Diagnóstico prenatal no Invasivo.

Dr. Mario Hidalgo Roco. Centro de Referencia Perinatal Oriente (CERPO) Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital “Dr. Luís Tisné Brousse” Campus Oriente, Facultad de Medicina, Universidad de Chile

Objetivos de la presentación. 1. 2. 3. 4. 5.

Definir diagnóstico prenatal no invasivo. Describir biología del cffDNA. Describir aplicaciones en práctica clínica Presentar principales ensayos relacionados. Presentar formas comerciales presentes en Chile.

Introducción Diagnóstico prenatal: Acciones que tienen como objetivo la detección "in útero" de los defectos congénitos. Incluye el proceso de estimación de riesgos de anomalías cromosómicas en gestaciones de bajo riesgo, el asesoramiento genético en gestaciones de alto riesgo y los procedimientos diagnósticos invasivos para poder realizar los estudios citogenéticos.

Diagnóstico Prenatal No Invasivo: - Diagnóstico v/s Cribado. - Objetivo: evitar procedimientos invasivos.

Introducción. • Técnicas de Diagnóstico prenatal: – Técnicas no invasivas: • US. • RNM – Técnicas mínimamente invasivas: • DNA fetal libre. • Diagnóstico genético preimplantacional. – Técnicas invasivas: • Biopsia de vellosidades coriales. • Amniocentesis. • Cordocentesis. Colllins et al, prenatal diagnosis: types and techniques, early human development 88, 2012.

Introducción Complicaciones de las técnicas invasivas De la Amnio – Cordocentesis.

De la CVS.

Diagnóstico Prenatal No Invasivo: Persigue disminuir la cantidad de procedimientos invasivos y por tanto, las complicaciones derivadas de ellos. Colllins et al, prenatal diagnosis: types and techniques, early human development 88, 2012.

Introducción. Historia: – Schmorl, 1893: presencia de células trofoblásticas en los pulmones y en circulación sanguínea de gestantes muertas por eclampsia. – Walknowska, 1969: aísla linfocitos fetales en sangre de portadoras de fetos varones (primera evidencia de células fetales). – Bianchi,1990: aisla eritroblastos fetales. – Bianchi, 1996: detectó linfocitos fetales años después del parto. – Lo, 1997: Presencia de cfDNA en circulación materna mediante la detección de secuencias del cromosoma Y en el plasma materno. 2011: introducción del diagnóstico prenatal no invasivo Alejandra Fernandez Fernandeza, Belen Prieto Garcıa y Francisco V. Alvarez Mene´ndezb,c,_Situacio´n actual del diagno´stico prenatal no invasivo, Rev Lab Clin. 2009;2(1):47–55

BIOLOGÍA DE DNA FETAL LIBRE EN SANGRE MATERNA

Biología del cffDNA circulante. • Origen: placentario. – Otros: apoptosis de células fetales intactas y transferencia de cfDNA.

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Pequeños fragmentos: 200 bp. Baja proporción: 9 – 20%. Se detecta desde las 5 semanas. Aumenta con EG: 29.3% cada semana. Tras el parto desaparece a las 2 horas (Clearence renal)

P. BENN*, H. CUCKLE† and E. PERGAMENT Non-invasive prenatal testing for aneuploidy: current status and future prospectsUltrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33 Published online in Wiley Online Library (wileyonlinelibrary.com). DOI: 10.1002/uog.12513

Biología del cffDNA circulante.

Nicolaides KH, Syngelaki A, Ashoor G, et al. Noninvasive prenatal testing for fetal trisomies in a routinely screened first-trimester population. Am J Obstet Gynecol 2012;207:374.e1-6.

Biología del cffDNA.

Diana W Bianchi, M.D The Use of NIPT to Detect Fetal Whole Chromosome and Sub-Chromosome Abnormalities cfDNA 2013 Copenhagen, Denmark

EL ANÁLISIS ES DEPENDIENTE DE LA FRACCIÓN FETAL.

Técnicas de secuenciación del cffDNA. • Secuenciación masiva en paralelo (shotgun). • Análisis digital de regiones seleccionadas (target)

Diana W Bianchi, M.D The Use of NIPT to Detect Fetal Whole Chromosome and Sub-Chromosome Abnormalities cfDNA 2013 Copenhagen, Denmark

Nicolaides KH, Syngelaki A, Ashoor G, et al. Noninvasive prenatal testing for fetal trisomies in a routinely screened first-trimester population. Am J Obstet Gynecol 2012;207:374.e1-6.

Técnicas de secuenciación del cffDNA.

Diana W Bianchi, M.D The Use of NIPT to Detect Fetal Whole Chromosome and SubChromosome Abnormalities cfDNA 2013 Copenhagen, Denmark

Técnicas de secuenciación.

pero para que todo esto sea realizable y comparable ….. Es muy importante la fracción fetal.

Fracción fetal. • MPS se lleva a cabo en la fracción materna y fetal. • La fracción fetal es la cantidad de cfDNA dividida por la cantidad total cfDNA. – Si la fracción fetal es más alta, más fácil es determinar la aneuploidía. – Si la fracción fetal es baja (. accedido en 08 agosto 2014.

DETECCIÓN DE ANEUPLOIDÍAS: DPNI EN ENSAYOS CLINICOS.

Cribado Clásico de Aneuploidías (2000)

Nicolaides KH, Syngelaki A, Ashoor G, et al. Noninvasive prenatal testing for fetal trisomies in a routinely screened first-trimester population. Am J Obstet Gynecol 2012;207:374.e1-6.

