[UK]

Coombsreactive Antisera Polyclonal Blood Grouping Reagents For the detection of red cell antigens in an indirect antiglobulintest [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] ◄ [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [ACT] [PRES]

808 120 808 131 808 141 808 145 808 150

5 ml 2 ml 2 ml 1 ml 1 ml

Anti-k (KEL2) Anti-Kpa (KEL3) Anti-Kpb (KEL4) Anti-Jsa (KEL6) Anti-Jsb (KEL7)

808 181 2 ml Anti-Jkb (JK2) 808 186 2 ml Anti-Fya (FY1) 808 191 2 ml Anti-Fyb (FY2) 808 216 2 ml Anti-Lua (LU1) 808 230 1 ml Anti-Xga (XG1)* 808 260 1 ml Anti-Wra (DI3)* 808 270 1 ml Anti-Dia (DI1)* Activity / Min.titer Preservative: < 0.1 % NaN3

| | | | | | 0197 | 0197 | 0197 | | | |

*

*H302; H312; H412; P273; P280; P312; P501

[IVD] Diagnostic reagent for in vitro use only To be used by trained laboratory personnel only. The [ACT] is printed on the vial label. Symbols are used according to regulation EN 980. Symbols not contained in regulation EN 980 are described.

Test purpose Coombsreactive Antisera are polyclonal reagents for the determination of red blood cell antigens of different blood type systems: Kell-system (k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb), Duffysystem (Fya, Fyb), Lutheran-system (Lua), Kidd-system (Jkb), Xg-system (Xga), Diegosystem (Dia, Wra). They are suited for the perfomance of an indirect antiglobulin-test in test tubes.

Test principle The test principle is a hemagglutination test. Red blood cell antigens react with corresponding antibodies in a test reagent. Immunoglobulins of the class IgG are able to bind to the corresponding red cell antigens. This does not result in a direct agglutination reaction. By adding polyspecific anti-human globulin the antibody coated red cells are linked to each other and agglutination results (indirect agglutination test).

Reagent Coombsreactive Antisera are polyclonal reagents. Their reactive component are IgG immunoglobulins. The antisera are reactive at 37°C. They are produced from human plasma and are suited for use in an indirect antiglobulin-test in test tubes as well as for the LISS method (e.g. MLB 2, see instructions for use of MLB 2). Anti-Jsa is not suitable for the LISS method. Polyclonal reagents from human plasma might be of a light brownish colour. Lypohilized reagents must be suspended with 1 ml distilled water prior to use. The bovine albumin used for the production of this reagent is purchased from BSEfree sources.

Materials required but not supplied • • • • • • •

•

Pipettes (drop volume 40-50 μl) Distilled water Isotonic saline Anti-Human-Globulin (e.g. Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 120, 804 115 and 804 130) MLB 2 [REF] 805205, 805200 IgG-coated reagent red cells (e.g. Coombscell-E [REF] 816 030) Glass tubes Laboratory centrifuge

Sample material

Interpretation of results Evaluating the reaction strength is corresponding to the Technical Manual (1): Reaction strength Agglutination 4+ One single agglutinate 3+ Several large agglutinates. 2+ Medium-size agglutinates, clear background. 1+ Small agglutinates, turbid background +/Barely visible agglutination, turbid background No agglutination

Performance characteristics and limitations of the method • • • • •

•

In case of negative results in an indirect antiglobulin-test, a repetition with antibody coated reagent cells should be carried out (e.g. Coombscell-E [REF] 816 030). Insufficient or inappropriate washing can lead to false negative reactions. Small amounts of residual sera/plasma can neutralize the Anti-Human Globulin. Strongly lipemic, icteric or microbiologically contaminated samples may lead to false results. In case of ambiguous results it is recommended to wash red blood cells at least 2 times. Anti-Dia contains additional antibodies against the low frequency antigen HUT (MNS19). HUT antigen is sensitive for Papain/Ficin. Dia antigen is resistant to Papain/Ficin. You might test with Papain/Ficin treated red blood cells to get a specific positive result. Conditions that may cause false positive result are: Contamination of sample or reagents Autoantibodies Improper storage or preparation of red blood cells Antibodies to antibiotics or other reagents Cold antibodies Positive Direct Anti-Globulin Test Unknown accompanying antibodies against low frequency antigens

In case of questionable results of unknown origin our Bio-Rad Service will assist you (phone: +49-6103-3130-611).

Shelf life Liquid reagents: After opening the reagent the product can be stored until its expiry date under proper storage conditions (2...8°C). The expiry date is printed on the label. Dry reagents (lyophilized): In the lyophilized state, the product can be stored until its expiry date under proper storage conditions. The expiry date is printed on the label. After resuspension in distilled water, the reagent can be stored up to 4 weeks at 2...8°C.

Warning and precautions The following hazard and precaution statements apply only for the lyophilized products Anti-Xga [REF] 808 230, Anti-Wra [REF] 808 260 and Anti-Dia [REF] 808 270: Hazard statements: • H302 Harmful if swallowed. • H312 Harmful in contact with skin. • H412 Harmful to aquatic life with long lasting effects. Precautionary statements: • P273 Avoid release to the environment. • P280 Wear protective gloves/protective clothing/eye protection. • P312 Call a POISON CENTER/doctor if you feel unwell. • P501 Dispose of contents/container to hazardous or special waste collection point. • Do not use damaged vials. • Turbidity or other visible changes may indicate a bacterial contamination. In this case the reagent must be discarded. • All handling techniques are to be performed according to the manufacturer’s instructions. Each deviation from these instructions is the sole responsibility of the user. • Used tests must be discarded as hazardous material. Waste management information can be found in the safety data sheet. • All materials of human origin used for this product were tested with FDA licensed methods for HbsAg, Anti-HCV and Anti-HIV-1/-2 and proved to be non-reactive. An infection with infectious diseases can be considered impossible. Nevertheless, all products of human origin must be regarded as potential transmitters of hepatitis, HIV or other infectious diseases. Appropriate safety precautions are recommended. Internal quality controls are recommended at regular intervals. For quality controls antisera are tested with reagent red cells carrying the corresponding heterozygous antigen.

