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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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11 N´ umero de publicaci´on:

2 126 962

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˜ ESPANA

C12R 1/225 C12R 1/46

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 95943553.8 kFecha de presentaci´on : 29.12.95 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 794 707 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 17.09.97

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54 T´ıtulo: Fermento l´ actico, y su uso para la preparaci´ on de productos antidiarr´ eicos.

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30 Prioridad: 02.01.95 FR 95 00003

13.10.95 FR 95 12032

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45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.04.99

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45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 126 962 T3

01.04.99

Aviso:

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73 Titular/es:

COMPAGNIE GERVAIS-DANONE 126-130 rue Jules Guesde F-92302 Levallois Perret, FR

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72 Inventor/es: Bouley, Christine;

Oudot, Elisabeth y Denariaz, G´ erard

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a Isabel 74 Agente: Esteban P´ erez-Serrano, M¯

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

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DESCRIPCION Fermento l´actico, y su uso para la preparaci´ on de productos antidiarr´eicos. La presente invenci´on se refiere a fermentos l´acticos, y a sus utilizaciones, en particular para la obtenci´on de productos dotados de propiedades antidiarr´eicas. Los productos l´ acteos fermentados de tipo yoghourt se obtienen por fermentaci´ on de la leche con una combinaci´ on de cepas de bacterias l´acticas Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus. Estas bacterias se desarrollan r´ apidamente en la leche, produciendo cantidades importantes de ´acido l´ actico y provocan la coagulaci´on de la leche en algunas horas. Durante la ingesti´on regular de yoghourt, la flora especifica del yoghourt aparece en las heces, pero desaparece al detener el consumo, ya que no se implanta en el hombre. Por el contrario, otras bacterias l´acticas forman parte de la flora banal del tracto digestivo del hombre, se trata en particular de Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei y bacterias del g´enero Bidifidobact´erium. Un determinado n´ umero de especies de Lactobacillus est´an presentes en la flora intestinal del hombre en buen estado de salud, y su presencia asegura un papel de equilibrio en comparaci´ on con otros grupos microbianos. Desde hace mucho tiempo se busca obtener leches fermentadas, que ofreciendo en el consumo unas propiedades organol´epticas agradables, contengan una cantidad elevada de bacterias l´ acticas presentes naturalmente en la flora intestinal del hombre, especialmente bacterias del g´enero Lactobacillus, capaces de desarrollarse en el intestino y contribuir al equilibrio de la flora intestinal. Las especies Lactobacillus casei y Lactobacillus acidophilus tienen, en este sentido, el objeto de un inter´es creciente. Se ha estudiado el efecto eventual de estas bacterias sobre determinadas patolog´ıas digestivas (trastornos gastrointestinales, gastro-enteritis, perturbaci´ on del tr´ ansito). Varios estudios en los ni˜ nos han mostrado el efecto ben´efico de los fermentos l´acticos administrados en forma de leches fermentadas o en forma de polvos, sobre la duraci´ on de la diarrea. TOUHAMI y col., [Ann. P´ediatr. (Paris) 39, n◦ 2, p. 79-86 (1992)] han comparado el efecto de la leche y del yoghourt en el ni˜ no que sufre diarrea persistente. Se han alimentado con leche o con yoghourt 78 ni˜ nos hospitalizados que presentan una diarrea persistente desde hace al menos 15 d´ıas. El fracaso del tratamiento se define como una no remisi´ on de la diarrea en los primeros 5 d´ıas, siendo el n´ umero de fracasos significativamente m´as bajo en el grupo del yoghourt (15 %) que en el grupo de la leche (45 %). Este resultado se traduce indirectamente en una disminuci´ on de la duraci´ on del episodio diarreico con el yoghourt. ISOLAURI y col., [Pediatrics, vol. 88 (1), 9. 90-97 (1991)], han realizado un estudio en ni˜ nos que padecen diarrea aguda desde hace menos de 7 d´ıas. 71 de los ni˜ nos del total han recibido L. Casei GG (L. Casei subsp. rhamnosus) bajo la forma liofilizada, o una leche fermentada por L. 2

