Total T3

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Coat-A-Count Total T3 English Intended Use: Coat-A-Count Total T3 is a 125 solid-phase I radioimmunoassay designed for the quantitative measurement of total circulating triiodothyronine (T3) in serum or plasma. It is intended strictly for in vitro diagnostic use as an aid in the assessment of thyroid status. Catalog Numbers: TKT31 (100 tubes), TKT35 (500 tubes) The 100-tube kit contains less than 3.5 microcuries (130 kilobecquerels) of 125 radioactive I T3; and the 500-tube kit contains less than 17.5 microcuries (648 kilobecquerels).

Summary and Explanation Under normal physiological conditions, T3 represents approximately 5 percent of the thyroid hormones in serum. Although present in lower concentration, T3 has a greater intrinsic metabolic activity, faster turnover and larger volume of distribution 1 than circulating T4. Reports that thyrotoxicosis may be caused by abnormally high concentrations of T3 — rather than T4 — have reinforced the 2-5 importance of T3 measurements. In addition, T3 determination is an important tool for monitoring hypothyroid patients receiving sodium liothyronine therapy. Unlike "T3 Uptake" tests, which estimate the saturation of thyroid hormone binding proteins, total T3 analysis actually measures circulating levels of triiodothyronine. Most reports indicate that T3 levels distinguish clearly between euthyroid and hyperthyroid subjects, but provide a less clear-cut separation between hypothyroid and euthyroid 1 subjects. Numerous conditions unrelated to thyroid disease may cause abnormal T3 1,6-9 Consequently, total T3 values values. should not be used on their own in establishing the thyroid status of an individual. The levels of serum T4, TBG (thyroid binding globulin), TSH (thyroid 2

stimulating hormone) and other clinical findings must be considered as well.

Principle of the Procedure The Coat-A-Count Total T3 procedure is a solid-phase radioimmunoassay, wherein 125 I-labeled T3 competes for a fixed time with T3 in the patient sample for antibody sites. This reaction takes place in the presence of blocking agents which serve to liberate bound triiodothyronine from carrier proteins; hence the assay measures total T3, since both free and protein-bound T3 from the patient sample are able to compete with radiolabeled T3 for antibody sites. Because the antibody is immobilized to the wall of a polypropylene tube, simply decanting the supernatant suffices to terminate the competition and to isolate the antibody-bound fraction of the radiolabeled T3. Counting the tube in a gamma counter then yields a number, which converts by way of a calibration curve to a measure of the T3 present in the patient sample. Reagents to Pipet: 1 Total Incubation Time: 2 Hours at 37°C Total Counts at Iodination: approximately 50,000 cpm

Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2–8°C in a refrigerator designated for incoming radioactive materials. Dispose of in accordance with applicable laws. Do not use reagents beyond their expiration dates. Some components supplied in this kit may contain human source material and/or other potentially hazardous ingredients which necessitate certain precautions. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C.

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Water: Use distilled or deionized water. Radioactivity A copy of any radioisotope license certificate (Specific or General) issued to a US customer must be on file with Siemens Healthcare Diagnostics before kits or components containing radioactive material can be shipped. These radioactive materials may be acquired by any customer with the appropriate Specific license. Under a General license these radioactive materials may be acquired only by physicians, veterinarians in the practice of veterinary medicine, clinical laboratories and hospitals — and strictly for in vitro clinical or laboratory tests not involving external or internal administration of the radioactive material or its radiation to human beings or other animals. Its acquisition, receipt, storage, use, transfer and disposal are all subject to the regulations and a (General or Specific) license of the U.S. Nuclear Regulatory Commission or a State with which the NRC has entered into an agreement for the exercise of regulatory control.

dispose of liquid radioactive waste of the type contained in this product through a laboratory sink drain. Licensees must remove or deface labels from empty containers of radioactive materials before disposal of solid waste. Specific licensees may dispose of small quantities of liquid radioactive waste of the type used in this product through a laboratory sink drain. Refer to the appropriate regulations applicable to your laboratory.

Materials Supplied: Initial Preparation Total T3 Ab-Coated Tubes (TT31) Polypropylene tubes coated with antibodies to T3 and packaged in zip-lock bags. Store refrigerated and protected from moisture, carefully resealing the bags after opening. Stable at 2–8°C until the expiration date marked on the bag. Color: pink. TKT31: 100 tubes. TKT35: 500 tubes. 125

I Total T3 (TT32) Iodinated triiodothyronine, ready-to-use, with blocking agents for thyroid-binding proteins. Each vial contains 105 mL. Stable at 2-8°C for 30 days after opening, or until the expiration date marked on the vial. Color: purple. TKT31: 1 vial. TKT35: 5 vials.

Handle radioactive materials according to the requirements of your General or Specific license. To minimize exposure to radiation, the user should adhere to guidelines set forth in the National Bureau of Standards publication on the Safe Handling of Radioactive Materials (Handbook No. 92, issued March 9, 1964) and in subsequent publications issued by State and Federal authorities.

Total T3 Calibrators (T3C3–8) Six vials, labeled A through F, of processed human serum calibrators supplied in liquid form, ready to use. The zero calibrator vial A contains 2.0 mL, and the remaining calibrator vials B through F each contain 1.0 mL. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. TKT31: 1 set. TKT35: 2 sets.

Wipe up spills promptly and decontaminate affected surfaces. Avoid generation of aerosols. Dispose of solid radioactive waste according to license requirements. General licensees (holders of NRC Form 483) may dispose of solid radioactive waste as nonradioactive waste, after removing labeling. Specific licensees (NRC Form 313) should refer to Title 10, Code of Federal Regulations, Part 20. Licensees in Agreement States should refer to the appropriate regulations of their own state. General licensees may

The calibrators contain, respectively, 0, 20, 50, 100, 200 and 600 nanograms of T3 per deciliter (ng/dL) in processed human serum; equivalently: 0, 0.31, 0.77, 1.54, 3.07 and 9.22 nanomoles per liter (nmol/L). Intermediate calibration points can be obtained by mixing calibrators in suitable proportions.

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

3

Materials Required But Not Provided Gamma counter — compatible with standard 12x75 mm tubes Vortex mixer Radioimmunoassay Plain 12×75 mm polypropylene tubes — for use as NSB tubes, available from Siemens Healthcare Diagnostics (catalog number: PPO). Micropipets: 100 µL and 1,000 µL Waterbath — capable of maintaining 37°C. Neither a heat block nor an oven is suitable.

Storage: 2–8°C for 7 days, or 1 month at 11 –20°C. Before assay, allow the samples to come to room temperature and mix by gentle swirling or inversion. Aliquot, if necessary, to avoid repeated thawing and freezing. Do not attempt to thaw frozen specimens by heating them in a waterbath.

Radioimmunoassay Procedure All components must be at room temperature (15–28°C) before use. 1

Foam decanting rack — available from Siemens Healthcare Diagnostics (catalog number: FDR).

Because nonspecific binding in the Coat-A-Count procedure is characteristically low, the NSB tubes may be safely omitted without detriment to accuracy or quality control.

Logit-log graph paper A tri-level, human serum-based immunoassay control, containing T3 as one of over 25 assayed constituents, is available from Siemens Healthcare Diagnostics (catalog number: CON6).

Specimen Collection The patient need not be fasting, and no special preparations are necessary. 10 Collect blood by venipuncture into plain, heparinized or EDTA tubes, and separate the serum or plasma from the cells. The time of collection should be noted.

Coated Tubes: Label twelve Total T3 Ab-Coated Tubes A (maximum binding) and B through F in duplicate. Label additional antibody-coated tubes, also in duplicate, for controls and patient samples.

The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. Coat-ACount Total T3 has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 100 µL per tube. Samples contaminated from administration of radioactivity to the patient are unsuitable for use.

4

Plain Tubes: Label four plain (uncoated) 12x75 mm polypropylene tubes T (total counts) and NSB (nonspecific binding) in duplicate.

2

Calibrators

ng/dL

A (MB)

0

nmol/L 0

B

20

0.31

C

50

0.77

D

100

1.54

E

200

3.07

F

600

9.22

Pipet 100 µL of the zero calibrator A into the NSB and A tubes, and 100 µL of each remaining calibrator, control and patient sample into the tubes prepared. Pipet directly to the bottom. Patient samples expected to contain T3 concentrations greater than the highest calibrator (600 ng/dL) should be diluted in the zero calibrator before assay. It is good practice to use a disposabletip micropipet, changing the tip between samples, in order to avoid carryover contamination. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

3

4

125

Add 1.0 mL of I Total T3 (Purple) to every tube. Vortex briefly and gently.

Results for the unknowns may then be read from the line by interpolation.

Laboratories equipped with a reliable pipettor-diluter may handle steps 2 and 3 simultaneously. No more than ten minutes should elapse during the dispensing of the tracer. Set the T tubes aside for counting (at step 6); they require no further processing.

It is good practice to inspect results for agreement within replicates, and to construct a graph of the calibration curve (even if the calculations are handled by computer) as a visual check on the appropriateness of the transformation used and as a way to detect deviant calibration points. We also recommend keeping track of these data reduction parameters:

Incubate for 2 hours at 37°C. Use a waterbath; neither an oven nor a heat block is suitable.

5

Decant thoroughly. Removing all visible moisture will greatly enhance precision. Using a foam decanting rack, decant the acontents of all tubes (except the T tubes) and allow them to drain for 2 or 3 minutes. (The tubes may be left inverted for hours without loss of antibody-bound material.) Then strike the tubes sharply on absorbant paper to shake off all residual droplets.

6

Count for 1 minute in a gamma counter.

Calculation of Results To obtain results in terms of concentration from a logit-log representation of the calibration curve, first calculate for each pair of tubes the average NSB-corrected counts per minute: Net Counts = (Average CPM) minus (Average NSB CPM)

Then determine the binding of each pair of tubes as a percent of maximum binding (MB), with the NSB-corrected counts of the A tubes taken as 100%: Percent Bound = (Net Counts / Net MB Counts) × 100

(The calculation can be simplified by omitting the correction for nonspecific binding; samples within range of the calibrators yield virtually the same results when Percent Bound is calculated directly from Average CPM.) Using logit-log graph paper, plot Percent Bound on the vertical (probability) axis against Concentration on the horizontal (logarithmic) axis for each of the nonzero calibrators, and draw a straight line approximating the path of these points. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

T = Total Counts (as counts per minute) %NSB = 100 × (Average NSB Counts / Total Counts) %MB = 100 × (Net Counts / Total Counts)

And the 20, 50 and 80 percent "intercepts," where 20% = Concentration at 20 Percent Bound, etc.

Note that other approaches, e.g. a sound implementation of the 4-parameter logistic, are also acceptable. See Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassay data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Example Run: For illustration only, not for calculating results from another run. (See "Example Run" table.)

Quality Control Controls or serum pools with at least two T3 concentration levels — low and high — should routinely be assayed as unknowns. Report patient results only if the control results meet your laboratory's established criteria for acceptability. It is good laboratory practice to record for each assay the lot numbers of the components used, as well as the dates when they were first reconstituted or opened. We also recommend charting control results from day to day — as described, for example, in Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493-501. Note that repeat samples can serve as a valuable additional tool for monitoring interassay precision, and that pairs of control tubes can be spaced throughout the assay to help verify the absence of significant drift.

Expected Values In a reference range study, 335 serum samples from healthy adults, ranging in 5

age from 15 to 70 years old, were assayed by Coat-A-Count Total T3 procedure. Nonparametric analysis of the results revealed a non-Gaussian distribution, and indicated a reference range for adults of

End-of-Run Effect: None up to approximately 200 tubes. (See "End-ofRun Effect" table.)

Limitations

Specificity: The Coat-A-Count Total T3 antiserum is highly specific for triiodothyronine, with a particularly low crossreactivity to other naturally occurring compounds or therapeutic drugs that might be present in patient samples. Although some compounds do exhibit crossreactivity, they are not normally present in concentrations that would significantly interfere with the assay. (See "Specificity" table.)

Many physiological, pharmacological, pathological, and genetic factors affect the interpretation of total T3 results. (Refer to the Summary and Explanation section.)

Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/L has no effect on results, within the precision of the assay.

More than 20% of patients with nonthyroidal disease who are critically ill have low serum T3 levels.

Hemolysis: Presence of packed red blood cells in concentrations up to 30 µL/mL has no effect on results, within the precision of the assay.

Performance Data

Lipemia: The Coat-A-Count Total T3 kit's calibrator (600 ng/dL, calibrator F) was serially diluted with a lipemic serum pool. This causes the degree of lipemia to increase as the T3 concentration (due to the calibrator) decreases. These dilutions were assayed, along with the unspiked lipemic pool. The results show good recoveries, even in the presence of severe lipemia.

86 – 187 ng/dL representing the central 95% of the observations. The median was 131 ng/dL. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges.

See Tables and Graphs for data representative of the Coat-A-Count Total T3 kit's performance. T3 results in the sections below are expressed as ng/dL. Unless otherwise specified, all results were generated on serum samples collected in tubes without anticoagulants, gel barriers, or clot-promoting additives. Conversion Factor: ng/dL × 0.01536 → nmol/L Calibration Range: 20 – 600 ng/dL (0.31 – 9.22 nmol/L) Analytical Sensitivity: 7 ng/dL Intraassay Precision (Within-Run): Statistics were calculated for samples from the results of 20 pairs of tubes in a single assay. (See "Intraassay Precision" table.) Precision Profile: A precision profile is displayed, depicting the intraassay CVs to be expected for samples assayed in duplicate. (See "Precision Profile" graph.) Interassay Precision (Run-to-Run): Statistics were calculated for samples from the results of pairs of tubes in 20 different assays. (See "Interassay Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) 6

Alternate Sample Type: To determine whether anticoagulants interfere with the assay, blood was collected from thirty volunteers into plain, heparinized and EDTA vacutainer tubes. All samples were assayed by the Coat-A-Count Total T3 procedure. By linear regression: (Heparin) = 0.9 (Serum) + 9.6 ng/dL r = 0.939 Means: 127 ng/dL (Heparin) 132 ng/dL (Serum) (EDTA) = 0.9 (Serum) + 2.1 ng/dL r = 0.908 Means: 127 ng/dL (EDTA) 132 ng/dL (Serum)

The results show that heparinized and EDTA plasma yield virtually the same results as serum in the Coat-A-Count Total T3 procedure. Method Comparison: The Coat-A-Count Total T3 kit was compared to Double Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Antibody Total T3 on 119 patient serum samples. By linear regression: (CAC) = 0.96 (DA) + 0.96 ng/dL r = 0.939 Means: 122 ng/dL (Coat-A-Count) 126 ng/dL (Double Antibody)

National Committee for Clinical Laboratory Standards, Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture, 3rd ed, NCCLS Document H3-A3, 1991. 11) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1995:612.

Protein Effect: To simulate various protein concentrations, experiments were performed in which 2.0 mL aliquots of a human serum pool were freeze-dried and then reconstituted with various volumes of water (1, 2 and 3 mL). Each reconstituted aliquot was then assayed by the Coat-A-Count Total T3 procedure. Note that aliquots reconstituted with half the original volume represent an extremely high protein concentration, on the order of 14 g/dL. (The factor to correct for reconstitution volume is tabulated.) The results indicate that even wide variations in protein have virtually no effect on the Coat-A-Count Total T3 assay. (See "Protein Effect" table.)

Technical Assistance

Curve Displacement: Four samples were each assayed by the Coat-A-Count Total T3 procedure in assays which included one-to-one dilutions of the sample with each of the calibrators A through F. (See "Curve Displacement" table.)

