[UK]

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Seraclone Anti-Le (LE1)

For the detection of red blood cell characteristics Lea [REF]

808 404

2 ml

[PRES] Preservative 0.1 % NaN3 [ACT]

Activity / Min.titer

◄

[IVD] Diagnostic reagent for in vitro use only To be used by trained laboratory personnel only. The [ACT] is printed on the label. Symbols are used according to regulation EN 980. Symbols not contained in regulation EN 980 are described. Test purpose Seraclone™ Anti-Lea (LE1) is used for the determination of the Lea antigen of red blood cells using the tube test. Test principle The test principle is a hemagglutination test to detect the respective red cell antigens. The blood types Lea and Leb are defined by presence or absence of the Lea and Leb characteristics on red blood cells. The antigen Lea reacts specifically with the corresponding antibody in Seraclone™ Anti-Lea (LE1). A positive reaction is visible by agglutination. The reagent is used for tube testing. Reagent Seraclone™ Anti-Lea (LE1) contains monoclonal antibodies of the immunoglobulin class IgM. They are derived from hybridoma cell lines which are created by fusing mouse antibody producing B-lymphocytes with mouse myeloma cells and demonstrate consistent specificity and reproducibility characteristic for monoclonal antibodies. The bovine albumin used for the production of this reagent is purchased from BSE-free sources. Seraclone™ Anti-Lea (LE1) clone LEA2 Material required but not supplied • Pipettes (volume 50 μl) • Glass tubes • Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.3 ± 0.2 • MLB 2 • Laboratory centrifuge Specimen collection Fresh samples of clotted, EDTA or citrate anticoagulated whole blood collected following general blood sampling guidelines are acceptable. The specimen should be tested as soon as possible after collection. If testing is delayed, specimens should be stored at 2 to 8°C. Blood specimens exhibiting gross hemolysis or contamination should not be used. Clotted samples or those collected in EDTA may be tested within 7 days from collection. Donor blood stored in citrate anticoagulant may be tested until the expiration date of the donor unit. Test procedure 1. Prepare a 2 - 3% red cell suspension in PBS pH 7.3 ± 0.2 or prepare a 1.5 - 2% red cell suspension in MLB 2 2. In a properly marked tube mix 1 drop (approximately 50µl) of reagent and 1 drop (approximately 50 µl) of red cell suspension 3. Incubate 15 minutes at room temperature 4. Centrifuge 10 seconds at 800 – 1000 x g 5. Gently dislodge cell button and observe for agglutination A positive and negative control should be performed in parallel. Interpretation or results Evaluation of the reaction strength is carried out according to the Technical Manual (1): Reaction strength Agglutination 4+ One single agglutinate 3+ Several large agglutinates 2+ Medium-size agglutinates, clear background 1+ Small agglutinates, turbid background +/Barely visible agglutination, turbid background No agglutination Stability of the reaction Following centrifugation, all tube tests should be read immediately and results interpreted without delay. Time delays may cause a dissociation of the antigenantibody complexes resulting to false negative or more often weak positive reactions.

Performance characteristics and limitations of the method • Falsely positive or falsely negative test results can occur from bacterial or chemical contamination of test materials, inadequate incubation time or temperature, improper storage of materials, or omission of test reagents. • The Lewis antigen status varies greatly between the red cells of one individual and another. As a consequence, positive reactions obtained with specimens of different patients may vary in strength. In properly calibrated test systems, Seraclone™ Anti-Lea (LE1) should produce positive reactions of 2+ to 4+ with group B or O cells. Reactions weaker than 1+ with group B or O test or control red cells should be investigated, as they may be an indication that the environmental temperature, centrifugation speed or time, or volume of reagent or cell suspension used are not optimum or that the reagent is deteriorating. • Red cell Lewis antigens are known to deteriorate with age. Stronger test reactions will be obtained with red cells from fresh specimens than with older samples. • The red cells of most newborns will type as Le(a-b-) with murine monoclonal, animal, or human Anti-Lewis reagents. However, some infants’ specimens may be encountered that will produce weakly positive reactions in direct agglutination tests with murine monoclonal Anti-Le(a), but not with human or animal reagents of the same specificity. • The Lewis phenotypes of children under six years of age cannot be accurately determined. • The Le(a) and Le(b) antigens may be reduced during pregnancy. ◄ • The formulation (enhancing diluent in combination with antibody concentration) of Seraclone™ Anti-Lea (LE1) limits the test procedure to: - Tests must not be interpreted microscopically - Prolonged incubation time may increase rouleaux formation which might be interpreted as false positive results - Unspecific +/- results may be interpreted sometimes, but can clearly be differentiated from true positive results • Lewis substance present in human serum or plasma can neutralize the Lewis antibodies, thus red blood cells must be washed and resuspended in saline for testing. • It is recommended to use the Seraclone™ Anti-Lea (LE1) in parallel with Seraclone™ Anti-Leb (LE2). ◄ • Some conditions that may cause false results are: - Contamination of sample or reagent, - Improper storage or preparation of red blood cells - Autoantibodies - Antibodies to antibiotics - Cold antibodies - Positive Direct Anti-Globulin Test - Strongly lipemic or icteric samples In case of questionable results of unknown origin our Bio-Rad Service will assist you (phone: +49-6103-3130-611). Shelf Life Storage temperature of Seraclone™ Anti-Lea (LE1) is 2…8°C. After opening the reagent the product can be stored until its expiry date under proper storage conditions. The expiry date is printed on the label. Warning and precautions • Do not use damaged vials • Turbidity or other visible changes may indicate a bacterial contamination.In this case the reagent must be discarded. Do not use if turbid. ◄ • All handling techniques are to be performed according to the manufacturer’s instructions. If not, it is the sole responsibility of the user. • Used test material must be discarded as hazardous material. Waste management information can be found in the safety data sheet. • Because of biotechnological manufacturing of non-human monoclonal antibodies a contamination with infectious agents can be considered impossible. Nevertheless, all test reagents of biological origin must be regarded as potential transmitters of hepatitis, HIV or other infectious agents. Appropriate safety precautions are recommended. ◄ • The packaging of this product contains natural rubber latex which may cause allergic reactions. • The product contains sodium azide (NaN3), which may react with lead or copper plumbing to form explosive azides. If discarded in the sink, flush with large amounts of water to prevent the build-up of explosive metal azides. References th ◄ (1) Technical Manual, 17 edition, Section 1, American Association of Blood Banks Key: Underline = Addition or significant change ◄= Deletion of text