References

(1) Technical Manual, 17th edition, Section 1, American Association of Blood Banks Key: Underline = Addition or significant change ◄= Deletion of text

Blood samples should be taken following general blood sampling guidelines. Fresh, non-hemolytic samples (native, EDTA or citrate blood) should be used. If needed prepare a red blood cell suspension from a centrifugated blood sample (e.g. 2 min. at 1000 x g) in isotonic saline as suspension medium.

Test procedure (indirect antiglobulin-test) Tube test 1. Prepare a 3 – 5 % suspension of the red cells in isotonic saline. 2. In an appropriately marked tube mix 1 drop reagent and 1 drop of red cell suspension. 3. Incubate for 30-60 minutes at 37°C. Incubate for 60 min. with Anti-Jsa. 4. Wash red cells three times with isotonic saline solution. Decant supernatant completely. 5. Add 2 drops of anti-human-globulin to the packed red cells and mix. 6. Centrifugate for 20 seconds at 800 - 1000 x g. 7. Gently dislodge cell button and observe for agglutination. A positive and a negative control should performed parallel.

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[DE]

Coombsreaktive Antiseren Polyklonale Blutgruppenreagenzien Zum Nachweis erythrozytärer Antigene im indirekten Antihumanglobulin-Test [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] ◄ [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [ACT] [PRES]

808 120 808 131 808 141 808 145 808 150

5 ml 2 ml 2 ml 1 ml 1 ml

Anti-k (KEL2) Anti-Kpa (KEL3) Anti-Kpb (KEL4) Anti-Jsa (KEL6) Anti-Jsb (KEL7)

808 181 2 ml Anti-Jkb (JK2) 808 186 2 ml Anti-Fya (FY1) 808 191 2 ml Anti-Fyb (FY2) 808 216 2 ml Anti-Lua (LU1) 808 230 1 ml Anti-Xga (XG1)* 808 260 1 ml Anti-Wra (DI3)* 808 270 1 ml Anti-Dia (DI1)* Activität / Mindesttiter Konserviert mit: < 0,1 % NaN3

6. 20 Sekunden bei 800 - 1000 x g zentrifugieren. 7. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen. Eine positive und eine negative Kontrolle sollten bei allen Untersuchungen mitgeführt werden.

Interpretation der Ergebnisse

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Die Bewertung der Reaktionsstärken erfolgt analog den Vorgaben des Technical Manual (1): Reaktionsstärke Agglutination 4+ Ein einziges Agglutinat 3+ Mehrere große Agglutinate 2+ Mittelgroße Agglutinate, klarer Hintergrund 1+ Kleine Agglutinate, trüber Hintergrund +/Gerade noch sichtbare Agglutinate, trüber Hintergrund Keine Agglutinate

Leistungsmerkmale und Grenzen der Methode • • • • •

•

*H302; H312; H412; P273; P280; P312; P501

[IVD] Reagenz zur In-vitro-Diagnostik

Negative Ergebnisse im indirekten Antihumanglobulin-Test sollten mit antikörperbeladenen Testerythrozyten überprüft werden. ◄ Unzureichendes Waschen kann zu falsch negativen Reaktionen führen. Geringe Restmengen von Serum/Plasma können das Anti-Human Globulin neutralisieren. Stark lipämische, ikterische oder mikrobiell kontaminierte Proben können zu unzuverlässigen Testergebnissen führen. Bei unklaren Ergebnissen wird empfohlen die Erythrozyten mindestens 2 mal zu waschen. Anti-Dia enthält zusätzliche Antikörper gegen „low frequency antigens“ HUT (MNS19). HUT Antigene reagieren empfindlich gegenüber Papain/Ficin. Dia Antigene reagieren resistent gegen Papain/Ficin. Für ein spezifisches positives Ergebnis kann mit Papain/Ficin behandelten Erythrozyten getestet werden. Mögliche Ursachen für ein falsch positives Ergebnis sind: Kontamination der Probe oder des verwendeten Reagenz Autoantikörper Unzureichende Lagerung oder Vorbereitung der Erythrozyten Antikörper gegen Antibiotika oder andere Reagenz-bestandteile Kälteantikörper Positiver Direkter Anti-Globulin Test. Unbekannte Begleitantikörper gegen low frequency antigens

Nur für die Verwendung durch geschultes Laborpersonal. Der [ACT] ist dem Fläschchenetikett zu entnehmen. Symbole werden entsprechend der Norm EN 980 verwendet. In EN 980 nicht enthaltene Symbole sind im weiteren Text erklärt.

Bei zweifelhaften Ergebnissen unklarer Ursache steht der Bio-Rad-Service (Tel. 06103-3130-611) für Rückfragen zur Verfügung.

Verwendungszweck

Haltbarkeit

Coombsreaktive Antiseren sind polyklonale Reagenzien zur Bestimmung erythrozytärer Antigene von verschiedenen Blutgruppen-Systemen: Kell-System (k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb), Duffy-System (Fya, Fyb), Lutheran-System (Lua), Kidd-System (Jkb), Xg-System (Xga), Diego-System (Dia, Wra). Sie sind geeignet zur Durchführung des indirekten Antihumanglobulin-Tests im Röhrchen.

Testprinzip Das Testprinzip ist ein Hämagglutinationstest. Die Antigene der Erythrozyten reagieren mit den korrespondierenden Antikörpern im Testreagenz. Immunglobuline der Klasse IgG sind in der Lage an die korrespondierenden Antigene der Erythrozyten zu binden. Dies führt nicht zu einer direkten Agglutinationsreaktion. Durch Zugabe von polyspezifischem Anti-Human-Globulin werden die mit Antikörpern beladenen Erythrozyten vernetzt und es kommt zu einer Agglutinationsreaktion (Indirekter Antihumanglobulin-Test).