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casei GG o un yoghourt termizado. La duraci´ on de la diarrea despu´es del tratamiento fue entonces de 2,4 d´ıas en el grupo testigo frente a 1,4 d´ıas en el grupo L. casei GG bajo la forma liofilizada o bajo la forma de una leche fermentada, o sea una disminuci´on significativa del 42 %. Seg´ un el mismo modelo, este equipo ha estudiado igualmente en las diarreas por rotavirus, el efecto de la administraci´ on de L. casei GG bajo la forma de polvo, en relaci´ on con 2 productos del comercio, siendo uno una preparaci´ on de L. casei rhamnosus (Lactophilus) y el otro una leche fermentada con los fermentos de yoghourt y que R ) [MAconten´ıa L. casei rhamnosus(YALACTA JAMAA y col., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (USA), Apr. 1995, 20(3) p. 333-8]. Este estudio muestra una significativa reducci´on de la duraci´ on de la diarrea por rotavirus en el grupo L. casei GG (1,8 d´ıas) en relaci´on con los grupos Lactophilus (2,8 d´ıas) y R (2,6 d´ıas). Esto se traduce en un YALACTA reducci´on del 36 % en relaci´on con Lactophilus y R . del 31 % en relaci´on con YALACTA Los dos estudios precedentes muestran el inter´es de L. casei subsp. Rhamnosus en la reducci´ on de la duraci´ on de la diarrea, al menos en el caso de la diarrea aguda o por rotavirus. Igualmente se ha mostrado, en los ni˜nos que sufren diarrea, que el consumo de yoghourt reduce significativamente el volumen de las heces en relaci´on con el consumo de leche [BRAN y col., “Les laits ferment´es. Actualit´es de la Recherche”, John LIBBEY Eurotext Lid, P. 233-239 (1989)]. El trabajo de [LING y col., Anne Nutri. Metab. 36, p. 162-166, (1992)] en las personas ancianas (que no sufren diarrea) muestra que una leche fermentada por L. casei GG normaliza la consistencia de las heces en comparaci´on con un grupo control que no consume esta leche fermentada. Sin embargo, Lactobacillus casei tiene un desarrollo muy lento y a menudo irregular en la leche, y los productos obtenidos tienen un gusto poco agradable, amargo, y a menudo demasiado ´acido. Se han realizado numerosas tentativas para producir productos fermentados con Lactobacillus casei asociados con todos o parte de los fermentos del yoghourt, pero hasta ahora ninguno permite obtener un resultado satisfactorio. Se sabe que existe una gran variabilidad en los productos obtenidos por fermentaci´ on, y que el resultado obtenido depende, en gran parte, de la naturaleza del fermento. Por ejemplo, las curvas de crecimiento, as´ı como la producci´ on de ´acido l´ actico, la producci´on de aromas y el espesamiento del medio, var´ıa de manera importante de una especie de bacterias l´acticas a otra, incluso a menudo en el seno de una misma especie. Adem´as, las bacterias l´acticas se utilizan m´as a menudo bajo la forma de fermentos complejos, y las interacciones entre las diferentes cepas a lo largo de la fermentaci´ on modifican las propiedades de las cepas, en relaci´on con las observadas en cultivos puros. En resumen, la conjugaci´ on entre la variabilidad en el seno de cada especie, y las interacciones entre las diferentes cepas en poblaciones en