Quality control The reactivity of all blood typing reagents should be confirmed on each day of use. To confirm the reactivity or specificity of Bio-Rad monoclonal Seraclone™ Anti-Lea (LE1) Blood Grouping Reagent should be tested with antigen-positive (preferably from heterozygous individuals) and antigennegative red blood cells. The reagent is acceptable for use if it reacts only with antigen-positive red blood cells.

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[DE]

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Seraclone Anti-Le (LE1)

Zum Nachweis des erythrozytären Antigens Lea [REF]

808 404

2 ml

[PRES] Konservierung [ACT]

0,1 % NaN3

Aktivität / Mindesttiter

◄

[IVD] Reagenz zur In-vitro-Diagnostik Nur für die Verwendung durch geschultes Laborpersonal. Der [ACT] ist dem Etikett zu entnehmen. Symbole werden entsprechend der Norm EN 980 verwendet. In EN 980 nicht enthaltene Symbole sind im weiteren Text erklärt. Verwendungszweck Seraclone™ Anti-Lea (LE1) wird zum Nachweis des Blutgruppenmerkmals Lea eingesetzt. Testprinzip Das Testprinzip ist ein Hämagglutinationstest zum Nachweis des entsprechenden Erythrozyten-Antigens. Die Blutgruppen Lea und Leb werden durch das Vorhandensein oder Fehlen der Merkmale Lea und Leb auf den Erythrozyten definiert. Das Antigen Lea reagiert spezifisch mit dem korrespondierenden Antikörper in Seraclone™ Anti-Lea (LE1). Eine positive Reaktion wird durch eine Agglutination sichtbar. Das Reagenz wird im Röhrchentest eingesetzt. Reagenz (LE1)) enthält monoklonale Antikörper der Seraclone™ Anti-Lea Immunglobulinklasse IgM. Sie werden aus Hybridom-Zelllinien gewonnen, die durch Fusion von antikörperproduzierenden B-Lymphozyten der Maus mit Maus-Myelomzellen entstanden sind. Sie weisen daher die für monoklonale Antikörper geltende konstante Spezifität und Reproduzierbarkeit auf. Das bei der Herstellung der Reagenzien verwendete Rinderalbumin wird nur aus BSE-freien Beständen bezogen. Seraclone™ Anti-Lea (LE1) Klon LEA2 Zusätzlich benötigte Reagenzien und Materialien • Pipetten (Volumen 50 μl) • Glasröhrchen • Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7,3 ± 0,2 • MLB 2 • Laborzentrifuge Probenmaterial Die Verwendung frischer Nativ-, EDTA- oder Citrat-Vollblutproben, gewonnen nach den allgemein gültigen Entnahmeverfahren, ist zulässig. Die Blutproben sollten schnellstmöglich nach der Entnahme getestet werden. Verzögert sich die Testdurchführung sollten die Proben bei 2…8°C gelagert werden. Hämolytische oder kontaminierte Blutproben sollten nicht verwendet werden. Nativblute und EDTA-Blute sollten innerhalb 7 Tagen nach Abnahme getestet werden. Citratproben von Spendern können bis zum Verfallsdatum der Konserve verwendet werden. Testdurchführung 1. Die zu untersuchenden Erythrozyten 2 - 3%ig in PBS pH 7,3 ± 0,2 oder 1,5 - 2%ig in MLB 2 suspendieren 2. In einem entsprechend beschrifteten Röhrchen je 1 Tropfen Reagenz (ca. 50 µl) und 1 Tropfen (ca. 50 µl) der Erythrozytensuspension mischen. 3. 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 4. 10 Sekunden bei 800 – 1000 x g zentrifugieren 5. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen Eine positive und eine negative Kontrolle sollte bei allen Untersuchungen mitgeführt werden. Interpretation der Ergebnisse Die Bewertung der Reaktionsstärken erfolgt analog den Vorgaben des Technical Manual (1): Reaktionsstärke Agglutinationsbild 4+ Ein einziges Agglutinat 3+ Mehrere große Agglutinate 2+ Mittelgroße Agglutinate,klarer Hintergrund 1+ Kleine Agglutinate, trüber Hintergrund +/Gerade noch sichtbare Agglutinate, trüber Hintergrund Keine Agglutinate Stabilität der Reaktion Nach der Zentrifugation sollten alle Röhrchenteste sofort abgelesen und die Resultate ohne Verzögerungen interpretiert werden. Der AntigenAntikörperkomplex kann sich aufgrund einer verzögerten Ablesung wieder lösen. Dies kann zu falsch negativen oder häufiger zu schwachen Reaktionen führen. Qualitätskontrolle Die Reaktivität aller Blutgruppenreagenzien sollte an jedem Tag der Verwendung überprüft werden. Um die Reaktivität und Spezifität von Seraclone™ Anti-Lea (LE1) zu bestätigen, sollte mit Antigen positiven (vorzugsweise von heterozygoten Zellen) und Antigen negativen Erythrozyten getestet werden. Das Reagenz ist für den Gebrauch geeignet, wenn es nur mit den Antigen positiven Erythrozyten reagiert.

