lomasney et al., J Biol. Chem. 266: 6365-6369, 1991) han sido expresados de forma transitoria en células COS-7 y pueden ser utilizados para calcular la selectividad para el receptor adrenérgico α1b por medio de una técnica de enlace de radiorreceptor.

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La capacidad de los compuestos de prueba para tomar parte con el ligando marcado apropiado para el enlace del receptor es entonces calculada y una constante de enlace (Ki) es calculada utilizando la ecuación de Cheng y Prusoff (Cheng et al., Biochem Pharmacol. 22 : 3099-3108, 1973) o un método computacional que sea equivalente bien conocido en el estado de la técnica. Una descripción detallada de esto es proporcionada en el Ejemplo 8 de abajo.

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Por el contrario, no hay técnicas de enlace de radiorreceptor disponibles para la determinación de la afinidad de los compuestos para el subtipo de receptor adrenérgico α1L , aunque este subtipo puede ser estudiado por medio de técnicas funcionales en una variedad de tejidos, tales como las arterias carótida y mesentérica del conejo, la arteria mesentérica pequeña y del conducto deferente (vas deferens) de la rata, la próstata humana (ver como referencia Doherty J. R. Eur. J. Pharmacol. 361: 1-15, 1998), así como la aorta del conejo pretratada con cloroetilclonidina (Testa et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 281: 1284-1293, 1997). En este enfoque, la capacidad de los compuestos de prueba para inhibir la contracción de los vasos sanguíneos inducida por NA es calculada y la constante de disociación (Kb) es estimada (Arunlakshana et al., Br. J. Pharmacol. Chemother. 14: 45-58, 1959), o un método computacional que sea equivalente bien conocido en el estado de la técnica. Una descripción detallada de esto es proporcionada en el Ejemplo 9 de abajo. Tal como ha sido analizado antes, los compuestos útiles para la práctica de la invención enlazan al receptor adrenérgico α1b con una Ki de al menos 10−8 M y tiene una afinidad para los receptores adrenérgicos αa1 , α1b y α1L de al menos 10 veces menor. Una vez un compuesto es identificado como que tiene las características anteriores, su 7

ES 2 250 130 T3 actividad farmacológica puede ser confirmada utilizando uno o más sistemas de modelo animal para el estudio de la erección en varones. Los sistemas de modelo animal útiles incluyen el incremento de la presión intracavernosa en ratas y/o perros anestesiados. 5

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En tales métodos, los compuestos son administrados dentro del cuerpo cavernoso y la presión intracavernosa es calculada, de forma simultánea a la presión sanguínea. La eficacia de los compuestos es calculada de mejor forma mediante la evaluación de la relación entre la presión sanguínea y la presión intracavernosa, las cuales están estrictamente correlacionadas. De este modo, se obtiene un índice de actividad el cual es expresado como un valor porcentual y refleja el porciento del ICP con respecto a la presión sanguínea, el cual puede alcanzar un valor máximo del 100%. Estos métodos están descritos en detalle en los Ejemplos 10 y 11 de abajo. Los compuestos útiles tal como son calculados utilizando los antes mencionados modelos in vivo, provocan un incremento considerable con respecto a un vehículo en la proporción ICP/BP cuando son administrados de manera local a una dosis de 10-1000 µg con una reducción de la presión sanguínea menor del 20% (30% solamente en la dosis más alta). Un modelo para calcular los efectos de los productos de la invención en la presión vaginal y clitoral está descrito en el Ejemplo 12. Aplicaciones Terapéuticas

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La invención abarca las formulaciones farmacéuticas que contienen los antagonistas del receptor adrenérgico α1b enumerados arriba para el tratamiento de la disfunción sexual en varones y mujeres, en particular cuando es debido a un origen vascular. Sin pretender limitar lo expuesto a una determinada teoría, el control simpático neural mantiene al pene y a la pared vaginal, así como al clítoris, en su estado flácido y antagonizando el efecto de los mediadores simpáticos en estos tejidos con antagonistas selectivos del receptor adrenérgico α1b se permite que este control negativo sea superado, con la relajación del músculo suave del pene y la vasodilatación de las arterias cavernosas en el varón y la vasocongestión en las mujeres. Como resultado, es aumentado el flujo sanguíneo en los varones hacia el interior de los espacios trabeculares de la corpora cavernosa, provocando el engullimiento del pene (tumescencia). La expansión de las paredes tabeculares contra la túnica albugínea genera una compresión de las vénulas subtunicales y obstaculiza el flujo venoso, dando como resultado una tumescencia prolongada, es decir, una erección. En las mujeres, la vasocongestión permite la lubricación vaginal, facilitando por lo tanto una actividad sexual satisfactoria. Una “cantidad efectiva” del compuesto para el tratamiento de la disfunción sexual es una cantidad que da como resultado una mejora apreciable de la erección. En los varones, un parámetro adicional es la duración de la erección, mientras que en las mujeres la cantidad efectiva es aquella que produce una cantidad notable del fluído sanguíneo en la pared vaginal y el clítoris. La cantidad efectiva para el tratamiento de la disfunción sexual puede depender de experimentaciones utilizando los métodos conocidos en la técnica, como estableciendo una matriz de dosis y frecuencias de administración y comparando un grupo de unidades o casos experimentales a cada punto de la matriz. La cantidad exacta, que debe administrarse a un paciente, puede variar dependiendo del estado y de la gravedad del trastorno y de la condición física del paciente. La mejora mensurable de un síntoma o parámetro cualquiera puede ser determinada por un médico experimentado en la materia o conocerse a partir de la información que suministra el paciente al médico. Se considera dentro del alcance de la presente invención cualquier atenuación o mejora significativa que se pueda presentar, desde el punto de vista clínico o estadístico. Por una atenuación o mejora clínicamente significativa se entiende una mejora perceptible para el paciente y/o para el médico. Preferentemente, los compuestos de la invención son empleados en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable antes de su administración. Tales composiciones están provistas de una cantidad efectiva terapéuticamente del compuesto de la presente invención y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, cuando la administración se efectúa por medio de una inyección, es preparada una solución acuosa aceptable para su inyección por vía intracavernosa en el pene. En este caso, los portadores incluyen pero no están limitados, agua, solución salina, una solución salina tamponada, sales, glicerol y etanol, lo mismo solos o en combinación. También, un agente conservante no irritante puede ser añadido a las composiciones tal como por ejemplo, el cloruro de benzalconio. En el caso de la administración por vía oral, intrauretral o vía subcutánea, el portador farmacéutico incluye pero no está limitado a geles tales como formulaciones de geles de petróleo, ungüentos, cremas, soluciones, pulverizadores, polvos, espumas y liposómica. El portador es soluble en agua, no irritante, y no sensibiliza la piel. En una forma de realización preferida, el portador para este tipo de administración tiene una consistencia semiblanda de tipo crema. Esto puede ser obtenido mediante el uso de un hidrogel tal como hidroxipropil-metilcelulosa. Para la administración por vía intravaginal en una ducha vaginal, los portadores incluyen pero no están limitados a agua, solución salina, una solución salina tamponada, sales, glicerol y etanol, lo mismo solos o en combinación. También, un agente conservante no irritante puede ser añadido a las composiciones, incluyendo por ejemplo, el cloruro de benzalconio. Los portadores para la administración en una crema o en óvulos vaginales incluyen pero no están limitados a 8

ES 2 250 130 T3 glicol de propileno, lanolina hidrogenada, aceite de almendra dulce, ésteres de poliglicol de ácidos grasos, alcohol cetílico, monoestearato de glicerol, sodio edetate, triglicéridos de ácidos grasos, gelatina, glicerina, dióxido de titanio, parabenes. 5

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Las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la invención pueden comprender de manera opcional otros agentes activos que mejoren o complementen los efectos de mejora del acto sexual de los compuestos de la presente invención. Tales agentes activos incluyen pero no están limitados a, prostaglandinas, por ejemplo prostaglandina E2 ; vasodilatadores directos, por ejemplo papaverina: y los inhibidores de la fosfodiesterasa tipo V, por ejemplo 1-{[3-(4,7-dihidro1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-5-il-4-etoxifenil]-4-metilpiperazina también conocido como sildenafil. Estos compuestos complementan la acción directa de los compuestos de la presente invención en la acción de producir los efectos de mejora deseados. El uso de un compuesto de acuerdo a la presente invención junto con el sildenafil puede además permitir que la dosis de este último sea reducida, reduciendo al mínimo sus indeseables efectos secundarios por medio de la administración de la combinación vía oral o por vía intravenosa o también por medio de uno de los métodos expuestos en los siguientes párrafos.