Example Run (ng/dL)

References 1) Hollander CS, Shenkman L. Radioimmunoassays for triiodothyronine and thyroxine. In: Rothfeld B, editor. Nuclear medicine in vitro. Philadelphia: Lippincott, 1974, 136-49. 2) Ahmed M, Doe RP, Nuttall FQ. Triiodothyronine thyrotoxicosis following iodide ingestion: a case report. J Clin Endocrinol Metab 1974;38:574-6. 3) Hollander CS, Nihei N, Burday SZ, Mitsuma T, Shenkman L, Blum M. Clinical and laboratory observations in cases of triiodothyronine toxicosis confirmed by radioimmunoassay. Lancet 1972;i:609-11. 4) Mitsuma T, Owens R, Shenkman L, Reiter E, Hollander CS. T3 toxicosis in childhood: hyperthyroidism due to isolated hypersecretion of triiodothyronine. J Pediatr 1972;81:982-4. 5) Sterling K, Refetoff S, Selenkow HA. Thyrotoxicosis due to elevated serum triiodothyronine levels. JAMA 1970;213:571-5. 6) Bates HM. Clin Lab Prod 1974;3:16. 7) Utiger RD. Serum triiodothyronine in man. Annu Rev Med 1974;25:289-302. 8) Larson PR. Triiodothyronine: review of recent studies of its physiology and pathophysiology in man. Metabolism 1972;21:1073-92. 9) Oppenheimer JH. Role of plasma proteins in the binding, distribution and metabolism of the thyroid hormones. N Engl J Med 1968;278:1153-62. 10) Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

In the United States, contact Siemens Healthcare Diagnostics Technical Services department. Tel: 877.229.3711. To place an order: Tel: 800.255.3232. Outside the United States, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Inc. is certified to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Tube1

Duplicate Average Net CPM2 CPM3 CPM4

Percent T3 Bound5 ng/dL6

T7

38,149 39,051

38,600

NSB8

702 720

711

A (MB)9

17,608 17,680

17,644 16,933 100%

0

B

15,432 15,612

15,522 14,811 87.5%

20

C

12,770 13,282

13,026 12,315 72.7%

50

D

10,179 10,061

10,120 9,409 55.6%

100

E

6,903 7,097

7,000

6,289 37.1%

200

F

3,212 3,270

3,241

2,530 14.9%

600

0

Unknowns10 X1

12,188 11,118

11,653 10,942 64.6%

70

X2

7,672 7,806

7,739

7,028 41.5%

170

X3

5,367 5,539

5,453

4,742 28.0%

300

Quality Control Parameters: T7 = 38,600 cpm %NSB8 = 1.8% %MB9 = 44%

11

7

20% Intercept12 = 450 ng/dL 50% Intercept = 125 ng/dL 80% Intercept = 35 ng/dL

Specificity ng/dL Added1 Triiodo-L-thyronine (T3)

Intraassay Precision (ng/dL) Mean1 1

SD2

56

2

5.0

79

4.8

CV3

Triiodo-L-thyronine (reverse T3)

8.9%

Triiodo-D-thyronine

6.1%

3

166

9.8

5.9%

4

170

5.8

3.4%

5

398

12.4

3.1%

Precision Profile (ng/dL)

L-Thyroxine

(T4)

D-Thyroxine

—

Apparent % Crossng/dL2 reactivity3 —

(100%)

500,000

69

0.014%

100

113

≈100%

5,000

25

0.50%

10,000

38

0.38%

5,000

55

1.10%

500

99

19.8%

20,000

88

0.44%

Monoiodotyrosine

1,000,000

13

0.001%

Diiodo-L-tyrosine

1,000,000

74

0.007%

Methimazole

1,000,000

39

0.004%

Triiodothyroacetic acid Tetraiodothyroacetic acid

5,5′-Diphenylhydantoin 1,000,000

73

0.007%

Phenylbutazone

1,000,000

95

0.010%

6-n-Propyl-2-thiouracil

1,000,000

30

0.003%

Linearity (ng/dL) Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4 1

Interassay Precision (ng/dL)

8 in 85

155

—

—

4 in 8

71

78

91%

Mean1

SD2

CV3

2 in 8

33

39

85%

1

59

5.9

10.0%

1 in 8

18

19

95%

2

95

9.0

9.5%

8 in 8

189

—

—

3

112

7.4

6.6%

4 in 8

92

95

97%

4

167

10.6

6.3%

2 in 8

42

47

89%

5

406

23.0

5.7%

1 in 8

24

24

100%

2

End-of-Run Effect (ng/dL) Tubes1 28–39

Tubes 110–121

Tubes 186–197

Tubes 230–241

1

74

74

70

74

2

113

118

125

122

3

117

106

115

116

4

143

147

143

135

5

153

155

160

157

6

382

357

379

358

8

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Curve Displacement (ng/dL) Dilution

1

1 unspiked5

2

Observed Expected 118

Protein Effect 3

4

%O/E

—

—

Expt.1 Factor2 1

Approx. g/dL3 Observed4 Expected5

2.00×

14.0

334

1.00×

7.0

0.67×

4.7

2.00×

O/E6

266

126%

133

—

(100%)

89

89

100%

14.0

340

298

114% (100%)

1 + A (0)

61

59

103%

1 + B (20)

66

69

96%

1 + C (50)

80

84

95%

1 + D (100)

111

109

102%

1.00×

7.0

149

—

1 + E (200)

169

159

106%

0.67×

4.7

85

100

85%

1 + F (600)

390

359

109%

2.00×

14.0

462

386

120% (100%)

2

3

2 unspiked

122

—

—

1.00×

7.0

193

—

2 + A (0)

55

61

90%

0.67×

4.7

109

129

84%

2.00×

14.0

436

394

111%

1.00×

7.0

196

—

(100%)

0.67×

4.7

111

132

84%

2 + B (20)

70

71

99%

2 + C (50)

89

86

103%

2 + D (100)

103

111

93%

2 + E (200)

163

161

101%

2 + F (600)

387

361

107%

156

—

—

3 unspiked 3 + A (0)

72

78

92%

3 + B (20)

89

88

101%

3 + C (50)

93

103

90%

3 + D (100)

128

128

100%

3 + E (200)

178

178

100%

3 + F (600)

397

378

105%

4 unspiked

190

—

—

4 + A (0)

86

95

91%

4 + B (20)

99

105

94%

4 + C (50)

114

120

95%

4 + D (100)

143

145

99%

4 + E (200)

216

195

111%

4 + F (600)

430

395

109%

4

Deutsch. Example Run: 1Röhrchen, 2Duplikat CPM, 3Mittelwert CPM, 4Netto CPM, 5Prozent Bindung, 6Gesamt T3, ng/dl, 7Total, 8%NSB, 9 %MB, 10Unbekannte, 11 Qualitätskontrollparameter, 1220% Intercept. Intraassay Precision: 1Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV (Variationskoeffizient). Interassay Precision: 1 Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV (Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung, 2 Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8. Curve Displacement: 1Verdünnung, 2 Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 5Ohne Zugabe von. Specificity: 1zugesetzte Menge, 2 Gemessene Konzentration, 3% Kreuzreaktivität. End-of-Run Effect: 1Röhrchen. Protein Effect: 1 Experiment, 2Faktor, 3Gemessene Konzentration, 4Beobachtet (B), 5Erwartet (E), 6 % B/E. Español. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado CPM, 3Media CPM, 4 CPM Netas, 5Porcentaje de unión, 6Total T3, ng/dl, 7Total, 8%NSB, 9 %MB, 10Desconocido, 11Parámetros del control de calidad, 12Corte al 20%. Intraassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV. Interassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV. Linearity: 1 Dilución, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4 %O/E, 58 en 8. Curve Displacement: 1Dilución, 2 Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 5Sin añadir. Specificity: 1Cantidad añadida, 2 Concentración aparente, 3% Reacción cruzada. End-of-Run Effect: 1Tubos. Protein Effect: 1 Experiment, 2Factor, 3Concentración aparente, 4 Observado (O), 5Esperado (E), 6%O/E. Français. Exemple Série: 1Tube, 2Duplicate CPM, 3 CPM moyen, CPM corrigé, 5 Pourcentage lié, 6Total T3, ng/dl, 7Total, 8 %NSB, 9%MB, 10Patients, 11Paramètres Contrôle de Qualité, 1220% Intercept. Intraassay Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV. Interassay Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV. Linearity:

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

9

1 Dilution, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8. Curve Displacement: 1Dilution, 2 Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 5Non chargés. Specificity: 1ajouté, 2Concentration apparente, 3Réaction croisée %. End-of-Run Effect: 1Tubes. Protein Effect: 1Expériences, 2 Facteur, 3Concentration apparente, 4Observé (O), 5Attendu (A), 6%O/A.

Italiano. Seduta Esemplificativa: 1Provetta, 2 CPM in duplicato, 3CPM Medio, 4CPM Netti, 5 Percentuale di Legato, 6T3 Totale, ng/dL, 7 Totale, 8%NSB, 9%MB, 10 Campioni Non Noti, 11 Parametri per il Controllo di Qualità, 12 Intercetta al 20%. Intraassay Precision: 1 Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione). Interassay Precision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard), 3 CV (Coefficiente di Variazione). Linearity: 1 Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A, 5 8 in 8. Curve Displacement: 1Diluizione, 2 Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A, 5Semplice. Specificity: 1quantità aggiunta, 2Concentrazione apparente, 3Percentuale di Crossreattività. Endof-Run Effect: 1Provette. Protein Effect: 1 Esperimento, 2Fattore, 3Concentrazione apparente, 4Osservato (O), 5Atteso (A), 6%O/A. Português. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado CPM, 3Média de CPM, 4Net CPM, 5Percentagem de Ligação, 6Total T3, ng/dL, 7Total, 8%NSB, 9 %MB, 10Desconhecidas, 11Parâmetros do controlo de qualidade, 1220% Intercepção. Intraassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão, 3 Coeficiente de variação. Interassay Precision: 1 Média, 2Desvio padrão, 3Coeficiente de variação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O), 3 Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Curve Displacement: 1Diluição, 2Observado (O), 3 Esperado (E), 4%O/E, 5Não adicionada. Specificity: 1Quantidade adicionada, 2Apparent Concentration, 3Percentagem de reacção cruzada. End-of-Run Effect: 1Tubos. Protein Effect: 1Experiment, 2Factor, 3Apparent Concentration, 4Observado (O), 5Esperado (E), 6 %O/E.

Deutsch Coat-A-Count Gesamt T3 Anwendung: Festphasen Radioimmunoassay (beschichtete Röhrchen) zur direkten quantitativen Bestimmung des zirkulierenden Gesamttrijodthyronin T3 im Serum oder Plasma. Der Test ist ausschließlich in der In-VitroDiagnostik im Zusammenhang mit der klinischen Beurteilung des Schilddrüsenzustandes einzusetzen.

10

Artikelnummern: TKT31 (100 Tests), TKT35 (500 Tests) Die Packung mit 100 Röhrchen enthält weniger als 3,5 Microcurie (130 Kilobequerel) an 125 radioaktivem I-markiertem T3; und die Packung mit 500 Röhrchen enthält weniger als 17,5 Microcurie (648 Kilobecquerel).

Klinische Relevanz Unter physiologischen Bedingungen repräsentiert das T3 ca. 5% der Schilddrüsenhormone im Serum. Obwohl dies nur eine geringe Konzentration ist, besitzt T3 eine größere metabolische Aktivität, einen schnelleren Umsatz und ein größeres Verteilungsvolumen als 1 zirkulierendes T4. Kasuistiken, die zeigten, dass Thyreotoxikose eher durch pathologisch erhöhte T3-Konzentrationen als durch T4-Erhöhungen verursacht wurden, haben die Notwendigkeit von T32-5 Bestimmungen erneut unterstrichen. Die T3-Bestimmung ist außerdem ein unerlässlicher Parameter für die Therapiekontrolle von Patienten unter T3Therapie. Im Gegensatz zum T3-Uptake, der die Sättigung der Bindungsproteine mit Schilddrüsenhormonen bestimmt, misst der Gesamt T3-Assay den Spiegel des zirkulierenden Trijodthyronins. Die meisten Publikationen zeigen, dass anhand der T3-Spiegel deutlich zwischen euthyreoten und hyperthyreoten Patienten unterschieden werden kann. Die Differenzierung euthyreoter von hypothyreoten Patienten hingegen ist 1 weniger ausgeprägt. Neben Schilddrüsenerkrankungen können auch andere Faktoren zu veränderten T31,6-9 Deshalb darf der Werten führen. Schilddrüsenstatus von Patienten auch nicht allein auf der Grundlage des T3 als Einzelparameter beurteilt werden. Zur Beurteilung müssen die Serumspiegel von T4, TBG und TSH ebenso wie der klinische Status des Patienten herangezogen werden.

Methodik Der T3 Coat-A-Count RIA ist ein Festphasen Radioimmunoassay, bei dem 125 I-markiertes T3 eine vorgegebene Zeit mit dem T3 im Patientenserum um die Bindung an spezifische Antikörper Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

konkurriert. Diese Reaktion findet in Anwesenheit eines Blocking-Reagenz statt, welches zur Freisetzung von T3 aus Transportproteinen dient; infolgedessen wird vom Assay Gesamt T3 gemessen, da freies und proteingebundenes T3 aus dem Patientenserum mit markiertem T3 um die Bindung an spezifische Antikörper konkurrieren. Die Antikörper sind auf die Innenwand von Polypropylen-Röhrchen fest aufgebracht. Nach Ablauf der Inkubationszeit wird der Überstand abgegossen oder abgesaugt und die an die Antikörper gebundene Fraktion in einem Gamma-Counter gemessen. Die Counts sind zu der Konzentration umgekehrt proportional. Durch Vergleich mit unter gleichen Bedingungen behandelten Standards lässt sich die Konzentration des T3 im Serum aus der Standardkurve ablesen. Zu pipettierende Reagenzien: 1 Testdauer: 2 Stunden at 37°C Totalaktivität zum Zeitpunkt der Markierung: ca. 50 000 cpm

Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Zur In-vitro-Diagnostik. Reagenzien: Die Packung mit den Reagenzien sollte bei 2–8°C in einem Kühlschrank gelagert werden, der für radioaktives Material ausgewiesen ist. Die Entsorgung muss nach den jeweils gültigen Gesetzen erfolgen. Die Reagenzien dürfen nur bis zum Verfallsdatum verwendet werden. Einige Komponenten des Kits können Material humanen Ursprungs und/oder in anderer Weise gefährliche Inhaltsstoffe enthalten, die es unbedingt notwendig machen die folgenden Vorsichtsmaßnahmen einzuhalten. Die generell geltenden Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektiös zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflächenantigen und Hepatitis-C-Antikörper untersucht und negativ befundet.

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Bestimmten Komponenten wurde Natriumazid ( 25 Parameter, 3 Konzentrationen) (Artikelnummer: CON6).

Probengewinnung Es ist keine besondere Vorbereitung der Patienten nötig. Blutentnahme durch 10 Venenpunktion in unbeschichtete, Heparin- oder EDTA-Röhrchen, Trennung des Serums oder Plasma von den Blutzellen. Abnahmezeitpunkt notieren. Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klärung von lipämischen Proben empfohlen.

daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu interpretieren. Seren von Patienten unter therapeutischer Anwendung von Radioaktivität sind unbrauchbar. Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen Herstellern können differierende Werte verursachen. Dies hängt von den verwendeten Materialien und Additiven (Gel oder physische Trennbarrieren, Gerinnungsaktivatoren und /oder Antikoagulantien) ab. Coat-A-Count Gesamt T3 sind nicht mit allen möglichen Röhrchenvariationen ausgetestet worden. Details der getesteten Röhrchenarten sind dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu entnehmen. Erforderliche Menge: 100 µl pro Röhrchen. Lagerung: Bei 2–8°C für 7 Tage, oder für 11 1 Monat bei –20°C. Die Proben vor Testbeginn auf Raumtemperatur (15–28°C) bringen und vorsichtig durchmischen. Um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden bei Bedarf portionieren. Gefrorene Proben dürfen nicht durch Erhitzen im Wasserbad aufgetaut werden.

Testansatz und Durchführung Alle Testkomponenten vor Testbeginn auf Raumtemperatur (15–28°C) bringen. 1

Unbeschichtete Röhrchen: Jeweils 2 unbeschichtete 12x75 mm Polypropylen-Röhrchen mit T (Total Counts) und NSB (unspezifische Bindung) beschriften. Da die unspezifische Bindung im Coat-A-Count RIA normalerweise niedrig ist, hat sie keinen signifikanten Einfluss auf die Messwerte. Es kann deshalb auch auf das Mitführen der NSB-Röhrchen verzichtet werden.

Beschichtete Röhrchen: Jeweils 2 Antikörper-beschichtete Gesamt T3 Röhrchen mit A (maximale Bindung, 0Standard) und von B bis F beschriften. Jeweils 2 weitere Antikörper-beschichtete Röhrchen für Kontrollen und Patientenproben beschriften.

Bei hämolysierten Proben besteht die Möglichkeit einer unsachgemäßen Handhabung vor Eintreffen im Labor, 12

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Standards

2

ng/dl

A (MB)

0

0

B

20

0,31

C

50

0,77

100

1,54

200

3,07

Berechnung der Ergebnisse

F

600

9,22

Um die Konzentrationen aus der Logit-Log Darstellung der Standardkurve abzulesen werden zunächst der Mittelwert der zwei Röhrchen bereinigt um den Mittelwert der NSB Counts pro Minute (cpm) berechnet:

Jeweils 100 µl des 0-Standards A in die NSB und A Röhrchen und jeweils 100 µl der restlichen Standards, Kontrollen und Patientenproben in die vorbereiteten Röhrchen pipettieren. Direkt auf den Boden des Röhrchens pipettieren.