Cribado Plus de Aneuploidías (2000 – 2010)

Nicolaides KH, Syngelaki A, Ashoor G, et al. Noninvasive prenatal testing for fetal trisomies in a routinely screened first-trimester population. Am J Obstet Gynecol 2012;207:374.e1-6.

Resultados:

cffDNA

Cribado actual

Tasa detección T21

99%

98%

Tasa de detección T13 y 18

96%

96%

Procedimientos invasivos

1%

0.7%

– Tomado el cribado clásico – plus: • Se podría realizar cfDNA en 35, 20 y 11% de los casos en cribado solo, cribado combinado (+ PLGF y AFP) y crbiado combinado agregando (IPDV) – Conclusión del autor: • El cribado para aneuploidías de primer trimestre es bueno, pero puede ser mejorado si se agregan biomarcadores y el cfDNA.

Rendimiento para detección de aneuploidías.

• N = 118 euploides / 59 aneuploidías de Cromosmas sexuales. • DR: 43 / 47 (91.5%) en 45x. • DR: 5 / 47 (100%) • Falsos (+) 0%. Conclusión del autor: Análisis DNA MPS – target clasifica aneuploidías de cromosomas sexuales con alta sensibilidad.

Respecto a las otras aneuploidías el N es tan pequeño que no permite sacar conclusiones.

• Otros estudios: – Bianchi et al. MPS – S: • N = 482 • 20 casos: 45 x. – DR: 75% (15 casos) – 1 45x – 4 no clasificable. • 462 casos euploides: – Detectó 416 casos. – 1 falso positivo (45xy)

– Mazloom et al. MPS – S: • N = 411 • 21casos: 45 x. – DR: 81% (15 casos) – 3 no clasificable. • 390 casos euploides: – No clasificable: 18. – Falso positivo: 0.3

• Conclusión del autor: – Aparentemente el uso de la tecnología MPSS podría tener menor rendimiento al tener mayor variabilidad los cromosomas. – Puede estar influido por la alta incidencia materna y fetal de mosaicismos.

Algortimo Dra. Bianchi.

Diana W Bianchi, M.D The Use of NIPT to Detect Fetal Whole Chromosome and SubChromosome Abnormalities cfDNA 2013 Copenhagen, Denmark

ESO DICEN LOS ESTUDIOS …. QUE DIRÁN LAS PRINCIPALES SOCIEDADES CIENTÍFICAS

….. En Chile.

Único avalado por:

Comparación Test Comerciales.

Comparación de Test Comerciales.

Para la casa …..

¿ Las cffDNA es una prueba de cribado excepcional que reemplazará screening tradicional o es una prueba de diagnóstico imperfecto para ser usado en lugar de pruebas invasivas?

Ron Wapner, MD. Professor maternal – fetal medicine Departament of Obstetrics & Gynecology Columbia University Medical Center.

En conclusión….. • Potente herramienta cribado / diagnóstico. Sin embargo, la sensibilidad y especificidad de los métodos se ve afectada por factores biológicos y tecnológicos. • Beneficios en el la determinación de sexo fetal, grupo RhD, aneuploidías y el manejo propuestos en esas gestaciones. • Debe ser propuesto para población de alto riesgo. • Todo resultado positivo debe confirmarse por exámenes invasivos.

Bibliografía. •

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P. BENN*, H. CUCKLE† and E. PERGAMENT Non-invasive prenatal testing for aneuploidy: current status and future prospectsUltrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33 Published online in Wiley Online Library (wileyonlinelibrary.com). DOI: 10.1002/uog.12513 Marta Rodríguez de Albaa,∗,1, Ana Bustamante-Aragonésa,1, Sara Perladoa, María José TrujilloTiebasa, Joaquín Díaz-Recasensb, Javier Plaza-Arranzb Carmen RamosaDiagnóstico prenatal no invasivo: presente y futuro de mano de las nuevas tecnologías, d i a g n p r e n a t . 2 0 1 2;2 3(2):67–75 Alejandra Fernandez Fernandeza, Bele n Prieto Garcıa y Francisco V. A´lvarez Mene´ndezb,c,_Situacio´n actual del diagno´stico prenatal no invasivo, Rev Lab Clin. 2009;2(1):47–55 Non invasive prenatal testing for fetal aneuploidy. Comitte Opinion. N°545. American College of Obstetrician and Gynecologist. Obstet Gynecol 2012; 120: 1532 – 4

Diana W Bianchi, M.D The Use of NIPT to Detect Fetal Whole Chromosome and Sub-Chromosome Abnormalities cfDNA 2013 Copenhagen, Denmark Kypros H. Nicolaides , Thomas J. Musci Craig A. Struble Argyro Syngelaki Maria del Mar Gil aAssessment of Fetal Sex Chromosome Aneuploidy Using Directed Cell-Free DNA AnalysisFetal Diagn Ther DOI: 10.1159/000357198 Maria del Mar Gil Maria Soledad Quezada Barbara Bregant Argyro Syngelaki Kypros H. NicolaidesCell-Free DNA Analysis for Trisomy Risk Assessment in First-Trimester Twin Pregnancies Fetal Diagn Ther DOI: 10.1159/000356495

Bibliografía.

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Reunión CERPO DIAGNOSTICO PRENATAL NO INVASIVO

GRACIAS POR SU ATENCION