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De forma preferente, los compuestos de la invención son administrados de acuerdo a uno de los siguientes métodos. Los compuestos de la invención pueden ser administrados por medio de inyección en donde los compuestos de la invención son disueltos en una solución salina a una relación de concentración de 0.2 a 20 mg/ml. Es inyectado por vía intracavernosa un volumen de 0.5 ml. En otro ejemplo de un método preferido de uso, los compuestos de la invención son formulados en un gel de petróleo, el cual es entonces aplicado de forma externa a un catéter intrauretral. La dosis de los compuestos de la presente invención está en una amplitud del 1 al 10 porciento del peso del gel aplicado. El catéter es insertado en el interior de la uretra de forma que sea administrado el compuesto de la presente invención de forma intrauretral y para producir la vasodilatación que se necesita para la erección.

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Cualquier cantidad de los compuestos antes descritos el cual es eficaz para el alivio de la disfunción sexual en los humanos puede ser administrada por medio de una inyección. Es utilizada en una única dosis una amplitud de alrededor de 0.1 a 10 mg/dosis. De forma preferible en una única dosis es utilizada alrededor de 0.3 mg/dosis hasta alrededor de 3 mg/dosis.

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Para una ducha vaginal, la concentración puede tener una amplitud de a partir de 0.2% hasta un 5%, mientras que para una crema vaginal, la concentración puede tener una amplitud de a partir de 1% a un 10%. La cantidad la cual puede ser administrada por medio de un óvulo vaginal puede tener una amplitud desde 1 hasta 100 mg.

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La invención está ilustrada por los siguientes Ejemplos y por las Tablas y las Figuras a los cuales se ha hecho referencia en la presente. Ejemplo 1 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[4-(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-1-piperazinil]-hidrocloruro de quinazolina

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(I: A = 2-metoxi-6-isopropilfenoximetil, B = B1 ) (Compuesto A) 2-Metoxi-6-ácido de isopropilfenoxiacético (1A) 45

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Fue añadida gota a gota una solución de 11.1 ml de etil bromoacetato en 10 ml de tolueno a temperatura ambiente sobre alrededor de 15 minutos dentro de una mezcla de 20 g de NaOH, 30 ml de H2 O, 1.1 g de cloruro de trietil bencil amonio, 8.4 g de 2-isopropil-6-metoxifenol (preparado de acuerdo a Johnson et al., Tetrahedron. 38, 1397-1404 (1982)) y 40 ml de tolueno. La mezcla fue agitada con rapidez a la misma temperatura durante 2 h y después de esto durante 2 h a 60-65ºC y por 6.5 h bajo reflujo. Durante esta última etapa, fue añadida una solución de 6 ml de etil bromoacetato en 10 ml de tolueno. Al final la mezcla fue diluida con 250 ml de H2 O. La fase acuosa fue separada y tratada con HCl concentrado; el precipitado emulsificado fue extraído con Et2 O (3 x 50 ml) y la fase orgánica fue lavada con agua. Otra extracción fue llevada a cabo con 40 ml de 20% de Na2 CO3 y la solución débilmente alcalina fue tratada con HCI concentrado y extraída con Et2 O (3 x 40 ml). Las extracciones fueron depositadas y el disolvente fue evaporado, y se obtuvieron 8 g (72%) del compuesto del título; b. p. 190ºC/0.7 mmHg.

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4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[4-(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-1-piperazinil]-hidrocloruro de quinazolina

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Fueron añadidos gota a gota 3.6 ml de SOCl2 en una solución en ebullición de 6 g de 1A intermediario en 30 ml de CCl4 y la mezcla fue agitada bajo reflujo por 2 h. El residuo oleaginoso obtenido por medio de la evaporación de la mezcla de reacción, fue disuelto en 26 ml de CHCl3 y la solución fue añadida gota a gota sobre 30 minutos en una solución agitada de 7.75 g de 4-amino-6,7-dimetoxi-2-(1-piperazinil)-quinazolina y 4.1 ml de Et3 N en 50 ml de DMF. Después del agitado durante 2 horas, los disolventes fueron evaporados a sequedad. El residuo fue disuelto en 250 ml de CHCl3 . La solución fue lavada con 2.5% NaHCO3 y luego con H2 O, y finalmente evaporada a sequedad. La purificación fue llevada a cabo por cromatografía en columna utilizando CHCl3 /MeOH 100:3 como mezcla eluyente.

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El residuo fue suspendido en 100 ml de etanol a ebullición, y el HCI etanólico fue entonces añadido en un exceso ligero hasta la disolución. Después del enfriamiento, la sal de clorhidrato fue recogida por succión y recristalizada en etanol para obtener 6.4 g (45%) del producto; m. p. 252-254ºC. 9

ES 2 250 130 T3 Ejemplo 2 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(4aR,8aS)-4-(2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina 5

(I: A = 2-furil, B = B3 ) (Compuesto B) (±)-(2-Furoil)-cis-octahidroquinoxalina (2A)

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Fueron añadidos gota a gota 1.44 g de 48% de ácido hidrobromico a una solución de 3.85 g de cis-octahidroquinoxalina (preparado como se describe en Brill et al., J. Org. Chem. 28, 1135-1138, (1963)) en 26 ml de etanol y 4 ml de H2 O agitado a 40-45ºC. Fueron añadidos gota a gota 1.16 g de 2-furoil cloruro sobre 15 minutos dentro de una solución resultante y el agitado fue continuado durante 3 h a 80ºC. La solución fue concentrada a bajo volumen, diluida con agua y extraída con cloroformo. El residuo obtenido después de la evaporación del disolvente fue purificado mediante cromatografía flash eluyente con éter de petróleo : etil acetato : metanol : 28% amonio acuoso 8 : 6 : 2 : 0.2 para obtener 2.35 g (40%) del compuesto deseado. M. p. 178ºC dec. (+)-1-(2-Furoil)-cis-octahidroquinoxalina (2B)

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25

Una solución de 2.35 g del anterior intermediario 2A en 22 ml de metanol fue tratada con una solución de 1.54 g de (S)-(+)-ácido mandélico en 22 ml de metanol. La mezcla fue evaporada a sequedad para obtener un residuo el cual fue cristalizado por medio de la disolución del sólido en 265 ml de etil acetato caliente y entonces la reducción del volumen por medio de evaporación hasta alrededor de 130 ml. El precipitado fue recristalizado otras seis veces con el mismo disolvente para obtener 0.4 g de (+)-mandelato sal; m. p. 188-190ºC, [α]20 D = + 79.4º (c=1, MeOH). La sal fue disuelta en agua, la solución muy fría se basificó con 2 N NaOH, y la mezcla resultante extraída con cloroformo (3 x 22 ml). Con la eliminación del disolvente seco se obtuvo 0.21 g del compuesto deseado como un sólido céreo; m. p. 47-50ºC, [α]20 D = + 70.1º (c=1, MeOH). 4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[(4aR,8aS)-4-(2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina

30

Fue calentada a reflujo durante 72 h una mezcla de 0.21 g del anterior intermediario 2B, 0.18 g de 4-amino-2-cloro6,7-dimetoxiquinazolina y 0.2 g de N,N-diisopropiletilamina en 13 ml de alcohol isoamílico. Después de enfriarse, la mezcla fue dejada a 0ºC durante toda la noche. El sólido fue entonces recogido, triturado con 2N NaOH frío, filtrado, lavado con agua, y transformado en la sal de clorhidrato. La cristalización de MeOH/15% EtOH obtuvo 0.06 g del compuesto del título. M. p. 262-264ºC, [α]20 D = + 74.4º (c=1, MeOH).