125

1,0 ml I Gesamt T3 (Lila) in jedes Röhrchen hinzufügen. Kurz und leicht mischen. Mit Hilfe eines Pipettor-Dilutors können die Schritte 2 und 3 auch simultan durchgeführt werden. Das 125 Verteilen des I-Gesmt T3 darf nicht länger als 10 Minuten dauern. Die TRöhrchen bis zur Messung (siehe Schritt 6) beiseite stellen; sie bedürfen keiner weiteren Behandlung. Für 2 Stunden bei 37°C im Wasserbad inkubieren. Heizblock oder Ofen dürfen nicht verwendet werden.

5

Alle Röhrchen 1 Minute im GammaCounter messen.

E

Es ist gute Laborpraxis Pipetten mit Einmalspitzen zu verwenden und die Spitze von Probe zu Probe zu wechseln um Verschleppung zu vermeiden.

4

6

D

Patientenproben mit Konzentrationen oberhalb des Messbereichs bis 600 ng/dl müssen vor der Messung mit 0-Standard verdünnt werden.

3

Röhrchen kräftig auf Fließpapier ausgeklopft, um alle restlichen Tröpfchen zu entfernen.

nmol/l

Vollständig dekantieren. Vollständiges Entfernen der Flüssigkeit verbessert die Präzision deutlich. Mit Hilfe eines Dekantierständers alle Röhrchen (außer die TRöhrchen) dekantieren oder absaugen und 2–3 Minuten umgedreht stehen lassen. (Die Röhrchen können umgedreht für Stunden stehengelassen werden, ohne antikörper-gebundenes Material zu verlieren.) Anschließend werden die

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Netto Counts = (Mittelwert CPM) minus (Mittelwert NSB CPM)

Anschließend wird die Bindung jedes Röhrchenpaars als Prozent der Maximalbindung (MB, B0) bestimmt. Hierzu werden die mittleren CPM des AStandards korrigiert um die mittlere NSB als 100% gesetzt: Prozentbindung = (Netto Counts / Netto MB Counts) × 100

(Die Berechnung kann durch weglassen der Korrektur um die NSB vereinfacht werden. Für Proben innerhalb des Standardbereichs werden nahezu identische Konzentrationen berechnet, wenn B/B0 direkt aus den CPM ermittelt wird.) Die so ermittelten B/B0 aller Standards außer des 0-Standards werden auf der yAchse auf Logit-Log Papier gegen die Konzentration auf der x-Achse (logarithmisch) aufgetragen. Die Punkte werden mit bestmöglicher Annäherung durch eine gerade Linie verbunden. Die Ergebnisse der unbekannten Proben können dann durch Interpolation an der Kurve abgelesen werden. Es ist gute Laborpraxis die Ergebnisse der Doppelbestimmung auf Übereinstimmung zu prüfen und eine Grafik der Standardkurve darzustellen (auch wenn die eigentliche Berechnung durch ein Computerprogramm erfolgt) um visuell zu überprüfen, ob für die Standardkurve die geeignete Transformation verwendet wurde und um eventuell abweichende Standardkurvenpunkte zu entdecken. Es wird weiterhin empfohlen, folgende Parameter der Berechnung zu protokollieren: T = Totalaktivität (als Counts pro Minute) 13

%NSB = 100 × (Mittelwert NSB Counts / Total Counts) %MB = 100 × (Netto Counts / Total Counts)

und die 20, 50 und 80 Prozent "intercepts," wobei 20% = Konzentration bei 20 Prozent Bindung, etc.

Bitte beachten Sie, dass auch andere Auswertungen z. B. nach der 4-Parameter-Logistik akzeptabel sind. Siehe: Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassay data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Auswertebeispiel: Dieses Beispiel dient nur zur Veranschaulichung und ist nicht dazu geeignet Werte aus einem anderen Testansatz damit zu ermitteln. (siehe Tabelle "Example Run").

Qualitätskontrolle Es wird empfohlen Kontrollen mit mindestens 2 Konzentrationen (niedrig und hoch) an Gesamt T3 routinemäßig als unbekannte Proben einzusetzen. Patientenergebnisse dürfen nur dann freigegeben werden, wenn die laborspezifischen Akzeptanzkriterien erfüllt sind. Hierzu sind die jeweils gültigen Richtlinien zu berücksichtigen. Es ist gute Laborpraxis die Chargennummern, sowie das Datum der ersten Öffnung bzw. Rekonstitution der verwendeten Komponenten zu protokollieren. Die wiederholte Messung von Proben kann bei der Beurteilung der Interassay Präzision hilfreich sein. Der Einsatz von Kontrollprobenpaaren an unterschiedlichen Positionen des Testansatzes ist hilfreich, um einen eventuellen Drift zu erkennen.

Referenzwerte In einer Referenzwertstudie wurden 335 Serumproben von gesunden Erwachsenen, im Alter von 15 – 70 Jahren mit Coat-A-Count Gesamt T3 gemessen. Die non-parametrische Auswertung der Ergebnisse zeigte keine Normalverteilung. Der Referenzbereich für Erwachsene als zentraler 95% Bereich wurde mit 86 – 187 ng/dl ermittelt. Der Median ist 131 ng/dl.

14

Diese Grenzwerte sind lediglich als Richtlinien aufzufassen. Jedes Labor sollte seine eigenen Referenzbereiche etablieren.

Grenzen der Methode Zahlreiche physiologische, pharmakologische, pathologische und genetische Faktoren beeinflussen die Interpretation der Gesamt-T3-Ergebnisse. (Details finden Sie im Abschnitt „Klinische Relevanz“). Mehr als 20% der kritisch kranken Patienten mit einer nicht-thyreoidalen Erkrankung haben niedrige SerumGesamt T3-Spiegel.

Leistungsdaten Siehe Tabellen und Grafiken mit repräsentativen Daten für den Assay. Die Ergebnisse sind in ng/dl angegeben. Alle Daten wurden – sofern nicht anders angegeben – aus Serumproben in Röhrchen ohne Antikoagulantien, Geltrennmittel oder gerinnungsfördernde Zusätze gewonnen. Umrechnungsfaktor: ng/dl × 0,01536 → nmol/l Messbereich: 20 – 600 ng/dl (0,31 – 9,22 nmol/l) Analytische Sensitivität: 7 ng/dl Intraassay-Präzision: Statistische Berechnung der Ergebnisse von Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in einem Ansatz gemessen wurden. (Siehe Tabelle „Intraassay-Precision“.) Präzisionsprofil: Die Darstellung des Präzisionsprofils zeigt zu erwartende VK´s in der Doppelbestimmung. (Siehe Grafik "Precision Profile".) Interassay-Präzision: Statistische Berechnung der Ergebnisse von Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in mehreren Ansätzen gemessen wurden. (Siehe Tabelle „Interassay-Precision“.) Linearität: Proben wurden in verschiedenen Verdünnungen getestet. (Repräsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle „Linearität“.) "End of Run" Effekt: Tritt bis ca. 200 Röhrchen nicht auf (siehe Tabelle "End-of-Run Effect").

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Spezifität: Das in diesem Testbesteck verwendete Antiserum ist hochspezifisch für Trijodthyronin mit besonders niedrigen Kreuzreaktivitäten zu anderen natürlich vorkommenden Substanzen oder Medikamenten, die in Patientenproben vorkommen können. Trotzdem zeigen einige Substanzen Kreuzreaktivitäten, die aber aufgrund ihrer normalerweise geringen Konzentrationen keine signifikanten Störungen im Assay hervorrufen. (siehe Tabelle „Spezifität“.) Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationen bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Hämolyse: Erythrozytenkonzentrate haben in Konzentrationen bis zu 30 µl/ml keinen Einfluss auf die Messung, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Lipämie: Der Standard (600 ng/dl, Standard F) wurde mit einem lipämischen Serumpool seriell verdünnt. Dies führt dazu, dass der Grad der Lipämie ansteigt, während die T3 Konzentration (hauptsächlich durch den Standard) abfällt. Alle Verdünnungen wurden zusammen mit dem unverdünnten Serumpool gemessen. Die Ergebnisse zeigen akzeptable Wiederfindungen auch bei deutlicher Lipämie. Alternativer Probentyp: Um den Einfluss von unterschiedlichen Antikoagulantien zu untersuchen, wurde Blut von 20 Freiwilligen in Röhrchen ohne Zusatz, Heparin- und EDTA-Vacutainer-Röhrchen bestimmt. Alle Proben wurden mit dem Coat-A-Count Gesamt T3 Assay bestimmt. Durch lineare Regression: (Heparin) = 0,9 (Serum) + 9,6 ng/dl r = 0,939 Mittelwerte: 127 ng/dl (Heparin) 132 ng/dl (Serum) (EDTA) = 0,9 (Serum) + 2,1 ng/dl r = 0,908 Mittelwerte: 127 ng/dl (EDTA) 132 ng/dl (Serum)

Die Ergebnisse zeigen, dass im Heparinund EDTA-Plasma die gleichen Ergebnisse wie im Serum erzielt werden. Methodenvergleich: Der Coat-A-Count Gesamt T3 wurde mit dem Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Doppelantikörper Gesamt T3 RIA anhand von 119 Patientenserumproben vergleichen. Durch lineare Regression: (CAC) = 0,96 (DA) + 0,96 ng/dl r = 0,939 Mittelwerte: 122 ng/dl (Coat-A-Count) 126 ng/dl (Double Antibody)

Protein Einfluss: Um unterschiedliche Proteinkonzentrationen zu simulieren, wurden 2,0 ml Portionen eines Humanserum-Pools gefriergetrocknet und anschließend in unterschiedlichen Volumina (1, 2, und 3 ml) an Wasser aufgelöst. Jede aufgelöste Portion wurde im Gesamt T3 Coat-A-Count RIA gemessen. In den mit der Hälfte des Originalvolumens aufgelösten Proben liegt eine extrem hohe Proteinkonzentration von 14 g/dl vor. (Der jeweilige Faktor, um das Auflösevolumen zu korrigieren, ist in der Tabelle aufgelistet.) Die Ergebnisse zeigen, dass selbst große Unterschiede in der Gesamtproteinkonzentration keinen Einfluss auf den Gesamt T3 Coat-A-Count RIA haben. (Siehe Tabelle "Protein Effect”.) Kurvenverschiebung: Vier Proben wurden einzeln in Gesamt T3 Assays untersucht, dabei erfolgte jeweils eine 1:1 Verdünnung der Probe mit einem der Standards A-F. (Siehe Tabelle "Curve Displacement".)

Anwendungsberatung Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an Ihre Niederlassung. www.siemens.com/diagnostics Das Qualitätsmanagement-System der Siemens Healthcare Diagnostics Inc. ist zertifiziert nach DIN EN ISO 13485:2003.

Español Coat-A-Count Total T3 Utilidad del análisis: Coat-A-Count T3 125 Total es un radioinmunoensayo I de fase sólida diseñado para la determinación cuantitativa de triyodotironina total circulante (T3) en suero o plasma. Está diseñado estrictamente para uso diagnóstico in vitro 15

y como ayuda en la valoración del estado de la glándula tiroides. Referencia: TKT31 (100 tubos), TKT35 (500 tubos) El kit de 100 tubos contiene menos de 3,5 microcurios (130 125 kilobequereles) de T3 I ; y el kit de 500 tubos contiene menos de 17,5 microcurios (648 kilobequereles).

Resumen y Explicación del Test Bajo condiciones fisiológicas normales, la T3 representa aproximadamente el 5 por ciento de las hormonas tiroideas en el suero. Aunque presente en concentraciones más bajas, la T3 tiene una actividad metabólica intrínseca mayor, producción mas rápida y mayor volumen de circulación que la T4 1 circulante. Los publicaciones de que la tirotoxicosis puede ser causada por concentraciones de T3 anormalmente altas – en vez de T4 – han reforzado la 2-5 importancia de las mediciones de T3. Adicionalmente, la determinación de T3 es una importante herramienta para el seguimiento de pacientes hipotiroideos que están recibiendo terapia de liotironina de sodio. A diferencia de las pruebas de “Captación de T3”, que calculan la saturación de las proteína de unión de la hormona tiroidea, el análisis T3 total realmente mide los niveles circulantes de triyodotironina. La mayoría de las publicaciones indican que los niveles de T3 distinguen claramente entre los sujetos eutiroideos y los hipertiroideos, pero proporcionan una separación menos clara entre los sujetos hipotiroideos y los 1 eutiroideos. Numerosas condiciones no relacionadas a enfermedades de la glándula tiroides pueden ser causa de valores de T3 1,6-9 Consecuentemente los anormales. valores de T3 total no se deberán usar por si mismos en el establecimiento del estado tiroideo de un individuo. Deben considerarse también los niveles de T4 en suero, TBG (globulina de unión de tiroides), TSH (hormona estimulante del tiroides) y otros hallazgos clínicos.

Principio del análisis

125

donde la T3 Total marcada con I compite durante un tiempo fijo con la T3 de la muestra del paciente por sitios de unión con el anticuerpo. Esta reacción tiene lugar en presencia de agentes bloqueadores que sirven para liberar la triyodotironina unida a las proteínas transportadoras; de ahí que el ensayo mide T3 total, ya que tanto la T3 libre y la T3 unida a proteínas de la muestra del paciente pueden competir con la T3 marcada radiactivamente por los sitios de unión del anticuerpo. Debido a que el anticuerpo está inmovilizado a la pared de un tubo de polipropileno, la simple decantación del sobrenadante es suficiente para terminar la competencia y aislar la fracción de T3 marcada radiactivamente unida al anticuerpo. El conteo del tubo en un contador gama proporciona entonces un número, que se convierte por medio de una curva de calibración en una medida de la concentración de T3 presente en la muestra del paciente. Reactivos a pipetear: 1 Tiempo total de incubación: 2 horas a 37°C Cuentas totales en la iodización: aproximadamente 50 000 cpm

Advertencias y precauciones Para uso diagnóstico in vitro. Reactivos: Almacenar de 2–8°C en una cámara preparada para almacenar material radioactivo. Desechar de acuerdo a la legislación en vigor. No usar los reactivos después de su fecha de caducidad. Algunos componentes suministrados en el kit pueden contener material de origen humano y/o otros componentes potencialmente peligrosos que necesiten ciertas precauciones. Siga las precauciones universales y manipule todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de sangre humana han sido analizados y son negativos para sífilis; para anticuerpos frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C.

El procedimiento Coat-A-Count T3 Total es un radioinmunoensayo de fase sólida, 16

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Se ha usado Azida sodica, en concentraciones menores de 0,1 g/dl, como conservante. Para su eliminacion, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la constitucion de residuos de azidas metalicas, potencialmente explosivas, en las cañerías de cobre y plomo. Agua: Usar agua destilada o desionizada. Radioactividad Una copia de cualquier certificado de licencia de radioisótopos (específico o general) emitido a la aduana de los EEUU se registrará en los ficheros de Siemens Healthcare Diagnostics antes de que se puedan enviar kits o componentes conteniendo material radioactivo. Estos materiales radioactivos pueden adquirirse por cualquier cliente con la licencia específica apropiada. Con una licencia general, estos materiales radioactivos pueden adquirirse solo por medicos, veterinarios en la prácrica de la medicina veterinaria, laboratorios clínicos y hospitales — y estrictamente para la clínica in vitro o test de laboratorio que no conlleven la administración interna o externa de material radioactivo o su radiación a humanos u otros animales. Su adquisición, recepción, almacenaje, uso, trasferencia y desecho están regulados y se expenderá una licencia (general o específica) de la Comisión Nuclear de EEUU o de un Estado con el NRC para su consiguiente control. Manejar los materiales radioactivos de acuerdo a los requerimientos de su licencia general o específica. Para minimizar la exposición a la radiación, el usuario debe adherirse al cuarto conjunto de guías publicadas por el National Bureau of Standards con el nombre Safe Handling of Radioactive Materials (Handbook No. 92, issued March 9, 1964) y en las consiguientes publicaciones de las autoridades Federales o Estatales. Limpiar y decontaminar rápidamente las superficies afectadas. Evitar la generación de aerosols. Eliminar los residuos sólidos radioactivos de acuerdo con los requerimientos de su licencia. Licencias generales (NRC Form 483) pueden eliminar sus residuos sólidos radioactivos como residuos no radioactivos, después de retirar las etiquetas. Licencias específicas (NRC Form 313) se deben Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

referir al Título 10, Código de Regulaciones Federales, Parte 20. Las licencias en Estados Asociados deben referirse a las normativas de su correspondiente Estado. Licencias generales pueden eliminar sus residuos líquidos radioactivos contenidos en este tipo de productos como cualquier otro material líquido, quitando las etiquetas de los contenedores y procesándolos como residuos sólidos. Licencias específicas pueden eliminar pequeñas cantidades de residuos líquidos radioactivos contenidos en este tipo de productos como cualquier otro material líquido. Refiérase a la normativa aplicable a su laboratorio.