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mezcla compleja, vuelven imprevisible el comportamiento de las cepas l´acticas en los fermentos. O, a lo largo de sus investigaciones sobre la simbiosis de los fermentos l´acticos, los inventores han descubierto un nuevo fermento del yoghourt particularmente ventajoso cuando se utiliza en asociaci´on con bacterias del g´enero Lactobacillus para la obtenci´ on de un producto l´acteo fermentado. La presente invenci´on tiene por objeto un fermento del yoghourt constituido por una mezcla de tres bacterias l´acteas Streptococcus thermophilus DN-001 147, Streptococcus thermophilus DN-001 339, y Lactobacillus bulgaricus DN-100 182, as´ı como un fermento l´ actico, caracterizado porque comprende el fermento del yoghourt tal como se define anteriormente, y comprende adem´ as una u otras especies de bacterias l´acticas. Estas otras bacterias l´acticas se pueden elegir en el grupo constituido por los g´eneros Lactobacillus, Bifidobacterium, y Lactococcus. Pertenecen preferentemente al grupo Lactobacillus casei, y preferentemente se trata de la bacteria Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001. Las cepas de Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001, Lactobacillus bulgaricus DN-100 182, Streptococcus thermophilus DN-001 147, Streptococcus thermophilus DN-001 339, utilizadas para la presente invenci´on se han registrado seg´ un el Tratado de Budapest del 30 de diciembre de 1994, ante la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) en posesi´on del Instituto Pasteur, calle Docteur Roux 25, en Par´ıs, bajo los respectivos n´ umeros: I1518 para la cepa Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001; I-1519 para la cepa Lactobacillus bulgaricus DN-100 182; I-1520 para la cepa Streptococcus thermophilus DN-001 147; el n´ umero I-1521 para la cepa Streptococcus thermophilus DN-001 339. Las caracter´ısticas de estas especies son entre otras las siguientes: - Cepa Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001 Morfolog´ıa: microorganismo Gram-positivo, no m´ ovil y no forma esporas, se presenta bajo la forma de peque˜ nos bacilos finos. Metabolismo: heterofermentaria, catalasa (-) gluconato (+). Fermentaci´ on de az´ ucares: ribosa (+), adonitol (+), galactosa (+), glucosa (+), fructosa (+), manosa (+), L-sorbosa (+), manitol (+), sorbitoi (+), alfa-metil D-gluc´ osido (+), N-acetilglucosamina (+), arbutina (+), esculina (+), salicina (+), celobiosa (+), maltosa (+), lactosa (+), sacarosa (+), trehalosa (+), beta-gentobiosa (+), turanosa (+), tagatosa (+). - Cepa Streptococcus thermophilus DN-001 147 Morfolog´ıa: microorganismo Gram-positivo no m´ ovil y no forma esporas, se presenta bajo la forma de estreptococos grande en diplococos y cadenas cortas. Metabolismo: homofermentaria, catalasa (-). Fermentaci´ on de az´ ucares: Dglucosa (+), D-fructosa (+), sacarosa (+), lactosa (+). - Cepa Streptococcus thermophilus DN-001 339 Morfolog´ıa: microorganismo Gram-positivo no m´ ovil y no forma esporas, se presenta bajo la forma de estreptococos grande en diplococos