35

Ejemplo 3 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(3S)-3-(t-butilo carbamoil)-4-(2-furoil)-1-piperazinil]-quinazolina 40

(I: A = 2-furil, B = B2 ) (Compuesto C) 4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[(3S)-3-(t-butilo carbamoil)-1-piperazinil]-quinazolina (3 A)

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Una mezcla de 0.36 g de 4-amino-2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolina, 1.08 g de (S)-N-tert-butil-2-piperazina carboxamida bis-(1S)-(+)-10-sulfanato de alcanfor preparado como está descrito en la Patente US 5 700 364 y 0.94 ml de diisopropiletilamina en 10 ml de alcohol isoamílico fue calentado a reflujo durante 9 h. Después de enfriarse a temperatura ambiente, el disolvente fue evaporado in vacuo y fueron añadidos al residuo 50 ml de diclorometano. La mezcla fue lavada con agua (3 x 20 ml), 5% de Na2 CO3 (30 ml) acuoso, agua (3 x 20 ml), secado (Na2 SO4 ) y evaporado a sequedad. El residuo fue purificado mediante cromatografía flash eluyente con cloroformo : 2N amonio metanólico 100: 3 para obtener 0.173 g (30%) del compuesto deseado. 1 H-NMR (CDCl3 , δ) : 1.35 (s, 9H, C (CH3 )3 ), 1.65-2.10 (m, 1H, piperazina NH), 2.30-3.40 (m, 5H, piperazina CHs), 3.95 (s, 6H, OCH3 ), 4.45 (d, 1H, piperazina CH), 4.68 (dd, 1H, piperazina CH), 6.00-6.45 (m, 2H, NH2 ), 6.857.10 (m, 2H, CONH y quinazolina H8), 7.18 (s, 1H, quinazolina H5).

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4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[(3S)-3-(t-butilo carbamoil)-4-(2-furoil)-1-piperazinil]-quinazolina

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Se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas en 10 ml de diclorometano una mezcla de 0.243 g del anterior intermediario 3A, 0.17 ml de diisopropiletilamina, 0.08 ml de 2-furoil cloruro. La solución fue diluida con diclorometano (10 ml), lavada con agua (4 x 10 ml), 2N NaOH (4 x 10 ml) y agua (4 x 10 ml), secada (Na2 SO4 ) y evaporada hasta sequedad. El residuo fue purificado mediante cromatografía flash eluyente con éter de petróleo : etil acetato 100 : 2 para obtener 0.2 g (68%) del compuesto del título como un sólido de color marfil.

65

H-NMR (DMSO-d6 , δ) : 1.14 (s, 9H, C (CH3 )3 ), 3.08-3.22 (m, 1H, piperazina CH), 3.32-3.47 (m, 2H, piperazina CHs), 3.77 (s, 3H, OCH3 ), 3.81 (s, 3H, OCH3 ), 4.10-4.25 (m, 1H, piperazina CH), 4.35-4.50 (m, 1H, piperazina CH), 4.82-4.98 (m, 2H, piperazina CHs), 6.61-6.66 (m, 1H, furano H4), 6.69 (s, 1H, furano H3), 6.95-7.18 (m, 3H, CONH y NH2 ), 7.42 (s, 1H, quinoleína H8), 7.55 (s, 1H, quinoleína H5), 7.85 (s, 1H, furano H5). 1

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ES 2 250 130 T3 Ejemplo 4 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina · 2.5 H2 O 5

(I: A = 2-metoxi-6-isopropilfenoximetil, B = B3 ) 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina dihidrocloruro · 2.5 H2 O (4A) 10

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Fue agitada a reflujo durante 72 horas una mezcla de 7.85 g de 4-amino-2-cloro-6,7-dimetoxi quinazolina, 13.3 g de trietilamina, 0.4 g de dimetilaminopiridina, 11.5 g de cis-decahidro quinosalina y 80 ml de alcohol i-amílico. Después que se enfriara a temperatura ambiente, el disolvente fue evaporado y el residuo fue purificado por medio de cromatografía flash eluyente con éter de petróleo : etil acetato : metanol : 28% de hidróxido de amonio 8 : 6 : 2 : 0.2. El residuo obtenido fue transformado en sal de clorhidrato y cristalizado de i-propanol : metanol 1:1 para obtener 14.7 g (73%) del compuesto deseado, m. p. 290-295ºC. 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[4-cloroacetil-(±)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina hidrocloruro (4B)

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Fue añadida gota a gota sobre 15 minutos a 0ºC una solución de 0.26 g de cloroacetil cloruro en 6 ml de diclorometano a una mezcla agitada de 0.5 g del intermediario anterior 4A y 0.21 g de diisopropiletilamina en 15 ml de diclorometano. Pasadas 4 h de agitado a temperatura ambiente y 72 h en reposo en el frigorífico, el sólido fue recogido por succión y purificado por cristalización en cloroformo para obtener 0.12 g (33%) del producto deseado; m. p. > 270ºC. 1 H-NMR (CDCl3 , δ) : 1.30-2.35 (m, 8H, octahidroquinoxalina CHs a posición 5, 6, 7 y 8), 3.70-4.18 (m, 10H octahidroquinoxalina CHs a posición 2 y 3 y 2 OCH3 ), 4.20-4.36 (m, 1H octahidroquinoxalina H4a), 4.47 (s, 2H, CH2 Cl), 4.60-4.78 (m, 1H octahidroquinoxalina H8a), 7.48 (s, 1H, quinoleína H8), 7.75 (s, 1H, quinoleína H5), 8.66 (br, 1H, NH), 8.90 (br, 1H, NH), 11.95 (br, 1H, NH).

4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina hidrocloruro · 2.5 H2 O Fueron añadidos 10 ml de una solución recién preparada de 0.095 M EtONa a una solución agitada de 0.16 g de 2-isopropil-6-metoxifenol en 5 ml de etanol y se continuó agitando durante 0.5 horas a temperatura ambiente. La solución resultante fue añadida gota a gota en 15 minutos en una solución agitada de 0.2 g del intermediario de arriba 4B en 50 ml de etanol bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla fue agitada durante 5 horas a temperatura ambiente y entonces fue calentada a reflujo durante 20 horas. El residuo, obtenido después de la evaporación del disolvente, fue convertido en la sal de clorhidrato y cristalizado de i-propanol para obtener 0.64 g (21%) del compuesto del título; m. p. 208-209ºC.