Materiales Suministrados: Preparación Inicial Tubos Recubiertos con T3 Total Ab (TT31) Tubos de polipropileno recubiertos con anticuerpos a la T3 y envasados en bolsas con cierre. Almacenar refrigerados y protegidos de la condensación, cerrando cuidadosamente las bolsas después de su uso. Estable a 2–8°C hasta la fecha de caducidad impresa en la bolsa. Color: rosa. TKT31: 100 tubos. TKT35: 500 tubos. 125

I T3 Total (TT32) Triyodotironina, lista para usar, con agentes bloqueadores para proteínas de unión a hormonas tiroideas. Cada frasco contiene 105 ml. Almacenar refrigerado: estable a 2–8°C durante 30 días después de su apertura o hasta la fecha de caducidad señalada en la etiqueta. Color: morado. TKT31: 1 vial. TKT35: 5 viales. Calibradores T3 Total (T3C3–8) Seis frascos, marcados de A a F, de calibradores con base de suero humano procesado proporcionados en forma líquida, listos para usar. El calibrador cero frasco A contiene 2,0 ml, y el resto de los calibradores, frascos B a F, cada uno contiene 1,0 ml. Estable a 2–8°C durante 30 días después de abrise, o hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C. TKT31: 1 juego. TKT35: 2 juegos. Los calibradores contienen, respectivamente, 0, 20, 50, 100, 200 y 600 nanogramos de T3 l por decilitro 17

(ng/dl) en suero humano procesado: equivalente a: 0, 0,31, 0,77, 1,54, 3,07, y 9,22 nanomoles por litro (nmol/l). Se pueden obtener puntos de calibración intermedios mezclando los calibradores en las proporciones apropiadas.

Materiales Requeridos pero no suministrados Contador gama – compatible con tubos estándar de 12x75 mm

valores diferentes, dependiendo del material del tubo y de los aditivos, incluyendo barreras de gel o barreras físicas, activadores de la coagulación y/o anticoagulantes. El T3 Total Coat-A-Count no ha sido analizado con todos los distintos tipos de tubos. Para obtener detalles sobre los tipos tubos que se han analizado, consulte la sección de Tipos de Muestras Alternativos. Volumen requerido: 100 µl por tubo.

Mezclador vórtex

Conservación: 2–8°C durante 7 días, o 1 11 mes a –20°C.

Radioinmunoensayo Tubos de polipropileno limpios de 12x75 mm – para usar como tubos NSB, disponibles en Siemens Healthcare Diagnostics (Referencia: PPO).

Antes del ensayo permita que las muestras alcancen temperatura ambiente (15–28°C) y mezcle agitando suavemente o por inversión. Alicuotar, si es necesario, para evitar la repetición de congelación y descongelación. No intentar la descongelación de muestras congeladas calentándolas en un baño de agua.

Micropipetas: 100 ul, y 1 000 ul Baño María – capaz de mantener 37°C – Ni un horno o parrilla son apropiados. Gradilla de espuma – disponible en Siemens Healthcare Diagnostics (Referencia: FDR). Papel para gráfica logit-log Un control de tres niveles con base de suero humano, que contiene T3 junto con otros más de 25 analitos, que se puede obtener en Siemens Healthcare Diagnostics (Referencia: CON6).

Recogida de la muestra El paciente no necesita estar en ayunas así como tampoco cualquier otro tipo de preparación. Recoger la sangre por 10 venopunción en tubos limpios, con heparina o EDTA y separar el suero de las células. Se debe anotar la hora de la toma. Se recomienda el uso de una ultracentrífuga para aclarar las muestras lipémicas. Las muestras hemolizadas podrían indicar una mala manipulación de la muestra antes de ser recibida por el laboratorio; en este caso, los resultados deben interpretarse con precaución.

Procedimiento del Radioinmunoanálisis Todos los componentes deben llevarse a temperatura ambiente (15–28°C) antes de su uso. 1

Tubos de ensayo: Marcar cuatro tubos de ensayo de polipropileno (sin recubrir) 12x75 mm. Tubos T (cuentas totales) y NSB (unión no específica) en duplicado. Debido a que la unión no específica en el procedimiento Coat-A-Count es característicamente baja, los tubos NSB puede omitirse con seguridad sin comprometer la exactitud o control de calidad. Tubos Recubiertos: Marcar en total doce tubos recubiertos con anticuerpo con A (unión máxima) y con B a F en duplicado. Marcar tubos recubiertos adicionales, también en duplicado, para controles y muestras de pacientes.

Las muestras contaminadas por la administración de radioactividad al paciente no se deben usar. Los tubos para recoger sangre de distintos fabricantes pueden producir 18

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Calibradores

2

ng/dl

A (MB)

0

0

B

20

0,31

50

0,77

100

1,54

Cálculo de resultados

E

200

3,07

F

600

9,22

Para obtener resultados en términos de concentración a partir de una representación logit-log de la curva de calibración, primero hay que calcular para cada pareja de tubos las cuentas medias por minuto corregidas con el NSB:

Pipetear 100 µl del calibrador cero A en los tubos NSB y A, y 100 µl de cada uno de los calibradores restantes, control y muestras de pacientes en los tubos preparados al efecto. Pipetear directamente en el fondo del tubo.

125

Agregar 1,0 ml de I T3 Total (Morado) a todos los tubos. Agitar en vórtex breve y suavemente. Los laboratorios equipados con un pipetor-dilutor confiable pueden manejar los pasos 2 y 3 simultáneamente. No deberán pasar más de 10 minutos mientras se dispensa el trazador. Dejar los tubos T a un lado para su contaje (paso 6); no requieren más procesamiento posterior. Incubar durante 2 horas a 37°C. Usar baño María; ni un horno ni una parrilla son apropiados.

5

Contar durante 1 minuto en un contador gamma.

D

Es una buena práctica el uso de micropipetas con punta desechables, cambiando las puntas entre las muestras, para evitar la contaminación por arrastre.

4

6

C

Las muestras de pacientes que se espere contengan concentraciones de T3 mayores a las del calibrador más alto (600 ng/dl) deberán diluirse con el calibrador cero antes de ensayarse.

3

tubos contra papel absorbente para eliminar las gotas residuales.

nmol/l

Decantar completamente. Eliminar toda la humedad visible para mejorar la precisión. Utilizando la gradilla de espuma, decantar o aspirar el contenido de todos los tubos (excepto los tubos T) y déjelos escurrir durante 2 o 3 minutos. (Los tubos pueden mantenerse invertidos durante horas sin perder material unido al anticuerpo). Golpear los

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Cuentas netas = (Media CPM) menos (Media NSB CPM)

Entonces, determinar la unión de cada pareja de tubos como un porcentaje de la unión máxima (MB), tomando las cuentas corregidas con el NSB de los tubos A como 100%: Porcentaje de Unión = (Cuentas netas / Cuentas MB netas) × 100

(El cálculo puede simplificarse omitiendo la corrección de las uniones no específicas; las muestras dentro del rango de calibración van a dar virtualmente el mismo resultado cuando el porcentaje de unión es calculado directamente a partir de la media de las CPM). Usando papel gráfico logit-log, representar el porcentaje de unión en el eje vertical frente a la concentración en el eje horizontal (logarítmico) para cada calibrador no cero y dibujar la línea que pase por esos puntos aproximadamente. Los resultados de las muestras pueden ser leídos en la curva por interpolación. Es una buena práctica inspeccionar los resultados para comprobar la concordancia entre los replicados, y realizar una gráfica de la curva de calibración (aunque los cálculos se realicen por ordenador) para ver la transformación más apropiada a usar y las posibles desviaciones en los puntos de calibración. También, recomendamos mantener un registro de los siguientes parámetros de la reducción de datos: T = Cuentas totales (como cuentas por minuto) %NSB = 100 × (Media cuentas NSB / cuentas totales) %MB = 100 × (Cuentas netas / Cuentas totales)

Y los cortes 20, 50 y 80 por ciento, donde 19

20% = Concentración al 20 por ciento de unión, etc.

Otras aproximaciones, por ejemplo, logística 4-parámetros, también son acep`tables. Ver Dudley RA, et al. “Guidelines for immunoassay data reduction”. Clin Chem 1985; 31:1264-71. Ejemplo: Sólo como ilustración, no se puede utilizar para calcular resultados. (Ver tabla "Example Run").

Control de Calidad Se deberán ensayar controles o pools de suero con al menos dos niveles de concentración de T3 – bajo y alto – rutinariamente como muestras desconocidas. Informar los resultados de pacientes sólo si los resultados de control para ese ensayo satisfacen el criterio establecido en su laboratorio para aceptabilidad. Es una buena práctica de laboratorio registrar para cada ensayo los números de lote de los componentes usados, así como las fechas en las que fueron abiertos por primera vez y reconstituidos. También recomendamos el uso de gráficos diarios de los controles — como se describe, por ejemplo, en Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493-501. Las muestras repetidas pueden servircomo una herramienta de valor adicional para monitorizar la precision interensayo, y que las parejas de los tubos del control pueden espaciarse a lo largo de la tanda de ensayo para verificar la ausencia de deriva significativa.

Valores esperados En un estudio de rangos de referencia, se ensayaron 335 muestras de suero de adultos sanos, de entre 15 a 70 años, con el procedimiento Coat-A-Count Total T3. El análisis no paramétrico de los resultados reveló una distribución no Gaussiana e indicó un rango de referencia para adultos de 86 – 187 ng/dl que representa el 95% central de las observaciones. La media fue 131 ng/dl. Estos límites han de considerarse sólo como una guía. Cada laboratorio deberá 20

establecer sus propios intervalos de referencia.

Limitaciones Muchos factores fisiológicos, farmacológicos, patológicos y genéticos afectan la interpretación de los resultados de T3 total. (Consultar la Sección Resumen y Explicación de la Prueba.) Más del 20% de los pacientes con enfermedad no tiroidea que están críticamente enfermos tienen bajos niveles de T3 en suero.

Características analíticas Las siguientes secciones contienen datos representativos del rendimiento del kit Coat-A-Count T3 Total. Los resultados de T3 en las secciones inferiores son expresados en nanogramos de T3 por decilitro (ng/dl). De no especificarse lo contrario, todos los resultados en las siguientes secciones fueron generados en muestras de suero tomadas en tubos sin anticoagulantes, barreras de gel o aditivos formadores de coágulos. Factor de Conversión: ng/dl × 0,01536 → nmol/l Intervalo de calibración: 20 – 600 ng/dl (0,31 – 9,22 nmol/l) Sensibilidad analítica: 7 ng/dl Precisión intraensayo (dentro de una tanda): Las estadísticas se calcularon a partir de los resultados de 20 pares de tubos en una sóla tanda. (Véase la tabla "Precisión intraensayo".). Perfil de Precisión: Abajo se muestra un perfil de precisión, ilustrando los CV del intraensayo que se han de esperar para las muestras sujetas a ensayo en duplicado. (Véase la tabla "Perfil de Precisión".). Precisión entre ensayos (de una tanda a otra): La estadística fue calculada a partir de los resultados de pares de tubos en 20 tandas diferentes. (Véase la tabla "Precisión entre ensayos".) Linealidad: Las muestras fueron analizadas con varias diluciones. (Véase la tabla "Linealidad" para resultados representativos.)

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Efecto deriva: Ninguno hasta aproximadamente 200 tubos. (Ver tabla "End-of-Run Effect"). Especificidad: El antisuero Coat-A-Count T3 Total es altamente específico a la triyodotironina, con una reactividad cruzada particularmente baja a otros compuestos de origen natural o drogas terapéuticas que puedan estar presentes en las muestras de los pacientes. Aunque algunos compuestos sí muestran reactividad cruzada, no están presentes normalmente en concentraciones que interfieran significantemente con el ensayo. (Véase la tabla "Especificidad".) Bilirrubina: La presencia de bilirrubina, en concentraciones hasta 200 mg/l, no tiene ningún efecto sobre los resultados en términos de precisión. Hemólisis: La presencia de eritrocitos hasta concentraciones de 30 µl/ml no tiene efecto en los resultados, en lo concerniente a la precisión del ensayo. Lipemia: El calibrador F (600 ng/dl) del kit Coat-a-Count T3 Total se diluyó en serie con un pool de suero lipémico. Esto causa un aumento del grado de lipemia a medida que disminuye la concentración de T3 (debida al calibrador). Estas diluciones se ensayaron posteriormente , asi como el pool lipémico sin sobrecargar. Los resultados muestran una buena recuperación, incluso en presencia de lipemia muy alta. Tipo de Muestra Alternativa: Para determinar si los anticoagulantes interfieren con el ensayo, se tomó sangre a treinta voluntarios en tubos vacutainer limpios, con heparina y con EDTA. Todas las muestras se ensayaron con el procedimiento Coat-A-Count T3 Total. Por regresión lineal: (Heparina) = 0,9 (Suero) + 9,6 ng/dl r = 0,939 Medias: 127 ng/dl (Heparina) 132 ng/dl (Suero) (EDTA) = 0,9 (Suero) + 2,1 ng/dl r = 0,908 Medias: 127 ng/dl (EDTA) 132 ng/dl (Suero)

Los resultados muestran que el plasma heparinizado y EDTA proporcionan virtualmente los mismos resultados que el Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

suero con el procedimiento Coat-A-Count T3 Total. Comparación de métodos: El kit Coat-ACount T3 Total fue comparado con el kit Doble Anticuerpo T3 Total en 119 muestras de suero de pacientes. Por regresión lineal: (CAC) = 0,96 (DA) + 0,96 ng/dl r = 0,939 Medias: 122 ng/dl (Coat-A-Count) 126 ng/dl (Double Antibody)

Efecto Proteico: Para simular varias concentraciones de proteínas, se efectuaron experimentos en los que alícuotas de 2,0 mL de un pool de suero humano normal se liofilizaron y luego fueron reconstituidas con varios volúmenes de agua (1, 2 y 3 ml). Cada alícuota reconstituida se ensayó con el procedimiento Coat-A-Count T3 Total. Observe que las alícuotas reconstituidas con la mitad del volumen original representan una concentración de proteína extremadamente alta, del orden de 14 g/dl. Los resultados indican que incluso amplias variaciones en proteína total no tienen efecto significativo en el ensayo de Coat-A-Count T3 Total. (Véase la tabla "Efecto Proteico".) Desplazamiento de la Curva: Se ensayaron cuatro muestras con el kit Coat-A-Count Total T3, cada una de ellas diluida 1-en-1 procedure con cada uno de los calibradores (A a F). (Véase la tabla "Curve Displacement".)

Asistencia técnica Póngase en contacto con el distribuidor nacional. www.siemens.com/diagnostics El Sistema de Calidad de Siemens Healthcare Diagnostics Inc. está certificado por la ISO 13485:2003.

Français Coat-A-Count Total T3 Domaine d'utilisation: La technique Coat-A-Count Total T3 est un dosage radioimmunologique en phase solide pour la mesure quantitative de la totale T3 21

(triiodothyronine) dans le sérum ou le plasma. Ce test est réservé à un usage in vitro et constitue une aide au bilan thyroïdien. Référence catalogue : TKT31 (100 tubes), TKT35 (500 tubes) Le coffret de 100-tubes contient moins de 3,5 micro-curies (130 kilobecquerels) de T3 marquée à l'iode 125. Le coffret de 500tubes contient moins de 17,5 micro-curies (648 kilobecquerels) de T3 marquée à l'iode 125.

Introduction Dans des conditions physiologiques normales, la T3 constitue environ 5% des hormones thyroïdiennes dans le sérum. Bien que présente à de plus faibles concentrations, la T3 possède une plus grande activité biologique et un 1 métabolisme plus rapide que la T4. Des études ont montré qu'une thyroxicose peut, dans certains cas, être associée à des taux anormalement élevés de T3 et non de T4. Ceci renforce l'intérêt des 2-5 dosages de T3. Par ailleurs, le dosage de T3 est un outil important dans le suivi des patients sous traitement substitutif. Contrairement aux dosages de T-Uptake qui mesurent la capacité des protéines de transport (TBG) à lier les hormones thyroïdiennes, le dosage de la T3 totale mesure le taux de T3 circulante. Dans la littérature, il est clairement établi que les taux de T3 permettent de bien distinguer les états hyperthyroïdiens des euthyroïdiens, mais la discrimination entre l'hypothyroïdie et l'euthyroïdie est 1 beaucoup moins claire. De nombreux facteurs indépendants des pathologies thyroïdiennes peuvent conduire à des valeurs de T3 1,6-9 Par conséquent, le dosage anormales. de la T3 seule ne peut pas permettre de réaliser le diagnostic de l'état thyroïdien d'un individu. Les dosages de T4 totale, TBG, TSH et d'autres données cliniques doivent être prises en considération.