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y cadenas cortas. Metabolismo: homofermentaria, catalasa (-). Fermentaci´on de az´ ucares: Dglucosa (+), D-fructosa (+), sacarosa (+), lactosa (+). - Cepa Lactobacillus bulgaricus DN-100 182: Morfolog´ıa: microorganismo Gram-positivo no m´ ovil y no forma esporas, se presenta bajo la forma de bacilos muy cortos y rechonchos. Metabolismo: homofermentaria, catalasa (-). Fermentaci´on de az´ ucares: ribosa (+), D-glucosa (+), D-manosa (+), lactosa (+). La asociaci´on del fermento del yoghourt seg´ un la invenci´on, con bacterias del g´enero Lactobacillus, y en particular con Lactobacillus casei, permite obtener unos productos que poseen una poblaci´on de Lactobacilos elevada, una estabilidad muy buena a lo largo del tiempo, una textura untuosa y propiedades organol´epticas excelentes. Igualmente, la invenci´on tiene por objeto un procedimiento de preparaci´ on de un producto l´acteo fermentado, dicho procedimiento se caracteriza porque comprende la utilizaci´ on de un fermento del yoghourt o de un fermento l´ actico de acuerdo con la invenci´on, tal como se define anteriormente. Igualmente, la presente invenci´on tiene por objeto los productos l´ acteos fermentados susceptibles de ser obtenidos por un procedimiento de acuerdo con la invenci´on, tal como se define anteriormente. Seg´ un una forma de realizaci´ on preferida de un producto l´ acteo fermentado de acuerdo con la invenci´on, ´este contiene entre 1 x 108 y 1,2 x 109 c´elulas de L. casei por ml, entre 2 x 108 y 1 x 109 c´elulas de S. Thermophilus por ml, y entre 4 x 106 y 2 x 107 c´elulas de L. bulgaricus por ml. Los productos l´ acteos fermentados de acuerdo con la invenci´on pueden basarse en leche entera, desnatada o suplementada pudiendo contener especialmente materias grasas, materias secas hidr´ ofilas de la leche, prote´ınas de soja, az´ ucares y frutas en trozos o en pur´e. Igualmente, los inventores han constatado que los fermentos l´acticos y las preparaciones de leche fermentada de acuerdo con la invenci´ on, que asocian fermentos del yoghourt con Lactobacilllus, pose´ıan propiedades anti-diarr´eicas superiores a los fermentos y preparaciones de la t´ecnica anterior aconsejadas para este fin. Igualmente, la presente invenci´on tiene por objeto la utilizaci´on de fermentos l´ acticos y de preparaciones de leche fermentada de acuerdo con la invenci´on, para la obtenci´ on de productos antidiarr´eicos. La presente invenci´on se comprender´ a mejor con ayuda del complemento a la descripci´ on que sigue, que se refiere a unos ejemplos de obtenci´on de preparaciones de leche fermentada que utilizan fermentos l´acticos de acuerdo con la invenci´on, y unos ejemplos que muestran sus propiedades antidiarr´eicas. Sin embargo, se debe entender que estos ejemplos se dan u ´ nicamente a t´ıtulo de ilustraci´ on del objeto de la invenci´on por lo que no constituyen de ninguna manera una limitaci´on. Ejemplo 1 Obtenci´ on de preparaciones de leche fermentada: 3

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Comparaci´ on de fermentos l´ acticos de acuerdo con la invenci´ on con fermentos l´ acticos de la t´ecnica anterior. Se a˜ nade leche en polvo a la leche entera, en una relaci´ on de 4 gramos de polvo por 100 gramos de leche. Despu´es de la homogeneizaci´on se pasteuriza la mezcla lo minutos a 95◦C, despu´es se enfr´ıa a 38◦C antes de sembrarla con cultivos activos de diferentes cepas.

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x 108 c´elulas por ml) y Lactobacillus bulgaricus (1 x 107 c´elulas por ml). 5

- Las propiedades organol´epticas de las cuatro preparaciones se eval´ uan despu´es de 7 d´ıas de conservaci´on a 8◦ C. Los resultados se ilustran en la Tabla I a continuaci´on: TABLA I

