Columnas de HPLC XBridge™

[ 1 ]

Versatilidad y rendimiento inigualables La familia de columnas de HPLC XBridge™ está diseñada para obtener la máxima flexibilidad en el desarrollo de métodos de HPLC. Se pueden desarrollar separaciones robustas en menos tiempo y con mayor confianza, permitiendo que los usuarios de sistemas cromatográficos aprovechen plenamente la potencia del pH. Combinando vanguardistas procesos de enlazado, “endcapping” y síntesis de partículas con una fabricación y calidad que lideran el sector, las columnas XBridge constituyen la solución de confianza para las separaciones cromatográficas más exigentes.

■

Flexibilidad para funcionar a lo largo de un rango de pH y temperaturas de fase móvil sin precedentes

■

■

Transferencia perfecta de métodos a la tecnología UltraPerformance LC®. Incomparable vida útil de la columna.

Tecnología BEH

Introducida por primera vez en 1999 a través de la familia XTerra ® de columnas de HPLC, la tecnología de partículas híbridas (HPT, siglas inglesas)* orgánicas/inorgánicas, patentada por Waters, superó significativas limitaciones de los materiales de relleno de fase reversa con base de sílice: en especial la inestabilidad hidrolítica a pH alto. La HPT de segunda generación, llamada BEH Technology™, incorporada tanto en las columnas ACQUITY UPLC® BEH como en las columnas de HPLC XBridge, marca un nuevo hito en la cromatografía. Finalmente se puede utilizar toda la potencia del pH en el desarrollo sistemático de métodos para LC. *Patentes de los EE.UU. 6.686.035; 7.223.473; 7.250.214.

Sínt esis de pa rt ículas pa ra la t ecnología BEH En la síntesis de partículas BEH, el monómero bis (trietoxisilil) etano contiene un puente de etileno en su estructura. Este puente de etileno imparte a la estructura de la partícula de sílice la resistencia a la disolución a pH elevado que tienen los polímeros, sin sacrificar en absoluto la integridad estructural ni la eficacia de la partícula de sílice.

E tO CH 2 CH 2 OE t Si O Si

Si

O

E tO

Si

O Et

4

O

O

O

OE t Si

O

Si

+

Si

EtO OEt EtO

O Et

OEt

OE t

EtO

E tO E tO Si EtO

OEt CH 2 Si OEt CH 2 OEt

Si(OH)4

-

3OH

n

Polietoxisilano (BPEOS)

Bis(trietoxisilil)etano (BTEE)

Tetraetoxisilano (TEOS)

O O

Si

O O

O

Si O

O

Si

O

O

Si

Si

O

O

Disolución de pa rt ículas a pH el evado

Anal. Chem. 2003, 75, 6781-6788

O

OH O

O

O

Si

Si

OH O

O

Si

O

O

Si

Si

O

O

O

O

Si

O

O

OH O

O

O

O

Si

Si

O

O

O

O

Si

Si

OH O

O

O

O

Si

Si

OH O

O

O

O

Si

Si

O

O

O

O

Si

O

O

Núcleo

Partícula XBridge

Partícula de sílice Si(OH)4

3OH

O O

Si

O O

O

O

Si

Si O

O

O

Si

O

OH O

Si

O

O

O

O

Si

OH O

O

Si

O

O

O

Si

Si

O

O

O

O

Si

O

O

OH O

O

O

Si

Si

Si

O

O

O

O

Si

Si

OH O

O

O

O

Si

Si

OH O

O

O

O

Si

Si

OH O

O

O

O

O

Si

O

O

Si

O

Si O

O

CH2

Si

OH

OH O

Si

O

Si O

CH2

OH O

CH2

O

O

Si

CH2 O

Si O

O

Si

CH2 O

O Si O

Si O

O

Si O

O

CH2 O

Si

O

O

O

Si O

Si O

O

Si O

OH O

Si

OH O

CH2 CH2 O

Si

O

O

Núcleo

OH

OH Si

O

O

O

OH O

O

Núcleo

O

Si

Si

Si

OH O

O

O

O

CH2

Si CH2

■Si ■

O

Si

OH

CH2

■

CH2

O

CH2

OH

O

O

O

OH O

CH2

O

Si

O

O

CH CH Si(OH)4 tiene una elevada solubilidad en el agua. 2

O

■O La

Núcleo

OH

Sólo que hidrolizar 4 enlaces. Si Si Si Si hay Si Si O O O O O O Si

2

O

Si

O

Si

O

Si

O

Si

O

Si

O

O O O a pHO> 7. sílice esO fácilOde disolver

Pérdida de eficacia.

Si

■

Hay que hidrolizar hasta 6 enlaces.

■

Hidrófoba, menos reactiva que la sílice.

O

■

O

[ 4 ]

Se forman enlaces Si-O-Si mientras otros se rompen.

Si

O

O Si O

O

Tecnología BEH

Beneficios de la t ecnología híbrida Atributo de la partícula híbrida Beneficio para la RP-HPLC

Los grupos híbridos superficiales reducen la concentración superficial de silanol.

Reducción de los factores de cola USP de los picos para las bases.

Los grupos puente internos confieren una elevada interconectividad.

Mayor estabilidad química y mecánica.

Los grupos híbridos internos y superficiales añaden hidrofobicidad.

Mayor estabilidad de la columna a pH alto.

La tecnología BEH ofrece a los usuarios de sistemas cromatográficos la flexibilidad de transferencia entre las plataformas cromatográficas UltraPerformance LC, analítica y preparativa. Combinando la tecnología BEH con el diseño de columna patentado de óptima densidad del lecho (OBD™), las columnas XBridge Prep OBD ofrecen una elevada capacidad de carga, máxima eficacia y larga vida útil de la columna. Tanto las partículas XBridge HPLC como las partículas ACQUITY UPLC BEH de 1,7 µm tienen tecnología BEH, permitiendo así una transferencia directa de las separaciones por HPLC a la tecnología UPLC. Tanto si un usuario de sistemas cromatográficos está interesado en separaciones por UPLC de menos de 2 µm, como en el desarrollo de métodos de purificación o en separaciones de escala analítica, la tecnología BEH ofrece soluciones precisas y fiables.

P roduc tos con t ecnología BEH

Columnas XBridge

Columnas ACQUITY UPLC BEH

Columnas XBridge OBD Prep

Columnas BEH de bioseparación

Tecnología de Separación de Péptidos Tecnología de Separación de Oligonucleótidos [ 5 ]

xbridge c18 /c 8

XBridge C18 /C 8 Las dos fases enlazadas de HPLC más populares, C18 y C8, son las fases de primera elección en el desarrollo de métodos de LC. Útiles para una amplia variedad de separaciones, estas columnas son conocidas por todos los científicos dedicados a la separación. Las columnas XBridge C18 y C8 ofrecen O flexibilidad para el desarrollo de métodos. Mediante el uso de enlaces trifuncionales y un “endcapping” avanzado, se observa O Si una excelente reproducO ibilidad, rendimiento y vida útil de la columna a lo largo de todo el rango de pH (1-12).

Características de las columnas XBridge C18 y C8 Tipo de ligando

O

Trifuncional C18

Trifuncional C8

2.5, 3.5, 5, 10

O Si 2.5, 3.5,Polar 5,Group 10

3.1 µmol/m2

3.2 µmol/m2

CH 3

O Si O

Densidad del ligando* Fase enlazada

O O Si

O

Tamaños de partícula disponibles (µm) Carga de carbono*

CH 3

Tipo de “endcapping”

O Si

Intervalo de pH

CH3

CH3

18%

13%

Patentado Polar Group

Patentado O

O Si O

1-12

1-12

Límites de temp. a pH bajo

80 °C

60 °C

Límites de temp. a pH alto

45 °C

45 °C

L1

L7

135Å

135Å

O O Si O

Farmacopea de los Estados Unidos.

Partícula BEH

O O Si O

Diámetro de poro* Volumen de poro*

0.7 mL/g

0.7 mL/g

Superficie*

185 m2/g

185 m2/g

* Valores nominales.

Estabilidad a pH bajo

Estabilidad a pH alto

La inestabilidad a pH bajo se debe a la escisión de los enlaces de siloxano por hidrólisis ácida. Para mejorar la estabilidad a pH bajo de las fases enlazadas, hay que reducir la tasa de hidrólisis. Los tipos de química XBridge C18, C8 y Fenilo utilizan uniones trifuncionales y “endcapping” patentados para conseguirlo. En ensayos acelerados en condiciones de pH bajo, las columnas XBridge C18 presentan una mínima pérdida de retención (mayor estabilidad hidrolítica) en comparación con las columnas rellenas con fases preparadas empleando silanos monofuncionales.