Principe du test Le dosage Coat-A-Count Totale T3 est un dosage radioimmunologique en phase solide. Au cours de l'incubation, il y a compétition entre la T3 marquée à l'iode 125 et la T3 de l'échantillon, vis-à-vis des 22

sites de l'anticorps. Cette réaction a lieu en présence d'agents bloquants devant libérer la triiodothyronine de ses protéines de transport, ainsi ce dosage mesure la T3 totale puisque la T3 libre et la T3 liée aux protéines dans le sérum du patient peuvent concourir avec la T3 marquée à l'iode 125 pour lier les anticorps fixés sur la paroi des tubes en polypropylène. Après incubation, il suffit d'éliminer le surnageant par décantation pour isoler facilement la fraction radioactive lié à l'anticorps. Le tube est ensuite compté sur un compteur gamma, les cpm étant inversement proportionnels à la concentration de T3 présente dans l'échantillon qui sera déterminée à l'aide d'une courbe standard. Réactifs à distribuer : 1 Temps d'incubation totale : 2 heures à 37°C Activité totale en début de marquage : environ 50 000 cpm

Précautions d'emploi Réservé à un usage diagnostique in vitro. Réactifs : Conserver à +2/+8°C dans un réfrigérateur autorisé à recevoir du matériel radioactif. Éliminer les déchets conformément aux lois en vigueur. Ne pas utiliser les réactifs au delà de leur date d'expiration. Certains composants fournis avec ce coffret peuvent contenir des agents humains et/ou d'autres éléments potentiellement infectieux qui nécessitent certaines précautions. Respecter les précautions d'emploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les réactifs dérivés de produits humains et utilisés dans ce coffret ont subi un test sérologique pour la Syphilis et des tests de dépistage pour les anticorps antiVIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène de surface de l'hépatite B, qui se sont tous avérés négatifs. De l'azide de sodium à des concentrations inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme conservateur ; lors de l'élimination, l'évacuer avec de grandes quantités d'eau pour éviter une accumulation d'azides métalliques explosifs dans les canalisations. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Eau : utiliser de l'eau distillée ou désionisée.

Materiel Fourni : Préparation Initiale

Radioactivité Ce coffret de réactif est reservé à l'usage in vitro (Autorisation DGSNR).

Tubes revêtus d'anticorps anti-T3 (TT31) Tubes en polypropylène revêtus d'anticorps anti- T3 dans des sachets à glissière. Les conserver réfrigérés et protégés de l'humidité, bien refermer les sachets après utilisation. Stable à +2/+8°C jusqu'à la date d'expiration notée sur le sachet. Couleur: rose. TKT31 : 100 tubes. TKT35 : 500 tubes.

Règles de base de protection contre les rayonnements ionisants et précautions d'emploi. Ce produit radioactif ne peut être reçu, acheté, détenu ou utilisé que par des personnes autorisées à cette fin et dans des laboratoires dotés de cette autorisation. Cette solution ne peut en aucun cas être administrée à l'homme ou aux animaux. Respecter impérativement les dates de péremption indiquées sur l'emballage extérieur et sur les étiquettes des différents réactifs du coffret. Tous les réactifs, dont les tubes revêtus d'anticorps, doivent être conservés à + 4/+ 8° C dans leur conditionnement d'origine avant d'être utilisés. L'achat, la possession, l'utilisation et l'échange de matières radioactives sont soumis aux réglementations en vigueur dans le pays de l'utilisateur. Les règles de base de protection contre les rayonnements ionisants doivent être respectées selon des procédures en vigueur. Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche. Eviter le contact direct avec la peau ou les muqueuses de tout produit radioactif en utilisant des blouses et gants de protection. Toute manipulation de matières radioactives se fera dans un local ad hoc éloigné de tout passage. Les produits radioactifs seront stockés dans leur conditionnement d'origine dans un local approprié. Un cahier de réception et de stockage de produits radioactifs sera tenu à jour. Le matériel de laboratoire et la verrerie qui ont été contaminés doivent être éliminés au fur et à mesure afin d'éviter une contamination croisée de plusieurs isotopes. Chaque contamination ou perte de substance radioactive devra être réglée selon les procédures établies. Toute mise aux déchets de matière radioactive se fera en accord avec les réglementations en vigueur. Ne pas manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer des cosmétiques dans les laboratoires où des produits radioactifs sont utilisés. Les réactifs radioactifs ne peuvent être vendus qu'à des personnes habilitées à manipuler des substances radioactives. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

T3 marquée à l'iode 125 (TT32) Chaque flacon contient 105 ml de T3 marquée à l'iode 125, avec des agents bloquants. Stable à +2/+8°C pendant 30 jours après ouverture, ou jusqu'à la date d'expiration notée sur le flacon. Le traceur doit être à température ambiante (15– 28°C) et mélangé par retournement avant emploi. Couleur: pourpre. TKT31 : 1 flacon. TKT35 : 5 flacons. Standards T3 Totale (T3C3–8) Six flacons de standards de T3 prêts à l'emploi, le standard A contient 2,0 ml, et les standards B à F contiennent 1,0 ml chacun. Stable à +2/ +8 °C pendant 30 jours après ouverture, ou 6 mois (aliquoté) à –20 °C. TKT31 : 1 jeu. TKT35 : 2 jeux. Les standards contiennent respectivement, 0, 20, 50, 100, 200 et 600 nanogrammes de T3 par décilitre (ng/dl) en matrice sérum humain traité équivalents à : 0, 0,31, 0,77, 1,54, 3,07 et 9,22 nanomoles par litre (nmol/l). Des points intermédiaires peuvent être obtenus en mélangeant des standards dans des proportions compatibles.

Matériel requis mais non fourni Compteur Gamma – permettant l'utilisation de tubes standards 12x75 mm Agitateur de type Vortex Dosage radioimmunologique Tubes secs en polypropylène 12x75 mm – à utiliser comme les tubes LNS, disponibles chez Siemens Healthcare Diagnostics (Référence catalogue : PPO). Micropipettes: 100 µl et 1 000 µl Bain-marie pouvant maintenir une température d'incubation de 37°C. 23

Ni étuve ni bloc chauffant ne sont adaptés à ce dosage. Un portoir de décantation – disponible chez Siemens Healthcare Diagnostics (Référence catalogue : FDR). Papier graphe Logit-log Un contrôle immunodosage, à base de sérum humain, à trois niveaux de concentration, contenant de la testostérone (parmi plus de 25 constituants dosables), est disponible chez Siemens Healthcare Diagnostics (Référence catalogue : CON6).

congélation / décongélation. Ne pas tenter de décongeler les spécimens congelés à l'aide d'un bain marie.

Protocole de dosage Tous les composants doivent être à température ambiante avant leur utilisation (15–28°C). 1

La valeur du LNS dans la technique Coat-A-Count étant très faible, elle peut être négligée sans que la précision ou le contrôle de qualité ne soient modifiés.

Recueil des échantillons Le patient n'a pas besoin d'être à jeun et aucune préparation spéciale n'est requise. 10 Prélever le sang par ponction veineuse et le recueillir sur tubes secs ( sans anticoagulant ) ou héparinés, en notant l'heure de prélèvement. Séparer le sérum ou le plasma des cellules, par centrifugation. Il est recommandé de clarifier les échantillons hyperlipémiques par ultracentrifugation.

Tubes revêtus d'anticorps: Etiqueter 12 tubes revêtus d'anticorps anti-T3, A (liaison maximale) et de B à F en duplicate. Etiqueter les tubes revêtus d'anticorps anti- T3 supplémentaires, également en duplicate, pour les contrôles et les échantillons patients.

Des échantillons hémolysés peuvent être révélateurs d'une préparation inadéquate du prélèvement avant son envoi au laboratoire ; il faudra donc interpréter les résultats avec prudence. Les échantillons contaminés par de la radioactivité administrée in-vivo au patient ne peuvent être utilisés dans ce dosage. Des tubes pour prélèvements sanguins provenant de fabricants différents peuvent donner des résultats différents, selon les matériaux et additifs utilisés, y compris gels ou barrières physiques, activateurs de la coagulation et/ou anticoagulants. Le coffret T3 Totale Coat-A-Count n'a pas été testé sur tous les types de tubes possibles. Veuillez consulter le chapitre intitulé Autres Types d'Échantillons pour plus de renseignements sur les tubes qui ont été évalués. Volume nécessaire : 100 µl par tube. Conservation : 7 jours à +2/+8° C ou 1 11 mois à –20°C. Avant le dosage, laisser les échantillons revenir à température ambiante (15– 28°C), mélanger doucement par rotations ou retournement Aliquoter, si nécessaire, afin d'éviter de répéter les cycles 24

Tubes secs : Etiqueter deux séries de tubes (non revêtus) en polypropylène 12x75 mm tubes T et LNS (Liaison Non Spécifique) en duplicate.

2

Standards

ng/dl

A (LM)

0

nmol/l 0

B

20

0,31

C

50

0,77

D

100

1,54

E

200

3,07

F

600

9,22

Pipeter 100 µl du standard zéro A dans les tubes de LNS et les tubes A(LM). Pipeter 100 µl de chacun des autres standards, contrôles et échantillons de patients dans les tubes correspondants préparés. Pipeter directement au fond du tube. Les échantillons de patients suspectés de contenir des concentrations de T3 supérieures au standard le plus élevé (600 ng/dl) doivent être dilués avec le standard zéro avant le dosage. Il est bon d'utiliser des embouts de micropipettes jetables, de changer d'embout entre les échantillons de manière à éviter toute contamination. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

3

Ajouter 1,0 ml de T3 marquée à l'iode 125 dans chaque tube. Vortexer. Les laboratoires équipés d'un pipeteur-diluteur fiable peuvent procéder aux étapes 2 et 3 simultanément. Pas plus de 10 minutes ne doivent s'écouler pendant la distribution du traceur. Les tubes T peuvent être mis de côté jusqu'au comptage (étape 6). Les tubes T peuvent être mis de côté jusqu'au comptage (étape 6); ils n'ont pas d'autre traitement.

4

Incuber 2 heures à 37°C. Ni étuve ni bloc chauffant ne sont adaptés à ce dosage.

5

Décanter complétement. Eliminer toute trace d'humidité pour améliorer la précision du dosage. A l'aide d'un portoir de décantation, décanter ou aspirer le contenu de tous les tubes (excepté les tubes T) et laisser les tubes retournés pendant 2 ou 3 minutes. Puis appliquer les fortement sur du papier absorbant afin d'éliminer les gouttelettes résiduelles.

6

Compter 1 minute dans un compteur gamma.

Calcul des Résultats Afin d'obtenir des résultats en concentrations à partir d'une représentation logit-log de la courbe de calibration, calculer pour chaque doublet de tubes les coups corrigés: moyenne cpm-moyenne des cpm du NSB: CPM corrigés = (Moyenne cpm) moins (Moyenne cpm LNS)

Puis déterminer pour chaque doublet la capacité de liaison en pourcentage de liaison maximale (MB), corrigée des cpm dus au NSB des tubes A tubes considérés à 100%: % liaison = (cpm corrigés / cpm corrigés LM) × 100

(Le calcul peut être simplifié en négligeant la correction due au LNS. Les échantillons dans la gamme de calibration donnent des résultats pratiquement identiques quand la capacité de liaison est calculée directement à partir de la moyenne des CPM.) Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

En utilisant un papier logit-log, on porte en ordonnée les pourcentages de liaison en fonction des concentrations des calibrateurs qui ne sont pas à zéro, en abscisse. On trace une ligne droite passant approximativement par ces points. Les concentrations des échantillons inconnus sont déterminées par interpolation sur la courbe standard. Il est bon de vérifier les doublets et de construire une représentation graphique de la courbe de calibration (même si celleci est faite par ordinateur) avec les différentes valeurs de façon à visualiser le meilleur tracé et c'est une façon de détecter les points deviants. Nous recommandons aussi de suivre les paramètres suivants : T = Activité totale (cpm) %LNS = 100 × (Moyenne des cpm du LNS / cpm Totaux) %LM = 100 × (cpm corrigés / cpm totaux)

Et les intercepts à 20, 50 et 80 % avec 20% = Concentration à 20% de liaison, etc.

Note: d'autres approches sont possibles comme l'intégration de paramètres 4-p logistique. Se rapporter à Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassay data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Exemple de série : A titre d'exemple uniquement, et non pour calculer des résultats provenant d'une autre série. (Voir le tableau « Example Run ».)

Contrôle de Qualité Les contrôles (ou pools de sérums) avec au moins deux taux de concentration de T3 haut et bas doivent être dosés en routine comme des échantillons inconnus. Les résultats de patient ne doivent être validés que si les résultats des contrôles correspondent aux critères d'acceptation établis par votre laboratoire. Il est bon d'enregistrer pour chaque dosage les numéros de lots des composants utilisés ainsi que la date à laquelle ils ont été reconstitués ou ouverts. Nous recommandons également de noter jour après jour les résultats des contrôles – comme décrit par exemple dans Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493501. Noter qu'un redosage d'échantillon 25

peut être précieux pour suivre la précision inter essai, et que les doublets de tubes contrôle peuvent être espacés de façon à vérifier l'absence de dérive significative.

Valeurs de référence Dans une étude de valeurs normales, 335 sérums d'adultes apparemment en bonne santé, âgés de 15 à 70 ans, ont été dosés avec la technique Coat-A-Count Total T3 pour donner les résultats suivants, exprimés en ng/dl.

duplicate. (Voir le tableau « Intraassay Precision ».). Profil de précision : Un profil de précision, montre les coefficients de variation attendus pour chaque échantillon dosé en double. (Voir le graphe “Precision Profile”.) Précision inter-dosage (entre plusieurs séries) : Les résultats ont été calculés pour chacun des 5 échantillons à partir des résultats de 20 séries en duplicate. (Voir le tableau “Interassay.)

L'analyse non-paramétrique des résultats a donné une distribution non gaussienne avec une médiane à 131 ng/dl et un domaine centré à 95%ile de

Test de dilution : Des échantillons ont été dosés à différentes concentrations. (Voir le tableau « Linearity » pour des données représentatives.)

86 – 187 ng/dl

Effet de la position des tubes : Aucun jusqu'à 200 tubes. (Voir le tableau « Endof-Run Effect ».)

Utiliser ces valeurs à titre indicatif uniquement. Chaque laboratoire devra établir ses propres valeurs de référence.

Limites De nombreux facteurs physiologiques, pharmacologiques, pathologiques et génétiques peuvent affecter l'interprétation des résultats de la T3 totale. (Voir Introduction) Plus de 20% des patients gravement malades, mais ne souffrant pas d'atteinte de la thyroïde, ont des taux de T3 totale peu élevés dans le sérum.

Performances du test Consulter les tableaux et graphiques pour obtenir les données représentatives des performances du test. Les résultats sont donnés en ng/dl. (En l'absence de précision supplémentaire, tous les résultats ont été obtenus sur des échantillons sériques prélevés sur tubes sans anticoagulant, ni gel, ni activateur de la coagulation). Facteur de conversion : ng/dl × 0,01536 → nmol/l Domaine de mesure : 20 – 600 ng/dl (0,31 – 9,22 nmol/l) Sensibilité analytique : 7 ng/dl Précision intra-dosage (au sein d'une même série) : Les résultats ont été calculés pour chacun des 5 échantillons à partir des résultats de 20 séries en

26

Spécificité : L'antisérum utilisé dans le coffret Coat-A-Count Total T3 est très spécifique pour la triiodothyronine avec des réactions croisées très faibles pour tous les composants naturels du sérum et médicaments pouvant être présents dans l'échantillon. Bien que certaines substances donnent des réactions croisées, celles-ci ne sont normalement pas en concentration suffisante pour interférer dans ce dosage ; (Voir le tableau « Specificity ».) Bilirubine : La présence de bilirubine ne présente aucun effet sur les résultats ni sur la précision du dosage si la concentration ne dépasse pas 200 mg/l. Hémolyse : La présence d'agrégat d'hématies jusqu'à une concentration de 30 µl/ml, n'a aucun effet sur les résultats quant à la précision du dosage. Lipémie : Des dilutions en séries du standard (600 ng/dl) ont été effectuées avec un pool de sérums lipémiques, le taux de lipides augmentant tandis que la concentration de T3 provenant du standard diminuait, le dosage de ces dilutions et du pool lipémique a montré que même en présence d'une lipémie sévère, les pourcentage de récupération restaient bons. Autres types d'échantillons : Afin de déterminer le rôle éventuel des anticoagulants sur la technique, le sang de 30 volontaires a été recueilli sur tubes vacutainers secs, héparinés et avec Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

EDTA. Tous les échantillons ont été dosés avec le coffret Coat-A-Count Total T3. Par régression linéaire : (Héparine) = 0,9 (Sérum) + 9,6 ng/dl r = 0,939 Moyennes : 127 ng/dl (Héparine) 132 ng/dl (Sérum) (EDTA) = 0,9 (Sérum) + 2,1 ng/dl r = 0,908 Moyennes : 127 ng/dl (EDTA) 132 ng/dl (Sérum)

Ce dosage Coat-A-Count Total T3 donne les mêmes résultats sur sérum et plasma hépariné ou EDTA. Comparaison de méthodes : La technique Coat-A-Count Total T3 a été comparée sur 119 échantillons sériques avec un autre radio-immunodosage avec double anticorps (Coffret DA). Par régression linéaire : (CAC) = 0,96 (DA) + 0,96 ng/dl r = 0,939

Le Système Qualité de Siemens Healthcare Diagnostics Inc. est certifié ISO 13485:2003.