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- La preparaci´ on A contiene u ´ nicamente la cepa Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001, sembrada en una concentraci´on inicial de 2 x 107 c´elulas por ml. Despu´es de 35 horas de incubaci´on a 37◦ C, el pH alcanza el valor de 4,7 y la prepaon raci´on se conserva a 4◦ C. La concentraci´ de la cepa DN-114 001 es entonces de 4 x 109 c´elulas por ml. - La preparaci´ on B se siembra con la mezcla de las cepas: Streptococcus thermophilus DN-001 147 (5 x 104 c´elulas por ml), Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5 x 103 c´elulas por ml) y Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 (1 x 105 c´elulas por ml). La incubaci´ on se realiza a 37◦ C; despu´es de aproximadamente 1 hora, el pH alcanza 4,7, y la preparaci´ on se transfiere a 4◦ C. Las concentraciones en los productos fermentados son: Streptococcus thermophilus DN001 147 Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5 x 108 c´elulas por ml y Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 (7 x 106 c´elulas por ml). - La preparaci´ on C es una preparaci´ on comercial de fermentos del yoghourt THY71 (TEXEL) utilizada como control en los ensayos de degustaci´ on. La preparaci´ on se siembra con Streptococcus thermmophilus y Lactobacillus bulgaricus en concentraciones id´enticas (aproximadamente 3 x 106 c´elulas por ml). Despu´es de 3 horas y media de incubaci´ on a 44◦C se alcanza un pH de 4,7, y la preparaci´ on se conserva a 4◦C. La concentraci´on es entonces de 5 x 108 c´elulas por ml para S. thermophilus y 2 x 108 c´elulas por ml para L. bulgaricus. - La preparaci´ on D se siembra con la mezcla de las siguientes cepas: Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001 (2 x 107 c´elulas por ml), Streptococcus thermophilus DN-001 147 (5 x 104 c´elulas por ml), Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5 x 103 c´elulas por ml) y Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 (1 x 105 c´elulas por ml). La incubaci´ on se realiza a 37◦C; despu´es de aproximadamente 12 horas de incubaci´ on, el pH alcanza 4,7 y se transfiere la preparaci´ on a 4◦ C. Las concentraciones en el producto fermentado son Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei DN-114 001 (6 x 108 c´elulas por ml) Streptococcus thermophilus DN-001 147 y Streptococcus thermophilus DN-001 339 (5 4

Prepa- Textura raci´ on 15

Apreciaci´ on general Gr´ anulos quebra- Case´ına, Amar(-) dizos, Ligerago, Gusto ligeramente espesa mente rancio Espesa Untuosa Ins´ıpido (+) Espesa Aroma de (+++) yoghourt tipo Gusto fresco Muy espesa Untuosa Gusto cremoso (+++)

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Aroma/gusto

La preparaci´ on D presenta una poblaci´ on elevada en L. paracasei subsp. paracasei, una estabilidad muy buena a lo largo del tiempo, una textura untuosa y excelentes propiedades organol´epticas. Ejemplo 2 Influencia de las preparaciones de leche fermentada de acuerdo con la invenci´ on sobre la duraci´ on de la diarrea Las preparaciones utilizadas son las siguientes: - Preparaci´on “Yoghourt” se trata de la preparaci´on B obtenida, tal como se describe en el Ejemplo 1 anterior, a partir de un fermento de yoghourt de acuerdo con la invenci´on. - Preparaci´on “B.C.”: se trata de la preparaci´on D obtenida, tal como se describe en el Ejemplo 1 anterior, a partir del fermento l´actico de acuerdo con la invenci´ on. - Preparaci´on “Leche”: se trata de leche gelificada, no fermentada, en la que la composici´on es la siguiente: -

Sacarosa Guar Carragenano Leche entera CSP

6g 0,6 g 0,15 g 100 ml

Esta preparaci´ on se trata a 130◦C durante algunos segundos. El estudio se realiza sobre una poblaci´on de 265 ni˜ nos en guarder´ıa. Los ni˜ nos se reparten en 3 grupos por aleatorizaci´ on y consumen regularmente 125 g (ni˜ nos de 6 a 18 meses), o 250 g (ni˜ nos de m´ as de 18 meses), bien de la preparaci´on “leche”, bien de la preparaci´ on “Yoghourt”, bien de la preparaci´ on “B.C.”, durante 3 periodos sucesivos de 1 mes, entrecortados por periodos sin suplemento de 1 mes. El ensayo se ha realizado en doble ciego.