La degradación de las partículas cromatográficas de base sílice a un pH elevado se debe al ataque nucleófilo de los iones hidróxido sobre sus enlaces siloxánicos estructurales. Cromatográficamente, esto ocasiona vacíos en la columna, degradación de la forma de los picos o pérdida de eficacia. Las partículas XBridge incorporan puentes de etileno dentro de la matriz de sílice, que confieren resistencia a la disolución de la partícula. Tendrían que romperse hasta seis enlaces siloxánicos para liberar una sola unidad con puentes de etileno de una partícula. La estabilidad química queda demostrada en el ensayo acelerado a pH alto que se ilustra más abajo. Horas en TEA 50 mM a 50 ˚C hasta una pérdida de eficacia del 50%

Horas en TFA al 1% a 80 ˚C hasta una pérdida de retención del 20% 0

20

40

60

80

0

100

XBridge C18

XBridge C18

Zorbax® SB C18

XTerra MS C18

SunFire C18

Gemini™ C18

Intersil® ODS-3

Zorbax® Extend C18

Ace® C18

Luna® C18 (2)

Gemini™ C18

YMC™ Pro C18

Luna® C18 (2)

[ 6 ]

50

100

150

200

xbridge c18 /c 8 El pH como herramienta para un óptimo desarrollo de métodos En la cromatografía de fase reversa, el pH de la fase móvil puede producir cambios en la selectividad y capacidad de retención a los compuestos ionizables. Los compuestos ácidos presentan mayor retención a valores del pH por debajo de su pKa, y los compuestos básicos presentan una retención más prolongada a valores del pH por encima de su pKa. Muchos compuestos farmacológicamente activos son ionizables; así, una columna con un intervalo útil de pH más amplio permite mayor flexibilidad para el desarrollo de métodos farmacéuticos. Las columnas XBridge tienen un amplio intervalo útil de pH (pH 1-12), lo cual ofrece una flexibilidad inigualable para el desarrollo de métodos.

Columna:

XBridge C18, 3.0 x 100 mm, 3.5 µm

Fase móvil A1:

Fosfato potásico 100 mM, pH 2

Fase móvil A2:

Fosfato potásico 100 mM, pH 7

Fase móvil A3:

Fosfato potásico 100 mM, pH 12

Fase móvil B:

ACN

Fase móvil C:

H 2O

Caudal:

0.6 mL/min

Gradiente:

Tiempo



(min)

%A



0.0

20

5



15.0

20

50

Temperatura:

30 °C

pH 2 Forma deficiente de los picos Sobrecarga de la columna Baja retención: ionizado

AU

0

Perfil %B

0.5

0.5

%C

pH 7 Mejor forma de los picos Mejor retención: 50% ionizado Coelución

75 30

AU

Volumen de inyección: 20 µL @ 30 mg/mL en agua Detection:

UV @ 215 nm

Instrumento:

Waters Alliance® 2695 con PDA 2996

0 0.5

pH 12 La mejor forma de los picos Buena retención: 100% no ionizado La mejor resolución

AU

0 0

5

10

15 min

El clorhidrato de lincomicina es un fármaco antibiótico bien establecido, utilizado en medicina humana y veterinaria, efectivo principalmente contra patógenos grampositivos. El actual método USP adolece de una forma deficiente de los picos y de poca sensibilidad. Para desarrollar un método óptimo, se puede utilizar el pH para obtener mejor forma de los picos y mejor resolución.

Columna:

XBridge C18, 3.0 x 100 mm, 3.5 µm

Fase móvil A:

Fosfato potásico 100 mM, pH 12

Fase móvil B:

Acetonitrilo

Fase móvil C:

Agua

Excelente carga 7.3%

Gradiente:

Tiempo



(min)

%A

Perfil %B

%C



0.0

20

15

65



15.0

20

35

45

Caudal:

0.6 mL/min

Resolución optimizada Excelente forma de picos

1.1%

Volumen de inyección: 20 µL @ 30 mg/mL en agua Temperatura:

30 °C

Detección:

UV @ 215 nm

Instrumento:

Waters Alliance 2695 with 2996 PDA

0.25%

0

5

Una vez seleccionado el pH, se optimizó la pendiente del gradiente para mejorar la resolución.

[ 7 ]

10

15 min

Cambio ent re pH alto y bajo

Sacando pa rt ido de los tam pones de fosfato

La capacidad de cambiar entre un pH alto y uno bajo en una sola columna puede permitir una espectacular reducción del tiempo de parada del instrumento, así como significativas reducciones de coste cuando se trabaja a múltiples niveles de pH. Tradicionalmente, se asignan columnas diferentes para cada nivel de pH, para evitar la degradación prematura de la columna. Las partículas de tecnología BEH, cuando se combinan con fases enlazadas y “endcapping” novedosos e innovadores, permiten el uso de las columnas de HPLC XBridge a un pH más elevado que las columnas convencionales, pero permiten el “cambio de pH” sin reducción en el rendimiento. En otras palabras, una sola columna XBridge puede utilizarse para trabajar en condiciones de pH tanto bajo como alto, eliminando así el tiempo necesario para cambiar de columna, y la necesidad de disponer de múltiples columnas para trabajar a pH bajo y alto por separado.

Los tampones de fosfato poseen una singular selectividad, excelente transparencia UV y buena capacidad de tamponamiento a múltiples valores del pKa. No obstante, debido a la naturaleza agresiva del fosfato, las columnas tradicionales de sílice presentan con frecuencia una vida útil muy reducida. Las columnas XBridge demuestran un rendimiento excelente con tampones de fosfato en todo el intervalo de pH, debido a la resistencia química mejorada de las partículas con tecnología BEH. 3

2

4

5 6

pH 2

1

0

1

2

3

3

4

5

6

2

6

4

0

1

2

3

3

4

5

6

2

B

A

B = base A = ácido N = neutro

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

Iny. nº 2

3.5

4.0

4.5

5.0 min

Gemini™ Column

V0 A

B = base A = ácido N = neutro

B

N

Iny. nº 2

Iny. nº 1724

8 min

5 4

pH 12

V0 0

B = base A = ácido N = neutro

Iny. nº 4800 0.5

7

1

N

V0

8 min

pH 7

6

Columna XBridge

7

5

1

A

1

B

2N

3Iny. nº 2

4

5

6

7

8 min

Iny. nº 1724

Eliminando el sangrado en MS 0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0 min

La espectrometría de masas, en combinación con la HPLC, ofrece a los químicos analíticos mayor sensibilidad y selectividad. Para obtener todos los beneficios de la LC/MS, es esencial la utilización de columnas de LC de baja degradación. La tecnología BEH incorporada a las columnas XBridge elimina prácticamente la degradación de la LC/MS, al ofrecer mayor sensibilidad hidrolítica y resistencia de las partículas. Como se puede ver más abajo, en comparación con una exploración de fondo por MS, se observa una degradación mínima. 3.0E+07

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

Sin columna

5.0 min

XBridge C18 2.5E+07

En esta evaluación se investigó el efecto de cambiar el pH de la fase móvil de forma agresiva para cada inyección, empleando una mezcla de compuestos ácidos, básicos y neutros. Cada columna fue equilibrada primero a pH 3, seguido de una sola inyección de la mezcla de prueba. La columna fue equilibrada después a pH 10, seguido de una sola inyección de la mezcla de prueba. Esta secuencia se repitió para varios miles de inyecciones sin deterioro de la columna XBridge C18.

Recuento de iones

n

XBridge C18 /C 8

2.0E+07

1.5E+07

1.0E+07

5.0E+06

0.0E+00 0

[ 8 ]

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22 min

XBridge C18 /C 8 Re p roducibilidad pa ra el desa rrollo de métodos Waters sigue siendo la referencia del sector para la reproducibilidad lote a lote. Desde la gama de columnas Symmetry ® en 1994 y continuando con las gamas de columnas de HPLC XTerra, Atlantis® y SunFire™, las columnas de Waters ofrecen resultados constantes. Las columnas XBridge se fabrican en las mismas instalaciones certificadas cGMP, ISO9001 e ISO13485 que producen estas gamas de columnas de HPLC, líderes en el sector. Los científicos dedicados al desarrollo de métodos pueden tener la garantía de que las separaciones obtenidas hoy serán reproducibles año tras año.

5 µm 5 µm 10 µm 3.5 µm 3.5 µm 0

10

20

30 min

Instalaciones de fabricación de Waters

Estabilidad pa ra un rendimiento fiabl e La tecnología BEH produce partículas diseñadas para mejorar el rendimiento de la columna y prolongar su vida útil en condiciones operativas de LC extremas y exigentes. Utilizando técnicas punteras de síntesis, Waters ha diseñado y fabricado columnas de LC capaces de ofrecer una vida útil que supera con mucho la de las principales marcas de columnas convencionales de HPLC, en condiciones de pH tanto bajo como alto.

Análisis del lote 1

XBridge C18, pH 2

Análisis del lote 3

XBridge C18, pH 11.3

Análisis del lote 13

Las instalaciones de vanguardia de Waters fabrican columnas de HPLC y de UPLC que aumentan al máximo el rendimiento del laboratorio. Somos fabricantes originales de partículas de sílice e híbridas, y podemos vigilar y controlar continuamente todo el proceso de fabricación a lo largo de la vida útil del producto. Esto permite obtener un control y una repetibilidad sin precedentes entre lotes de material.

1 análisis de lote = 500 volúmenes de la columna

Análisis del lote 15

Análisis del lote 34

Análisis del lote 36

0

5

10

15

20

25

30 min

La Corporación Waters ha recibido los siguientes registros y certificaciones:

Los resultados de arriba se obtuvieron como parte de una extensa evaluación de columnas de HPLC realizada por una importante empresa farmacéutica. Se evaluó un total de 18 columnas en condiciones exigentes para determinar la estabilidad de la eficacia y de la selectividad durante un uso prolongado, así como la reproducibilidad entre lotes. Esta evaluación dio lugar a la selección de las columnas de HPLC XBridge como la principal columna de desarrollo de métodos a nivel mundial.

• ISO9001:2000

Datos cortesía de Novartis.

• ISO13485:2003

[ 9 ]

• Registrada por la Food y Drug Administration de los EE.UU.: cGMP y dispositivos médicos de Clase 1.