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

Leistungsmerkmale und Grenzen der Methode • Falsch positive oder falsch negative Testresultate können durch bakterielle oder chemische Kontamination des Testmaterials, inadäquate Inkubationzeit oder -temperatur, falsche Lagerung der Materialien oder fehlende Zugabe der Testreagenzien auftreten. • Der Lewis Antigenstatus der Erythrozyten variiert von Individuum zu Individuum beträchtlich. Deshalb können Positiv-Reaktionen mit Proben verschiedener Patienten in der Stärke variieren. In regelgerecht kalibrierten Testsystemen sollte Seraclone™ Anti-Lea (LE1) positive Reaktionen von 2+ bis 4+ mit Zellen der Blutgruppe B oder O zeigen. Reaktionen, die schwächer als 1+ mit Zellen Blutgruppe B oder O oder Kontrollzellen reagieren, sollten untersucht werden, da dies ein Zeichen dafür sein könnte, dass die Umgebungstemperatur, die Zentrifugationsgeschwindigkeit oder –zeit, das Volumen des Reagenz oder der verwendeten Zellensuspension nicht im Optimum sind oder das Reagenz nicht einsatzfähig ist. • Von Lewis-Antigenen an Erythrozyten ist bekannt, dass sie bei Alterung schlechter nachweisbar sind. Mit Erythrozyten frischer Proben erhält man stärkere Reaktionen als mit älteren. • Die Erythrozyten der meisten Neugeborenen werden mit monoklonalen, tierischen oder humanen Anti-Lewis Reagenzien als Le(a-b-) typisiert. Jedoch reagieren einige kindliche Proben schwach positiv in direkten Agglutinationstests mit monoklonalem Anti-Le(a) von der Maus, aber nicht mit humanen oder tierischen Reagenzien derselben Spezifität. • Die Lewis Phänotypen von Kindern unter 6 Jahren können nicht einwandfrei bestimmt werden. • Le(a) und Le(b) Antigene können während der Schwangerschaft vermindert sein. ◄ • Die Rezeptur (Verstärkermedium in Kombination mit der Antikörperkonzentration) von Seraclone™ Anti-Lea (LE1) bedingt folgende Einschränkungen: - Mikroskopische Interpretation der Ergebnisse ist nicht zulässig - Eine verlängerte Inkubation kann die Geldrollenbildung verstärken, die als falsch positives Ergebnis interpretiert werden kann - Unspezifische +/- Reaktionen können auftreten, sie können jedoch klar von richtig positiven Ergebnissen differenziert werden • Die im Plasma oder Serum vorhandene Lewis-Substanz kann LewisAntikörper neutralisieren, so dass Erythrozyten in Kochsalzlösung gewaschen und resuspendiert werden müssen. • Es wird empfohlen Seraclone™ Anti-Lea (LE1) parallel mit Seraclone™ Anti-Leb (LE2) zu verwenden. ◄ • Mögliche Ursachen für ein falsches Ergebnis: - Kontamination der Probe oder des verwendeten Reagenzes - Unzureichende Lagerung oder Vorbereitung der Erythrozyten - Autoantikörper - Antikörper gegen Antibiotika - Kälteantikörper - Positiver Direkter Anti-Globulin Test - Stark lipämische oder ikterische Proben Bei zweifelhaften Ergebnissen unklarer Ursache steht der Bio-Rad-Service (Tel. 06103–3130-611) für Rückfragen zur Verfügung. Haltbarkeit Die Lagerungstemperatur von Seraclone™ Anti-Lea (LE1) ist 2…8°C. Nach Öffnung des Reagenzes ist das Produkt bei sachgemäßer Lagerung bis zum Ende der angegebenen Laufzeit haltbar. Die Laufzeit ist dem Reagenzienetikett zu entnehmen. Warnhinweis und Vorsichtsmaßregeln • Beschädigte Fläschchen dürfen nicht mehr verwendet werden. • Eine Trübung des Produktes kann ein Hinweis auf bakterielle Verunreinigung sein. In diesem Fall darf das Produkt nicht eingesetzt werden. ◄ • Alle Techniken sind nach den Vorgaben des Herstellers anzuwenden. Jede Abweichung von den Vorgaben des Herstellers liegt in der Verantwortung des Anwenders. • Gebrauchtes Testmaterial muss als Gefahrgut betrachtet werden. Hinweise zur Entsorgung sind dem Sicherheitsdatenblatt zu entnehmen. • Durch die biotechnologische Herstellung der nicht humanen monoklonalen Antikörper ist das Risiko einer Kontamination durch infektiöse Krankheitserreger nahezu ausgeschlossen. Dennoch sollten alle Testreagenzien biologischen Ursprungs als potentielle Überträger von Hepatitis, HIV oder anderen infektiösen Krankheitserregern behandelt werden. Angemessene Sicherheitsvorkehrungen werden empfohlen. ◄ • Die Verpackung dieses Produktes enthält natürliches Latex welches allergische Reaktionen auslösen kann. • Das Produkt enthält Natriumazid (NaN3), welches mit Blei- oder Kupferrohren zu explosiven Aziden reagieren kann. Bei einer Entsorgung im Abfluss mit viel Wasser nachspülen, um die explosive Verbindung von Metallaziden zu verhindern. Literatur th ◄ (1) Technical Manual, 17 edition, Section 1, American Association of Blood Banks Schlüssel: Unterstrichen = Zusatz oder wichtige Änderung ◄= Entfernter Text