Reagenz Coombsreaktive Antiseren sind polyklonale Reagenzien und enthalten als reaktive Komponente Antikörper der Immunglobulin-Klasse IgG. Die Antiseren sind reaktiv bei 37°C. Sie werden aus Human-Plasma gewonnen und sind geeignet für den indirekten Antihumanglobulin-Test im Röhrchen und auch für die LISS-Methode (z.B. mit MLB 2 von Bio-Rad, siehe Gebrauchsinformation MLB 2). Anti-Jsa ist nicht für die LISSMethode geeignet. Die Flüssigreagenzien sind gebrauchsfertig. Polyklonale Reagenzien humanen Ursprungs können leicht bräunlich gefärbt sein. Die Trockenreagenzien (lyophilisiert) müssen vor Gebrauch mit 1 ml Aqua dest. aufgelöst werden. Das bei der Herstellung der Reagenzien verwendete Rinderalbumin wird nur aus BSE-freien Beständen bezogen.

Zusätzlich benötigte Reagenzien und Materialien • • • • • • • •

Pipetten (Tropfenvolumen 40-50 μl) Aqua dest. Isotone Kochsalzlösung Anti-Human-Globulin (z. B. Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 120, 804 115 und 804 130) MLB 2 [REF] 805 205, 805 200 IgG-sensibilisierte Erythrozyten (z. B. Coombscell-E [REF] 816 030) Glasröhrchen Laborzentrifuge

Probenmaterial Blutproben werden nach allgemeingültigen Entnahmeverfahren gewonnen. Es sollten frische, nicht hämolytische Proben (Nativ-, EDTA- oder Citratblut) verwendet werden. Wird für die Durchführung der Methode eine Erythrozytensuspension benötigt, wird diese aus den Erythrozyten der abzentrifugierten Blutprobe (z. B. 2 Min. bei 1000 x g) mit isotoner Kochsalzlösung als Suspensionsmedium erstellt.

Testdurchführung (Indirekter Antihumanglobulin-Test)

Flüssigreagenzien: Nach Öffnung des Reagenzes ist das Produkt bei sachgemäßer Lagerung (2...8°C) bis zum Ende der angegebenen Laufzeit haltbar. Die Laufzeit ist dem Reagenzienetikett zu entnehmen. Trockenreagenzien (lyophilisiert): Im lyophilisierten Zustand ist das Produkt bei sachgemäßer Lagerung bis zum Ende der auf dem Reagenzienetikett angegebenen Laufzeit haltbar. Nach Auflösung kann das Reagenz 4 Wochen im Kühlschrank bei 2...8°C aufbewahrt werden.

Warnhinweise und Vorsichtsmaßregeln Die folgenden Gefahrenhinweise und Vorsichtsmaßregeln gelten nur für lyophilisierte Produkte: Anti-Xga [REF] 808 230, Anti-Wra [REF] 808 260 und Anti-Dia [REF] 808 270: Gefahrenhinweise: • H302 Gesundheitsschädlich bei Verschlucken. • H312 Gesundheitsschädlich bei Hautkontakt. • H412 Schädlich für Wasserorganismen, mit langfristiger Wirkung. Sicherheitshinweise: • P273 Freisetzung in die Umwelt vermeiden. • P280 Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen. • P312 Bei Unwohlsein GIFTINFORMATIONSZENTRUM/Arzt anrufen. • P501 Inhalt/Behälter der Problemabfallentsorgung zuführen. • Bei beschädigten Fläschchen darf das Produkt nicht mehr verwendet werden. • Eine Trübung oder andere sichtbare Veränderungen des Produktes können ein Hinweis auf bakterielle Verunreinigung sein. In diesem Fall darf das Produkt nicht eingesetzt werden, da die Ursache der Veränderung durch den Hersteller geklärt werden muss. • Alle Techniken sind nach den Vorgaben des Herstellers anzuwenden. Jede Abweichung von den Vorgaben des Herstellers liegt in der Verantwortung des Anwenders. • Alle Testreagenzien sollten als potentiell infektiös gehandhabt und die entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden. Informationen zur Entsorgung verwendeter Reagenzien sind dem Sicherheitsdatenblatt zu entnehmen. • Alle für diese Produkte verwendeten Materialien humanen Ursprungs werden mit FDA-lizensierten Methoden auf HbsAg, Anti-HCV und Anti-HIV-1/-2 geprüft und müssen sich als nicht reaktiv erweisen. Eine Infektion mit diesen infektiösen Erregern ist daher unwahrscheinlich. Dennoch sollten alle Produkte humanen Ursprungs als potentielle Überträger von Hepatitis, HIV oder anderen infektiösen Krankheitserregern behandelt werden. Angemessene Sicherheitsvorkehrungen werden empfohlen. Der Anwender muss eine regelmäßige interne Qualitätskontrolle durchführen. Dazu werden die Antiseren mit Testerythrozyten, die das korrespondierende Antigen in heterozygoter Ausprägung tragen, geprüft.

Literatur

(1) Technical Manual, 17th edition, Sect. 1, American Association of Blood Banks Schlüssel: Unterstrichen = Zusatz oder wichtige Änderung ◄= Entfernter Text

Röhrchentest 1. Die zu untersuchenden Erythrozyten 3 bis 5 %ig in isotoner Kochsalzlösung suspendieren. 2. In einem entsprechend beschrifteten Röhrchen je 1 Tropfen Reagenz und 1 Tropfen der Erythrozytensuspension vorlegen. 3. 30-60 Minuten bei 37°C inkubieren. Mit Anti-Jsa 60 Min. inkubieren. 4. Die Erythrozyten 3 mal mit isotoner Kochsalzlösung waschen. Den Überstand vollständig dekantieren. 5. Dem Sediment 2 Tropfen Anti-Human-Globulin zufügen und mischen.