XBridge Fenilo O O Si O

XBridge Fenilo O Si Las columnas fenilo se utilizan con frecuencia en separaciones donde se necesita una selectividadOalternativa, especialmente cuando los analitos O de interés contienen un anillo aromático. Tradicionalmente, las columnas de fenilo se han utilizado poco, debido a su inadecuada estabilidad en condiciones de pH bajo. Los científicos dedicados al desarrollo de métodos ya no se ven limitados por el pH cuando utilizan una columna de LC de CH O Si fenilo. Gracias al novedoso enlazado y “endcapping” de la tecnología de partículas BEH, las columnas XBridge Fenilo ofrecen excelente estabilidad a CH pH bajo y alto, dando lugar a la columna fenilo más estable y reproducible del mercado. 3

Polar Group

3

O

Características de las columnas XBridge Fenilo

O Si O

Tipo de ligando

Trifuncional C6 Fenilo

Tamaños de partícula disponibles (µm)

2.5, 3.5, 5

Fase enlazada

Densidad del ligando*

3.0 µmol/m2

Carga de carbono*

15%

Tipo de “endcapping”

Patentado

Intervalo de pH

1-12

Límites de temp. a pH bajo

80 °C

Límites de temp. a pH alto

45 °C

Partícula BEH

Farmacopea de los Estados Unidos.

L11

Diámetro de poro*

135Å

Volumen de poro*

0.7 mL/g

Superficie*

185 m2/g

* Valores nominales.

Exc el ent e rendimiento Las columnas XBridge Fenilo combinan una unión trifuncional del ligando fenilo-hexilo con técnicas patentadas de “endcapping” para obtener una estabilidad a pH bajo que lidera el sector, sin dejar de ofrecer una excelente forma de picos.

Excelente forma de los picos

Estabilidad a pH bajo que lidera el sector

Sonda: Etilparabeno 100

Amitriptilina NUSP = 9300 T USP = 1.20

XBridge™ Phenyl 90

% retención inicial

Agilent Zorbax® SB-Phenyl 80

XBridge Fenilo

Phenomemex Luna Phenyl-Hexyl ®

®

Varian Pursuit® Diphenyl

70

Agilent Zorbax® Eclipse XDB Phenyl 60

Restek Ultra Phenyl 0

20

40

60

80

Amitriptilina NUSP = 920 T USP = 6.59

Zorbax SB Fenilo ®

50 100

Horas en TFA al 1% en H2O pH 1,0 a 80 ˚C

10

[ 10 ]

20

30

40

50

60

70

80

90 min

XBridge Fenilo

Singula r sel ec t iv idad

12

Ácidos 9

Bases

Las columnas XBridge Fenilo ofrecen una selectividad alternativa con respecto a las columnas alquílicas de cadena recta, así como a las columnas con grupos polares integrados, en especial para compuestos que contienen un grupo aromático. Esto proporciona gran flexibilidad para desarrollar métodos ortogonales para separaciones difíciles.

2

1

8

4,5 3

XBridge Fenilo

11 67

10

12 9,10 4

1 2 3

XBridge C18

11

8

6 7

5

12 9 2 1 3 4

5

4

6 7

8

10

8

XBridge Shield RP18

11

12

16

20 min

Con diferentes ligandos se pueden observar cambios de selectividad. Como se ilustra aquí, el ligando fenilo ofrece mejor retención y una selectividad alternativa para los antidepresivos tricíclicos (picos 6, 7 con respecto al pico 8).

Uso del pH bajo pa ra enf renta rse a desafíos de desa rrollo de métodos La separación de ácidos aromáticos ha sido históricamente difícil, utilizando columnas C18 tradicionales. Estos compuestos son derivados del fenol y poseen anillos aromáticos; por tanto, construir una columna de fenilo es una solución lógica. No obstante, se ha demostrado que el pH bajo es crítico para obtener una separación efectiva en esta clase de compuestos, lo cual es problemático para la mayoría de las columnas de fenilo que hay en el mercado, en cuanto a la estabilidad. Las columnas XBridge Fenilo ofrecen la solución. No solo se consigue la selectividad deseada (mediante interacciones pi-pi), sino que la estabilidad química mejorada favorece la vida útil de la columna y un funcionamiento consistente a pH bajo.

XBridge Phenyl

Volumen de inyección:

4.6 × 100 mm, 3.5 µm

Disolvente de la muestra: 10 µg/mL of all analytes in H2O

Número de referencia:

186003334

Temperatura de la columna: 35 °C

Fase móvil A:

H 2O

Temperatura de la muestra: 20 °C

Fase móvil B:

ACN

Detección:

Fase móvil C:

NH4HCOOH 100 mM, pH 3

Velocidad de adquisición: 5 points/sec

Caudal:

1 mL/min

Filtro respuesta:

1.0

Lavado de la aguja:

5/95 MeOH/H2O

Instrumento:

Alliance 2695 con PDA 2996



Columna:



1 7

2

6 4

3



Gradiente:

Tiempo

Perfil



(min)

%A

%B

%C



0.0

85

5

10 10



20 µL

UV @ 280 nm



8.00

65

25



10.00

10

80

10

Compuestos



11.00

10

80

10

1. Ácido gálico



12.00

85

5

10

2. Ácido protocatéquico



15.00

85

5

10

3. Ácido 3,4 dihidroxifenilacético 4. Ácido 4-hidroxibenzoico 5. Picrolam 9

8

5

6. Ácido vainíllico

10

7. Ácido siríngico 8. Ácido salicílico 9. Ácido 2,4-diclorofenoxiacético (Weed-B-Gone)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12 min

10. Ácido 2-(2,4,5-triclorofenoxi) propanoico (Silvex)

En diversos herbicidas comunes, entre ellos Silvex, Picloram y Weed-B-Gone, se utilizan ácidos aromáticos. Muchos otros ácidos orgánicos son analitos ácidos muy polares que pueden ser difíciles de retener en las columnas C18 tradicionales, y sin embargo se retienen bien utilizando las columnas XBridge Fenilo.s.

[ 11 ]

XBridge Shield RP18

XBridge Shield RP18 O

Las columnas que contienen grupos polares embebidos se están volviendo más populares entre los O Sicientíficos dedicados al desarrollo de métodos, debido O a su selectividad alternativa en comparación con los tipos de química C18 tradicionales. El XBridge Shield RP18 ofrece una selectividad complementaria así como una excelente forma de los picos para las bases. La tecnología Shield patentada* incorpora un grupo carbamato integrado en la fase unida, que protege los silanoles superficiales. Además, esta funcionalidad permite la compatibilidad conOfases móviles totalmente acuosas sin riesgo de O Si O deshumectación de los poros, permitiendo una retención fiable y consistente. *Patente de los EE.UU. 5.374.755 [Neue et al.] CH 3 O Si

Características de la columna XBridge Shield RP18 Tipo de ligando

Monofuncional de grupo polar integrado O

Tamaños de partícula disponibles (µm)

O Si O

Fase unida

Densidad del ligando* Carga de carbono*

2.5, 3.5, 5, 10 3.3 µmol/m2 17%

Tipo de “endcapping”

TMS

Intervalo de pH

2-11

Límites de temp. a pH bajo

30 °C

Límites de temp. a pH alto

45 °C

Farmacopea de los Estados Unidos. Partícula BEH

Polar Group

CH3

L1

Diámetro de poro*

135Å

Volumen de poro*

0.7 mL/g

Superficie*

185 m2/g

* Valores nominales.

¿Qué es la t ecnología Shield?

Beneficios de la tecnología Shield:

A principios de la década de 1990 se crearon fases enlazadas novedosas en las que se integraban grupos funcionales polares en cadenas alquílicas C18 y C8. Uno de los principales beneficios era una reducción de las interacciones silanólicas con los analitos básicos, permitiendo una mejora de la forma de los picos. Estos materiales de primera generación se preparaban mediante una modificación superficial de dos pasos, en una mezcla de grupos amino derivados y no derivados, que variaban de un lote a otro. Así, los analitos eran retenidos mediante mecanismos de fase reversa y de intercambio aniónico.

n

Reducción de las interacciones silanólicas con los analitos básicos. Esta desactivación o protección ocasiona una mejora de la forma de los picos para los analitos básicos.

n

Se observa también una singular selectividad para las fases unidas con grupos polares embebidos, reduciéndose generalmente los factores de retención de los analitos polares y básicos, y quedando la retenció de los analitos no polares relativamente inalterada.

n

Las fases enlazadas Shield ofrecen tiempos de retención del analito estables y reproducibles en fases móviles 100% acuosas. Las fases alquílicas convencionales adolecen de deshumectación en estas condiciones, y los tiempos de retención se reducen significativamente.

Los materiales de segunda generación se preparan utilizando una modificación superficial de un paso, en la que el grupo funcional se integra en un silano. Una sola reacción superficial con el silano da lugar a una única estructura posible del ligando, sin posibilidad alguna de intercambio aniónico. Este enfoque resultó ofrecer una excelente reproducibilidad entre lotes. La eliminación de los mecanismos de intercambio aniónico es también importante, ya que previene la posibilidad de interacciones secundarias con analitos cargados negativamente.

Referencia bibliográfica A Review of Waters’ Bonded Phase Shield Technology and Its Use in High Performance Liquid Chromatography (HPLC) White Paper Referencia bibliográfica 720000207EN

[ 12 ]

XBridge Shield RP18

O pt imiza r la sel ec t iv idad pa ra el desa rrollo de métodos Para desarrollar métodos cromatográficos, algunas de las herramientas disponibles para el científico dedicado a la separación incluyen el pH, la química de la columna y el modificador orgánico. La columna XBridge Shield RP18 ofrece una selectividad alternativa, junto con la capacidad de funcionar correctamente en una amplia gama de pH y con diversos eluyentes. Utilizando estas herramientas clave, el usuario de sistemas cromatográficos puede optimizar rápidamente las condiciones de prueba necesarias para lograr una separación efectiva.