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[FR]

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a

Seraclone Anti-Le (LE1)

a

Pour la détection de l’antigène érythrocytaire Le (LE1) [REF]

808 404

2 ml

[PRES] Conservé avec [ACT]

0,1 % NaN3

Activité / Titre minimum

◄

[IVD] Réactif pour diagnostic in vitro Ne doit être utilisé que par le personnel de laboratoire formé à cet effet. Le [ACT] figure sur l´étiquette. Les symboles utilisés sont conformes à la norme EN 980. Les symboles non visés dans la norme EN 980 sont expliqués dans le texte. Application Seraclone™ Anti-Lea (LE1) est utilisé dans la méthode d’essai en éprouvettes pour détecter le marqueur du groupe sanguin Lea. Principe du test Le principe du test est basé sur l´hémagglutination qui décèle l´antigène correspondant des érythrocytes. Les groupes sanguins Lea et Leb sont définis par la présence ou l´absence des caractéristiques Lea et Leb sur les érythrocytes. Les antigènes Lea réagissent de façon spécifique aux anticorps correspondants de Seraclone™ Anti-Lea (LE1). L´agglutination met en évidence une réaction positive. Le réactif est utilisé pour le test en tube. Réactif Seraclone™ Anti-Lea (LE1) sont des anticorps monoclonaux de la classe des immunglobulines IgM. Ils proviennent de lignées d´hybridation cellulaire obtenues par fusion de lymphocytes B de souris, producteurs d´anticorps, avec des cellules de myélomes de souris. Ils présentent la spécificité et la reproductibilité constante caractéristique des anticorps monoclonaux. L´albumine d´origine bovine utilisée pour la fabrication des réactifs provient de stocks certifiés libres de virus de l´ESB. Seraclone™ Anti-Lea (LE1) Clone LEA2 Réactifs et matériel supplémentaires • Pipettes (volume 50 µl) • Tubes en verre • Tampon phosphate salin (PBS) pH 7,3 ± 0,2 • MLB 2 • Centrifugeuse de laboratoire Echantillons Il est possible d’utiliser des échantillons de sang frais total natif, EDTA ou citraté provenant des procédés de prélèvement courants. Les échantillons de sang doivent être testés le plus rapidement possible après le prélèvement. Si la réalisation de l’essai est retardée, les échantillons doivent être conservés entre 2…8°C. Il convient de ne pas utiliser les échantillons de sang hémolysés ou contaminés. Le sang natif et le sang EDTA doivent être testés dans un délai de 7 jours à compter du prélèvement. Les échantillons citratés peuvent être utilisés jusqu’à la date d’expiration de la poche de sang. Mode opératoire 1. Mettre en suspension les érythrocytes à analyser dans une solution PBS pH 7,3 ± 0,2 de 2 à 3 % ou dans MLB 2 de 1,5 à 2 %. 2. Déposer, dans un tube correctement identifé, respectivement 1 goutte (env. 50 µl) de réactif et 1 goutte (env. 50µl) de suspension d´érythrocytes. 3. Incuber pendant 15 minutes à température ambiante. 4. Centrifuger pendant 10 secondes à 800-1000 x g 5. Observer l´agglutination en secouant doucement. Chaque essai effectué doit inclure respectivement un contrôle positif et négatif. Interprétation des résultats L´évaluation des forces de réaction s´opère conformément dispositions du Technical Manual (1): Force de réaction Agglutination 4+ Une seule agglutination 3+ Quelques agglutinations grandes 2+ Agglutination moyenne, fond lucide 1+ Petite agglutination, fond turbide +/Moins visible agglutination, fond turbide Aucune agglutination

aux

Stabilité de la réaction Après centrifugation, toutes les éprouvettes doivent être lues et interprétées immédiatement sans délai. Tout délai peut entraîner une dissociation du complexe antigène-anticorps entraînant des réactions faussement négatives ou plus souvent des réactions faiblement positives. Contrôle de qualité Il convient d’examiner la réactivité de tous les réactifs pour la détermination du groupe sanguin le jour de leur utilisation. Pour confirmer la réactivité et la spécificité de Seraclone™ Anti-Lea (LE1), il convient d’effectuer des essais avec des érythrocytes à antigènes positifs (de préférence de cellules hétérozygotes) et des érythrocytes à antigènes négatifs. Le réactif peut être utilisé s’il réagit uniquement aux érythrocytes à antigènes positifs

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

Performances et limites de méthodes • Des résultats d’analyse faussement positifs ou faussement négatifs peuvent se produire suite à une contamination bactérienne ou chimique du matériel d’analyse, un temps ou une température d’incubation inadéquats, un stockage inadapté du matériel, ou l’omission des réactifs. • La quantité d’antigènes Lewis sur les hématies varie grandement d’un individu à l’autre. Par conséquent, les réactions positives obtenues avec les échantillons de différents patients peuvent varier en intensité. Dans des systèmes d’analyse proprement calibrés, Seraclone™ Anti-Lea (LE1) doit produire des réactions positives 2+ à 4+ avec des hématies du groupe B ou O. Les réactions d’intensité inférieure à 1+ avec les hématies de contrôle ou des groupes B ou O doivent être investiguées, car elles peuvent indiquer que la température ambiante, la vitesse ou le temps de centrifugation, ou le volume de réactif ou de suspension cellulaire utilisés ne sont pas optimums ou que le réactif se détériore. • Il est reconnu que les antigènes Lewis des hématies se détériorent avec le temps. Les réactions d’agglutination seront plus fortes avec des hématies provenant d’échantillons frais que celles obtenues avec des échantillons plus vieux. • Les hématies de la plupart des nouveaux-nés seront typées Le(a-b-) avec les réactifs Anti-Lewis monoclonaux murins, animaux, ou humains. Cependant, certains échantillons infantiles peuvent produire des réactions faiblement positives sur les tests d’agglutination directe avec l’Anti-Le(a) monoclonal murin, mais pas avec des réactifs d’origine humaine ou animale de la même spécificité. • Les phénotypes Lewis d’enfants de moins de six ans ne peuvent être déterminés avec précision. • Le nombre d’antigènes Le(a) et Le(b) peut diminuer durant la grossesse. ◄