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

186164/33 – 04/2016

[FR]

Antisérums réactifs de Coombs Réactifs polyclonaux pour la détermination d'antigènes érythrocytaires Pour la détection d´antigènes dans le test indirect à l´antiglobuline humaine [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] ◄ [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [ACT] [PRES]

808 120 808 131 808 141 808 145 808 150

5 ml 2 ml 2 ml 1 ml 1 ml

Anti-k (KEL2) Anti-Kpa (KEL3) Anti-Kpb (KEL4) Anti-Jsa (KEL6) Anti-Jsb (KEL7)

808 181 2 ml Anti-Jkb (JK2) 808 186 2 ml Anti-Fya (FY1) 808 191 2 ml Anti-Fyb (FY2) 808 216 2 ml Anti-Lua (LU1) 808 230 1 ml Anti-Xga (XG1)* 808 260 1 ml Anti-Wra (DI3)* 808 270 1 ml Anti-Dia (DI1)* Activité / Titre minimum Conservé avec: 0,1% de NaN3

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*

[IVD] Réactif pour diagnostic in vitro Le test ne doit être utilisé que par le personnel de laboratoire formé à cet effet. Le [ACT] sur l´étiquette du flacon. Les symboles sont utilisés conformément à la norme EN 980. Les symboles non visés dans la norme EN 980 sont expliqués dans le texte.

Application Les antisérums réactifs de Coombs sont des réactifs polyclonaux destinés à la détermination d´antigènes érythrocytaires de plusieurs systèmes de groupage sanguin: système Kell (k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb), système Duffy (Fya, Fyb), système Lutheran (Lua), système Kidd (Jkb), système Xg (Xga), système Diego (Dia, Wra). Ils sont aptes à être utilisés pour le test indirect à l´antiglobuline humaine en tube.

Principe du test Le test est basé sur le principe de l´hémagglutination. Les antigènes des érythrocytes de tests réagissent avec les anticorps correspondants contenus dans le réactif du test. Les immunoglobulines de la classe IgG ont la capacité de se fixer aux antigènes correspondants des érythrocytes. Ceci ne provoque pas de réaction directe d´agglutination. Par adjonction d´antiglobuline humaine polyspécifique, les érythrocytes chargés d´anticorps se lient les uns aux autres et il se produit une réaction d´agglutination (test indirect à l´antiglobuline humaine).

Réactif Les antisérums réactifs de Coombs sont des réactifs polyclonaux et contiennent, comme composant réactif, des anticorps de la classe des immunoglobulines IgG. Les antisérums sont réactifs à 37°C. Ils sont obtenus à partir de plasma humain et indiqués pour le test indirect à l´antiglobuline humaine en tube et aussi pour la méthode LISS (par ex. avec MLB 2, voir la notice d´emploi de MLB 2). Anti-Jsa n'est pas approprié pour la méthode LISS. Les réactifs liquides sont prêts à l´emploi. . Les réactifs polyclonaux de plasma humain peuvent être d'une couleur légèrement brunâtre. Les réactifs secs (lyophilisés) doivent être dissous avant l´emploi dans 1 ml d´eau distillée. L´albumine d´origine bovine utilisée pour la fabrication des réactifs provient de stocks certifiés libres de virus de l´ESB.

Réactifs et matériel supplémentaires

• • •

•

Interprétation des résultats L´évaluation de l'intensité de réaction s´opère conformément aux dispositions du Techn. Manual (1): Force de réaction Agglutination 4+ Une seule agglutination 3+ Quelques agglutinations grandes 2+ Agglutination moyenne, fond lucide 1+ Petite agglutination, fond turbide +/Moins visible agglutination, fond turbide Aucune agglutination

Performances et limites de méthodes • • • • •

•

*H302; H312; H412; P273; P280; P312; P501

• • • •

4. Laver les érythrocytes 3 fois avec une solution saline isotonique. Décanter ensuite intégralement le surnageant. 5. Ajouter au sédiment 2 gouttes d´antiglobuline humaine et mélanger. 6. Centrifuger pendant 20 sec à 800 - 1000 x g. 7. Observer l´agglutination en agitant doucement. Il convient d´inclure à chaque test un contrôle positif et négatif.

Pipettes (volume par goutte 40-50 µl) Eau destillée Solution saline isotonique Antiglobuline humaine (par ex. Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 120, 804 115 et 804 130) MLB 2 [REF] 805 205, 805 200 Erythrocytes de test sensibilisés à l´IgG Coombscell-E ([REF] 816 030) Tubes de verre Centrifugeuse de laboratoire

Echantillons Les échantillons sanguins sont prélevés selon des méthodes généralement reconnues. Il convient d´utiliser des échantillons sanguins frais, non hémolytiques (sang natif, avec EDTA ou citraté). Dans la mesure où la conduite du mode opératoire nécessite une suspension d´érythrocytes, celle-ci est confectionnée à partir des hématies de l´échantillon sanguin centrifugé (par. ex. 2 minutes à 1000 x g) avec une solution saline isotonique comme milieu de suspension.