Ácidos 10

Bases

pH 10

5

2 3

7,12

9 11

1

0

XBridge™ C18

6

8

Metanol 4

2

4

6

8

10

12

14

16

18 min

10 12

5

2

8,9

7

4 2

4

6

8

10

Metanol

11

1

0

XBridge™ Shield RP18

6

3

10

12

14

16

18 min

5 2

1

XBridge™ Shield RP18

12

8

11

3

6

Acetonitrilo

9 4 0

2

4

6

8

7

10

12

14

16

18 min

Grandes cambios de selectividad cuando se comparan las químicas de columnas ortogonales en diferentes modificadores orgánicos.

Exc el ent e se pa ración de bases Algunas columnas C18 muestran interacciones secundarias con los compuestos básicos, debido a un débil intercambio catiónico con los silanoles superficiales residuales, dando lugar a una asimetría deficiente de los picos. La columna XBridge Shield RP18, con tecnología Shield patentada, reduce la interacción silanólica con los analitos básicos, produciendo picos simétricos muy eficientes.

Columna:

XBridge Shield RP18,

Gradiente:

Tiempo

4.6 X 50 mm, 3.5 µm



(min)

%A

%B

%C 10

Número de referencia: 186003042

0.06

Fase móvil A:

H 2O

Fase móvil B:

MeOH

Fase móvil C:

NH4HCO3 100 mM

Caudal:

1.0 mL/min

2 1 3

Perfil

Volumen de inyección:



0

90

0



2

30

60

10



10

16

74

10



11

90

0

10



13

90

0

10

4

0.04

Temperatura:

35 °C

Detección:

UV @ 254

Velocidad de adquisición: 5 points/second Constante de tiempo:

1.0

Lavado de la aguja:

5/95 MeOH/H2O

Instrumento:

5

AU

6

20 µL

Concentración y diluyente de la muestra: 10 µg/mL in H2O

Alliance 2695 con PDA 2996 Compuestos

7

1. Nordoxepina 2. Trimetoprim

0.02

3. Nortriptilina 4. Doxepina 5. Imipramina

0.00 0.00

6. Amitriptilina

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

7.00

[ 13 ]

8.00

9.00

10.00

11.00 min

7. Trimipramina

O O

XBridge HILIC O O Si O

XBridge HILIC CH 3 O Si

Polar Group

CH La cromatografía de interacción hidrófila (HILIC, siglas inglesas) es una técnica cromatográfica que puede emplearse para mejorar la retención de especies muy polares, que se retienen muy poco por cromatografía de fase reversa. Las columnas XBridge HILIC ofrecen una selectividad alternativa a las columnas de fase reversa, al tiempo que mejoran la forma de los picos, la retención y la vida útil de la columna, en comparación O O Si con las columnas HILIC con base de sílice. Gracias a la fuerte y consistente tecnología BEH, las columnas XBridge HILIC establecen un nuevo O estándar de rendimiento para las separaciones HILIC. 3

Características de la columna XBridge Shield RP18

Fase unida

Tipo de ligando

BEH no enlazado

Tamaños de partícula disponibles (µm)

2.5, 3.5, 5

Intervalo de pH

1-8

Límites de temp. a pH bajo

45 °C

Límites de temp. a pH alto

45 °C

Partícula BEH

Farmacopea de los Estados Unidos.

L3

Diámetro de poro*

130Å

Volumen de poro*

0.7 mL/g

Superficie*

185 m2/g

* Valores nominales.

RETENCIÓN MEJORADA

SELECTIVIDAD COMPLEMENTARIA

Los mecanismos de retención de HILIC son una compleja combinación de partición, intercambio iónico y enlaces de hidrógeno, dando lugar a una retención mejorada para analitos polares. La retención tiene lugar con una fase estacionaria polar en combinación con fases móviles compuestas de acetonitrilo a concentraciones superiores al 80%, que ofrecen una retención notablemente mayor que la fase reversa.

Las columnas XBridge HILIC ofrecen una selectividad complementaria a las columnas de fase reversa. En algunos casos, se observa una inversión del orden de elución, además de una mejor retención, lo cual puede ser ventajoso cuando se desarrollan separaciones ortogonales para analitos polares. 3

HO Colina

Compuestos

2

N+

1. 6-acetilmorfina 2. Morfina

1

3. Morfina-3-β-glucurónido

XBridge C18 de fase reversa

XBridge C18 de fase reversa Factor de retención = 0 3

1 2

V 0 = 0.33 min

XBridge HILIC XBridge HILIC

V 0 = 0.35 min

Factor de retención = 1,8 0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

1.4

1.6

1.8

2.0 min

El XBridge HILIC ofrece retención donde la fase reversa no consigue retención alguna.

0

1

2

3

4

5

6 min

XBridge HILIC ofrece una selectividad alternativa a la fase reversa. Los metabolitos polares de morfina se retienen más en condiciones HILIC. [ 14 ]

XBridge HILIC

ESTABILIDAD QUÍMICA Con frecuencia se necesita un pH intermedio en la fase móvil para alterar el estado de carga del analito o del sustrato, a fin de promover la retención. Para los materiales con base de sílice, esto provoca frecuentemente una disolución de las partículas, ocasionando una reducción de la vida útil de la columna. Las columnas XBridge HILIC están fabricadas con tecnología BEH, que permite una excepcional longevidad de la columna, permitiendo varios miles de inyecciones sin reducción del rendimiento debida a la degradación química. 1 3 2

Columna:

Inyección 10

XBridge HILIC, 2.1 x 50 mm, 3.5 μm

Fase móvil A:

Acetonitrilo:agua 95:5 con NH4+ CH3COO- 10 mM pH 5,5

Fase móvil B:

Acetonitrilo:agua 50:50 con NH4+ CH3COO- 10 mM pH 5,5

Caudal:

0.5 mL/min

Gradiente:

1 – 99% B a lo largo de 2 minutos, 1% B a 2,1 min, parar 0,4 min

Volumen de inyección:

2.0 μL

Temperatura:

30 ˚C

Detección:

UV @ 254 nm

Inyección1000 Compuestos 1. Uracilo 2. 5-fluorocitosina 3. Citosina

Inyección 2000

0

1

La XBridge HILIC muestra una excepcional resistencia química, que permite una prolongada vida útil de la columna.

2 min

SENSIBILIDAD MEJORADA PARA ESPECTROMETRÍA DE MASAS

PASOS REDUCIDOS DE MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS

La utilización de HILIC ha adquirido popularidad, principalmente debido a la amplia adopción de la espectrometría de masas como detector, y a la necesidad de mejorar la sensibilidad para la cuantificación de analitos polares. A diferencia de la fase reversa, que utiliza fases móviles altamente acuosas para inducir la retención de los compuestos polares, con HILIC se emplea una fase móvil rica en acetonitrilo. Esta fase móvil altamente orgánica se desolvata con facilidad, permitiendo una mejora en la eficacia de ionización y en la respuesta de la espectrometría de masas.

Cuando se utilizan métodos de extracción en fase sólida (SPE, siglas inglesas) para la limpieza de las muestras, con frecuencia se utiliza una fracción altamente orgánica, para eluir selectivamente los analitos de interés del dispositivo. Antes de inyectar esta fracción en una columna de fase reversa, hay que evaporar primero la fracción orgánica y después reconstituirla con una porción de disolvente acuoso. Estos dos pasos son frecuentemente los pasos más largos de un procedimiento de SPE. Con las columnas XBridge HILIC, la fracción altamente orgánica se puede inyectar directamente, con lo que se elimina la necesidad de evaporación y se aumenta el rendimiento de las muestras.

Intensidad 3.0 x 107

Opiáceos en plasma humano

HO

Placa µElution Oasis® MCS

2.0 x 107

O

H

Condicionar/equilibrar: 200 µL CH3OH/ 200 µL de H2O

NCH3

2

1

2

3.0 x 107

1.0 x 10

O

6-acetilmorfina 10 ng/mL añadidos a plasma humano

Intensidad

2.0 x 107

O

XBridge C18 de fase reversa

1.0 x 107

Respuesta 8,6 x

Respuesta 10,5 x

O HO

O

N+

HO

N+

2. Colina (Ch)

1. Acetilcolina (Ach)

Morfina 10 ng/mL añadidos a plasma humano

XBridge HILIC 0

0.2

Lavado 3: 200 µL CH3CN

H NCH3

O

7

1.0

2

4

Lavado 1:200 µL de HCOOH al 2% en H2O Lavado 2: 200 µL CH3OH

HO

1

Cargar: 300 µL de plasma humano enriquecido con un 2% H3PO4

Eluir: 50 µL de NH4OH al 5% en CH3CN Inyección directa del eluato: elimina los largos pasos de evaporación y reconstitución.

6 min

2.0 min

La XBridge HILIC ofrece una respuesta mejorada de la espectrometría de masas, permitiendo límites de detección más bajos.

La XBridge HILIC ofrece una inyección directa de los eluyentes de SPE, aumentando así el rendimiento de las muestras. [ 15 ]

Tecnología UPLC

En 2004, Waters revolucionó la ciencia de la separación por LC con la creación del sistema ACQUITY UltraPerformance LC (UPLC). Las separaciones de alta resolución por UPLC se realizan en un sistema capaz de utilizar plenamente unas columnas de LC que están eficazmente rellenas de partículas de menos de 2 µm, con tolerancia a la presión. La tecnología BEH es uno de los principales elementos habilitadores que hay tras esta nueva plataforma de separación, y ofrece la eficacia, resistencia e intervalo de pH necesarios para las separaciones por UPLC. Como las columnas ACQUITY UPLC BEH y las XBridge HPLC incorporan la misma tecnología BEH, los métodos se pueden transferir sin problemas entre estas plataformas de partículas. Las separaciones cromatográficas se pueden transferir sin esfuerzo entre la tecnología de UPLC, la escala analítica y la preparativa. Los usuarios de sistemas cromatográficos pueden aprovechar una amplia variedad de tamaños de partículas (esto es, 1,7, 2,5, 3,5, 5 y 10 µm) conservando la eficacia del método.