•

La formulation (diluant en combinaison avec une concentration d’anticorps) de Seraclone™ Anti-Lea (LE1) limite les procédures de tests suivants : - Les tests ne doivent pas être interprétés microscopiquement. - Une prolongation du temps d’incubation peut entrainer la formation de rouleaux qui peuvent être interprétés comme des résultats faussement positifs. - Des résultats +/- non spécifiques peuvent parfois être interprétés, mais peuvent être clairement différenciés de vrais résultats positifs. • Les substances Lewis présentes dans le sérum ou le plasma humain peuvent neutraliser les anticorps Lewis, ces hématies doivent être lavées et remises en suspension dans un milieu salin pour les tests. • Il est recommandé d’utiliser Seraclone™ Anti-Lea (LE1) en parallèle avec Seraclone™ Anti-Leb (LE2). ◄ • Causes possibles de résultats faussés : - Contamination de l’échantillon ou du réactif utilisé - Stockage ou préparation impropre des érythrocytes - Auto-anticorps - Anticorps contre les antibiotiques - Anticorps froids - Test direct à l’antiglobuline positif - Échantillons très lipémiques ou ictériques En cas de résultats douteux dont la cause ne serait pas évidente, veuillez consulter le Bio-Rad-Service (Tel. +49-6103-3130-611) qui se tient à votre disposition. Durée de conservation Seraclone™ Anti-Lea (LE1) doit être conservé entre 2…8°C. Après ouverture du réactif, le produit conservé dans des conditions adéquates se conserve jusqu’au terme de la durée indiquée. La durée figure sur l’étiquette du réactif. Avertissements et précautions • Ne pas utiliser d’éprouvettes endommagées. • La turbidité du produit peut indiquer une contamination bactérienne. Dans ce cas, ne pas utiliser le produit. ◄ • Toutes les techniques doivent être utilisées conformément aux instructions du fabricant. Le non-respect des instructions du fabricant relève de la responsabilité de l’utilisateur qui devra le valider. • Tous les réactifs des essais doivent être considerés comme étant potentiellement infectieux. Les informations sur le traitement des réactifs utilisés peuvent être consultées sur la fiche technique de sécurité. • Grâce à la production des anticorps monoclonaux non humains par des procédés biotechnologiques, le risque de contamination par germes pathogènes infectieux est pratiquement exclu. Cependant, tous les produits d´origine non humaine doivent être considérés comme étant potentiellement porteurs des virus de l´hépatite, du VIH ou d´autres germes pathogènes. Il est conseillé de prendre les mesures de sécurité adéquates. ◄ • L’emballage de ce produit contient du latex naturel qui peut déclencher des réactions allergiques. • Le produit contient de l’azoture de sodium (NaN3) qui peut réagir avec la tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures explosifs. En cas de rejet dans les conduits d’évacuation, rincer à grande eau pour éviter la formation d’azotures métalliques explosifs.

Bibliographie th ◄ (1) Technical Manual, 17 edition, Section 1, American Association of Blood Banks Clé : Souligner = Addition ou modification significative ◄= Effacement du texte

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[ES]

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a

Seraclone Anti-Le (LE1)

Para determinar la presencia del antígeno eritrocitario Lea [REF]

808 404

2 ml

[PRES] Conservación [ACT]