En cas de résultats négatifs avec un test indirect à l'antiglobuline, refaire le test avec des hématies tests sensibilisées (Coombscell-E [REF] 816 030). Un lavage insuffisant ou inapproprié peut conduire à des réactions faussement négatives. Un résidu de faible quantité de sérum/plasma peut neutraliser les anti-immunoglobulines humaines. Des échantillons fortement lipémiques, ictériques ou microbiologiquement contaminés peuvent conduire à des résultats faussement négatifs. Si les résultats sont ambigus, il est recommandé de laver deux fois les érythrocytes. L' anti-Dia contient des anticorps contre l'antigène de faible fréquence HUT (MNS19). L'antigène HUT est sensible à la papaine/ficine. L'antigène Dia est résistant à la papaine/ficine. Pour avoir un résultat positif et spécifique les tests doivent être réalisés avec des érythrocytes traitées par la papaine/ficine. Causes possibles de résultats faux positifs: Contamination de l’échantillon ou des réactifs Auto-anticorps Stockage ou préparation impropre des érythrocytes Anticorps contre les antibiotiques ou autres réactifs Anticorps froids Test direct à l’antiglobuline positif Anticorps inconnus contre les antigènes de faible fréquence

En cas de résultats douteux dont la cause ne serait pas évidente, veuillez consulter le Bio-Rad-Service (Tél. +49-6103-3130-611) qui se tient à votre disposition.

Stabilité Réactifs liquides: Une fois le flacon ouvert et stocké adéquatement (2...8°C), le produit demeure stable jusqu´à la date de péremption indiquée. La date de péremption figure sur l´étiquette du réactif. Réactifs secs (lyophilisés): Sous forme lyophilisée et stocké adéquatement, le produit demeure stable jusqu´à la date de péremption indiquée sur l´étiquette. Après dissolution, le réactif peut être conservé pendant 4 semaines au frigidaire à 2...8 °C. Si le flacon est endommagé, le produit ne doit plus être utilisé.

Avertissements et précautions Les mentions de danger et conseils de prudence suivants ne s’appliquent qu’aux produits lyophilisés: Anti-Xga [REF] 808 230, Anti-Wra [REF] 808 260 et Anti-Dia [REF] 808 270: Avertissements de danger: • H302 Nocif en cas d'ingestion. • H312 Nocif par contact cutané. • H412 Nocif pour les organismes aquatiques, entraîne des effets néfastes à long terme. Consignes de sécurite: • P273 Éviter le rejet dans l'environnement. • P280 Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/du visage. • P312 Appeler un CENTRE ANTIPOISON/un médecin en cas de malaise. • P501 Éliminer le contenu/récipient dans un centre de collecte des déchets dangereux ou spéciaux. • Si le flacon est endommagé, le produit ne doit plus être utilisé. • Tout aspect turbide ou d'autres changements visibles du produit peuvent indiquer une contamination bactérienne. Dans ce cas, ne pas utiliser le produit, car le fabricant est dans l´obligation d´éclaircir la cause du changement de celuici. • Toutes les techniques doivent être appliquées conformément aux dispositions du fabricant. Toute dérogation aux instructions du fabricant relève de la responsabilité de l´utilisateur. • Tous les réactifs des essais doivent être considerés comme étant potentiellement infectieux. Les informations sur le traitement des réactifs utilisés peuvent être consultées sur la fiche technique de sécurité. • Tous les matériaux d´origine humaine utilisés pour la fabrication de ce produit sont soumis à un contrôle de HbsAg, anti-HCV et anti-HIV-1/-2, conformément à des méthodes homologuées par la FDA, et doivent s´avérer non réactifs. C´est pourquoi, une contamination par des agents infectieux est peu probable. Cependant, il est recommandé de considérer tous les produits d´origine humaine comme étant potentiellement porteurs der germes pathogènes infectieux. Il est conseillé de prendre les mesures de sécurité appropriées. ◄ L´utilisateur est tenu d´effectuer en interne un contrôle de qualité régulier. A cet effet, les antisérums sont contrôlés à l´aide des érythrocytes de test porteurs des antigènes à expression hétérozygote correspondants.

◄

Bibliographie

Mode opératoire (test indirect à l´antiglobuline humaine) Test en tube

Clé : Souligner = Addition ou modification significative ◄= Effacement du texte

(1) Technical Manual, 17th ed., Sect. 1, American Assoc. of Blood Banks

1. Mettre en suspension les érythrocytes à examiner dans une solution saline isotonique de 3 à 5 %. 2. Mélanger respectivement dans une tube adéquatement marquée 1 goutte de réactif et 1 goutte de suspension d´érythrocytes. 3. Incuber pendant 30-60 minutes à 37°C. Incuber avec Anti-Jsa 60 min.

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

186164/33 – 04/2016

[ES]

Antisueros reactivos de Coombs Para la detección de antígenos eritrocitarios en el test indirecto de antiglobulina humana Reaktivos Polyklonales para groupos sanguineos [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] ◄ [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [ACT] [PRES]

808 120 808 131 808 141 808 145 808 150

5 ml 2 ml 2 ml 1 ml 1 ml

Anti-k (KEL2) Anti-Kpa (KEL3) Anti-Kpb (KEL4) Anti-Jsa (KEL6) Anti-Jsb (KEL7)

808 181 2 ml Anti-Jkb (JK2) 808 186 2 ml Anti-Fya (FY1) 808 191 2 ml Anti-Fyb (FY2) 808 216 2 ml Anti-Lua (LU1) 808 230 1 ml Anti-Xga (XG1)* 808 260 1 ml Anti-Wra (DI3)* 808 270 1 ml Anti-Dia (DI1)* Actividad / titulo minimo Conservación: < 0,1% de NaN3

| | | | | | 0197 | 0197 | 0197 | | | |

4. Lavar los eritrocitos 3 veces con solución salina isotónica. Decantar el sobrenadante completamente. 5. Añadir 2 gotas de antiglobulina humana al sedimento y mezclar. 6. Centrifugar 20 segundos a 800 - 1000 x g. 7. Verificar la aglutinación agitando suavemente. Para todos los análisis se deberá efectuar paralelamente un control negativo y uno positivo.

Interpretación de los resultados La intensidad de reacción Manual (1): Intensidad de reacción 4+ 3+ 2+ 1+ +/• • • •

• *H302; H312; H412; P273; P280; P312; P501

[IVD] Reactivo para uso diagnóstico in vitro Para ser utilizado exclusivamente por personal cualificado de laboratorio. El [ACT] viene indicado en la etiqueta de los viales. Los símbolos se emplean de acuerdo con la norma EN 980. Los símbolos no contenidos en la norma EN 980 son explicados en el presente texto.