Italiano Coat-A-Count T3 Totale Uso: Il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale è un dosaggio in fase solida marcato con 125 I per la misurazione quantitativa della triiodotironina (T3) totale circolante nel siero o nel plasma. A solo uso diagnostico in vitro quale ausilio nella determinazione dello stato tiroideo. Codice: TKT31 (100 provette), TKT35 (500 provette) Il kit da 100 determinazioni contiene meno di 3,5 microcurie (130 kilobecquerel) di T3 marcata 125 con I ; il kit da 500 determinazioni contiene meno di 17,5 microcurie (648 kilobecquerel).

Moyennes : 122 ng/dl (Coat-A-Count) 126 ng/dl (Double Antibody)

Riassunto e spiegazione del Test

Effet des Protéines : Pour simuler différentes concentrations en protéines, des expériences ont été effectuées en reconstituant des aliquotes de 2 ml de sérums humains lyophilisés avec différents volumes d'eau (1 ; 2 ; et 3 ml). Chaque aliquote reconstitué a été dosé à l'aide de la méthode Coat-A-Count Total T3. Une reconstitution avec la moitié du volume original correspond à une très forte concentration en protéines ( de l'ordre de 14 g/dl), les résultats démontrent que même pour de grandes variations de taux de protéines, le dosage n'est pas influencé. (Se reporter au tableau "Protein Effect" pour des données représentatives.)

In condizioni fisiologiche normali, la T3 rappresenta circa il 5% degli ormoni tiroidei presenti nel siero. Benché presente a concentrazioni più basse, la T3 ha un attività metabolica intrinseca maggiore, un turnover più veloce ed un volume di distribuzione maggiore rispetto 1 alla T4 circolante. Il fatto che la tireotossicosi possa essere causata da concentrazioni abnormalmente elevate di T3 – piuttosto che di T4 – ha data maggior 2-5 l'importanza alle determinazioni della T3. Inoltre, le determinazioni della T3 sono uno strumento importante nel monitoraggio di pazienti ipotiroidei sottoposti a terapia con liotironina di sodio. Diversamente dai test della “T3 Uptake”, che stimano la saturazione delle proteine leganti gli ormoni tiroidei, l'analisi della T3 totale misura realmente i livelli circolanti di triiodotironina. Molti studi indicano che i livelli di T3 distinguono chiaramente tra soggetti eutiroidei e ipertiroidei, ma forniscono una separazione meno netta tra soggetti 1 ipotiroidei ed eutiroidei.

Test de parallélisme : Quatre échantillons ont été dosés avec la technique Coat-A-Count Total T3 après dilution volume à volume avec les standards du coffret (0, 20, 50, 100, 200 et 600 ng/dl). (Se reporter au tableau "Curve Displacement".)

Assistance technique Contacter votre distributeur national. www.siemens.com/diagnostics Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Numerose patologie non connesse ad anomalie tiroidee possono provocare 1,6-9 valori anomali di T3. 27

Conseguentemente, i valori di T3 totale non debbono essere utilizzati da soli per stabilire lo stato tiroideo di un individuo. I livelli di T4 sierica, TBG (globulina legante la tiroide), il TSH (Ormone che stimola la Tiroide) ed altre indagini cliniche debbono parimenti essere tenute in considerazione.

Procedura del Dosaggio Il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale è un radioimmunodosaggio in fase solida, dove 125 la T3 marcata con I compete per i siti anticorpali per un tempo prefissato con la T3 presente nel campione del paziente. La reazione avviene in presenza degli agenti bloccanti che servono a liberare la triiodotironina legata dalle proteine carrier; quindi il dosaggio misura la T3 totale, poiché l'anticorpo è adeso alle pareti di una provetta di polipropilene, decantare semplicemente il supernatante per terminare la competizione ed isolare la frazione legata all'anticorpo della T3 radiomarcata. La conta della provetta in un gamma counter produce un numero che convertito attraverso una curva di calibrazione misura la T3 presente nel campione del paziente. Reagenti da Dispensare: 1 Tempo Totale di Incubazione: 2 ore a 37°C Conte Totali alla iodinazione: circa 50 000 cpm

Avvertenze e precauzioni Ad uso diagnostico in vitro. Reagenti: Conservare a 2–8°C in un frigorifero appositamente destinato al materiale radioattivo. Eliminare secondo le normative di legge vigenti. Non utilizzare reagenti oltre la data di scadenza. Alcuni componenti forniti in questo kit possono contenere materiale di origine umana e/o altri ingredienti potenzialmente pericolosi che necessitano di precauzioni di utilizzo. Seguire le precauzioni generali, e manipolare tutti i componenti come se potessero trasmettere agenti infettivi. Sono stati dosati i materiali di origine umana e sono stati trovati non reattivi per la Sifilide; per gli Anticorpi Anti-HIV 1 e 2;

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per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B; e per gli Anticorpi Anti-Epatite C. E' stata aggiunta Sodio Azide a concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come conservante. Al momento dell'eliminazione, irrorare con molta acqua per evitare la formazione di azidi metalliche potenzialmente esplosive nelle tubature di piombo e di rame. Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o deionizzata. Radioattività Una copia di tutti i certificati di Autorizzazione per radioisotopi (Specifica o Generica) rilasciata ad un cliente americano deve essere conservata in file presso la Siemens Healthcare Diagnostics prima che i kit o i componenti contenenti materiale radioattivo possano essere spediti. Questi materiali radioattivi possono essere acquisiti da qualsivoglia cliente in possesso dell'Autorizzazione Specifica. Con l'Autorizzazione Generica questi materiali radioattivi possono essere acquistati solo da medici, veterinari che esercitino la professione, laboratori clinici ed ospedalieri – e solo per l'esecuzione di test clinici o di laboratorio in vitro che non implichino somministrazione interna o esterna del materiale radioattivo o delle sue radiazioni alle persone o animali. La sua acquisizione, ricevimento, conservazione, utilizzo, trasferimento ed eliminazione sono soggette a regolamentazioni e ad Autorizzazione (Generica o Specifica) della Commissione Statunitense per il Nucleare o dello Stato con il quale l'NRC abbia stipulato un accordo per l'esercizio del controllo regolatorio. Manipolare i materiali radioattivi secondo quanto previsto dall'Autorizzazione Generica o Specifica. Per minimizzare l'esposizione alle radiazioni, l'utilizzatore deve attenersi alle linee guida stabilite dal National Bureau of Standards publication su “Safe Handling of Radioactive Materials” “Norme per una corretta manipolazione dei Materiali Radioattivi”.(Guida N° 92, pubblicata il 9 Marzo 1964) e successive edizioni pubblicate dallo Stato e dalle Autorità Federali. Assorbire immediatamente le fuoriuscite e decontaminare le superfici contaminate. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Evitare la formazione di aerosol. Eliminare i rifiuti solidi radioattivi secondo quanto previsto dall'Autorizzazione. Le licenze generiche (possessori di NRC Form 483) possono eliminare i rifiuti radioattivi solidi come non radioattivi, dopo aver rimosso l'etichetta. I detentori di autorizzazioni specifiche (NRC Form 313) devono fare riferimento al Titolo 10, Codice delle Regolamentazioni Federali Parte 20. I detentori di Autorizzazioni negli Stati che hanno stipulato un accordo con l'NRC dovrebbero far riferimento alle regolamentazioni idonee dei loro stati. I detentori di Autorizzazioni Generali possono eliminare i rifiuti radioattivi liquidi del tipo contenuto in questo prodotto attraverso il lavello del laboratorio. I detentori di autorizzazione devono eliminare o rendere illeggibili le etichette dei contenitori vuoti di materiali radioattivi prima di eliminare i rifiuti solidi. I detentori di autorizzazioni specifiche possono eliminare piccoli quantitativi di rifiuti radioattivi liquidi del tipo utilizzato in questo prodotto attraverso il lavello del laboratorio. Fare riferimento alle regolamentazioni appropriate applicabili al Vostro laboratorio.

Materiali Forniti: Preparazione Iniziale Provette Coattate con T3 Totale (TT31) Provette di polipropilene coattate con anticorpi anti-T3 e confezionati in buste a cerniera. Conservare refrigerate al riparo dall'umidità, richiudendole dopo l'utilizzo. Stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza indicata sulla confezione. Colore: rosa. TKT31: 100 provette. TKT35: 500 provette. 125

T3 Totale marcato con I (TT32) Triidotironina iodinata, pronta all'uso, con agenti bloccanti per le proteine leganti la tiroide. Ciascun flacone contiene 105 mL. Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta. Colore: porpora. TKT31: 1 flacone. TKT35: 5 flaconi. Calibratori T3 Totale (T3C3–8) Sei flaconi, etichettati dalla A alla F di calibratori di siero umano processato forniti in forma liquida, pronti all'uso. Il calibratore zero, flacone A contiene 2,0 mL, ed i rimanenti calibratori dalla B Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

alla F contengono ciascuno 1,0 mL. Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a –20°C. TKT31: 1 set. TKT35: 2 set. I calibratori contengono, rispettivamente 0, 20, 50, 100, 200 e 600 nanogrammi di T3 per decilitro (ng/dL) in siero umano processato; equivalenti a: 0, 0,31, 0,77, 1,54, 3,07 e 9,22 nanomoli per litro (nmol/L). I punti intermedi della calibrazione possono essere ottenuti mescolando i calibratori in proporzioni idonee.

Materiali Richiesti Ma Non Forniti Gamma counter — compatibile con provette standard da 12x75 mm Vortex mixer Radioimmunodosaggio Provette semplici (12x75 mm) di polipropilene — da utilizzarsi come provette NSB, disponibili presso Siemens Healthcare Diagnostics (Codice: PPO). Micropipette: da 100 µL e da 1 000 µL Bagnetto termostatato — in grado di mantenere la temperatura a 37°C — Non sono da utilizzare né forni né piastre riscaldate. Foam per la decantazione — disponibili da Siemens Healthcare Diagnostics (Codice: FDR). Carta per grafici logit-log Un controllo umano su base sierica a tre livelli, contenente T3 tra gli oltre 25 costituenti dosati, disponibile da Siemens Healthcare Diagnostics. (Codice: CON6).

Prelievo dei Campioni Non è necessario che il paziente sia a digiuno, non sono necessarie preparazioni 10 particolari. Prelevare il sangue in provette semplici, eparinizzate o EDTA, e separare il siero o il plasma dalle cellule. Occorre annotare l'ora del prelievo. Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga per schiarire i campioni lipemici. I campioni emolizzati posson indicare il trattamento non idoneo del campione prima dell'arrivo al laboratorio; per questo motivo, i risultati devono essere interpretati con prudenza. 29

I campioni contaminati da somministrazione di radioattivo al paziente non devono essere utilizzati. Provette per il prelievo di sangue di produttori diversi possono dare valori differenti, a seconda dei materiali e degli additivi usati, incluso gel o barriere fisiche, attivatori di coaguli e/o anticoagulanti. L'Coat-A-Count T3 Totale non é stato verificato con tutte le possibili variazioni di tipi di provette. Consultare la sezione riguardante Campioni Alternativi per dettagli sulle provette testate.

2

Volume Richiesto: 100 µL per provetta. Conservazione: a 2–8°C per 7 giorni, o 1 11 mese a –20°C.

Dosaggio Radioimmunologico Tutti i componenti devono essere a temperatura ambiente (15–28°C) prima dell'utilizzo.

30

nmol/L 0

B

20

0,31

C

50

0,77

D

100

1,54

E

200

3,07

F

600

9,22

Dispensare 100 µL del calibratore zero A nelle provette NSB ed A, e 100 µL di ciascuno dei calibratori, controlli e campioni dei pazienti rimanenti nelle provette preparate. Pipettare direttamente al fondo.

Aggiungere 1,0 mL di T3 Totale 125 in ogni provetta. marcata con I Vortexare. I laboratori in possesso di un pipettore-diluitore affidabile possono eseguire i punti 2 e 3 simultaneamente. Non devono passare più di 10 minuti nella dispensazione del tracciante. Mettere da parte le provette T per la conta (al punto 6); non sono necessari ulteriori passaggi.

Provette Semplici: Etichettare quattro provette 12x75 mm di polipropilene semplici (non coattate) T (conte totali) ed NSB (legame non specifico) in duplicato.

Provette Coattate: Etichettare con A 12 provette coattate con anticorpo T3 Totale (legame massimo) e da B ad F in duplicato. Etichettare altre provette coattate con anticorpo, anch'esse in duplicato, per i controlli ed i campioni dei pazienti.

0

Si consiglia di utilizzare un puntale monouso, cambiando il puntale tra un campione e l'altro, per evitare la contaminazione da carryover. 3

Poiché il legame non specifico nel dosaggio Coat-A-Count è caratteristicamente basso, le provette NSB possono essere omesse senza compromettere l'accuratezza o il controllo di qualità.

ng/dL

A (MB)

Campioni con concentrazioni di T3 più alte del calibratore più elevato (600 ng/dL) devono essere diluiti nel calibratore zero prima del dosaggio.

Prima del dosaggio, consentire ai campioni di raggiungere temperatura ambiente (15–28°C) e mescolare scuotendo leggermente o capovolgendo la provetta. Aliquotare, se necessario per evitare cicli ripetuti di congelamento e scongelamento. Non tentare di scongelare i campioni congelati riscaldandoli in un bagnetto termostatato.

1

Calibratori

4

Incubare per 2 ore a 37°C. Utilizzare un bagnetto termostatato. Non utilizzare né forni né piastre riscaldate.

5

Decantare completamente. Rimuovere tutta l'umidità visibile aumentando così la precisione. Utilizzando un foam, decantare il contenuto di tutte le provette (ad eccezione delle provette T) e consentire loro di asciugarsi per 2 o 3 minuti. Le provette possono rimanere capovolte per ore senza che si perda il materiale legato all'anticorpo). Tamponarle su carta assorbente per eliminare completamente i liquidi.

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

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Contare per 1 minuto in un gamma counter.

Calcolo dei Risultati Per ottenere i risultati in termini di concentrazione da una rappresentazione logit-log della curva di calibrazione, calcolare inizialmente per ogni coppia di provette le conte medie al minuto corrette con NSB: Conte Nette = (Media dei CPM) Meno (Media CPM NSB)

Quindi determinare il legame di ogni coppia di provette come percentuale del legame massimo (MB), con le conte corrette-NSB delle provette A prese al 100%: Percentuale di Legato = (Conte Nette / Conte Nette MB) × 100

(Il calcolo può essere semplificato omettendo la correzione per il legame non specifico; i campioni entro il range dei calibratori danno virtualmente gli stessi risultati quando la Percentuale di Legato viene calcolata direttamente dai CPM Medi). Utilizzando la carta logit-log, tracciare la Percentuale di Legato sull'asse verticale (probabilità) verso la Concentrazione sull'asse orizzontale (logaritmica) per ciascuno dei calibratori non zero e tracciare una linea retta approssimativamente lungo il tracciato di questi punti. I risultati per i campioni sconosciuti possono essere letti dalla retta attraverso interpolazione. Si consiglia di visionare i risultati per stabilire la correlazione entro i replicati e tracciare un grafico della curva di calibrazione (anche se i calcoli vengono effettuati dal computer) per visualizzare l'appropriatezza della trasformazione utilizzata e per individuare i punti devianti all'interno della calibrazione. Consigliamo anche di mantenere una rintracciabilità dei parametri utilizzati per la riduzione dei dati: T = Conte Totali (conte al minuto) %NSB = 100 × (Conte NSB Medie / Conte Totali) %MB = 100 × (Conte Nette / Conte Totali)

E le “intercette” al 20, 50 ed 80%, dove

Nota: sono accettabili anche altri tipi di approccio, quali: l'implementazione della logistica a 4 parametri. Vedi Dudley Ra et al. Guidelines for immunoassay data Reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Seduta Esemplificativa: a solo scopo illustrativo e non per calcolare i risultati di un'altra seduta. (vedi tabella "Example Run").