40

Ejemplo 5 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(5-metil-2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina · 2.5 H2 O 45

(I: A = 5-metil-2-furil, B = B3 ) 5-Metil-2-furoil cloruro (5A)

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Fue añadida gota a gota a 0ºC bajo atmósfera de nitrógeno una solución de 0.31 g de SOCl3 en 2 ml de benceno a una solución de 0.22 g de 5-ácido metilfuroico, preparado de acuerdo al procedimiento descrito por Robert et al., Eur. J. Med. Chem. 30, 915-924 (1995), en 5 ml de benceno. La mezcla fue agitada durante 1 hora a 80ºC y el exceso SOCl2 fue entonces destilado. El residuo (0.24 g, 97% de teórica) fue utilizado para la siguiente fase sin purificación posterior. 4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(5-metil-2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina · 2.5 H2 O Una solución de 0.24 g del anterior intermediario 5A en 5 ml diclorometano fue añadida gota a gota a 0ºC a una solución agitada de 0.56 g del intermediario 4A y 0.25 g de trietilamina en 10 ml de diclorometano. La mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante 3 horas y entonces mantenida a 0-4ºC toda la noche. El precipitado fue recogido mediante succión y purificado mediante cromatografía flash eluyente con éter de petróleo : etil acetato : metanol : 28% hidróxido de amonio 8 : 8 : 2 : 0.2. La base pura fue transformada en la sal de clorhidrato y cristalizada de i-propanol para obtener 0.2 g (27%) del compuesto del título; m. p. 268-270ºC.

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ES 2 250 130 T3 Ejemplo 6 4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-tetrahidrofuroil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina · 2.5 H2 O 5

(I: A = 2-tetrahidrofuril, B = B3 ) 2-tetrahidrofuroil cloruro (6A) 10

Fue agitada a 80ºC durante una hora una mezcla de 0.22 g de 2-tetrahidro-2- ácido furoico y 0.5 ml de SOCl2 en 10 ml de benceno. El exceso de SOCl2 y benceno fue destilado para obtener 0.25 g de un residuo oleaginoso el cual fue considerado puro en un 80% y fue utilizado para la próxima fase sin purificación posterior.

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4-Amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-tetrahidrofuroil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina · 2.5 H2 O

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Este compuesto fue preparado de acuerdo al procedimiento descrito en el Ejemplo 5, pero utilizando el intermediario 6A en vez del intermediario 5A y utilizando éter de petróleo : etil acetato : metanol : 14% hidróxido de amonio 8 : 6 : 2 : 0.1 como el eluyente para la cromatografía flash. La base pura fue transformada en la sal de clorhidrato y cristalizada de etanol para obtener un 21% del compuesto del título; m. p. 220-223ºC. Ejemplo 7

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4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-benziloxicarbonil-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-hidrocloruro de quinazolina · 0.75 H2 O (I: A = benziloxi, B = B3 )

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Este compuesto fue preparado de acuerdo al procedimiento descrito en el Ejemplo 5, pero utilizando benziloxicarbonil cloruro en vez del intermediario 5A y utilizando éter de petróleo : etil acetato : metanol : 14% hidróxido de amonio 8 : 5 : 0.6 : 0.025 como el eluyente para la cromatografía flash. La base pura fue transformada en la sal de clorhidrato y cristalizada de etanol para obtener un 14% del compuesto del título; m. p. 243-245ºC. Ejemplo 8

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Ensayo de Enlace de Radioligando a adrenoceptores α1 Clonados El ligando [3 H] Prazosina a los adrenoceptores α1a en bovinos, adrenoceptores α1b en hámster y adrenoceptores α1d en ratas fue llevado a cabo en membranas de células COS-7 (células epiteliales de riñón de mono CV-1) que expresa de forma transitoria los adrenoceptores α1a en bovinos, los adrenoceptores α1b en hámster y los adrenoceptores α1d en ratas. La elaboración y transfección de los adrenoceptores α1 individuales fue llevado a cabo como se ha descrito anteriormente en (Schwinn et al., J. Biol. Chem. 265: 8183-8189, 1990; Cotecchia S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 7159-7163, 1998; Lomasney et al., J. Biol. Chem. 266: 6365-6369, 1991). Las membranas de células COS-7 (35, 35 y 70 µg proteína/muestra para α1b , α1a y α1d , respectivamente) fueron incubadas en 50 mM Tris, pH 7.4, que contiene 10 µM de pargilina y 0.1% de ácido arcórbico, con 1.1 nM [3 H] prazosina, en un volumen final de 0.22 ml, durante 30 minutes a 25ºC, en la ausencia o la presencia de fármacos competentes (1 pM - 10 µM). El enlace no específico fue determinado en la presencia de 100 µM de fentolamina. La incubación fue detenida mediante la adición del amortiguador Tris enfriado con hielo y la filtración rápida a través de filtros GF52 Schleicher & Schuell o Whatman GF/B pretratados con polietilenimina al 0.2%.

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El enlace a subtipos del adrenoceptor α1 humano clonado fue llevado a cabo en membranas a partir de células CHO (las células chinas del ovario del hámster) transfectadas mediante electroporación con ADN que expresa los genes que codifican para cada subtipo adrenoceptor α1 . La clonación y expresión estables del gen del adrenoceptor α1 humano fueron llevadas a cabo como se describe previamente (Testa et al., Pharmacol. Comm. 6: 79-86 (1995). Las membranas de células CHO (30 µg de proteínas) fueron incubadas en 50 mM Tris, pH 7.4, que contiene 0.2 nM de [3 H] prazosina, en un volumen final de 1.02 ml, para 30 minutos a 25ºC, en la ausencia o la presencia de fármacos competentes (1 pM - 10 µM). El enlace no específico fue determinado en la presencia de 10 µM de fentolamina. La incubación fue detenida mediante la adición del amortiguador Tris enfriado con hielo y la filtración rápida a través de filtros GF52 Schleicher & Schuell o Whatman GF/B pretratados con polietilenimina al 0.2%.

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La inhibición del enlace específico de los radioligandos por los fármacos de prueba se analizó para estimar el valor IC50 mediante la utilización del programa de ajuste de curva no lineal (De lean et al., A. J. Physiol. 235 : E97-E102, (1978). El valor IC50 se convirtió a una constante de afinidad (Ki) mediante la ecuación de Cheng & Prusoff (Cheng et al., Biochem. Pharmacol. 22 : 3099-3108, 1973). Los datos se expresan como la media de Ki.

55

Los compuestos de los Ejemplos del 1 al 7 mostraron la potencia deseada a los adrenoceptores α1b , sus valores Ki siendo más altos que 1 x 10−8 M (Tabla 1). El Compuestos A, el Compuesto B y el Compuesto C fueron 12

ES 2 250 130 T3 también selectivos para el adrenoceptor α1b , siendo su afinidad para los otros subtipos α1 de al menos 10 veces menor. TABLA 1 5

Afinidad (Ki, nM) de los diferentes compuestos probados para los subtipos de adrenoceptores α1 recombinantes de humanos y animales Receptores clonados de animales