Finalidad prevista Los antisueros reactivos de Coombs son reactivos policlonales para la identificación de antígenos eritrocitarios de diversos sistemas de grupos sanguíneos: Sistema Kell (k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb), sistema Duffy (Fya, Fyb), sistema Lutheran (Lua), sistema Kidd (Jkb), sistema Xg (Xga), sistema Diego (Dia, Wra). Están indicados para la ejecución del test indirecto de antiglobulina humana en tubo de ensayo.

Principio del test El test se basa en el principio del test de hemaglutinación. Los antígenos de los eritrocitos reaccionan con los correspondientes anticuerpos presen-tes en el reactivo de ensayo. Las inmunoglobulinas de la clase IgG tienen la capacidad de unirse a los antígenos correspondientes de los eritrocitos. Esto no conduce a una reacción de aglutinación directa. Mediante la adición de antiglobulina humana poliespecífica, los eritrocitos cubiertos con anticuerpos se unen entre sí, originándose una reacción de aglutinación (test indirecto de antiglobulina humana).

Reactivo Los antisueros reactivos de Coombs son reactivos policlonales y contienen como componente reactivo los anticuerpos de la clase de inmunoglobulina IgG. Los antisueros son reactivos a una temperatura de 37°C. Se obtienen de plasma humano y están indicados para el test indirecto de antiglobulina humana en tubo de ensayo y también para el método LISS (p.ej. con MLB 2; véanse las instrucciones de empleo de MLB 2). Anti-Jsa no está indicado paral el metodo LISS. Los reactivos líquidos está listos para usar. Los reactivos policlonales de plasma humano peuden ser de un color marrón claro. Los reactivos liofilizados deben ser disueltos en 1 ml de agua destilada antes de ser usados. La albúmina de origen bovino empleada para la fabricación de reactivos, se obtiene de proveedores certificados libres de EEB.

Reactivos y materiales necesarios que no se suministran • • • • • • • •

Pipetas (volumen de dispensación: 40-50 μl) Agua destilada Solución salina isotónica Antiglobulina humana (p.ej. Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 120, 804 115 y 804 130) MLB 2 ([REF] 805 205, 805 200) Eritrocitos de ensayo sensibilizados con IgG Coombscell-E ([REF] 816 030) Tubos de ensayo de vidrio Centrifugadora de laboratorio

Muestras Las muestras de sangre se obtendrán según los métodos generalmente válidos. Se deben utilizar muestras frescas, que no presenten hemólisis (sangre nativa, con EDTA o con citrato). Si para la ejecución del análisis se require una suspensión eritrocitaria, ésta se prepará de los eritrocitos de la muestra de sangre centrifugada (p.ej. 2 min. a 1000 x g) con solución salina isotónica como medio de suspensión.

Procedimiento (Test indirecto de antiglobulina humana) Test en tubo 1. Suspender los eritrocitos que de desean analizar al 3-5 % en solución salina isotónica. 2. En un tubo adecuadamente rotulado verter 1 gota de reactivo y 1 gota de la suspensión eritrocitaria. 3. Incubar durante 30-60 minutos a 37°C. Incubar con Anti-Jsa durante 60 minutos.

Aglutinación Un solo aglutinado Varias grandes aglutinados Aglutinados medianos, fondo claro Aglutinados pequeños, fondo turbido Aglutinados apenas visible, fondo turbido Ningunos aglutinados

Características de funcionamiento y limitaciones del método

•

*

se evaluará de acuerdo con lo dispuesto en el Technical

En caso de resultados negativos en una prueba de anti-globulina humana indirecta, se debe repetir la prueba connun reactivo de células recubiertas de anticuerpos (por ejemplo Combscell-E [REF] 816 030). Un lavado insuficiente ó inadecuado puede llevarnos a resultados falsos negativos. Pequeñas cantidades de suero/plasma residuales pueden neutralizar la anti-globulina humana. Muestras fuertemente lipémicas, hemolizadas ó que presenten contaminación microbiana pueden conducir a resultados falsos. En caso de resultados confusos, se recomienda lavar los eritrocitos al menos 2 veces. El Anti-Dia contiene anticuerpos adicionales contra el antígeno HUT (MNS19) de baja frecuencia. El antígeno HUT es sensible a la Papaína/Ficina mientras que el antígeno Dia es resistente a la Papína/Ficina. Se pueden obtener resultados específicos haciendo la prueba con células tratadas con Papaína/Ficina. Posibles causas de un resultado fals Contaminación de la muestra o de los reactivos empleados Almacenamiento inadecuado o preparación incorrecta de los eritrocitos Autoanticuerpos Anticuerpos contra antibióticos Anticuerpos fríos Prueba de antiglobulina directa positiva Muestras considerablemente lipémicas o ictéricas

En caso de resultados dudosos de causa desconocido póngase en contacto con nuestro servicio Bio-Rad de atención al cliente (Tel. +49-6103-3130-611).

Estabilidad Reactivos líquidos: Una vez abierto el reactivo, el producto puede ser conservado en las condiciones adecuadas (2...8°C) hasta la fecha que se indica. La fecha de caducidad viene indicada en la etiqueta del reactivo. Reactivos liofilizados: En estado liofilizado el producto puede ser conservado en condiciones apropiadas hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del reactivo. Una vez disuelto el reactivo, se puede conservar 4 semanas en el frigorífico a una temperatura de 2...8°C.