0,1 % NaN3

Actividad / titulo minimo

◄

[IVD] Reactivo para uso diagnóstico in vitro Para ser utilizado exclusivamente por personal cualificado de laboratorio. El [ACT] viene indicado en la etiqueta. Los símbolos se emplean de acuerdo con la norma EN 980. Los símbolos no contenidos en la norma EN 980 son explicados en el presente texto. Finalidad prevista Seraclone™ Anti-Lea (LE1) se usa para determinar la caracteristíca del grupo sanguíneo Lea mediante método de tubo de ensayo. Principio del test El test se basa en el principio del test de hemaglutinación para la detección del correspondiente antígeno eritrocitario. Los grupos sanguíneos Lea y Leb son definidos por la presencia o ausencia de las propiedades Lea y Leb sobre los eritrocitos. El antígeno Lea reacciona de manera específica con el correspondiente anticuerpo contenido en Seraclone™ Anti-Lea (LE1). La reacción positiva es visible si se produce una aglutinación. El reactivo debe utilizarse para tests en tubos de ensayo. Reactivo Seraclone™ Anti-Lea (LE1) es un anticuerpo monoclonal de la clase de inmunoglobulina IgM. Se obtienen de líneas celulares de hibridoma que resultan de la fusión de linfocitos B de ratón productores de anticuerpos con mielomas de ratón. Presenta la especificidad y reproducibilidad constantes que son características bien conocidas de los anticuerpos monoclonales. La albúmina de origen bovino empleada para la fabricación de reactivos se adquiere únicamente de proveedores certificados libres de EEB. Seraclone™ Anti-Lea (LE1) clon LEA2 Reactivos y materiales necesarios que no se suministran • Pipetas (volumen: 50 μl) • Buffer Salino de Fosfatos (PBS) pH 7,3 ± 0,2 • MLB 2 • Tubos de ensayo de vidrio • Centrifugadora de laboratorio Muestras Se deben usar muestras frescas de sangre coagulada ó sangre anticoagulada con EDTA ó citrato, colectadas siguiendo las guías generales de obtención de muestras de sangre Si se prevé un retraso del ensayo, las muestras se han de almacenar a una temperatura de 2…8°C. No usar muestras hemolizadas o contaminadas. Las muestras de sangre recién sacada y las muestras con EDTA se tienen que analizar dentro de los 7 días siguientes a su obtención. La sangre de donantes almacenada en citrato como anticoagulante puede ser analizada hasta la fecha de caducidad de la bolsa de sangre del donador. Procedimiento 1. Suspender los eritrocitos que se desean analizar en PBS pH 7,3 ± 0,2 al 2 3% o en MLB 2 al 1,5 - 2%. 2. En un tubo adecuadamente rotulado verter 1 gota (aprox. 50 µl) de reactivo y 1 gota (aprox. 50µl) de suspensión eritrocitaria. 3. Dejar incubar 15 minutos a temperatura ambiente. 4. Centrifugar 10 segundos a 800–1000 x g 5. Verificar la aglutinación agitando suavemente. Para todos los análisis se deberá efectuar paralelamente un control negativo y uno positivo. Interpretación de los resultados La intensidad de reacción se evaluará de acuerdo con lo dispuesto en el Technical Manual (1): Intensidad de reacción Aglutinación 4+ Un solo aglutinado 3+ Varias grandes aglutinados 2+ Aglutinados medianos, fondo claro 1+ Aglutinados pequeños, fondo turbido +/Aglutinados apenas visible, fondo turbido Ningunos aglutinados Estabilidad de la reacción Después de la centrifugación, todos los tubos de ensayo deben ser leidos inmediatamente y los resultados interpretados sin ningún retraso. El retraso en la lectura puede causar una disociación de los complejos antígeno-anticuerpo dando resultados falsos negativos ó más frecuentemente dando reaccciones débiles positivas. Control de calidad Controlar la reactividad de los reactivos de grupos sanguíneos todos los días antes de su utilización. Para confirmar la reactividad ó especificidad del reactivo Seraclone™ Anti-Lea (LE1), se debe probar con eritrocitos positivos al antígeno (preferentemente con células heterocigotas) y eritrocitos negativos para el antígeno. El reactivo se podrá emplear, si sólo reacciona con los eritrocitos positivos.

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

Características de funcionamiento y limitaciones del método • Los resultados de test falsos, ya sean positivos o negativos, pueden producirse debido a la contaminación bacteriana o química de los materiales del test, a una temperatura impropia, un tiempo inadecuado de centrífuga, un almacenamiento incorrecto de los materiales, o bien a la omisión de los reactivos del test. • El estatus del antígeno de Lewis varia, de forma considerable, entre los hematíes de una persona a otra. Como consecuencia, las reacciones positivas obtenidas con muestras de diversos pacientes pueden llegar a variar en la fuerza. En los sistemas de test apropiadamente calibrados, el Seraclone™ Anti-Lea (LE1) deben producir reacciones positivas de 2+ o 4+ con los grupos B y los hematíes O. Las reacciones que ofrezcan un resultado más débil que 1+ con el grupo B y el test O, o bien con hematíes control, deben ser investigadas, ya que puede llegar a ser una señal inequívoca de que no se está aplicando correctamente la temperatura ambiental, el tiempo y velocidad de centrífuga, el volumen del reactivo o la resuspensión del hematíe. Por otro lado, también cabe la posibilidad, en caso de ocurrir todo lo mencionado, de que el reactivo se esté deteriorando. Se ha determinado que los antígenos de Lewis se deterioran con el paso del tiempo. • Se obtendrán reacciones de test más fuertes con los hematíes procedentes de muestras frescas que con aquellos de muestras más antiguas. • Los hematíes de la mayoría de los recién nacidos se determinan como Le(a-b-) mediante monoclonal de ratón, o bien con reactivos de origen humano o animal Anti-Lewis. Sin embargo, nos podemos encontrar con el caso de que algunas muestras de bebés, producirán reacciones débilmente positivas en los test directos de aglutinación con el monoclonal de ratón Anti-Le(a), aunque nunca con los reactivos de origen humano o animal de la misma especificidad. • Los fenotipos de Lewis de los niños menores de seis años no se pueden determinar con precisión. • Los antígenos Le(a) y Le(b) se pueden llegar a reducir durante el embarazo. ◄ • La formulación (el diluyente potenciador en combinación con la concentración de anticuerpos) de Seraclone™ Anti-Lea (LE1) presenta las siguientes limitaciones: - Los tests no deben interpretarse microscópicamente - Un tiempo de incubación prolongado podría favorecer la formación del fenómeno de Rouleaux, que se podría interpretar como resultados falsamente positivos - Resultados + / - inespecíficos podrían ser interpretados algunas veces, pero se pueden distinguir con claridad de los verdaderos resultados positivos. • La sustancia Lewis presente en el suero o plasma humano puede neutralizar los anticuerpos anti-Lewis. Los hematíes, por lo tanto, deben ser lavados y resuspendidos en una solución salina antes de comenzar el test. • Se recomienda utilizar el Seraclone™ Anti-Lea (LE1) en paralelo con Seraclone™ Anti-Leb (LE2). ◄ • Posibles causas de un resultado falso: - Contaminación de la muestra o de los reactivos empleados - Almacenamiento inadecuado o preparación incorrecta de los eritrocitos - Autoanticuerpos - Anticuerpos contra antibióticos - Anticuerpos fríos - Prueba de antiglobulina directa positiva - Muestras considerablemente lipémicas o ictéricas En caso de resultados dudosos de causa desconocida póngase en contacto con nuestro servicio Bio-Rad de atención al cliente (Tel. +49-6103-3130-611). Vida útil La temperatura adecuada de almacenamiento de Seraclone™ Anti-Lea (LE1) es de 2…8°C. Después de abrir el reactivo se puede conservar el producto hasta su fecha de caducidad siempre y cuando se almacene correctamente. La fecha de caducidad aparece en la etiqueta del reactivo. Advertencias y precauciones • No emplear el producto en caso de que el frasco estuviera dañado. • Turbidez ú otros cambios visibles podrían indicar contaminación bacteriana. No utilizar en caso de turbidez. • Todas las técnicas se han de realizar de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El usuario es responsable de cualquier divergencia con respecto a tales instrucciones. • Todos los reactivos destinados al ensayo se deberan manejar como si fueran potencialmente infecciosos. Se puede encontrar la información del manejo de desechos en la ficha de datos de seguridad. • Gracias a la producción biotecnológica de los anticuerpos monoclonales no humanos, el riesgo de contaminación por agentes infecciosos queda prácticamente descartado. No obstante, todos los reactivos de ensayo de origen biológico deberán ser considerados como potenciales portadores de hepatitis, HIV u otros agentes patógenos infecciosos. Se recomienda adoptar las precauciones adecuadas. ◄ • El envase de este producto contiene látex natural que puede generar reacciones alérgicas. • El producto contiene azida de sodio (NaN3) que puede formar azidas explosivas con metales como cobre y plomo. En caso de desechar el producto por el desagüe, dejar correr mucho agua para evitar la combinación explosiva de azidas metálicas.