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El an´ alisis se ha realizado en la poblaci´ on de ni˜ nos que han presentado al menos un episodio diarr´eico (n = 62) durante el curso del per´ıodo de observaci´ on (6 meses). La duraci´ on de la diarrea se define como el tiempo transcurrido entre la aparici´ on de la diarrea (3 heces liquidas por d´ıa) y la desaparici´ on de las heces l´ıquidas. M´ as particularmente, ´esta representa el n´ umero de d´ıas despu´es de la aparici´on del episodio diarr´eico, durante los que el ni˜ no presenta todav´ıa al menos una hez liquida. Los resultados se representan en la Tabla II a continuaci´ on. TABLA II Producto Leche Yoghourt B.C. Total

N´ umero de ni˜ nos 20 24 18 62

N´ umero de d´ıas con diarrea 3,8 ± 1,8 3,1 ± 1,7 2,9 ± 2,6 3,3 ± 2,0

Estos resultados muestran que, en los ni˜ nos que presentan diarrea, el suplemento de alimentaci´on con la preparaci´on “Yoghourt” o la preparaci´on “B.C.” reduce el n´ umero de d´ıas con diarrea en relaci´on con la preparaci´ on “Leche”. Esta reducci´on es del 18 % en el caso de la preparaci´on “Yoghourt”, y del 24 % en el caso de la preparaci´on “B.C.”. Ejemplo 3 Influencia de las diferentes preparaciones sobre la duraci´ on de la normalizaci´ on de las heces El an´ alisis se realiza sobre la misma poblaci´on de ni˜ nos (n= 62) que en el ejemplo 2. La duraci´ on de la normalizaci´ on de las heces es el tiempo transcurrido entre las u ´ ltimas heces liquidas y el retorno a las heces moldeadas. Mas particularmente, ´esta representa la duraci´on requerida para una vuelta a un tr´ ansito normal. Los resultados se representan en la Tabla III a continuaci´ on.

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Producto

Leche Yoghourt B.C. Total

TABLA III N´ umero de N´ umero de d´ıas ni˜ nos antes de la normalizaci´on 20 2,6 ± 2,4 24 2,0 ± 1,6 18 1,2 ± 1,0 62 1,9 ± 1,8

Estos resultados muestran que en los ni˜ nos que han presentado diarrea, el suplemento con la preparaci´ on “B.C.”, reduce significativamente el tiempo de normalizaci´ on de las heces en relaci´on con la preparaci´on “Leche”; la reducci´ on observada es del 54 %. El tiempo de normalizaci´on de las heces es m´as r´ apido con la preparaci´ on “B.C.” (1,2 ± 1,0) que con la preparaci´on “Yoghourt” (2,0 ± 1,6). Ejemplo 4 Influencia de las diferentes preparaciones sobre la duraci´ on total del episodio diarr´eico.

El an´ alisis se realiza sobre la misma poblaci´on de ni˜ nos (n= 62) que en el Ejemplo 2. La duraci´ on total del episodio diarr´eico es el tiempo transcurrido entre el inicio de la diarrea (> de tres heces l´ıquidas por d´ıa) y el fin del per´ıodo de normalizaci´ on (vuelta a las heces moldeadas). Si un ni˜ no presenta m´as de un episodio diarr´eico, este an´alisis tiene en cuenta el episodio donde el plazo calculado sea m´as grande. Los resultados se muestran en la Tabla IV a continuaci´on

Producto

Leche Yoghourt B.C. Total

TABLA IV N´ umero de Duraci´ on total ni˜ nos del episodio diarr´eico (d´ıas) 20 6,9 ± 3,0 24 4,8 ± 2,3 18 3,9 ± 2,4 62 5,2 ± 2,8