T ecnología UPLC: v elocidad y resolución

UPLC 0.08

Rs (2,3) = 2.90

Absorbancia a 270 nm

VELOCIDAD EXTREMA

2.1 x 30 mm, 1.7 µm

0.00

HPLC 0.04

VELOCIDAD CON RESOLUCIÓN

2.1 x 150 mm, 5.0 µm Rs (2,3) = 4.57

Absorbancia a 270 nm

0.00

5.00

10.00

15.00

20.00

CON VELOCIDAD

0.00 0.04

RESOLUCIÓN EXTREMA

0.00

1.50

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

2.1 x 100 mm, 1.7 µm Rs (2,3) = 6.18

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

2.1 x 150 mm, 1.7 µm Rs (2,3) = 7.42

Absorbancia a 270 nm

0.00

1.00

Rs (2,3) = 4.58

Absorbancia a 270 nm

0.04

RESOLUCIÓN

0.50

2.1 x 50 mm, 1.7 µm

Absorbancia a 270 nm

0.08

2.00

4.00

6.00 7.00

Para separaciones isocráticas, la resolución (Rs) es proporcional al tamaño de la partícula. Por tanto, las partículas más pequeñas ofrecen mayor resolución.

[ 16 ]

Desarrollo de métodos más rápido con la tecnología UPLC

HPLC

UPLC

Protocolo de desarrollo de métodos

Protocolo de desarrollo de métodos

pH 3 / Acetonitrilo

pH 3 / Acetonitrilo pH 3 / Metanol pH 10 / Acetonitrilo pH 10 / Metanol

pH 3 / Metanol

8 Horas TIEMPO TOTAL DE Screening pH 10 / Acetonitrilo

Tiempo de screening: 2 horas/columna x 4 columnas

pH 10 / Metanol

26.8 Horas TIEMPO TOTAL DE SCREENING Tiempo de análisis: 6,7 horas/columna x 4 columnas

El desarrollo de métodos utilizando un enfoque de screening sistemático es uno de los modos más rápidos y efectivos para crear nuevas separaciones de HPLC. Evaluando combinaciones de pH, química de la columna y modificador orgánico, se racionaliza la información necesaria para permitir una decisión segura acerca del modo de continuar con un método. Pero ¿y si los datos pudieran obtenerse aún más deprisa? La respuesta está en la tecnología de UPLC.

Se ilustra aquí un protocolo convencional de desarrollo de métodos utilizando tecnología HPLC y UPLC. Ambas técnicas proporcionan la misma cantidad de información. La diferencia es la cantidad de tiempo de laboratorio necesaria para obtener esta información. ¡En este ejemplo, la tecnología UPLC dio la respuesta en 1/3 del tiempo! Este protocolo completo se puede terminar en un solo día laborable, manteniendo la misma calidad de la información. La tecnología UPLC aumenta considerablemente la velocidad de desarrollo de métodos y la eficacia del funcionamiento de un laboratorio.

Tecnología PREPARATIVA OBD

Alcanza r un nuevo niv el de du ración de las columnas p re pa rat ivas La escasa vida útil y el rendimiento irregular de las columnas preparativas han sido fuente de inquietud significativa para el químico dedicado a la purificación. Hay que reducir el coste por purificación, y la pérdida de muestras por fallo prematuro de la columna debe ser reducida al mínimo. Tras muchos años de investigación acerca del relleno y del diseño de las columnas, Waters creó el diseño de columna preparativa con óptima densidad del lecho (OBD)*, resolviendo eficazmente estos problemas. Este formato es reconocido en el sector como el que ofrece las columnas preparativas más estables, eficaces y reproducibles. La combinación de los robustos rellenos XBridge y el diseño OBD eleva el rendimiento de las columnas preparativas a un nuevo nivel y garantiza una escalabilidad directa, una eficacia máxima y una larga vida útil de las columnas. *Patente del Reino Unido nº GB2408469.

Eficacia máxima/un 30% menos de contrapresión

Fase móvil A:

0,1% de DEA en agua

Compuestos

Fase móvil B:

0,1% de DEA en acetonitrilo

1. Labetolol (50 mg/mL) 2. Quinina (50 mg/mL)

Concentración de la muestra: 300 mg/mL en DMSO Instrumento:

Sistema

Detección:

UV @ 260 nm

3. Diltiacem (50 mg/mL)

AutoPurification®

4. Verapamilo (100 mg/mL) 5. Amitriptilina (50 mg/mL)

XTerra Prep MS C18, 19 x 50 mm, 5 µm Volumen de inyección: 660 µL 3

Carga total: 198 mg Presión máxima: 1000 psi

5 1

0

2

4

2

4

6

XBridge Prep C18, 19 x 50 mm, 5 µm

Caudal:

23.8 mL/min

Gradiente:

Tiempo



(min)

%A

%B



0.0

95

5



1.79

95

5



6.79

5

95



7.79

5

95

8

4 660 µL 6 0Volumen de 2 inyección:

Perfil

Maximum Contrapresión máxima: 700 psi 2

4

1

0

4

2

23.8 mL/min Tiempo



(min)

%A

%B



0.0

95

5

5

1.79

95

5

6.79

5

95



7.79

5

95

3

Carga total: 198 mg

10 min

Caudal: Gradiente: 10 min

8

6

8

Perfil

10 min

Las columnas XBridge Prep ofrecen la misma elevada capacidad de carga y fiabilidad que se espera de nuestros productos XTerra Prep, generando al tiempo menor contrapresión en la columna y mayor eficacia. 0

4

2

6

8

10 min

Transferencia directa Fase móvil A:

Acetato amónico 10 mM, pH 10

Compuestos

Fase móvil B:

Acetonitrilo/bicarbonato amónico 100 mM (90/10)

1. Econazol (100 mg/mL)

Caudal:

1,06 min/mL (ana); 18 min/mL (prep)

Gradiente:

Gradiente de 10 min, desde el 5% de A al 95% de B

Detección:

UV @ 270 nm

2. Miconazol (100 mg/mL) 0

1

4

6

Volumen de inyección: 510 µL

Carga total: 6 mg

Carga total: 102 mg

4

6

8

12

10

1

Volumen de inyección: 30 µL

2

8

14

16

18

20 min

14

16

18

20 min

2

XBridge Prep C18, 19 x 100 mm, 5 µm

XBridge C18, 4.6 x 100 mm, 5 µm

0

2

2

10

12

14

16

18

20 min

0

2

4

6

8

10

12

El diseño de la columna preparativa OBD ofrece una densidad del lecho relleno equivalente a la de la columna analítica, garantizando por tanto una transferencia directa. 0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

[ 18 ]

20 min

Tecnología PREPARATIVA OBD

Beneficios del pH en el aislamiento y en la pu rificación

Reducir el cost e am p liando la v ida út il de la columna

Carga de bases Bases

XBridge C18

1. Nordoxepina 2. Doxepina

100

1,2

3. Amitriptilina

x 5 en las ordenadas 3

%

0.1 mg

pH 2.3

-1 100

1

2

x 20 en las ordenadas 0.1 mg

3 %

pH 7

-8

100

2

1

0

0.5 mg

0

2

4

El diseño OBD muestra una resistencia excepcional al fallo mecánico del lecho cromatográfico y ofrece un rendimiento constante de una columna a otra, reduciendo el coste mediante una vida útil prolongada

3

%

6

8

La demanda de aislamiento rápido de compuestos con elevada pureza exige integridad y estabilidad de la columna preparativa. Las materias primas complejas, de escasa solubilidad, se disuelven con frecuencia en disolventes fuertes, como el DMSO. Esta combinación de escasa solubilidad y los choques de presión asociados a los grandes volúmenes de inyección de eluyente orgánico puro es la principal responsable del fallo precoz de la columna, y del colapso del lecho cromatográfico.

pH 10

10 min

El pH elevado para analitos básicos ofrece la mejor capacidad de carga, así como la mejor retención y separación. Carga de ácidos Ácidos

XBridge C18

1. Oxacilina

100

2. Cloxacilina

1

3. Dicloxacilina 2 3

%

0.8 mg

pH 2.3

0.3 mg

pH 7

0.2 mg

pH 10

Inyección 1

0

100

1

%

2

3

0 100

%

0

1

0

1

2

2 3

3 4

5

6

7 min

El pH bajo para analitos ácidos ofrece la más alta capacidad de carga, así como la mejor retención y separación.