Controllo di Qualità Devono essere dosati in routine come campioni sconosciuti controlli (o pool di sieri) con almeno due livelli di concentrazione di T3 Totale (basso ed alto). Riportare i risultati dei pazienti solo se i risultati dei controlli sono conformi ai criteri di accettabilità del Vostro laboratorio. Si consiglia per ogni dosaggio di annotare i numeri di lotto dei componenti utilizzati, quali le date di ricostituzione o di apertura. Si consiglia anche di tracciare i grafici dei risultati dei controlli giorno dopo giorno – come descritto, ad esempio, in Westgard JO, et al. A multi-rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27:493-501. Campioni ripetuti possono servire come ulteriore strumento per monitorare la precisione inter-dosaggio; coppie di campioni intervallate lungo tutto il dosaggio possono essere d'aiuto nel verificare l'assenza di deviazioni significative.

Valori Attesi E' stato effettuato uno studio sui range di riferimento effettuato con il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale. Sono stati analizzati 335 campioni di siero provenienti da adulti in buono stato di salute di età compresa tra 15 e 70 anni. L'analisi non parametrica dei risultati ha rivelato una distribuzione non-Gaussiana ed ha indicato un range di riferimento per gli adulti di 86 – 187 ng/dL che rappresenta il range centrale al 95% delle osservazioni. Il valore mediano era di 131 ng/dL. Considerare questi limiti soltanto come linee guida. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire le proprie gamme di riferimento.

20% = Concentrazione al 20% di Legato ecc. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

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Limiti Molti fattori fisiologici, farmacologici, patologici e genetici intaccano l'interpretazione dei risultati della T3 Totale. (Fare riferimento alla sezione “ Summary and Explanation”) Più del 20% dei pazienti con patologie non tiroidee ammalati in maniera critica presentano bassi livelli di T3.

Prestazioni del Dosaggio Vedi Tabelle e Grafici per valori rappresentativi delle prestazioni del dosaggio Coat-A-Count T3 Totale. I risultati del dosaggio nelle sezioni di cui di seguito sono espressi in ng/dL. Se non diversamente indicato, i risultati sono stati generati da campioni di siero prelevati in provette senza anticoagulanti, barriere di gel o additivi che favoriscano la formazione di coaguli. Fattore di Conversione: ng/dL × 0,01536 → nmol/L Range di calibrazione: 20 – 600 ng/dL (0,31 – 9,22 nmol/L) Sensibilità analitica: 7 ng/dL Precisione Intra-Dosaggio (All'interno della stessa seduta): Sono state calcolate statistiche per i campioni dai risultati di 20 coppie di provette in un unico dosaggio. (Vedi tabella “Intraassay Precision”.) Profilo di Precisione: Viene descritto un profilo di precisione, che descrive i CV intra-dosaggio attesi per i campioni dosati in duplicato. (Vedi grafico "Precision Profile".) Precisione Inter-Dosaggio (Da una seduta all'altra): Sono state calcolate statistiche per i campioni dai risultati di coppie di provette in 20 dosaggi differenti (Vedi tabella “ Interassay Precision ”.) Linearità: I campioni sono stati dosati a varie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” per dati rappresentativi.) Effetto Fine-Seduta: Nessuno fino a circa 200 provette. (vedi tabella "End-of-Run Effect".) Specificità: L'antisiero è altamente specifico per la T3 Totale con bassa crossreattività verso altri composti presenti in natura o medicinali che potessero essere presenti nei campioni. Benché 32

alcuni composti presentino crossreattività, normalmente non sono presenti in concentrazioni tali da interferire con il dosaggio.(Vedi tabella "Specificity".) Bilirubina: La presenza di bilirubina in concentrazioni fino a 200 mg/L non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Emolisi: La presenza di globuli rossi impaccati in concentrazioni fino a 30 µL/mL non ha effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Lipemia: il calibratore Coat-A-Count T3 Totale (600 ng/dL, calibratore F) è stato diluito serialmente con un pool di sieri lipemici. Ciò ha provocato un aumento del tasso di lipemia inversamente proporzionale alla diminuzione della concentrazione di T3 (dovuta al calibratore). Queste diluizioni sono state dosate unitamente ai pool lipemici non diluiti. I risultati mostrano un buon recupero anche in presenza di lipemia grave. Tipo di Campione Alternativo: Per determinare se gli anticoagulanti interferiscano nel dosaggio, è stato prelevato del sangue da 30 volontari in provette semplici, eparinizzate e vacutainer EDTA. Tutti i campioni sono stati dosati con il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale. Mediante regressione lineare: (Eparina) = 0,9 (Siero) + 9,6 ng/dL r = 0,939 Valore medio: 127 ng/dL (Eparina) 132 ng/dL (Siero) (EDTA) = 0,9 (Siero) + 2,1 ng/dL r = 0,908 Valore medio: 127 ng/dL (EDTA) 132 ng/dL (Siero)

I risultati mostrano che il plasma eparinizzato ed EDTA producono risultati simili al siero con il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale. Comparazione di Metodi: Il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale è stato comparato al Dosaggio Doppio Anticorpo T3 Totale su 119 campioni di siero. Mediante regressione lineare: (CAC) = 0,96 (DA) + 0,96 ng/dL r = 0,939

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Valore medio: 122 ng/dL (Coat-A-Count) 126 ng/dL (Double Antibody)

tubos contém menos que 17,5 microcuries (648 kilobecquerels).

Effetto delle Proteine: Per simulare le concentrazioni delle varie proteine, sono stati effettuati esperimenti nei quali aliquote da 2,0 mL di un pool di sieri umani è stato liofilizzato e quindi ricostituito con vari volumi di acqua (1,2 e 3 mL). Ciascuna aliquota ricostituita è stata dosata con il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale. Fare attenzione che le aliquote ricostituite con metà del volume originario rappresentano una concentrazione di proteine estremamente elevata, nell'ordine di 14 g/dL. (Il fattore per correggere il volume di ricostituzione è tabulato di seguito). I risultati indicano che anche con variazioni consistenti delle proteine non ci sono effetti sul dosaggio Coat-A-Count T3 Totale. (Vedi tabella "Protein Effect").

Sumário e Explicação do Teste

Curva di Dislocazione: Quattro campioni sono stati dosati con il dosaggio Coat-A-Count T3 Totale incluse diluizioni 1:1 del campione con ciascuno dei calibratori dalla A alla F. (Vedi Tabella "Curve Displacement")

Assistenza Tecnica All'estero: Si prega di contattare il proprio Distributore Nazionale. www.siemens.com/diagnostics Il Sistema Qualità della Siemens Healthcare Diagnostics Inc. è certificato ISO 13485:2003.

Português T3 Total Coat-A-Count Utilização: O T3 Total Coat-A-Count é um radioimunoensaio de fase sólida marcado 125 com I designado para o doseamento quantitativo da triiodotironina total circulante (T3) em soro ou plasma. Destina-se exclusivamente ao diagnóstico in vitro como auxiliar na avaliação clínica do estado da tireóide. Números de catálogo: TKT31 (100 tubos), TKT35 (500 tubos) O Kit com 100 tubos contém menos que 3,5 microcuries 125 (130 kilobecquerels) de I radioactivo ligado ao T3; o Kit com 500 Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Sob condições fisiológicas normais T3 representa aproximadamente 5% dos hormônios da tireóide no soro. Embora presente em baixas concentrações, T3 tem grande actividade metabólica intrínseca, rápida taxa de síntese e degradação e maior volume de 1 distribuição que o T4 circulante. Publicações mostram que a tireotoxicose pode ser causada por concentrações de T3 anormalmente altas – ao invés do T4 – tem reforçado a importância das 2-5 mensurações do T3. Adicionalmente, a mensuração de T3 é uma importante ferramenta no monitoramento de pacientes hipotireoideanos recebendo terapia de liotironina sódica. Diferente dos testes tipo “T3 Uptake”, os quais estimam a saturação das proteínas ligadoras de hormônios da tireóide, análise de T3 Total mensura os níveis circulantes de triiodotironina. Os artigos mais recentes indicam que os níveis de T3 distinguem nitidamente entre indivíduos eutireodeanos e hipertireoideanos, mas provê uma separação pouco clara entre os indivíduos hipotireoideanos e os 1 eutireoideanos. Várias condições não relacionadas às doenças da tireóide podem causar valores 1,6-9 Consequentemente, de T3 anormais. valores de T3 Total não devem ser usados por si só no estabelecimento do status da tireóide de um indivíduo. Os níveis de T4 séricos, TBG (globulina ligadora da tireóide), TSH (hormônio estimulante da tireóide) e outros aspectos clínicos tem que ser considerados como um todo.

Princípio do Procedimento O procedimento de T3 Total Coat-A-Count é um procedimento de radioimunoensaio em fase sólida onde o T3 marcado com 125 iodo I compete, por um período fixo de tempo, com o T3 da amostra do paciente para os sítios do anticorpo. Esta reacção ocorre em presença de agentes bloqueadores que servem para liberar a triiodotironina ligada das proteínas carregadoras, assim sendo o ensaio mede o T3 Total pois ambas formas de T3, a livre e a ligada a proteína, da amostra do 33

paciente são capazes de competirem com o T3 radiomarcado para os sítios do anticorpo. Em razão do anticorpo estar imobilizado na parede do tubo de polipropileno, uma simples decantação do sobrenadante é suficiente para terminar a competição e isolar a fracção ligada ao anticorpo de T3 radioactivo. Conta-se o tubo num contador GAMMA e os números gerados serão utilizados para a obtenção da curva de calibração, a qual medirá o T3 presente na amostra do paciente. Reagentes para Pipetar: 1 Tempo de Incubação : 2 horas a 37ºC Contagens Totais na Marcação com o Iodo: aproximadamente 50 000 cpm

Precauções Para uso de diagnóstico in vitro. Reagentes: Conservar a 2–8°C num frigorífico destinado para materiais radioactivos. Eliminar de acordo com as leis aplicáveis. Não utilize reagentes com prazo de validade expirado. Alguns componentes fornecidos com este kit podem conter matéria de origem humana e/ou outros ingredientes potencialmente perigosos que necessitem de algumas precauções. Manipule com as devidas precauções todos os materiais capazes de transmitir doenças infecciosas. As matérias primas, obtidas de soro humano, foram testadas, revelando resultados negativos para a sífilis, para os anticorpos do vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2; para o antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus da hepatite C. Azida de sódio foi adicionada como conservante; para evitar acumulações de azidas metálicas explosivas em canalizações de cobre e alumínio, os reagentes devem ser rejeitados no esgoto apenas se estiverem diluídos e forem lavados com grandes volumes de água. Água: Utilize água destilada ou deionizada. Radioactividade Uma cópia da licença de uso de produtos radioactivos (especifico ou geral) enviada pelo cliente, deve estar em poder da 34

Siemens Healthcare Diagnostics antes do envio dos kits ou componentes contendo material radioactivo. Estes materiais radioactivos podem ser adquiridos por qualquer cliente que possua a necessária licença especifica. Com uma licença generalista estes produtos radioactivos só podem ser adquiridos por médicos, veterinários na prática de medicina veterinária, laboratórios clínicos e hospitais. E somente para uso clinico in vitro ou testes laboratoriais não envolvendo administração externa ou interna do material radioactivo ou da sua radiação para o ser humano ou outros animais. A sua aquisição, receita, armazenamento uso, transporte e eliminação estão sujeitas aos regulamentos e à licenciada Comissão de Regulação Nuclear ou do Estado respectivo de acordo com a lei em vigor. Tratar os materiais radioactivos de acordo com a regulamentação da sua licença, específica ou generalista. De modo a minimizar a exposição à radiação deve o utilizador seguir as instruções da publicação do Departamento Nacional de Padrões (Utilização segura de materiais radioactivos-Livro No. 92, publicado em Março de 1964) e publicações seguintes do Estado e Autoridades Federais. Limpar os derrames prontamente e descontamine as superfícies afectadas. Evitar os aerossóis. Elimine os lixos radioactivos de acordo com a regulamentação da licença. As licenças generalistas (portadores da licença NRC 483) podem eliminar os lixos sólidos radioactivos como lixo não radioactivo depois de remover os rótulos. Licenças Especificas (Licença NRC 313) devem ter em conta o Capitulo 10 do artigo 20, do Código de Regulamentações Federais. Cada Estado deve referir a legislação em vigor aprovada para o seu território. As licenças generalistas podem eliminar os lixos radioactivos líquidos do tipo deste produto para um esgoto de laboratório. Os licenciados devem remover os rótulos dos frascos vazios de materiais radioactivos antes de os colocar no esgoto sólido. As licenças especificas podem eliminar pequenas quantidades de lixo radioactivo deste tipo de produto para o esgoto normal do laboratório. Ter em atenção as regulamentações em vigor para o seu laboratório. Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Materiais fornecidos: Preparação inicial

NSB, disponíveis na Siemens Healthcare Diagnostics (Números de catálogo: PPO).

Tubos revestidos com Anticorpos de T3 Total (TT31) Tubos de polipropileno revestidos com anticorpos anti-T3 embalados em sacos com fecho de segurança. Conservar refrigerado e protegido da humidade, selar os sacos cuidadosamente após cada abertura. Estável a 2–8°C até à data de validade inscrita na embalagem. Cor: Rosa. TKT31: 100 tubos. TKT35: 500 tubos.

Banho-maria – capaz de manter 37°C. Nem forno ou bloco de calor são adequados.

125

I T3 Total (TT32) 125 Triiodotironina marcado com I, pronto para uso, com agentes bloqueadores para as proteínas ligadoras dos hormônios tireoideano. Cada frasco contém 105 mL. Estável a 2–8°C durante 30 dias depois de aberto, ou até à data de validade inscrita no frasco. Cor: Púrpura. TKT31: 1 frasco. TKT35: 5 frascos. Calibradores de T3 Total (T3C3–8) Seis frascos, rotulados de A a F de calibradores de T3 em soro humano processado. Os calibradores são fornecidos na forma líquida, pronto para uso. O calibrador zero A contém 2,0 mL, e os calibradores remanescentes de B a F contém 1,0 mL cada. Estável após a abertura por 30 dias a 2–8°C ou por 6 meses (alicotado) a –20°C. TKT31: 1 conjunto. TKT35: 2 conjuntos. Os calibradores contém respectivamente, 0, 20, 50, 100, 200 e 600 nanogramas de T3 por decilitro (ng/dL) em soro humano processado; equivalente à: 0, 0,31, 0,77, 1,54, 3,07 e 9,22 nanomoles por litro (nmol/L). Pontos de calibração intermediários podem ser obtidos pela mistura de calibradores em proporções adequadas.

Materiais Necessários mas não Fornecidos Contador Gama – compatível com os tubos normais (12x75 mm) Agitador Vórtex Radioimunoensaio Tubos não revestidos de polipropileno (12x75 mm) – para uso como tubos T e

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Micropipetas: 100 µL e 1 000 µL

Espuma de decantação– disponível na Siemens Healthcare Diagnostics (Números de catálogo: FDR). Papel gráfico logit-log Controle de imunoensaios, com três níveis, baseado em soro humano, contendo T3 como um dos mais de 25 constituintes ensaiados; disponíveis na Siemens Healthcare Diagnostics (Números de catálogo: CON6).

Colheita O paciente não necessita dieta. Não são necessárias preparações especiais. 10 Colher o sangue por punção venosa em tubos comuns, tubos heparinizados ou com EDTA, e separar o soro ou plasma das células. A hora da colecta deve ser anotada. Recomenda-se o uso de uma ultra centrífuga para clarear amostras lipémicas. Amostras hemolisadas podem indicar tratamento incorrecto de uma amostra antes do envio para o laboratório; portanto os resultados devem ser interpretados com cuidado. Amostras contaminadas pela administração de radioactividade no paciente são inadequadas para uso. Os tubos para colheita sanguínea de diferentes fabricantes, podem originar diferentes valores, dependendo dos materiais e aditivos, incluíndo gel ou barreiras fisicas, activadores do coágulo e/ou anti coagulantes. Coat-A-Count T3 Total não foram ainda testados com todas as possiveis variações originadas pelos tipos de tubos. Consultar a secção Tipos de Amostras Alternativas para obter detalhes sobre os tubos que foram testados. Volume de amostra: 100 µL por tubo. Armazenazem: 7 dias a 2–8°C, ou por 11 até 1 mês congelado a –20°C.

35

Antes do ensaio, permita que as amostras atinjam a temperatura ambiente e agitar suavemente ou por inversão. Aliquotar se necessário para evitar repetidos congelamentos/descongelamentos. Não descongelar as amostras por aquecimento em banho-maria.

mesmas entre as amostras de modo a evitar a contaminação. 3

Laboratórios equipados com um pipetador diluidor adequado podem manusear os itens 2 e 3 simultaneamente. Não mais que 10 minutos devem ser gastos durante a dispensação do traçador. Deixar os tubos T para as contagens (n°6) pois os mesmos não necessitam mais processamento.