10

Receptores clonados de humanos

α1a

α1b

α1d

α1a

α1b

α1d

Ejemplo 1 - Compuesto A

7.5

0.45

10.34

-

-

-

Ejemplo 2 - Compuesto B

32.94

0.68

26.9

9.43

0.17

2.63

Ejemplo 3 - Compuesto C

-

-

-

94.12

1.76

25.07

Ejemplo 4

-

-

-

-

0.16

-

Ejemplo 5

-

-

-

-

0.24

-

Ejemplo 7

-

-

-

-

0.65

-

Prazosina

0.72

0.46

1.39

0.61

0.42

0.23

Fentolamina

3.22

89.15

67.05

4.80

33.21

17.26

15

20

25

30

Ejemplo 9 Afinidad funcional para los receptores adrenérgicos α1L 35

40

45

50

55

La actividad antagonista α1 funcional de los compuestos de prueba contra las contracciones inducidas por noradrenalina (NA) de la aorta de conejo pretratada con cloroetilclonidina (receptor α1L ) fue evaluada de acuerdo al método de Testa ( Testa et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 281 : 1284-1293, 1997). Conejos New Zealand machos adultos fueron sacrificados mediante dislocación cervical. La aorta fue retirada, colocada en amortiguador de Krebs-Henseleit y disectada libre de tejido adherente. Fueron preparados anillos de cada arteria (8 anillos por aorta, de aproximadamente 4-5 mm de ancho) y suspendidos en 20 ml de baño orgánico que contenía amortiguador de bicarbonato de Krebs de la siguiente composición (mM) : NaCl 112.0, KCl 5.0, CaCl2 2.5, KH2PO4 1.0, MgSO4 1.2, NaHCO3 12.0 y glucosa 11.1, y equilibrado a 37ºC con 95% de O2: 5% de CO2. Se agregaron al amortiguador desmetilimipramina (0.1 µM) y corticosterona (1 µM) para bloquear la captación neuronal y extraneuronal de Na, (±)-propanol (1 µM) para bloquear los β-adrenoceptores y yohimbina (0.1 µM) para bloquear los adrenorreceptores α2. Los tejidos se sujetaron a una carga pasiva de 2 g y la tensión desarrollada fue medida utilizando transductores isométricos (Basile 7003). Las preparaciones se dejaron equilibrar por 60 minutos y luego se cebaron cada 30 minutos con NA 10 µM por tres ocasiones. Los anillos aórticos fueron luego incubados con el agente alquilante cloroetilclonidina (5 x 10-5 M) por 30 minutos y luego se lavaron extensamente tres veces (en 0.5 horas) antes de construir la curva de concentración de NA/respuesta. Después del lavado de NA y el re-equilibrio del tejido (45 minutos), el fármaco a ser probado se agregó y, después de 30 minutos, se construyó una segunda curva de concentración de NA acumulativa/respuesta. Cada concentración del antagonista se probó utilizando 2-3 anillos aórticos provenientes de diferentes conejos. Se calcularon las proporciones de dosis (por ejemplo, la proporción entre las concentraciones de noradrenalina requerida para producir la mitad de respuesta máxima en la presencia y en la ausencia del antagonista de prueba) en cada concentración de los compuestos. El logaritmo de estas proporciones de dosis -1 se mostró en gráfica contra el logaritmo de las concentraciones de compuestos (gráfica de Schild) para evaluar la afinidad de Kb constante. Cuando se utilizaron únicamente una o dos concentraciones de los compuestos de prueba, el valor aparente de Kb fue calculado utilizando la fórmula: Kb = [B]/(PROPORCIÓN DE DOSIS - 1), donde B es la concentración de antagonista.

60

Los compuestos probados mostraron selectividad para el adrenoceptor α1b versus el adrenoceptor α1L. La afinidad funcional de ambos para este receptor probó de hecho, al menos 10 veces inferior que aquel para el subtipo α1b (Tabla 2). 65

13

ES 2 250 130 T3 TABLA 2 Afinidad funcional de los compuestos de prueba para el subtipo adrenoceptor α1L 5

Kb, nM

10

Compuesto A – Ejemplo 1

631.0

Compuesto B – Ejemplo 2

741.0

Compuesto C – Ejemplo 3

3715.0

Prazosina

20.9

Fentolamina

251.0

15

Ejemplo 10 20

Registro de la presión intracavernosa y de la presión sanguínea en ratas La evaluación de las propiedades de la erección de los diferentes compuestos probados en ratas fue llevado a cabo de acuerdo al método de Giuliano et al. (Giuliano et al., J. Urol. 150 : 519-524, 1993). 25

30

35

40

45

50

Las ratas fueron anestesiadas por medio de una inyección por vía intraperitoneal de uretano (1.5 g/kg en solución salina estéril) y colocadas en una mesa homeotérmina. La temperatura de estas fue mantenida a 37ºC. Las ratas fueron traqueotomizadas con el objetivo de facilitar la respiración espontánea y para prevenir la aspiración de saliva. Se llenó un catéter con solución salina heparinizada (25 IU/ml) y fue colocado dentro de la carótida para registrar el promedio de la presión sanguínea (BP, mmHg). El pene fue descubierto y la corpora cavernosa fue expuesta. Una aguja de acero inoxidable de calibre 25 fue insertada dentro de un cuerpo cavernoso para registrar la presión intracavernosa (ICP en mmHg). La aguja fue acoplada al catéter lleno con la solución salina heparinizada (25 IU/ml). Los catéteres de presión fueron conectados a los transductores de presión (Modelo 750, Elcomatic Ltd., Glasgow, UK). A continuación de un período de reposo de 10 minutos, el disolvente del compuesto fue suministrado por vía intracavernosa (µl/inyección). Luego, fueron inyectadas cada diez minutos unas dosis en aumento de un compuesto por medio de la misma vía. Se llevaron a cabo cinco inyecciones en cada rata (un disolvente más cuatro dosis acumulativas) y cinco ratas fueron utilizadas para el estudio de un compuesto. Para cada inyección y para cada compuesto fue medida la media de la presión sanguínea (BP) promedio a lo largo de los diez minutos siguientes a la inyección. También fue registrado el valor máximo ICP alcanzado durante el período de diez minutos a continuación de una inyección. En estos experimentos, todos los compuestos probados fueron disueltos y diluidos en disolvente glicol de propileno Sorensen. Los valores de ICP y de BP fueron registrados como media ± s.e. del promedio, o variación porcentual (± s.e. ) de los valores basales. Las proporciones (ICP/BP) *100, las cuales corresponden al porcentaje del BP alcanzado por ICP, fueron calculadas por medio de la utilización del valor del efecto del pico en ICP en la presión sanguínea media bajo observación durante 10 min posteriores a la inyección de los compuestos, y registrado como media ± s.e. del promedio. Los efectos del Compuesto A, prazosina y fentolamina están resumidos de la Tabla 3 a la Tabla 5. El Compuesto A aumentó de forma dependiente de la dosis la ICP (desde 33.9 mmHg después de la inyección del vehículo hasta 50.6 mmHg) y la BP disminuyó ligeramente (alrededor de un 30%). El aumento de la ICP duró varios minutos, si bien nunca sobrepasó el período de diez minutos de cribaje (screening) (datos no mostrados). La prazosina no fue capaz de provocar ningún incremento de la ICP y disminuyó la presión sanguínea por 41% entre la inyección del disolvente y después de la inyección de 1000 µg/kg. La fentolamina no modificó la ICP hasta 300 µg/kg. Después de la inyección de 100 µg/kg se provocó un aumento de la presión intracavernosa constante que duró varios minutos (sin exceder los 10 minutos); a esta dosis la fentalomina disminuyó la BP por 30%.