Referencia bibliográfica Folleto de las columnas preparativas de óptima densidad del lecho (OBD). Referencia bibliográfica 720002336EN

[ 19 ]

Inyección 7.000

Tecnología de separación de péptidos

Las columnas con tecnología de separación de péptidos de Waters incorporan partículas con tecnología BEH. Están especialmente testadas con un mapa de péptidos para garantizar la estabilidad de los métodos de separación de péptidos, así como un comportamiento predecible, con la diversidad de muestras que se encuentran en proteómica, caracterización de proteínas y síntesis peptídica. Disponibles en tamaños de poro de 130 Å o de 300 Å y en tamaños de partícula desde 1,7 µm hasta 10 µm, ofrecen: n

Picos estrechos y simétricos para obtener la máxima resolución.

n

Excelente separación de una amplia diversidad de péptidos.

n

Excelente forma y retención de los picos en ácido fórmico y en ácido trifluoroacético, para obtener una óptima cromatografía.

n

Transferencia directa de los métodos desde la tecnología UPLC de menos de 2 µm hasta las separaciones preparatorias por HPLC

Las columnas con tecnología BEH pueden emplearse para aumentar la resolución de digestiones peptídicas complejas. Utilizando las partículas de UPLC BEH de 1,7 µm en dimensiones de columna más largas, el usuario de sistemas cromatográficos puede conseguir una resolución extrema. El poder de resolución de una columna de LC se puede expresar por su cociente de longitud a tamaño de partícula (l/dp). Las columnas con cocientes l/dp más elevados ofrecen mayor eficacia y se utilizan para las separaciones más difíciles. Un ejemplo serían las columnas ACQUITY UPLC BEH con tecnología de separación de péptidos, que están disponibles con una longitud de 150 mm. Su cociente l/dp es superior a 88.000 y ofrecen eficacias de > 35.000 placas por separación.

Ma pa p e pt ídico de mayor resolución con UPLC HPLC Capacidad de picos = 372

30

40

50

60

70

80

90 min

UPLC Capacidad de picos = 723

30

40

50

60

70

80

90 min

Se muestra arriba la resolución de una mezcla peptídica compleja de una digestión proteica con fosforilasa b. En comparación con el uso de tecnología tradicional de HPLC, se obtiene mejor resolución de los componentes en un sistema ACQUITY UPLC de Waters, utilizando columnas con tecnología de separación de péptidos de Waters, que contienen partículas BEH de 1,7 µm.

[ 20 ]

Tecnología de separación de oligonucleótidos

Las columnas con tecnología de separación de oligonucleótidos (OST, siglas inglesas) de Waters utilizan la tecnología BEH de partículas híbridas, y están disponibles en formatos de partículas de 1,7 µm para UPLC y de 2,5 µm para HPLC. Esto proporciona la flexibilidad necesaria para cubrir una amplia diversidad de necesidades analíticas y de purificación, sin dejar de ofrecer una excepcional resolución y vida útil de la columna. La separación de muestras de oligonucleótidos sintéticos destritilados se basa en el método convencional de cromatografía de fase reversa con par iónico. Las columnas ACQUITY UPLC OST C18 y XBridge OST C18 son las adecuadas para este tipo de análisis y ofrecen: n

Una eficacia de separación equivalente o mejor que la de los métodos PAGE-CGE o HPLC de intercambio iónico.

n

La capacidad de resolver largas secuencias de oligonucleótidos gracias a la mayor potencia de resolución obtenida empleando partículas de menos de 3 µm.

n

Una amplia oferta de columnas escalables para cubrir las necesidades de aislamiento de escala en el laboratorio.

n

Excepcional vida útil de la columna para reducir el coste por análisis.

Exc e p cional du ración de las columnas Separación de una cadena de un 55–25mero de oligodesoxitimidina destritilada Columna:

XBridge OST C18, 2.5 µm (2.1 x 50 mm)

Gradiente:

0 – 100% de B en 30 min (10-25% MeOH).

Fase móvil:

A: 10% de MeOH / 90% de (HFIP 385 mM + TEA 14,3 mM)

Caudal:

1.0 mL/min



B: 25% de MeOH / 75% de (HFIP 385 mM + TEA 14,3 mM)

Detección:

260 nm, 5 barridos por segundo

Sistema HPLC:

Alliance Bio 2796 de Waters con PDA

Temperatura de la columna TEA:

60 °C

Inyección nº 4

Inyección nº 1001

Las columnas XBridge OST C18 son adecuadas para la purificación de oligonucleótidos destritilados, debido a su disponibilidad en diversos tamaños de columna. El científico dedicado a la separación tiene la posibilidad de seleccionar el tamaño de columna más adecuado, basándose en la cantidad de muestra de oligonucleótido disponible. Esto permite la máxima resolución de los componentes y la máxima recuperación del producto de interés en secuencias fallidas no deseadas.

Guía de selección de columnas XBridge OST C18 para la purificación de oligonucleótidos destritilados. Columna (mm)

Carga de masas aprox. (µmoles)**

Caudal (mL/min)

2.1 x 50

0.04

0.2

4.6 x 50

0.20

1.0

10.0 x 50

1.00

4.5

19.0 x 50*

4.00

16.0

30.0 x 50*

9.00

40.0

50.0 x 50*

25.00

110.0

* Columna OST especial ** Los valores son solo aproximados y varían en función de la longitud del oligonucleótido, su composición de bases y el método de recogida de fracciones utilizado.

[ 21 ]

Soluciones XBridge: productos farmacéuticos

n

Análisis de cafeína y sus metabolitos

La cafeína es un estimulante del sistema nervioso central y del metabolismo, y se utiliza tanto en situaciones sociales como en medicina, para reducir la fatiga física y restaurar la alerta mental cuando se produce una debilidad o somnolencia inusuales. La cafeína estimula el sistema nervioso central primero a los niveles superiores, ocasionando un aumento de la alerta y de la vigilia, un raciocino más rápido y claro, mayor concentración y mejor coordinación corporal general.

Las columnas XBridge Fenilo ofrecen una separación rápida y consistente para el análisis de la cafeína y sus metabolitos.

Compuestos

3

XBridge Phenyl, 4.6 × 100 mm, 3.5 µm

1. Ácido 1,7-dimetilúrico

Columna: Número de referencia:

186003334

2. 1-metilxantina

Fase móvil A:

H 2O

3. Ácido 1,3-dimetilúrico

Fase móvil B:

ACN

4. 1,7-dimetilxantina

Fase móvil C:

100 mM NH4HCO3

5. Teobromina

Caudal:

1.0 mL/min

6. Cafeína

Gradiente:

Tiempo (min) 0.0



9.00 4

2 6 5 1

Perfil

%A

%B

%C

89

1

10

24

10

66

10.00

89

1

10

20.00

89

1

10

Volumen de inyección:

10 µL

Muestra:

Cafeína (10 µg/mL), teobromina (10 µg/mL), 1-metilxantina (10 µg/mL), ácido 1,3-dimetilúrico (10 µg/mL), 1,7-dimetilxantina (10 µg/mL), ácido 1,7-dimetilúrico (10 µg/mL) en H2O/NH4HCO3 (90/10)

Temp. de la columna:

30 °C

Temp. de la muestra:

15 °C

Detección:

UV @ 280 nm



Velocidad de adquisición: 5 puntos/s

0

n

2

4

6

Respuesta del filtro:

0.2

Instrumento:

Waters Alliance 2695 con PDA 2998

8 min

Análisis de estatinas

Las estatinas (o inhibidores de la HMG-CoA reductasa) forman una clase de agentes hipolipidemiantes, empleados como fármacos para reducir los niveles de colesterol en personas que padecen enfermedad cardiovascular o corren riesgo de padecerla. Reducen el colesterol inhibiendo la enzima HMG-CoA reductasa, que es una enzima limitadora de la velocidad de la vía del mevalonato, implicada en la síntesis del colesterol. La inhibición de esta enzima en el hígado estimula los receptores de LDL, ocasionando un aumento del aclaramiento de lipoproteínas de baja densidad (LDL, siglas inglesas) del torrente circulatorio, y una reducción de los niveles de colesterol en sangre. Además de la actividad liporreductora, las estatinas presentan propiedades ligadas a la prevención de la ateroesclerosis. Los investigadores especulan también que las estatinas ayudan a prevenir la enfermedad cardiovascular, inhibiendo la formación de trombos, estabilizando los niveles de placa, mejorando la función endotelial y moderando las respuestas inflamatorias.

Las columnas XBridge Shield RP18 separan eficazmente compuestos estrechamente relacionados, permitiendo su rápida identificación.

Compuestos

Columna:

XBridge Shield RP18, 4.6 x 50 mm, 3.5 µm

1. Pravastatina

Número de referencia:

186003042

2. Atorvastatina

Fase móvil A:

H2O

Fase móvil B:

ACN

3. Lovastatina 4. Simvastatina

2

Fase móvil C:

NH4HCO3 100 mM, pH 10

Caudal:

1.2 mL/min

Volumen de inyección:

20 µL

Concentración y diluyente de la muestra: 10 µg/mL en H2O 1

3

4

Temperatura:

30 °C

Detección:

UV @ 248

Velocidad de adquisición: 5 puntos/segundo

0

1

3

5

[ 22 ]

Filtro respuesta:

1.0

Lavado de la aguja:

5/95 MeOH/H2O

Instrumento:

Waters Alliance 2695 con PDA 2996

7 min

Soluciones XBridge: seguridad alimentaria

n

Análisis de aditivos y conservantes alimentarios

La sacarina es un edulcorante artificial. El ácido 4-hidroxibenzoico es conocido principalmente como la base para la preparación de sus ésteres, llamados parabenos, que se utilizan como conservantes. El ácido deshidroacético, el metil parabeno y el ácido sórbico son conservantes empleados en cosméticos y alimentos.