Advertencias y precauciones Las declaraciones siguientes respecto al riesgo y a la precaución se refiere solamente a los productos liofilizados: Anti-Xga [REF] 808 230, Anti-Wra [REF] 808 260 et Anti-Dia [REF] 808 270: Advertencias de peligro: • H302 Nocivo en caso de ingestión. • H312 Nocivo en contacto con la piel. • H412 Nocivo para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos. Precauciones advertencia: • P273 Evitar su liberación al medio ambiente. • P280 Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección. • P312 Llamar a un CENTRO DE TOXICOLOGåA/médico si la persona se encuentra mal. • P501 Eliminar el contenido o el recipiente en un punto de recogida pública de residuos especiales o peligrosos. • No utilizar el producto si el vial está deteriorado. • Un enturbiamiento u otra alteración visible del producto puede ser indicio de contaminación bacterial. En este caso no se debe utilizar el reactivo, ya que la causa del alteración debe ser esclarecida por el fabricante. • Todas las técnicas se han de realizar de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El usuario es responsable de cualquier divergencia con respecto a tales instrucciones. • Todos los reactivos destinados al ensayo se deberían manejar como si fueran potencialmente infecciosos además de adoptar las correspondientes medidas de seguridad. Se puede sacar las informaciones como desechar los reactivos ya usados de la ficha de datos de seguridad. • Todos los materiales de origen humano empleados para la elaboración de este producto han sido testados para la detección de HbsAg, Anti-HCV y Anti-HIV-1/2 según métodos validados de la FDA y han resultado no reactivos. Una infección con tales agentes infecciosos es por tanto improbable. No obstante, todas las sustancias de origen humano deberán ser consideradas como potenciales portadores de hepatitis, HIV u otros agentes infecciosos. Se recomienda adoptar las precauciones adecuadas. El usuario deberá efectuar controles internos de calidad en intervalos regulares. Para ello se examinarán los antisueros con eritrocitos de ensayo que sean portadores de los antígenos heterocigóticos correspondientes.

Referencias

(1) Technical Manual, 17th ed., Sect. 1, American Association of Blood Banks

Clave: Subrayado = Adición o cambio significativo ◄= Texto borrado

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[IT]

Antisieri reattivi in Coombs

Interpretazione dei risultati

Per l'identificazione di antigeni eritrocitari nel test indiretto all'antiglobulina umana Reagenti policlonali per la determinazione dei gruppi sanguigni [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] ◄ [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [REF] [ACT] [PRES]

808 120 808 131 808 141 808 145 808 150

5 ml 2 ml 2 ml 1 ml 1 ml

Anti-k (KEL2) Anti-Kpa (KEL3) Anti-Kpb (KEL4) Anti-Jsa (KEL6) Anti-Jsb (KEL7) b

808 181 2 ml Anti-Jk (JK2) 808 186 2 ml Anti-Fya (FY1) 808 191 2 ml Anti-Fyb (FY2) 808 216 2 ml Anti-Lua (LU1) 808 230 1 ml Anti-Xga (XG1)* 808 260 1 ml Anti-Wra (DI3)* 808 270 1 ml Anti-Dia (DI1)* Attivitá / titolo minimo Conservato con : < 0,1% de NaN3

6. Centrifugare per 20 secondi a 800 - 1000 x g. 7. Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente. Per ciascuna analisi vanno effettuati un controllo positivo e un controllo negativo

| | | | | | 0197 | 0197 | 0197 | | | |

*

*H302; H312; H412; P273; P280; P312; P501

[IVD] Reagente per uso diagnostico in vitro Da utilizzare solo da parte di personale di laboratorio esperto ed addes-trato. Il [ACT] è riportato sull'etichetta del flacone. I simboli vengono utiliz-zati secondo la normativa EN 980. I simboli non riportati nella normativa EN 980 sono descritti nel testo.

La valutazione della forza di reazione viene eseguita secondo le istruzioni riportate nel Technical Manual (1): Forza di reazione Agglutinazione 4+ Un unico agglutinato 3+ Vari agglutinati grandi 2+ Agglutinati di medie dimensioni, in uno sfondo chiaro 1+ Piccoli agglutinati, in uno sfondo torbido +/Agglutinazione appena visibile, in uno sfondo torbido Nessuna agglutinazione

Caratteristiche delle prestazioni e limiti del metodo • • • • •

•

In caso di risultati negativi in un test indiretto all'antiglobulina, va eseguito un test di controllo con emazie test sensibilizzate con anticorpi (es. Coombscell-E [REF] 816 030). Lavaggi insufficienti o non corretti possono portare a reazioni falso negative. Piccoli quantitativi residui di siero/plasma possono neutralizzare l'antiglobulina umana. Campioni fortemente lipemici, itterici o microbiologicamente contaminati possono portare a risultati errati. In caso di risultati ambigui si raccomanda di lavare le emazie almeno due volte. Anti-Dia contiene anticorpi aggiuntivi contro l'antigene a bassa frequenza HUT (MNS19). L'antigene HUT è sensibile a Papaina/Ficina. L'antigene Dia è resistente a Papaina/Ficina. E' possibile utilizzare emazie trattate con Papaina/Ficina per ottenere specifici risultati positivi. Possibili cause di un risultato errato: Contaminazione di campione o reagenti Autoanticorpi Conservazione o preparazione degli eritrociti non corrette Anticorpi contro antibiotici o altri reagenti Anticorpi freddi Test all'antiglobulina diretto positivo Anticorpi associati non noti contro antigeni a bassa frequenza

In caso di risultati dubbi con causa ignota è possibile contattare l'assistenza Bio-Rad (Tel. +49-6103-3130-611) per chiarimenti.

Stabilità

Gli antisieri reattivi in Coombs sono reagenti policlonali per l'identificazione di antigeni eritrocitari di diversi sistemi di gruppi ematici: sistema Kell (k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb), sistema Duffy (Fya, Fyb), sistema Lutheran (Lua), sistema Kidd (Jkb), , sistema Xg (Xga), sistema Diego (Dia, Wra). Sono indicati per l'esecuzione del test indiretto all'antiglobulina umana in provetta.