55

60

65

La Figura 1 representa los efectos del vehículo y las diferentes dosis de los compuestos probadas en las proporciones de ICP/BP, correspondientes al porcentaje de la presión sanguínea (BP) alcanzada por la presión intracavernosa (ICP), después de la inyección intracavernosa en ratas. Los datos representan los valores medios de la proporción. Basal : primera línea; vehículo: segunda línea; diferentes dosis probadas : otras líneas (Compuesto A: 10, 30, 100 y 300 µg; prazosina y fentolamina: 10, 30, 100, 300 y 1000 µg). El porciento disminuido del promedio de la BP calculada versus los valores basales expresados en las Tablas 3-5 también está representados. El Compuesto A aumenta la proporción de ICP/BP en una manera dosis dependiente. Los incrementos por encima del 40% fueron obtenidos en presencia de disminuciones de la presión sanguínea sin exceder el 20%. Por el contrario, los incrementos de ICP/BP provocados por la prazosina y la fentolamina fueron escasamente dosis dependientes y ambos compuestos inducidos, a las mismas dosis, hipotensión marcada, siendo la disminución de la presión sanguínea igual a, o mayor que el 40%. El Compuesto A aumenta la proporción desde 31.8 a continuación de la inyección del disolvente hasta 66.4 a continuación de la inyección de 300 µg/kg del compuesto. El incremento obtenido con la dosis más alta de prazosina 14

ES 2 250 130 T3 refleja solamente la disminución en la presión sanguínea, ya que la ICP no aumenta en lo más mínimo. La fentolamina induce solamente un incremento ligero a la dosis más alta. TABLA 3 5

Efectos en la presión intracavernosa y la presión sanguínea después de la inyección por vía intracavernosa del Compuesto A en ratas anestesiadas (n = 5) 10

15

Dosis(µg/kg) BASAL Vehículo 10 30 100 300

ICP (mmHg)

BP (mmHg)

Proporción ICP/BP

14.5 ± 1.6 33.9 ± 6.6 36.8 ± 8.7 37.6 ± 10.1 38.7 ± 12.3 50.6 ± 13.7

92.6 ± 5.9 105.7 ± 10.1 91.3 ± 9.4 82.7 ± 11.0 74.8 ± 9.3 72.5 ± 5.6

15.8 ± 1.9 31.8 ± 5.5 38.3 ± 5.8 43.0 ± 7.0 47.9 ± 9.2 66.4 ± 15.6

ICP = presión intracavernosa, BP = presión sanguínea

20

TABLA 4 25

Efectos en la presión intracavernosa y la presión sanguínea después de la inyección por vía intracavernosa de prazosina en ratas anestesiadas (n = 5) 30

35

Dosis (µg/kg) BASAL Vehículo 10 30 100 300 1000

ICP (mmHg)

BP (mmHg)

Proporción ICP/BP

11.5 ± 2.9 26.5 ± 17.3 20.1 ± 6.4 14.9 ± 3.3 19.0 ± 6.6 18.9 ± 6.8 26.9 ± 3.5

87.5 ± 11.0 73.1 ± 9.2 54.9 ± 7.7 60.0 ± 7.4 56.8 ± 7.9 41.3 ± 3.0 43.7 ± 4.1

13.2 ± 1.3 38.0 ± 24.7 31.3 ± 6.2 24.8 ± 5.7 31.5 ± 8.1 43.0 ± 12.6 62.5 ± 16.3

40

ICP = presión intracavernosa, BP = presión sanguínea

TABLA 5

45

Efectos en la presión intracavernosa y la presión sanguínea después de la inyección por vía intracavernosa de fentolamina en ratas anestesiadas (n = 5) 50

Dosis (µg/kg)

55

60

BASAL Vehículo 10 30 100 300 1000

ICP (mmHg)

BP (mmHg)

Proporción ICP/BP

12.9 ± 1.5 12.4 ± 1.5 12.6 ± 1.7 10.1 ± 1.4 10.5 ± 1.4 12.5 ± 2.3 20.6 ± 2.1

119.6 ± 4.2 84.6 ± 4.1 79.8 ± 7.3 72.2 ± 4.3 61.1 ± 7.0 63.0 ± 2.2 59.8 ± 3.6

10.8 ± 1.1 15.1 ± 2.5 16.6 ± 3.0 14.3 ± 2.3 17.9 ± 3.3 20.4 ± 4.4 34.3 ± 2.7

ICP = presión intracavernosa, BP = presión sanguínea 65

15

ES 2 250 130 T3 Ejemplo 11 Registro de la presión intracavernosa y la presión sanguínea en perros 5

La evaluación de las propiedades de la erección en perros fue llevada a cabo de acuerdo al método de Carati (Carati et al., J. Physiol. 384: 525-538, 1987), con algunas modificaciones.

25

Perros machos beagle fueron anestesiados con pentobarbital sódico (i. v. Nembutal, 35 mg/kg para inducción y 4 mg/kg/h para mantenimiento) y fueron intubados con un tubo endotraqueal con balón para facilitar la libre ventilación. Fue canulada un área colateral de la vena femoral izquierda con un catéter de PE para la infusión del anestésico. La BP sistémica fue controlada a través de un transductor de presión Mikro-tip 6F (Instrumentos Millar) introducido en el arco aórtico a través de la arteria carótida común derecha. La ICP fue medida por medio de una aguja de calibre 20 colocada en el interior del cuerpo cavernoso izquierdo o derecho y la misma aguja fue utilizada para la inyección intracavernosa de los fármacos. La aguja fue acoplada a un catéter lleno con la solución salina heparinizada (25 iu/ml). La señal de la presión fue activada por medio de un BM 614/2 y amplificada en un polígrafo multicanal. Los compuestos a ser probados fueron administrados por vía inyección intracavernosa en un volumen de 0.5 ml y, después de cada inyección, la aguja fue lavada con 0.5 ml de solución salina. Los vehículos para la disolución del fármaco fueron probados antes de la primera dosis de cada fármaco. Los compuestos fueron administrados de una manera acumulativa con intervalos de 30 minutos entre las administraciones. La ICP (mmHg) fue medida en el efecto pico o máximo después de la administración de los compuestos. La duración de tumescencia (DT, min) fue medida desde el inicio del aumento de la ICP sobre su valor basal hasta el retorno a la línea de base. La presión sanguínea sistólica y la presión sanguínea diastólica (mmHg) fueron medidas en el efecto pico o máximo después de la administración de los fármacos, con el objetivo de evaluar los efectos de los fármacos sobre la BP independientemente de los efectos sobre la ICP. Además, la presión sanguínea sistólica fue medida al tiempo del valor máximo de la ICP después de la inyección por vía intracavernosa, para evaluar las proporciones de ICP/BP.

30

En estos experimentos, el Compuesto A, el Compuesto B y la fentolamina (1 o 3 mg/ml) fueron disueltos en un 10% de (v/v) N,N-dimetilformamida y diluidos además en H2 O desionizada. La prazosina fue disuelta en H2 O desionizada. Los datos fueron registrados como media ± s.e. del promedio, o variación porcentual (± s.e. ) de los valores basales.

35

Los resultados de la administración de los fármacos por vía intracavernosa en perros anestesiados están representados en las Tablas de la 6 a la 9. Los vehículos empleados para la disolución de los fármacos fueron probados antes de cada dosis de cada compuesto y no mostraron efecto ni en la presión intracavernosa ni en la presión sanguínea sistémica (datos no representados).