La columna XBridge Fenilo permitió una rápida cuantificación de los compuestos de interés. 1

3

2

Columna:

1. Sacarina

Número de referencia:

2. Ácido 4-hidroxibenzoico

Fase móvil A:

KH2PO4 20 mM, pH 2,5

3. Ácido sórbico

Fase móvil B:

ACN

4. Metilparabeno

Caudal:

1.0 mL/min

5. Ácido deshidroacético

Isocratic Mobile

5

4

XBridge Phenyl, 4.6 × 100 mm, 3.5 µm

Compuestos



186003334

Composición de la fase móvil isocrática:

75%A; 25%B

Volumen de inyección:

10 µL

Muestra:

Sacarina (100 µg/mL), ácido 4-hidroxibenzoico



(10 µg/mL), ácido deshidroacético



(100 µg/mL), metilparabeno (25 µg/mL),



ácido sórbico (10 µg/mL)



en KH2PO4/ACN (75/25)

Temperatura de la columna: 30 °C Temperatura de la muestra: 15 °C Detección:



UV @ 240 nm

Velocidad de adquisición: 5 puntos/s

1

n

2

3

4

5

Filtro respuesta:

0.2

IInstrumento:

Waters Alliance 2695 con PDA 2996

6 min

Análisis de patulina en zumo de manzana

La patulina es una micotoxina producida por varias especies de mohos, que puede aparecer en diversos alimentos, incluyendo cereales, frutas y quesos. De los hongos capaces de producir patulina, Penicillum expansum es el más común y se aísla con frecuencia en manzanas podridas. Debido a su toxicidad, diversos organismos reguladores han establecido una ingesta máxima diaria de patulina, siendo la inquietud principal el consumo de zumo de manzana por los niños.

En este método, la patulina se puede resolver completamente del hidroximetilfurfural, un compuesto interferente común.

Compuestos

Columna:

XBridge C18, 4.6 x 100 mm, 3.5 µm

1. Hidroximetilfurfural

Número de referencia:

186003033

2. Patulina

Fase móvil:

HCOOH:ACN (95:5, v/v) al 0,1%

Caudal:

0,75 mL/min

Temperatura:

25 °C

Detección:

276 nm

1 2

3

4

5

6 min

Los datos han sido ofrecidos por cortesía del Dr. Vural Gökmen, Departamento de Ingeniería Alimentaria, Universidad Hacettepe, Ankara, Turquía.

Literature Reference Para obtener notas de aplicación adicionales del XBridge, visitar www.waters.com/xbridge

[ 23 ]

Soluciones XBridge: medioambientales

n

Análisis de explosivos

El método EPA 8330 describe el uso de la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con detección ultravioleta (UV) para el análisis de muestras que contienen, o se sospecha que contienen, compuestos explosivos. El método 8330 permite la detección de explosivos en partes por mil millones (ppb, siglas inglesas) en tierra, agua y sedimentos.

Las columnas XBridge Fenilo separaron con precisión 14 compuestos explosivos en muestras de interés.

4 3



Compuestos

Columna:

XBridge Phenyl, 2.1 x 150 mm, 3.5 µm



1. HMX



2. RDX

Número de referencia:

186003324



3. 1,3,5-trinitrobenceno

Fase móvil:

Formiato amónico 10 mM/isopropanol



4. 1,3 dinitrobenceno

Caudal:

0.25 mL/min



5. Nitrobenceno

Inyección:

10 µL



6. TNT

Temperatura:

40 °C



7. Tetrilo

Detección

UV @ 254 nm



8. 2 amino-4,6 dinitrotolueno



9. 2,4 dinitrotolueno

Sistema:

Sistema Alliance HPLC de Waters con detector de absorbancia 2487 doble λ.



10. 4 amino-2,6 dinitrotolueno



11. 2,6 dinitrotolueno



12. 4-nitrotolueno



13. 2-nitrotolueno



14. 3-nitrotolueno

9

6 8

2

7

5

1

10

11

12

2

n

6

10

14

13

18

14

22 min

Análisis de derivatizados con DNPH

Los organismos reguladores de todo el mundo están interesados en medir el formaldehído y otros aldehídos en el aire. Muchos grupos dedicados a la salud pública están interesados en la implicación de estos aldehídos en la irritación respiratoria y sus posibles efectos cancerígenos con una exposición prolongada. Los fabricantes de productos que pueden contribuir a las emisiones de aldehídos al aire, así como contaminantes en interiores, son los fabricantes de materiales de construcción y productos de madera, tejidos y textiles, y empresas de automoción.

Las columnas XBridge C18 separan rápidamente los compuestos de interés para su cuantificación.

Columna:

1. Formaldehído-DNPH

Número de referencia:

2. Acetaldehído-DNPH

Fase móvil A:

H 2O

3. Acetona-DNPH

Fase móvil B:

ACN

4. Crotonaldehído-DNPH

Fase móvil C:

HCOOH al 0,2% en H2O

5. Ciclohexanona-DNPH

Caudal:

1.2 mL/min

Gradiente:

Tiempo (min) 0.0 2.67 6.67 7.33 11.00

Volumen de inyección:

10 µL

Muestra:

Acetaldehído-DNPH (10 µg/mL), acetona-DNPH (10 µg/mL), ciclohexanona-DNPH (10 µg/mL), formaldehído-DNPH (10 µg/mL), crotonaldehído-DNPH (10 µg/mL) en H2O/ACN (60/40)

5

4

2

186003334

%A 40 40 0 40 40

Perfil (min) %B % C 50 10 50 10 90 10 50 10 50 10

Temperatura de la muestra: 15 °C

UV @ 254 nm

Velocidad de adquisición: 5 puntos/s 3

1



Temperatura de la columna: 30 °C Detección:

1

XBridge Phenyl, 3.5 µm, 4.6 × 100 mm

Compuestos

3

5

[ 24 ]

Filtro respuesta:

0.2

Instrumento:

Waters Alliance 2695 con PDA 2996

7 min

Soluciones XBridge: medioambientales

n

Análisis de aldehídos y cetonas como derivados de la DNPH

Los métodos EPA T011, 554 y 8315 describen el uso de la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con detección ultravioleta (UV) para la identificación de aldehídos y cetonas, como derivados de la dinitrofenilhidracina (DNPH) en el agua potable (554); tierra, aire, agua, desechos o chimeneas obtenidos por el método 0011 (8315 opción 1) al aire libre (T011), y muestras obtenidas en aire de interiores por el método 0100 (8315 opción 2). Los métodos EPA 554 y 8315 opción 1 están dirigidos a los mismos 12 compuestos. Igualmente, los métodos EPA T011 y 8315 opción 2 están dirigidos a los mismos 15 compuestos. Varios analitos son comunes a los cuatro métodos.

En combinación con estos métodos EPA, las columnas XBridge Fenilo facilitaron la identificación efectiva de derivados de la DNPH en muestras medioambientales.

Columna:

2

1

4 3 5

XBridge Phenyl, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm

Número de referencia: 186003335 Fase móvil:

Agua/tetrahidrofurano/acetonitrilo

Caudal:

1.5 mL/min

Inyección:

20 µL cada uno de mezcla AccuStandard (M-8315-R1-DNPH y M-8315-R2-DNPH) diluida 1:5 en agua/acetonitrilo 40:60.

Temperatura:

35 °C

Detección:

UV @ 360 nm

Sistema:

Sistema Alliance HPLC de Waters con detección UV.

7

6

8 9

10

11 12

Derivados DNPH de

1. Formaldehído



2. Acetaldehído



3. Propanal



4. Crotonaldehído



5. Butanal



6. Ciclohexanona



7. Pentanal



8. Hexanal



9. Heptanal

10. Octanal 11. Nonanal 12. Decanal

4

6

8

10

2

1

12

14

16

18

20

22 min

4 12

3

13

11

6 5

Derivados DNPH de 7

8

9

10

14 15



1. Formaldehído



2. Acetaldehído



3. Acetona



4. Acroleína



5. Propanal



6. Crotonaldehído



7. Butanal



8. Benzaldehído



9. Isovaleraldehído

10. Pentanal 11. o-tolualdehído 12. p-tolualdehído 13. m-tolualdehído 14. Hexanal 15. 2-5 dimetilbenzaldehído

4

6

8

10

12

14

16

18

20 min

Referencia bibliográfica Para obtener notas de aplicación adicionales del XBridge, visitar www.waters.com/xbridge

[ 25 ]

Información para pedidos

Columnas analíticas XBridge

Dimensiones

Tipo

Tamaño de las

C18

C8

Shield RP18

Fenilo

HILIC

partículas 1.0 x 50 mm 2.1 x 10 mm 2.1 x 20 mm IS™ 2.1 x 30 mm 2.1 x 50 mm 3.0 x 20 mm IS 3.0 x 20 mm 3.0 x 30 mm 3.0 x 50 mm 4.6 x 20 mm IS 4.6 x 20 mm 4.6 x 30 mm 4.6 x 50 mm 4.6 x 75 mm

Columna Precolumna Columna Columna Columna Columna Precolumna Columna Columna Columna Precolumna Columna Columna Columna

2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm 2.5 µm

186003118 1860030561 186003201 186003084 186003085 186003087 1860030572 186003121 186003122 186003088 1860030582 186003089 186003090 186003124

186003164 1860030741 186003167 186003099 186003101 186003168 1860030752 186003169 186003170 186003172 1860030762 186003173 186003174 186003175

186003136 1860030651 186003139 186003091 186003092 186003140 1860030662 186003141 186003142 186003144 1860030672 186003145 186003096 186003146

186003306 1860033591 186003307 186003308 186003309 186003310 1860033602 186003311 186003312 186003313 1860033612 186003314 186003315 186003316

186004456 186004457 — — — 186004458 — 186004459 — 186004460 186004461

1.0 x 50 mm 1.0 x 100 mm 1.0 x 150 mm 2.1 x 10 mm 2.1 x 20 mm IS 2.1 x 30 mm 2.1 x 50 mm 2.1 x 100 mm 2.1 x 150 mm 3.0 x 20 mm IS 3.0 x 20 mm 3.0 x 30 mm 3.0 x 50 mm 3.0 x 100 mm 3.0 x 150 mm 4.6 x 20 mm IS 4.6 x 20 mm 4.6 x 30 mm 4.6 x 50 mm 4.6 x 75 mm 4.6 x 100 mm 4.6 x 150 mm 4.6 x 250 mm