Reagenti liquidi: una volta aperto il flacone, il reagente può essere conservato in condizioni appropriate (2...8°C) fino alla data di scadenza indicata. La data di scadenza è riportata sull'etichetta del reagente. Reagenti liofilizzati: allo stato liofilizzato il prodotto può essere conservato in condizioni appropriate fino alla data di scadenza indicata. La data di scadenza è riportata sull'etichetta del reagente. Dopo essere stato sciolto, il reagente può essere con-servato in frigorifero per 4 settimane ad una temperatura di 2...8°C.

Principio del test

Avvertenze e precauzioni

Finalità d'uso

Il test si basa sul principio di emoagglutinazione. Gli antigeni degli eritrociti reagiscono con gli anticorpi corrispondenti contenuti nel reagente. Le immunglobuline della classe IgG sono in grado di legarsi agli antigeni degli eritrociti corrispondenti. Ciò non porta ad una reazione di agglutinazione diretta. Con l'aggiunta di antiglubuline umane polispecifiche, gli eritrociti rivestiti con anticorpi vengono collegati gli uni agli altri, dando luogo ad una reazione di agglutinazione (test dell'antiglobulina umana indiretto).

Reagente Gli antisieri reattivi in Coombs sono reagenti policlonali e contengono quale componente reattivo gli anticorpi della classe immunoglobulinica IgG. Gli antisieri sono reattivi ad una tempera-tura di 37°C. Si ottengono da plasma umano e sono indicati per il test indiretto all'antiglobulina umana in provetta e per il metodo LISS (ad es. con MLB 2 ; si vedano le istruzioni d'uso MLB 2). Anti-Jsa è adatto al metodo LISS. I reagenti liquidi sono pronti all'uso. Reagenti Policlonali da plasma umano potrebbero essere di un colore tendente al marrone chiaro. Dissolvere i reagenti liofilizzati con 1 ml di acqua distillata prima dell'uso. L'albumina di origine bovina impiegata per la preparazione dei reagenti va acquistata unicamente da fornitori certificati contro la BSE.

Reagenti supplementari e materiali necessari • • • • • • •

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Pipette (volume di dispensazione: 40-50 μl) Acqua distillata Soluzione salina isotonica Antiglobuline umane (ad es. Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 120, 804 115 e 804 130) MLB 2 ([REF], 805 205, 805 200) Eritrociti IgG-sensibilizzati (ad es. Coombscell-E [REF] 816 030) Provette in vetro Centrifuga da laboratorio

Materiale in esame I campioni di sangue vanno prelevati secondo le procedure generalmente valide. Devono essere impiegati campioni freschi, che non presentino emolisi (sangue intero, con EDTA o citrato). Se per i procedimento è necessaria una sospensione eritrocitaria, questa viene preparata dagli eritrociti del campione de sangue centrifugato (ad es. 2 minuti a 1000 x g) con soluzione salina isotonica quale mezzo di sospensione.

Le seguenti indicazioni di pericolo e di precauzione si applicano solo per il liofilizzato: Anti-Xga [REF] 808 230, Anti-Wra [REF] 808 260 et Anti-Dia [REF] 808 270: Avvertenze generali di pericolo: • H302 Nocivo se ingerito. • H312 Nocivo per contatto con la pelle. • H412 Nocivo per gli organismi acquatici con effetti di lunga durata. Precauzionale suggerimento: • P273 Non disperdere nell'ambiente. • P280 Indossare guanti/indumenti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso. • P312 Contattare un CENTRO ANTIVELENI/un medico in caso di malessere. • P501 Smaltire il prodotto/recipiente in un punto di raccolta rifiuti pericolosi o speciali. • Se i flaconi dovessero risultare danneggiati, il prodotto non va più utilizzato. • L’eventuale presenza di torbidità o altri cambiamenti visibili nel prodotto possono essere indice di contaminazione batterica. In tal caso il prodotto non va utilizzato in quanto spetta al produttore chiarire la causa della cambiamenti. • Tutte le tecniche vanno impiegate secondo le istruzioni del produttore. L'utente è responsabile di qualsiasi deviazione da tali istruzioni. • Tutti i reagenti devono essere considerati come potenzialmente infettivi. Per questo motivo, si dovrebbero prendere le misure di sicurezza necessarie. Informazioni sulla gestione dei rifiuti si possono trovare nelle schede di sicurezza. • Tutti i materiali di origine umana impiegati per questi prodotti sono stati sottoposti ad analisi per la ricerca di HbsAg, Anti-HCV e Anti-HIV-1/-2 con metodi validati dalla FDA e sono risultati non reattivi. Un'infezione con tali agenti infettivi è pertanto improbabile. Tutta-via, tutti i prodotti di origine umana devono essere considerati come potenziali portatori di epatite, HIV o altri agenti patogeni infettivi. Si consigliano adeguate misure precau-zionali. L'utente deve effettuare regolarmente un controllo di qualità interno. Allo scopo, devono essere esaminati gli antisieri con delle emazie test, portatrici degli antigeni eterozigoti corrispondenti.

Bibliografia

(1) Technical Manual, 17th ed., Sect. 1, American Association of Blood Banks

Chiave: Sottolineatura = Aggiunta o cambiamento significativo ◄= Cancellazione di testo

Esecuzione del test (test dell'antiglobulina umana indiretto) Test in provetta 1. Gli eritrociti in esame vanno sospesi al 3-5 % in soluzione salina isotona. 2. Dispensare in una provetta opportunamente contrassegnata 1 goccia di reagente e 1 goccia di sospensione eritrocitaria. 3. Incubare per 30-60 minuti ad una temperatura di 37°C. Incubare con Anti-Jsa per 60 minuti. 4. Lavare gli eritrociti 3 volte con soluzione salina isotonica. Decantare completamente il surnatante. 5. Aggiungere 2 gocce di antiglobuline umane al sedimento e miscelare.

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