10

15

20

40

45

50

55

60

Todos los fármacos probados indujeron un aumento de la presión intracavernosa (ICP). El Compuesto A aumentó de forma dependiente de la dosis la ICP (en comparación con los valores basales de ICP) desde 12 mmHg a 3 µg/kg hasta 96.5 mmHg con la dosis más alta (300 µg/kg). La duración del incremento de la presión intracavernosa (DT), también, fue dependiente de la dosis y duró al menos 27 min a la dosis más alta. El compuesto indujo una hipotensión dependiente de la dosis ligera (calculada sobre la presión sanguínea diastólica) desde -10 a -19 mmHg. El compuesto B aumentó la ICP en una manera dependiente de la dosis desde 13.7 mmHg (a 3 µg/kg) hasta 73.3 mmHg (1000 µg/kg) y solamente hipotensión inducida con la dosis más alta (-31 mmHg en presión sanguínea diastólica). La DT duró alrededor de 40 min a la dosis más alta. La prazosina y la fentolamina aumentaron la ICP a dosis que indujeron hipotensión sostenida. Además, el incremento de la ICP observada después de la inyección de estos compuestos de referencia no era dosis dependiente. La prazosina, a 1000 µg, indujo un incremento de la ICP de 36 mmHg solamente, y disminuyó la presión sanguínea diastólica por 71 mmHg. De forma similar, la fentolamina (a la misma dosis) aumentó la ICP por 43 mmHg, pero disminuyó la presión sanguínea diastólica por 37 mmHg. En la Figura 2 se muestran los efectos del vehículo y las diferentes dosis de los compuestos probados en las proporciones de ICP/BP, en correspondencia al porcentaje de la presión sanguínea (BP) alcanzada por la presión intracavernosa (ICP) después de la inyección por vía intracavernosa en perros. Los datos representan los valores medios de la proporción. Basal : primera línea; diferentes dosis probadas : otras líneas (Compuesto A: 3, 10, 30, 100 y 300 µg; Compuesto B : 3, 30, 100, 300 y 1000 µg; prazosina: 30, 100, 300 y 1000 µg; fentolamina : 10, 30, 100, 300 y 1000 µg). Las disminuciones porcentuales de la DBP calculada versus los valores basales expresados en las Tablas 6-9 también están representadas. El Compuesto A incrementa la proporción de ICP/BP de una manera dependiente de la dosis. Los incrementos mayores que el 80% fueron obtenidos en la presencia de las disminuciones de la presión sanguínea sin exceder el 20%. Resultados similares fueron obtenidos después de la administración del Compuesto B. Por el contrario, los incrementos de ICP/BP inducidos por la prazosina fueron menores que aquellos obtenidos después de los Compuestos A y B, y este compuesto de referencia indujo una hipotensión marcada. La fentolamina aumentó la proporción de ICP/BP solamente después de la administración de la dosis más alta, lo cual indujo una hipotensión relevante.

65

16

ES 2 250 130 T3 TABLA 6

5

Efectos en la presión intracavernosa y en la presión sanguínea después de la inyección por vía intracavernosa del Compuesto A en perros anestesiados (n = 4) Dosis (µg/kg)

10

15

20

BASAL 3 10 30 100 300

ICP (mmHg)

DT (min)

SBP (mmHg)

DBP (mmHg)

SBPICP (mmHg)

Proporción ICP/BP

14.5 ± 2.2 26.7 ± 8.7 75.0 ± 32.4 91.5 ± 26.9 95.0 ± 23.3 111.0 ± 10.9

1.2 ± 0.2 15.0 ± 8.4 8.3 ± 3.2 13.7 ± 5.6 27.4 ± 7.8

163.0 ± 5.4 155.3 ± 5.5 157.5 ± 6.6 154.0 ± 6.6 147.5 ± 7.6 140.0 ± 7.4

126.5 ± 5.5 116.0 ± 5.9 120.0 ± 5.9 117.5 ± 6.5 113.0 ± 7.3 107.5 ± 7.4

156.7 ± 6.8 158.5 ± 7.4 156.5 ± 5.9 148.5 ± 6.0 142.0 ± 6.5

8.8 ± 1.2 16.6 ± 4.7 45.1 ± 18.6 57.6 ± 16.0 62.5 ± 13.3 77.8 ± 4.8

ICP = presión intracavernosa; DT = duración de tumescencia; SBP, DBP = presión sanguínea diastólica y sistólica, SBPICP = SBP medido en el momento de valor máximo ICP

TABLA 7 25

Efectos en la presión intracavernosa y en la presión sanguínea después de la inyección por vía intracavernosa del Compuesto B en perros anestesiados (n = 6) 30

35

40

Dosis (µg/kg) BASAL 3 30 100 300 1000

ICP (mmHg)

DT (min)

SBP (mmHg)

DBP (mmHg)

SBPICP (mmHg)

Proporción ICP/BP

19.0 ± 1.6 36.7 ± 2.2 49.3 ± 14.2 52.7 ± 13.0 57.3 ± 11.4 93.3 ± 6.2

2.5 ± 0.9 4.3 ± 2.0 4.4 ± 1.6 3.5 ± 1.1 41.7 ± 11.6

152.3 ± 7.5 151.7 ± 7.3 150.0 ± 5.9 146.0 ± 4.8 139.0 ± 6.6 121.7 ± 4.9

112.0 ± 5.3 110.7 ± 5.5 107.3 ± 4.2 104.3 ± 4.2 98.0 ± 6.9 81.0 ± 4.3

153.3 ± 7.0 151.0 ± 5.7 147.3 ± 5.0 147.3 ± 5.7 135.7 ± 6.8

12.8 ± 1.7 24.2 ± 2.0 32.3 ± 8.6 36.0 ± 8.5 39.4 ± 8.0 69.0 ± 4.3

ICP = presión intracavernosa; DT = duración de tumescencia; SBP, DBP = presión sanguínea diastólica y sistólica, SBPICP = SBP medido en el momento de valor máximo ICP

45

50

TABLA 8 Efectos en la presión intracavernosa y en la presión sanguínea después de la inyección por vía intracavernosa de la prazosina en perros anestesiados (n = 4) Dosis (µg/kg)

55

60

BASAL 30 100 300 1000

ICP (mmHg)

DT (min)

SBP (mmHg)

DBP (mmHg)

SBPICP (mmHg)

Proporción ICP/BP

16.0 ± 1.6 25.5 ± 6.3 27.0 ± 8.7 37.5 ± 5.0 52.5 ± 5.0

1.1 ± 1.1 1.4 ± 1.1 3.0 ± 1.5 17.7 ± 14.1

159.5 ± 3.7 140.0 ± 7.0 122.0 ± 1.4 102.0 ± 1.6 93.5 ± 1.9

130.5 ± 3.3 116.0 ± 2.9 98.5 ± 1.9 78.5 ± 3.5 59.0 ± 5.1

142.5 ± 5.9 130.0 ± 6.1 117.0 ± 6.6 107.0 ± 8.9

10.0 ± 0.8 18.5 ± 5.5 21.1 ± 7.2 32.4 ± 4.9 49.8 ± 5.8

ICP = presión intracavernosa; DT = duración de tumescencia; SBP, DBP = presión sanguínea diastólica y sistólica, SBPICP = SBP medido en el momento de valor máximo ICP 65

17

ES 2 250 130 T3 TABLA 9 Efectos en la presión intracavernosa y en la presión sanguínea después de la inyección por vía intracavernosa de la fentolamina en perros anestesiados (n = 3)

5

Dosis (µg/kg) 10

15

20

BASAL 10 30 100 300 1000

ICP (mmHg)

DT (min)

SBP (mmHg)

DBP (mmHg)

SBPICP (mmHg)

Proporción ICP/BP

20.0 ± 2.3 24.0 ± 0.0 20.0 ± 2.3 17.3 ± 1.3 16.0 ± 2.3 62.7 ± 24.3

4.2 ± 2.1

166.7 ± 10.9 166.7 ± 10.7 165.3 ± 7.3 159.3 ± 12.5 138.0 ± 16.3 126.0 ± 13.0

128.0 ± 8.0 125.3 ± 9.4 125.3 ± 7.3 118.7 ± 11.2 108.7 ± 11.1 91.3 ± 14.7

166.7 ± 10.7 166.7 ± 9.7 165.3 ± 9.3 149.3 ± 9.3 141.3 ± 17.3

11.9 ± 0.7 14.5 ± 0.9 11.9 ± 0.8 10.5 ± 0.2 10.6 ± 0.9 41.3 ± 12.5

ICP = presión intracavernosa; DT = duración de tumescencia; SBP, DBP = presión sanguínea diastólica y sistólica, SBPICP = SBP medido en el momento de valor máximo ICP En los resultados de los Ejemplos 10 y 11 se muestra la utilidad de los antagonistas selectivos α1b para el tratamiento de la disfunción eréctil.