Columna Columna Columna Precolumna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Precolumna Columna Columna Columna Columna Columna Precolumna Columna Columna Columna Columna Columna Columna

3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm

186003126 186003127 186003128 1860030591 186003019 186003020 186003021 186003022 186003023 186003024 1860030602 186003025 186003026 186003027 186003028 186003029 1860030612 186003030 186003031 186003032 186003033 186003034 186003943

186003177 186003178 186003179 1860030771 186003180 186003046 186003047 186003048 186003049 186003181 1860030782 186003182 186003050 186003051 186003052 186003183 1860030792 186003184 186003053 186003185 186003054 186003055 186003963

186003148 186003149 186003150 1860030681 186003151 186003035 186003036 186003037 186003038 186003152 1860030692 186003153 186003039 186003040 186003041 186003154 1860030702 186003155 186003042 186003043 186003044 186003045 186003964

186003317 186003318 186003319 1860033621 186003320 186003321 186003322 186003323 186003324 186003325 1860033632 186003326 186003327 186003328 186003329 186003330 1860033642 186003331 186003332 186003333 186003334 186003335 186003965

186004429 — — 186004430 — 186004431 186004432 186004433 186004434 — — — 186004435 186004436 — — 186004437 186004438 186004439 — 186004440 186004441 —

2.1 x 10 mm 2.1 x 20 mm IS 2.1 x 30 mm 2.1 x 50 mm 2.1 x 100 mm 2.1 x 150 mm 3.0 x 20 mm IS 3.0 x 20 mm 3.0 x 30 mm 3.0 x 50 mm 3.0 x 100 mm 3.0 x 150 mm 3.0 x 250 mm 4.6 x 20 mm IS 4.6 x 20 mm 4.6 x 30 mm 4.6 x 50 mm 4.6 x 75 mm 4.6 x 100 mm 4.6 x 150 mm 4.6 x 250 mm

Precolumna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Precolumna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Precolumna Columna Columna Columna Columna Columna Columna

5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm

1860030621 186003107 186003129 186003108 186003109 186003110 186003130 1860030632 186003111 186003131 186003132 186003112 186003133 186003134 1860030642 186003135 186003113 186003114 186003115 186003116 186003117

1860030801 186003186 186003187 186003011 186003012 186003013 186003188 1860030812 186003189 186003190 186003191 186003014 186003192 186003193 1860030822 186003194 186003015 186003195 186003016 186003017 186003018

1860030711 186003156 186003157 186002999 186003002 186003003 186003158 1860030722 186003159 186003160 186003004 186003005 186003161 186003162 1860030732 186003163 186003006 186003007 186003008 186003009 186003010

1860033661 186003336 186003337 186003338 186003339 186003340 186003341 1860033672 186003342 186003343 186003344 186003345 186003346 186003347 1860033682 186003348 186003349 186003350 186003351 186003352 186003353

186004442 — 186004443 186004444 186004445 186004446 — — — 186004447 186004448 — — — 186004449 186004450 186004451 — 186004452 186004453 186004454

Pedidos en línea en www.waters.com [ 26 ]

—

186004455 —

ordering informaton

XBridge Preparative Columns Dimensiones

Tipo

Tamaño de las partículas

C18

C8

Shield RP18

Fenilo

10 x 10 mm 10 x 50 mm 10 x 100 mm 10 x 150 mm 10 x 250 mm 19 x 10 mm OBD 19 x 30 mm OBD 19 x 50 mm OBD 19 x 100 mm OBD 19 x 150 mm OBD 19 x 250 mm OBD 30 x 50 mm OBD 30 x 75 mm OBD 30 x 100 mm OBD 30 x 150 mm OBD 30 x 150 mm OBD 50 x 50 mm OBD 50 x 100 mm OBD 50 x 150 mm OBD 50 x 250 mm

PreColumnaa Columna Columna Columna Columna PreColumnaa Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna

5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm

1860029721 186002973 186003255 186002974 186003256 1860029752 186002976 186002977 186002978 186002979 186004021 186002980 186002981 186002982 186003284 186004025 186003933 186003937 186003929 186004107

1860029911 186003264 186003265 186003266 186003267 1860029922 186003268 186002993 186002994 186002995 186004023 186002996 186003269 186002997 186003083 — 186003934 186003938 — —

1860029831 186003257 186003258 186003259 186003260 1860029842 186003261 186002985 186002986 186002987 186004022 186002988 186003262 186002989 186002990 — 186003935 186003939 — —

1860033541 186003271 186003272 186003273 186003274 1860033552 186003275 186003356 186003357 186003358 186004024 186003277 186003278 186003279 186003276 — 186003936 186003940 — —

10 x 10 mm 10 x 150 mm 10 x 250 mm OBD 19 x 10 mm OBD 19 x 50 mm OBD 19 x 100 mm OBD 19 x 150 mm OBD 19 x 250 mm OBD 30 x 100 mm OBD 30 x 150 mm OBD 30 x 250 mm OBD 50 x 50 mm OBD 50 x 100 mm OBD 50 x 150 mm OBD 50 x 250 mm

PreColumnaa Columna Columna PreColumnaa Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna Columna

10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm 10 µm

1860038893 186003890 186003891 1860038924 186003893 186003901 186003894 186003895 186003930 186003896 186003897 186003898 186003902 186003899 186003900

1860040033 186004004 186004005 1860040064 186004007 186004008 186004009 186004010 — 186004011 186004012 186004013 186004014 186004015 186004016

1860039883 186003989 186003990 1860039914 186003992 186003993 186003994 186003995 — 186003996 186003997 186003998 186003999 186004001 186004002

— — — — — — — — — — — — — — —

Tamaño de las

C18

C8

Shield RP18

Fenilo

186003766 186003767 186003768 186003769 186003770 186003771 186003772 186003773 186003774 186003775 186003776

186003777 186003778 186003779 186003780 186003781 186003782 186003783 186003784 186003785 186003786 186003787

186003788 186003789 186003790 186003791 186003792 186003793 186003794 186003795 186003796 186003797 186003798

186003799 186003800 186003801 186003802 186003803 186003804 186003805 186003806 186003807 186003808 186003809

XBridge Column Method Validation Kits Dimensiones

Tipo

partículas 2.1 x 100 mm 3.0 x 100 mm 3.0 x 150 mm 4.6 x 100 mm 4.6 x 150 mm 2.1 x 150 mm 3.0 x 100 mm 3.0 x 150 mm 4.6 x 100 mm 4.6 x 150 mm 4.6 x 250 mm 1

MVKit MVKit MVKit MVKit MVKit MVKit MVKit MVKit MVKit MVKit MVKit

3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 3.5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm 5 µm

Requiere soporte universal para precolumnas Sentry: 2,1 x 10 mm WAT097958

2 Requiere

soporte universal para precolumnas Sentry: 3,0 x 20 mm/4,6 x 20 mm WAT046910

3 Requiere

soporte para precolumnas preparativas de 10 x 10 mm 289000779

4 Requiere

soporte para precolumnas preparativas de 19 x 10 mm 186000709

Para obtener información acerca de pedidos de columnas ACQUITY UPLC, visite:

Para obtener información acerca de pedidos para bioseparación y análisis, visite:

www.waters.com/acquitycolumns

www.waters.com/biosep

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Oficinas de ventas Austria y exportación europea (Europa central sudoriental, CEI y Oriente Medio) 43 1 877 18 07 Australia 61 2 9933 1777 Bélgica 32 2 726 1000 Brasil 55 11 5094-3788 Canadá 1 800 252 4752 x2205 China 86 10 8586 8899 CEI/Rusia +7 495 3367000 República Checa 420 2 617 1 1384 Dinamarca 45 46 59 8080

Países Bajos 31 76 508 7200 Noruega 47 6 384 60 50 Polonia 48 22 833 4400 Puerto Rico 1 787 747 8445 Singapur 65 6273 1221 España 34 93 600 9300 Suecia 46 8 555 11 500 Suiza 41 56 676 70 00 Taiwán 886 2 2543 1898 Reino Unido 44 208 238 6100

Francia 33 1 30 48 72 00

Todos los demás países: Waters Corporation EE.UU. 1 508 478 2000 1 800 252 4752

Alemania 49 6196 400600

www.waters.com

Finlandia 09 5659 6288

Hong Kong 852 29 64 1800 Hungría 36 1 350 5086 India y subcontinente indio 91 80 2837 1900 Irlanda 353 1 448 1500 Italia 39 02 27 421 1 Japón 81 3 3471 7191 Corea 82 2 820 2700 México 52 55 5200 1860

El sistema de gestión de calidad de las instalaciones de fabricación de Waters en Taunton, Massachusetts y en Wexford, Irlanda, cumple los estándares de gestión de calidad y garantía de calidad de la norma internacional ISO 9001:2000. El sistema de gestión de calidad de Waters es auditado periódicamente por el organismo de registro para garantizar su cumplimiento.

©2008 Waters Corporation. Waters, T he Science of W hat’s Possible, OBD, Oasis, XBridge, SunFire, XTerra, BEH Technology, ACQUITY UPLC, Alliance, AflaTest, Atlantis, Symmetry, IS, ACQUITY, UPLC, UltraPerformance LC y AutoPurification son marcas comerciales de Waters Corporation. Todas las demás marcas comerciales pertenecen a sus respectivos propietarios. 720001255ES abril de 2008 SC-W P