Técnica de Radioimunoensaio Todos os componentes devem estar à temperatura ambiente (15–28°C) antes de usar. Tubos lisos: Rotular quatro tubos de polipropileno (não revestidos) de 12x75 mm – T (contagens totais) e NSB (ligações não especificas) em duplicado.

1

Devido ao fato das ligações não especificas no método de Coat-A-Count serem geralmente baixas os valores de NSB podem ser omitidos sem comprometer a precisão ou controle de qualidade.

4

ng/dL

nmol/L

A (MB)

0

0

2

5

Decantar vigorosamente. Removendo todo o líquido remanescente melhora-se bastante a precisão. Usar uma espuma de decantação, decante ou aspire o conteúdo de todos os tubos (excepto os T) e deixar invertidos durante 2 ou 3 minutos. (Os tubos podem permanecer invertidos por horas sem nenhuma perda do material ligado ao anticorpo). Eliminar todas as gotas residuais com papel absorvente.

6

Contar 1 minuto em contador gama.

B

20

0,31

Cálculo dos Resultados

C

50

0,77

D

100

1,54

E

200

3,07

F

600

9,22

Para obter resultados de concentrações duma representação logit-log da curva de calibração, deve em primeiro lugar calcular-se para cada par de tubos a média de NSB-contagens por minuto corrigidas:

Pipetar 100 µL do calibrador zero A nos tubos NSB e A, e 100 µL de cada calibrador remanescente, controle e amostra de paciente nos tubos prépreparados. Pipetar directamente para a base do tubos. As amostras de pacientes das quais se esperam conterem concentrações de T3 superiores ao calibrador mais alto (600 ng/dL) devem ser diluídas com o calibrador zero antes do ensaio. É uma boa prática usar uma pipeta de ponteira descartável, trocando as

36

Incubar por 2 horas a 37°C. Usar banho-maria, nem estufa ou bloco de calor são adequados.

Tubos revestidos: Rotular doze tubos revestidos de T3 Total Ab em A (máxima ligação) e de B a F em duplicado. Rotular tubos revestidos de anticorpos adicionais também em duplicata, para os controles e amostras de pacientes. Calibradores

125

Adicionar 1,0 mL de T3 Total I (púrpura) em todos os tubos. Misturar em vórtex breve e gentilmente.

Contagens reais = (Média CPM) minutos (Média NSB CPM)

Determine a ligação de cada par de tubos como porcentagem do máximo de ligação (MB), com o NSB-contagens por minuto corrigidas dos tubos A tidas como 100%: Percentagem de Ligação = (Contagens reais / Contagens MB reais) × 100

(O cálculo pode ser simplificado omitindo a correcção para a ligação não especifica; amostras dentro da faixa de calibração originam virtualmente os mesmos resultados quando a Porcentagem de

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Ligação é calculada directamente da Média de CPM.) Usando um papel milimétrico logit-log, represente a Porcentagem de Ligação no eixo vertical (probabilidade) contra a Concentração no eixo horizontal (logarítmico) para cada um dos calibradores diferentes de zero, e representar uma linha recta em função da trajectória destes pontos. Resultados de amostras desconhecidas podem então ser lidas nessa recta por interpolação. È boa prática verificar os resultados pela concordância entre as replicatas e construir um gráfico da curva de calibração (mesmo que os cálculos sejam efectuados por computador) para verificação visual da aplicabilidade da transformação usada e como forma para detectar pontos de calibração que se afaste. Também recomenda-se guardar estas curvas: T = Contagens Totais (como contagens por minuto) %NSB = 100 × (Média Contagens NSB / Contagens Totais)

É uma boa prática laboratorial registrar para cada ensaio o número do lote dos componentes usados, bem como as datas de quando foram primeiro reconstituídas ou abertas. Recomenda-se registrar os valores diários em gráfico – como descrito, por exemplo, in Westgard JO, et al. A multi rule chart for quality control. Clin Chem 1981;27-493-501). Note que amostras repetidas podem servir como ferramenta adicional para monitorar a precisão inter-ensaio, e que pares de controles podem ser colocados ao longo do ensaio para ajudar a verificar a ausência de variação significativa.

Valores de Referência Em um estudo de faixa de referência, 335 amostras de soro de adultos saudáveis, na faixa de idade de 15 a 70 anos, foram ensaiadas pelo procedimento T3 Total Coat-A-Count. Análises não paramétricas dos resultados revelaram uma distribuição não Gaussiana, e indicou uma faixa de referência para os adultos de: 86 – 187 ng/dL

%MB = 100 × (Contagens reais / Contagens Totais)

Representando uma observação central de 95%. A mediana foi de 131 ng/dL.

E os 20, 50 e 80% intercepta onde

Considere esses limites apenas como directrizes. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores de referência.

20% = Concentração a 20 por cento de Ligação, etc.

Note que para outras perspectivas, como a implementação de uma logística de 4 parâmetros, também é aceitável. Ver Dudley RA, et al. Guidelines for immunoassays data reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71. Exemplo de Ensaio: Apenas para ilustração, não para calcular resultados de outros ensaios. (Ver tabela “Exemplo de Ensaio”).

Limitações Muitas condições fisiológicas, farmacológicas, patológicas e factores genéticos afectam a interpretação dos resultados de T3 Total (referir-se a secção Sumário e Explicação do Teste). Mais que 20% dos pacientes com doenças não tireoideanas em estado crítico possuem níveis séricos baixos de T3.

Controle de Qualidade Controles (ou “pools” de soro) com pelo menos dois níveis de concentração de T3 – baixo e alto – devem ser rotineiramente ensaiados como desconhecidos. Os resultados dos pacientes devem apenas ser reportados se os resultados dos controles para este ensaio estiverem dentro dos critérios de aceitação estabelecidos pelo laboratório.

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Características do Ensaio Ver tabelas e gráficos para os dados representativos da performance do kit de T3 Coat-A-Count. Os resultados de T3 nas secções abaixo estão expressos em ng/dL. A não ser de outra maneira especificada, todos os resultados foram gerados em amostras de soro colectadas em tubos sem anticoagulantes, barreiras de gel, ou aditivos promotores da coagulação. 37

Factor de conversão: ng/dL × 0,01536 → nmol/L Calibração: 20 – 600 ng/dL (0,31 – 9,22 nmol/L) Sensibilidade Analítica: 7 ng/dL Precisão Intra-ensaio (entre ensaios): As estatísticas foram calculadas para as amostras dos resultados de 20 pares de tubos em um único ensaio (Consulte a tabela precisão Intra-ensaio). Perfil de Precisão: Um perfil de precisão está mostrado reflectindo os CVs intraensaio dos quais se esperam para as amostras ensaiadas em duplicata (Ver gráfico “Perfil de Precisão”). Precisão Inter-ensaio (ensaio a ensaio): As estatísticas foram calculadas para os resultados de amostras de pares de tubos em 20 ensaios diferentes. (Consulte a tabela Precisão Inter-ensaio.) Linearidade: As amostras foram doseadas sob várias diluições. (Consulte a tabela “Linearidade” para os dados representativos.) Efeito fim-de-série: Nenhum até aproximadamente 200 tubos. (Ver tabela “Efeito fim-de-série”.) Especificidade: O antisoro do T3 Total Coat-A-Count é altamente específico para a triiodotironina, com uma reacção cruzada particularmente baixa a outros compostos que ocorrem naturalmente ou drogas terapêuticas que possam estar presentes nas amostras de pacientes. Apesar de alguns compostos apresentarem reacção cruzada, eles não estão normalmente presentes em concentrações que possam interferir significativamente com o ensaio. (Ver tabela “Especificidade”.) Bilirrubina: A presença de bilirrubina em concentrações até 200 mg/L não tem efeito em resultados, dentro da Precisão do Ensaio. Hemólise: A presença de elitrócetos em concentrações até 30 µL/mL não tem efeito em resultados, dentro da Precisão do Ensaio. Lipemia: Um calibrador do kit T3 Total Coat-A-Count (600 ng/dL, calibrador F) foi serialmente diluído com um pool de soro lipêmico. Isto causa um aumento no grau de lipemia enquanto que a concentração 38

de T3 decresce (devido ao calibrador). Estas diluições foram ensaiadas, em conjunto com o pool lipêmico não misturado. Os resultados mostraram uma boa recuperação ainda que em presença de lipemia severa. Tipo de amostra alternativa: Para determinar o quanto os anticoagulantes interferem com o ensaio, foi colectado sangue de 30 voluntários saudáveis em tubos lisos, heparinizados e a vácuo com EDTA. Todas as amostras foram ensaiadas pelo procedimento T3 Total Coat-A-Count, com os seguintes resultados. Regressão Linear: (Heparina) = 0,9 (Soro) + 9,6 ng/dL r = 0,939 Médias: 127 ng/dL (Heparina) 132 ng/dL (Soro) (EDTA) = 0,9 (Soro) + 2,1 ng/dL r = 0,908 Médias: 127 ng/dL (EDTA) 132 ng/dL (Soro)

Os resultados mostram que o plasma heparinizado e com EDTA geram virtualmente os mesmos resultados que o soro no procedimento T3 Total Coat-ACount. Comparação de Métodos: O kit de T3 Total Coat-A-Count foi comparado ao T3 Total Duplo Anticorpo em 119 amostras de pacientes. Regressão Linear: (CAC) = 0,96 (DA) + 0,96 ng/dL r = 0,939 Médias: 122 ng/dL (Coat-A-Count) 126 ng/dL (Duplo Anticorpo)

Efeitos da Proteína: Para simular várias concentrações de proteína, foram realizados vários experimentos no qual alicotas de 2,0 mL de um pool de soro humano foram liofilizadas e posteriormente reconstituídas com vários volumes de água. Cada alicota reconstituída foi então ensaiada com o procedimento T3 Total Coat-A-Count. Nota-se que as alicotas foram reconstituídas com a metade do volume original, representando uma concentração de proteína extremamente alta, na ordem de 14 g/dL. (O factor de correcção para o volume de reconstituição está tabulado abaixo). Estes resultados indicam que uma larga variação de proteína, Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

virtualmente, não afecta o ensaio de T3 Total Coat-A-Count. (Ver tabela “Efeito de Proteína”) Deslocamento da curva: Quatro amostras foram ensaiadas pelo procedimento T3 Total Coat-A-Count em ensaios nos quais incluíram diluições 1:1 da amostra com cada um dos calibradores de A a F. (Ver tabela “Deslocamento da Curva”)

Assistência Técnica Por favor contacte o seu Distribuidor Nacional. www.siemens.com/diagnostics O Sistema da Qualidade da Siemens Healthcare Diagnostics Inc. está registado sob a norma ISO 13485:2003. ®

Coat-A-Count is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. ©2010 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All rights reserved. Origin: US Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Los Angeles, CA 90045 USA

Siemens Healthcare Diagnostics Ltd. Sir William Siemens Sq. Frimley, Camberley, UK GU16 8QD

2010-10-25 PITKT3 – 8 Changes in this Edition: cc#19759: Removed TKT3X kit size and all associated component sizes and radioactivity information. In Materials Required But Not Provided section, added FDR catalog number for foam decanting rack and PPO catalog number for polypropylene tubes; removed “available from Siemens” claim for graph paper ZP797.

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

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It

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The following symbols may appear on the product labeling: / Die folgenden Symbole können auf dem Produktetikett verwendet werden: / Los siguientes símbolos pueden aparecer en la etiqueta del producto: / Les symboles suivants peuvent apparaître sur les étiquettes des produits : / Sull'etichetta del prodotto possono essere presenti i seguenti simboli: / Os seguintes símbolos podem aparecer no rótulo dos produtos: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device De: Medizinisches Gerät zur In-vitro Diagnose Es: Dispositivo médico para diagnóstico in vitro Fr: Dispositif médical de diagnostic in vitro It: Dispositivo medico per diagnostica in vitro Pt: Dispositivo médico para diagnóstico in vitro En: Catalog Number De: Katalog-Nummer Es: Número de referencia Fr: Numéro de référence catalogue It: Numero catalogo Pt: Número de catálogo En: Manufacturer De: Hersteller Es: Fabricante Fr: Fabricant It: Produttore Pt: Fabricante En: Authorized Representative in the European Community De: Autorisierte Vertretung in der Europäischen Union Es: Representante autorizado en la Unión Europea Fr: Représentant agréé pour l’Union européenne It: Rappresentante autorizzato nella Comunità europea Pt: Representante Autorizado na Comunidade Europeia

39

Symbol Definition En: CE Mark De: CE-Kennzeichen Es: Símbolo de la CE Fr: Marque CE It: Marchio CE Pt: Marca CE

Symbol Definition En: Temperature limitation (2–8°C) De: Temperaturgrenze (2–8°C) Es: Limitación de la temperatura (2–8°C) Fr: Limites de température (2–8°C) It: Limiti di temperatura (2–8°C) Pt: Limites de temperatura (2–8°C)

En: CE Mark with identification number of notified body De: CE-Kennzeichen Identifikationsnummer der benannten Stelle Es: Marca de la CE con número de identificación del organismo notificado Fr: Marque CE avec numéro d’identification du corps notifié It: Marchio CE con numero identificativo dell'ente notificato Pt: Marca CE, com número de identificação do órgão notificado

En: Upper limit of temperature (≤ -20°C) De: Obere Temperaturgrenze (≤ -20°C) Es: Limitación superior de la temperatura (≤ -20°C) Fr: Limite supérieure de température (≤ -20°C) It: Limite superiore di temperatura (≤ -20°C) Pt: Limite máximo de temperatura (≤ -20°C)

En: Consult instructions for use De: Bedienungshinweise beachten Es: Consulte las instrucciones de uso Fr: Consulter le mode d’emploi It: Consultare le istruzioni per l'uso Pt: Consulte as instruções de utilização

En: Lower limit of temperature (≥2°C) De: Mindesttemperatur (≥2°C) Es: Temperatura maxima (≥2°C) Fr: Limite inférieure de température (≥2°C) It: Limite inferiore di temperature (≥2°C) Pt: Limite inferior de temperatura (≥2°C)

En: Caution! Potential Biohazard De: Vorsicht! Biologisches Risikomaterial Es: ¡Precaución! Peligro Biológico Potencial Fr: Avertissement ! Risque biologique potentiel It: Attenzione! Potenziale Pericolo Biologico Pt: Precaução! Potenciais Riscos Biológicos

En: Do not freeze (> 0°C) De: Nicht einfrieren (> 0°C) Es: No congelar (> 0°C) Fr: Ne pas congeler (> 0°C) It: Non congelare (> 0°C) Pt: Não congele (> 0°C) En: Keep away from sunlight De: Vor Sonneneinstrahlung schützen Es: Mantener protegido de la luz solar Fr: Maintenir hors de portée de la lumière du soleil It: Non esporre alla luce del sole Pt: Manter protegido da luz solar

En: Radioactive Materials De: Radioaktives Material Es: Materiales radiactivos Fr: Matériaux radioactifs It: Materiali radioattivi Pt: Materiais Radioactivos En: Caution De: Vorsicht Es: Precaución Fr: Avertissement It: Attenzione Pt: Precaução

40

LOT

En: Batch code De: Chargenbezeichnung Es: Código de lote Fr: Numéro de code du lot It: Codice lotto Pt: Código de lote

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

Symbol Definition En: Contains sufficient for (n) tests De: Es reicht für (n) tests Es: Contiene material para (n) pruebas Fr: Suffisant pour (n) tests It: Contiene materiale sufficiente per (n) test Pt: Contém o suficiente para (n) testes

2008-01

En: Date format (year-month) De: Datumsformat (Jahr-Monat) Es: Formato de fecha (año-mes) Fr: Format de la date (année-mois) It: Formato data (anno-mese) Pt: Formato de data (ano-mês) En: Use by De: Verwendbar bis Es: Fecha de caducidad Fr: A utiliser avant It: Usare entro Pt: Use até En: Harmful De: Gesundheitsschädlich Es: Nocivo Fr: Nocif It: Nocivo Pt: Nocivo En: Corrosive De: Ätzend Es: Corrosivo Fr: Corrosif It: Corrosivo Pt: Corrosivo En: Toxic De: Giftig Es: Tóxico Fr: Toxique It: Tossico Pt: Tóxico En: Dangerous for the environment De: Umweltgefährlich Es: Peligroso para el medio ambiente Fr: Dangereux pour l'environnement It: Pericoloso per l'ambiente Pt: Perigoso para o ambiente

Coat-A-Count Total T3 (PITKT3-8, 2010-10-25)

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