25

30

35

El Compuesto A, lo mismo en perros que en ratas, y el Compuesto B en perros, inducen a un incremento de forma dependiente de la dosis de la ICP con unos efectos hipotensores muy bajos. La actividad proeréctil de tales compuestos se obtuvo en unas dosis inferiores a aquellas de fentolamina y prazosina y la disminución en la presión sanguínea diastólica fue inferior que aquella inducida por los fármacos de referencia. La fentolamina aumentó la ICP en perros y ratas a unas dosis muy altas, y su actividad proeréctil estuvo acompañada por una hipotensión sostenida. De un modo similar, la prazosina indujo un incremento en la ICP en perros acompañado por una fuerte hipotensión. En las ratas, la prazosina no incrementó la presión intracavernosa en el momento de la administración por vía intracavernosa y, por lo tanto, no se obtuvieron propiedades proeréctiles en esta especie de animales. Además, la duración de la acción observada después de la inyección del Compuesto A (y el Compuesto B a la dosis probada más alta) en perros fue superior que aquella de los compuestos de referencia probados.

40

Ejemplo 12 Evaluación del efecto en la presión vaginal y clitoral en conejos hembra

45

50

55

60

El método para evaluar los efectos de los productos de la invención en la presión vaginal y clitoral en hembras es aquel descrito por Park K et al., Int. J. Impot. Res. 9, 27-37 (1997), modificado según corresponda. Los conejos hembra de la raza New Zealand fueron anestesiados con fenobarbital y cateterizados en la arteria carótida para registrar la presión sanguínea. Las aortas abdominales y las arterias ilíacas, sobre las cuales fueron colocados sensores electromagnéticos del flujo para medir el flujo periférico, y el ramo del nervio pélvico el cual inerva la vagina y el clítoris fueron expuestos y aislados por medio de una laparotomía media. La presión en la pared vaginal y el clítoris fue medida por medio de la inserción de agujas ( de calibre 21 G), conectadas a un transductor de presión, en el corpus spongiosum vaginal y la corpora cavernosa clitoral, respectivamente. Los compuestos de prueba fueron administrados localmente en el interior de la capa subepitelial del tejido esponjoso vaginal o administrado por vía intravenosa. Fueron medidos el efecto en la presión vaginal y la presión clitoral después de la administración local y el efecto en la presión inducida por medio de estimulación eléctrica en el nervio pélvico (parámetros de estimulación: 10 V, 16 Hz, 8 msec). En los anteriores modelos experimentales, los resultados obtenidos con los compuestos de la invención indican un uso eficaz en el tratamiento de la disfunción sexual en la presencia de muy pocos efectos secundarios de un origen hipotensor.

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ES 2 250 130 T3 REIVINDICACIONES 1. Uso de un compuesto que tiene la fórmula general I 5

10

15

en donde A representa un grupo 2-furil, un 2-furil sustituido, 2-tetrahidrofuril, alcoxi sustituido o de fenoxialquil sustituido, y B representa uno de los siguientes grupos de la fórmula B1 , B2 o B3 :

20

25

a condición de que si B representa el grupo B1 entonces A representa un grupo de fenoxialquil sustituido, o de un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto,

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para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la disfunción sexual. 2. Uso de acuerdo a la reivindicación 1, de un compuesto en el cual B representa uno de los grupos

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40

3. Uso de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2 de un compuesto en donde A representa un grupo de la fórmula 45

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55

en donde R1 representa un grupo alquil lineal o ramificado que tiene de 1 a 5 átomos de carbono y R2 representa un grupo alcoxi que tiene de 1 a 4 átomos de carbono. 4. Uso de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2 de un compuesto en donde A representa un grupo 2-furil o 6-isopropil-2-metoxifenoximetil.

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5. Uso de acuerdo a cualquier reivindicación precedente de cualquiera de los siguientes compuestos: • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[4-[(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-1-piperazinil]-quinazolina,

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• 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(4aR,8aS)-4-(2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina y • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(3S)-3-(t-butilo-carbamoil)-4-(2-furoil)-1-piperazinil]-quinazolina,

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ES 2 250 130 T3 o de un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto. 6. Uso de acuerdo a cualquier reivindicación precedente para la preparación de un medicamento que contiene de forma adicional una prostaglandina, un vasodilatador directo o un inhibidor de la fosfodiesterasa 5 de cGMP. 5

7. Uso de acuerdo a la reivindicación 6 para la preparación de un medicamento que contiene sildenafil. 8. Uso de acuerdo a cualquier reivindicación precedente para la preparación de un medicamento en donde el medicamento va a ser administrado por vía intravaginal en la forma de gel, ducha vaginal, óvulos o crema. 10

9. Uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 7 para la preparación de un medicamento en donde el medicamento va a ser administrado por vía local en el interior de la capa subepitelial del tejido esponjoso vaginal. 15

10. Un compuesto que tiene la fórmula general

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en donde A representa un grupo 2-tetrahidrofuril, 2-furil sustituido, alcoxi sustituido o fenoxialquil sustituido, o un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto.

35

11. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 10 en el cual el anillo de octahidroquinoxalina tiene la configuración (4aR,8aS) 12. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 10 o a la reivindicación 11 en el cual A representa un grupo de la fórmula

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en donde R1 representa una cadena alquil lineal o ramificada que tiene de 1 a 5 átomos de carbono y R2 representa un grupo alcoxi que tiene de 1 a 4 átomos de carbono. 13. Cualquiera de los siguientes compuestos:

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• 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-metoxi-6-isopropilfenoxiacetil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina, • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(5-metil-2-furoil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina, • 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-(2-tetrahidrofuroil)-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina,

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• 4-amino-6,7-dimetoxi-2-[(±)-4-benziloxicarbonil-cis-octahidro-1-quinoxalinil]-quinazolina, o un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto.

65

14. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 13, o un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, en mezcla con un disolvente o un portador farmacéuticamente aceptables.

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ES 2 250 130 T3 15. Una composición farmacéutica que comprende a) un compuesto que tiene la fórmula general I 5

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en donde A representa un grupo 2-furil, 2-furil sustituido, 2-tetrahidrofuril, alcoxi sustituido o fenoxialquil sustituido, y B representa uno de los siguientes grupos de la fórmula B1 , B2 o B3 :

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a condición de que si B representa el grupo B1 entonces A representa un grupo de fenoxialquil sustituido, o un enantiómero, diastereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, b) una prostaglandina, un vasodilatador directo o un inhibidor de la fosfodiesterasa 5 de cGMP, y

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c) un disolvente o portador farmacéuticamente aceptables. 16. Una composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 15, la cual comprende un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 13. 35

17. Una composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 15 o a la reivindicación 16, la cual contiene sildenafil. 40

18. Una composición farmacéutica de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones de la 14 a la 17 en donde la composición va a ser administrada por vía intravaginal en la forma de gel, ducha vaginal, óvulos o crema. 19. Una composición farmacéutica de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones de la 14 a la 17 en donde la composición va a ser administrada por vía local en el interior de la capa subepitelial del tejido esponjoso vaginal.

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