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Referencias th ◄ (1) Technical Manual, 17 edition, Section 1, American Association of Blood Banks Clave: Subrayado = Adición o cambio significativo ◄= Texto borrado

[IT]

™

a

Seraclone Anti-Le (LE1)

Per la rilevazione dell’antigene eritrocitario Lea (LE1) [REF]

808 404

2 ml

[PRES] Conservato con 0,1 % NaN3 [ACT]

Attivitá / Titolo minimo

◄

[IVD] Reagente per uso diagnostico in vitro Da utilizzare solo da parte di personale di laboratorio esperto ed addestrato. Il [ACT] è riportato sull'etichetta. I simboli vengono utilizzati secondo la normativa EN 980. I simboli non riportati nella normativa EN 980 sono descritti nel testo. Uso previsto Il Seraclone™ Anti-Lea (LE1), viene impiegato per la rilevazione della caratteristica del gruppo sanguigno Lea col metodo in provetta. Principio del test Il test si basa sul principio del test di emoagglutinazione per individuare l'antigene eritrocitario corrispondente. I gruppi sanguigni Lea e Leb si definiscono tramite la presenza o l'assenza delle caratteristiche Lea e Leb sugli eritrociti. L’antigene Lea reagisce speficamente con anticorpo corrispondente in Seraclone™ Anti-Lea (LE1). La reazione positiva è visibile se avviene l'agglutinazione. Il reagente viene utilizzato per test in provetta. Reagente Seraclone™ Anti-Lea (LE1) contiene anticorpi monoclonali di classe immunoglobulinica IgM. Si ottengono da linee cellulari/ibridoma ottenuto dalla fusione di linfociti B produttori di anticorpi di topo e cellule di mieloma di topo. Presenta pertanto la specificità e la riproducibilità costanti ben note per gli anticorpi monoclonali. L'albumina di origine bovina impiegata per la preparazione dei reagenti viene acquistata unicamente da fornitori certificati contro la BSE. Seraclone™ Anti-Lea (LE1) clone LEA2 Ulteriori materiali richiesti • Pipette (volume: 50 μl) • Tampone fosfato salino (PBS) pH 7,3 ± 0,2 • MLB 2 • Provette in vetro • Centrifuga da laboratorio Raccolta di campioni È ammesso l’utilizzo di campioni freschi di sangue nativo o raccolto in EDTA o citratato, ottenuto secondo le procedure di raccolta generalmente valide. I campioni devono essere testati appena possibile dopo la raccolta. Se l’esecuzione del test viene ritardata, i campioni devono essere conservati a 2…8 °C. Non utilizzare campioni di sangue emolitici o contaminati. I campioni di sangue coagulato o raccolto in EDTA possono essere testati entro 14 giorni. I campioni di sangue con citratato di donatori possono essere testati fino alla data di scadenza della sacca. Esecuzione del test 1. Gli eritrociti in esame vanno sospesi al 2-3% in PBS pH 7,3 + 0,2 o al 1,5 - 2% in MLB 2. 2. Dispensare in una provetta opportunamente contrassegnata rispettivamente 1 goccia (circa 50 µl) di reagente e 1 goccia (circa 50µl) di sospensione eritrocitaria. 3. Incubare per 15 minuti a temperatura ambiente. 4. Centrifugare per 10 secondi a 800–1000 x g. 5. Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente. Per ciascuna analisi vanno effettuati un controllo positivo e un controllo negativo. Interpretazione dei risultati La valutazione della forza di reazione viene eseguita secondo le istruzioni riportate nel Technical Manual (1): Forza di reazione Agglutinazione 4+ Un unico agglutinato 3+ Vari agglutinati grandi 2+ Agglutinati di medie dimensioni, in uno sfondo chiaro 1+ Piccoli agglutinati, in uno sfondo torbido +/Agglutinazione appena visibile, in uno sfondo torbido Nessuna agglutinazione Stabilità della reazione Dopo la centrifugazione, tutte le provette devono essere lette immediatamente e i risultati interpretati subito. Ritardi nella lettura potrebbero causare una dissocaizione dei complessi antigene-anticorpo portando a risultati falsonegativi o più spesso a reazioni debolmente positive. Controllo di qualità La reattività di tutti i reagenti dei gruppi sanguigni deve essere verificata ogni giorno di utilizzo. Per confermare la reattività e la specificità di Seraclone™ Anti-Lea (LE1), il reagente deve essere testato con eritrociti positivi