Estos resultados muestran que en los ni˜ nos que han presentado diarrea, el suplemento de alimentaci´on con la preparaci´on “B.C” reduce significativamente la duraci´ on total del episodio diarr´eico; la duraci´ on observada es del 44 % en relaci´on con la preparaci´on “Leche”, y del 19 % en relaci´on con la preparaci´on “Yoghourt”. La duraci´ on total del episodio diarr´eico es m´as corta con la preparaci´on “B.C.” (3,9 ± 2,4) que con la preparaci´ on “Yoghourt” (4,8 ± 2,3). Ejemplo 5 Influencia de las diferentes preparaciones sobre el n´ umero total de d´ıas en los que los ni˜ nos presentan un tr´ ansito intestinal perturbado El an´ alisis se realiza sobre la misma poblaci´on de ni˜ nos (n= 62) que en el Ejemplo 2. El n´ umero total de d´ıas en los que los ni˜ nos presentan un tr´ ansito intestinal perturbado se calcula sumando el n´ umero de d´ıas en los que los ni˜ nos presentan una o varias heces anormales en consistencia o con frecuencia. Cuando el ni˜ no ha presentado varios episodios diarr´eicos, el an´alisis tiene en cuenta el conjunto de estos episodios. Los resultados se representan en la Tabla V a continuaci´on.

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Producto

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Leche Yoghourt B.C. Total

TABLA V N´ umero de Perturbaci´ on del ni˜ nos tr´ansito intestinal (d´ıas) 20 8,0 ± 5,3 24 5,3 ± 2,5 18 4,3 ± 2,7 62 5,9 ± 3,9

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Estos resultados muestran que en los ni˜ nos que han presentado diarreas, el suplemento de alimentaci´on con la preparaci´on “B.C.” reduce significativamente el n´ umero total de d´ıas en los que el tr´ ansito intestinal del ni˜ no est´a perturbado en relaci´on con la preparaci´on “Leche”; la reducci´ on observada es del 46 %. El n´ umero de d´ıas con heces anormales en consistencia o con frecuencia es 5

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m´as bajo con la preparaci´on “B.C.” (4,3 ± 2,7), que con la preparaci´ on “Yoghourt” (5,3 ± 2,5). Conclusi´ on: Las preparaciones de acuerdo con la invenci´ on permiten por tanto reducir la duraci´ on total del episodio diarr´eico, disminuyendo la duraci´ on durante la cual el ni˜ no presenta una o varias he-

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ces l´ıquidas por d´ıa y disminuyendo la duraci´ on durante la cual el ni˜ no presenta heces blandas. La propiedad anti-diarr´eica se traduce igualmente por una disminuci´ on del n´ umero de d´ıas durante los que el ni˜ no presenta heces de consistencia o de frecuencia anormales.

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REIVINDICACIONES 1. Fermento l´ actico, caracterizado porque se trata de un fermento del yoghourt constituido por una mezcla de tres bacterias l´ acticas Streptococcus thermophilus DN-001 147, Streptococcus thermophilus DN-001 339, y Lactobacillus bulgaricus DN-100 182. 2. Fermento l´ actico caracterizado porque comprende el fermento del yoghourt seg´ un la reivindicaci´on 1, y comprende adem´ as una u otras especies de bacterias l´acticas. 3. Fermento l´ actico seg´ un la reivindicaci´ on 2, caracterizado porque comprende una mezcla de bacterias l´acticas Streptococcus thermophilus DN001 147, Streptococcus thermophilus DN-001 339, Lactobacillus bulgaricus DN-100 182 y Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001. 4. Procedimiento de preparaci´ on de un pro-

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ducto l´acteo fermentado, dicho procedimiento se caracteriza porque comprende el uso de un fermento l´actico seg´ un una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3. 5. Preparaci´ on de leche fermentada, caracterizada porque es susceptible de obtenerse por el procedimiento seg´ un la reivindicaci´ on 4. 6. Fermento l´ actico seg´ un una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la utilizaci´ on como anti-diarr´eico. 7. Preparaci´ on de leche fermentada seg´ un la reivindicaci´on 5, para la utilizaci´ on como antidiarr´eico. 8. Cepa de bacterias l´acticas elegida entre el grupo constituido por la cepa de Streptococcus thermophilus DN-001 147, la cepa de Streptococcus thermophilus DN-001 339, la cepa de Lactobacillus bulgaricus DN-100 182, y la cepa de Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN-114 001.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales.

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Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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