MICROPROPAGACIÓN CULTIVO IN VITRO DE SEGMENTOS NODALES DE MENTA (HIERBABUENA) Las mentas o hierbabuenas son plantas perennes, raramente anuales, que se expanden mediante estolones. El fenómeno de hibridación interespecífica que ocurre naturalmente, dificulta la caracterización de las especies, clasificadas dentro del género Mentha (familia Lamiaceae). Originarias del Mediterráneo, las mentas fueron introducidas en Europa por los romanos. En medicina natural, la menta es utilizada en tizanas, infusiones y cataplasmas por sus propiedades estimulantes, carminativas y antiespasmódicas. Debido a su aroma y sabor característicos, la menta es muy apreciada en el arte culinario. Tanto su óleo esencial como el mentol, son aromatizantes populares en la instruida cosmética y de alimentos (dulces y chocolates). Por otro lado, las propiedades insecticidas del aceite esencial explican su inclusión como plantas acompañantes en la agricultura orgánica. En Brasil, las especies más comunes son la Mentha spicata o hierbabuena común (en la foto superior), la Mentha piperita (menta piperita), y la Mentha pulegium o poleo.

BIBLIOGRAFÍA ACADÉMIE DE TOULOUSE. Culture in vitro de la menthe. http://pedagogie.ac-toulouse.fr/svt/serveur/lycee/st gaudens/menthe/civmenth.html HORTAS. www.hortas.info MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagación. Guía 80: Micropropagación en el laboratorio de enseñanza; Guía 85: Desinfección de los instrumentos; Guía 90: Desinfección de los explantes y Guía 96: Los medios de cultivo. http:/www.bteduc.bio.br

Guía 106

María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br

MICROPROPAGACIÓN / CULTIVO IV DE SEGMENTOS NODALES DE MENTA

ACTIVIDAD PRÁCTICA OBJETIVO Cultivo in vitro de hierbabuena (Mentha piperita) a partir de segmentos nodales.

MATERIALES Una planta de hierbabuena, azulejo, cuchillo, 1 frasco con agua sanitaria diluida al medio, 3 frascos con agua estéril, 6 tubos de ensayo o frascos pequeños con medio nutritivo* estéril, palitos estériles, mechero Bunsen (opcional). * El medio nutritivo (Murashige & Skoog, Taji o Knop) es una solución de sales minerales a la que se adiciona sacarosa (1 a 5%), agar (0,7%) y agua de coco, como se indica en las Guías 111: Micropropagación: medios clásicos y 112: Micropropagación: medios alternativos.

PROCEDIMIENTO La limpieza del lugar de trabajo es fundamental, así como la higiene de las manos. El lugar de trabajo será desinfectado con alcohol 70º. Los participantes se lavarán muy bien las manos y los antebrazos con agua y jabón, antes de pasarse alcohol 70º. Cuidado! El alcohol es inflamable. Esterilizar el material contaminado antes de descartarlo.

A. ESTABLECIMIENTO DE UN CULTIVO ASÉPTICO

1. Separación de los explantes En un azulejo bien limpio, cortar segmentos del tallo de la hierbabuena conteniendo un nodo y eliminar las hojas. Lavar los explantes. 2. Desinfección de la superficie de los explantes Pasar rápidamente el material por alcohol 70º y sumergir el explante durante 10 minutos, en una solución de agua sanitaria diluida al medio adicionada con 1 gota de detergente. Agitar suavemente durante todo el proceso de desinfección. 3. Lavados en agua destilada estéril Hacer tres lavados de 1, 3 y 5 minutos, con agitación suave.

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4. Establecimiento del cultivo En condiciones asépticas, transferir los explantes a los recipientes con medio nutritivo.

5. Incubación A 20-28ºC, en presencia de luz.

6. Seguimiento Registrar semanalmente as observaciones.

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B. REGENERACIÓN DE LA PLANTA Luego del crecimiento de hojas y raíces, transferir los explantes a un medio sin agua de coco y sin azúcar. Siempre en condiciones asépticas. Una vez que se desarrollan las raíces y antes de transferir la planta a tierra, eliminar el agar por lavado. Controlas la humedad por un tiempo y proteger las plantas de la iluminación solar directa hasta su adaptación a las condiciones ambientales.

NUESTRO COMENTARIO La hierbabuena comprada en el comercio viene muy sucia, y a pesar del cuidado en la desinfección de los explantes tuvimos un alto número de contaminaciones. Para contrarrestar este problema, sembramos Mentha piperita en un vaso y retiramos los segmentos nodales de las plantes que crecían (Figura 1). El protocolo puede simplificarse. La hierbabuena no es una planta exigente y también se desarrolla bien en medio de Knop adicionado con agua de coco o, inclusive, en un medio sólo con agua de coco al 50%. Sin embargo, hasta que crecen las hojas es conveniente mantener las plántulas en un medio con azúcar. En relación con la esterilización, se puede reemplazar el agua destilada estéril de los lavados por Clor-in 10. El único inconveniente es que los explantes quedan pegajosos y resulta necesario usar un palito estéril para despegarlos de la pinza. Resulta más fácil si el trabajo es realizado en parejas.

¿CÓMO MONTAR UN PROYECTO? Comparar el crecimiento con diferentes medios. Cultivar in vitro otras variedades de hierbabuena, tales como Mentha pulegium o poleo.

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Figura 1. Las plantas de hierbabuena utilizadas en este experimento. A. Planta de Mentha piperita (semillas comerciales).

B. Mentha spicata (comprada en mercado de la calle)

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