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

all’antigene (preferibilmente da cellule eterozigoti) e negativi. Il reagente può essere impiegato se reagisce solo con gli eritrociti positivi per l’antigene. Caratteristiche delle prestazioni e limiti del metodo • Risultati del test falsamente positivi o falsamente negativi possono verificarsi per i seguenti motivi: contaminazione chimica o batteriologica dei materiali, tempi o temperatura di incubazione inadeguati, centrifugazione inadatta, conservazione dei materiali inadeguata, omissione di reagenti. • Lo stato dell’antigene Lewis varia enormemente da un individuo all’altro. Come conseguenza le reazioni positive ottenute con campioni di pazienti diversi potrebbero variare in intensità. In sistemi ben calibrati, Seraclone™ Anti-Lea (LE1) dovrebbe produrre reazioni da 2+ a 4+ con emazie di gruppo B o O. Reazioni inferiori a 1+ nei test con emazie di gruppo B o O oppure con emazie di controllo, dovrebbero essere verificate, in quanto potrebbero indicare che la temperatura dell’ambiente, la velocità o il tempo di centrifugazione, o il volume dei reagenti o la sospensione utilizzati non sono ottimali, oppure che il reagente si sta deteriorando. • E’ noto che gli antigeni Lewis si deteriorano nel tempo. Con campioni di emazie freschi si otterranno reazioni più intense rispetto a quelle ottenute con campioni più vecchi. • Le emazie della maggior parte dei neonati vengono tipizzate come Le(ab-) con reagenti Anti-Lewis, monoclonali murini, di origine animale o umana. Alcuni campioni di neonati potrebbero mostrare reazioni debolmente positive nel test di aggluinazione diretta con Anti-Le(a) monoclonale murino, ma non con reagenti di originale umana o animale aventi la stessa specificità. • I fenotipi Lewis dei bambini di età inferiore ai 6 anni non possono essere determinati in modo accurato. • I siti antigenici Le(a) e Le(b) potrebbero diminuire durante la gravidanza. ◄

La formulazione di Seraclone™ Anti-Lea (LE1) (mezzo potenziante in combinazione con la concentrazione degli anticorpi) porta alle seguenti limitazioni della procedura del test: - I test non devono essere interpretati microscopicamente - Un tempo d’incubazione prolungato può aumentare la formazioni di impilamenti che potrebbero essere interpretati come risultati falsi positivi - A volte si possono ottenere reazioni +/- non specifiche, che si possono però chiaramente distinguere dalle reazioni veramente positive • La sostanza di Lewis presente nel siero o nel plasma umano può neutralizzare gli anticorpi Anti-Lewis, quindi le emazie del campione per essere testate devono essere lavate e risospese in soluzione salina. • Si raccomanda di usare Seraclone™ Anti-Lea (LE1) in parallelo con Seraclone™ Anti-Leb (LE2). ◄ • Possibili cause di un risultato errato: - contaminazione del campione o del reagente utilizzato - conservazione o preparazione degli eritrociti non corrette - autoanticorpi - anticorpi contro gli antibiotici - anticorpi freddi - test antiglobulina diretto positivo - campioni fortemente lipemici o itterici. In caso di risultati dubbi con causa ignota è possibile contattare l'assistenza Bio-Rad (Tel. +49-61033130-611) per chiarimenti.

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Stabilità La temperatura di conservazione di Seraclone™ Anti-Lea (LE1) è 2…8°C. Una volta aperto il reagente, il prodotto può essere utilizzato fino alla scadenza indicata, se conservato in modo appropriato. La scadenza è indicata sull’etichetta del reagente. Avvertenze e precauzioni • Non utilizzare flaconcini danneggiati. • L’eventuale presenza di torbidità nel prodotto può essere indice di contaminazione batterica. In tal caso il prodotto non va utilizzato in quanto spetta al produttore chiarire la causa della torbidità. • Tutte le tecniche vanno impiegate secondo le istruzioni del produttore. L'utente è responsabile di qualsiasi deviazione da tali istruzioni. • Tutti i reagenti devono essere considerati come potenzialmente infettivi. Per questo motivo, si dovrebbero prendere le misure di sicurezza necessarie. Informazioni sulla gestione dei rifiuti si possono trovare nelle schede di sicurezza. • Grazie alla produzione biotecnologica degli anticorpi monoclonali non umani, il rischio di contaminazione con agenti patogeni infettivi può essere quasi escluso. Tuttavia, tutti i reagenti del test di origine biologica devono essere considerati come potenziali portatori di epatite, HIV o altri agenti patogeni infettivi. Si consigliano adeguate misure precauzionali. • La confezione di questo prodotto contiene lattice naturale, che può causare reazioni allergiche. • Il prodotto contiene sodio azide (NaN3), che può reagire con tubature di piombo o rame per formare azoturi esplosivi. Per smaltirlo, sciacquare lo scarico con acqua abbondante per evitare il rischio di formazione di azoturi metallici. Bibliografia th ◄ (1) Technical Manual, 17 edition, Section 1, American Association of Blood Banks Chiave: Sottolineatura = Aggiunta o cambiamento significativo ◄= Cancellazione di testo

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