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Legionella Urinary Antigen Enzyme Immunoassay

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MATERIALS PROVIDED / MATÉRIEL FOURNI / STOFFE VORAUSGESETZT / MATERIALE Fornito / Materiais fornecidos / MATERIALES SUMINISTRAR / ARBEJDSMATERIALE Hvis eller / MATERIEEL Voorzien / MATERIALEN Försynt / ARBEIDSMATERIALE Forsynt / ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ 1

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MCPL

WASHCONC

3

4

CONTROL +

CONTROL -

5

6

HRPCONJ

COLORDEV

7 STOP SOLN

EN resulting mortality rate, which ranges up to 25% in untreated immunocompetent patients, can be lowered if the disease can be diagnosed rapidly and appropriate antimicrobial therapy is instituted early. Legionella pneumophila is estimated to be responsible for 80-85% of reported cases of Legionella infections with the majority of cases being caused by L. pneumophila serogroup 1 alone3. Current methods for the laboratory detection of pneumonia caused by Legionella pneumophila require a respiratory specimen (e.g. expectorated sputum, bronchial washing, transtracheal aspirate, lung biopsy) or paired sera (acute and convalescent) for accurate diagnosis. These techniques include Legionella culture, direct fluorescent antibody (DFA), DNA probe, and indirect fluorescent antibody (IFA). All of these rely on either obtaining an adequate respiratory specimen for sufficient sensitivity, or collecting sera at a two to six week interval. Unfortunately, one of the presenting signs of patients with Legionnaires’ disease is the relative lack of productive sputum. This necessitates in many patients the use of an invasive procedure to obtain a respiratory specimen. Diagnosis by serological techniques is usually retrospective in nature, and even then, patient compliance in obtaining the necessary samples is poor.

Intended Use For in vitro diagnostic use. This kit is an enzyme immunoassay (EIA) based system intended for IN VITRO DIAGNOSTIC USE to qualitatively detect the presence of Legionella pneumophila serogroup 1 antigen (L. pneumophila serogroup 1 antigen) in human urine as an adjunct to culture for the presumptive diagnosis of past or current Legionnaires’ disease.

Summary and Explanation of the Test Legionnaires’ disease, named after the outbreak in 1976 at the American Legion convention in Philadelphia, is caused by Legionella pneumophila and is characterized as an acute febrile respiratory illness ranging in severity from mild illness to fatal pneumonia1. Since that time, it has been recognized that the disease occurs in both epidemic and endemic form and that sporadic cases are not readily differentiated from other respiratory infections by clinical symptoms. It is estimated that about 25,000 cases of Legionella infections occur annually2. Known risk factors include immunosuppression, cigarette smoking, alcohol consumption and concomitant pulmonary disease2. The

It was shown as early as 1979 by Berdal4, that a specific soluble antigen was present in the urine of patients with Legionnaires’ disease5,6,7,8. The presence of specific antigen in urine makes this an ideal specimen for collection, transport and subsequent detection in early, as well as later, stages of the disease9. The Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA Kit uses microtiter ELISA methodology for the detection of soluble antigen in urine from patients with Legionella pneumophila serogroup 1 infections.

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Principles of the Procedure The microtiter wells contained in the kit are coated with polyclonal antibody specific for L. pneumophila serogroup 1 antigen. Patient urine is added to the microtiter well and any L. pneumophila serogroup 1 antigen present is captured by the antibody coated microtiter well (solid phase). Anti-Legionella HRP conjugate added at the same time as the patient specimen binds to L. pneumophila serogroup 1 antigen. After an incubation, the wells are decanted and washed to remove any unbound antigen and conjugate. A color developer is added to the wells and incubated. The assay reaction is stopped using stop solution and the resultant absorbances of color are read on a microplate reader. Samples with absorbances greater than or equal to 3 times the negative control are considered positive. Microtiter Wells - Each kit contains 96 Microtiter Wells, coated with anti-Legionella pneumophila serogroup 1 IgG. Ready for use. Store at 2-8°C.

2

Wash Concentrate - One (1) vial with 40 mL of 0.1 M Phosphate Buffered Saline, detergent and preservative. Dilute the contents to 400 mL with distilled or deionized water for use. Store at 2-30˚ C.

3

Positive Control Urine - One (1) vial with 2 mL of human urine containing Legionella pneumophila serogroup 1 antigen and preservative. Ready for use. Store frozen at -10 to -20°C in aliquots or at 2-8°C as supplied.

4

Negative Control Urine - One (1) vial with 2 mL of normal human urine and preservative. Ready for use. Store frozen at -10 to -20°C in aliquots or at 2-8°C as supplied.

6

Color Developer - One (1) vial with 25 mL of chromogenic substrate solution containing tetramethylbenzidine (TMB) and hydrogen peroxide. Ready for use. Store at 2-8°C.

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Stop Solution - One (1) vial with 10 mL of 1N H2S04. Store at 2-8°C.

Safety Considerations • HANDLE URINE SPECIMENS AND POSITIVE AND NEGATIVE CONTROL URINES AS IF CAPABLE OF TRANSMITTING AN INFECTIOUS AGENT. • Control urines supplied in the kit have been autoclaved for a minimum of 15 minutes at 121°C, filtered through 0.2 µm membrane filter and contain 0.8% boric acid as preservative. Although processed by these accepted methods of microorganism inactivation, it should not be assumed that this will provide full inactivation. • Do not pipette by mouth. Do not eat, smoke or drink in areas in which specimens or kit reagents are handled. Wear disposable gloves throughout the test procedure. Dispose of gloves in biohazard waste. Thoroughly wash hands afterwards. Avoid contact with skin or mucous membranes.

5

EN

HRP Conjugate - One (1) vial with 15 mL of purified anti-Legionella pneumophila serogroup 1 IgG conjugated to horseradish peroxidase (HRP) in a Tris buffer with a protein stabilizer. Contains less than 0.02% thimerosal as a preservative. Ready for use. Store at 2-8°C.

Precautions

Materials Provided 1

5

EN • Stop Solution contains sulfuric acid and should be handled according to existing regulations for laboratory safety and good laboratory practice. Danger, causes severe skin burns and eye damage.

• Do not substitute reagents from other kit lots. Reagents are kit specific. Each kit lot has been optimized to detect Legionella pneumophila serogroup 1 antigen directly from clinical specimens. Dilution and alteration of reagents may result in loss of sensitivity.

• Color Developer contains N,N-Dimethylformamide as part of a mixture. May be harmful if swallowed, inhaled or absorbed through the skin.

• Avoid microbial contamination of reagents. Microbial contamination may interfere with the sensitivity of the assay.

• Wash Solution contains ProClin® 300. Warning, may cause an allergic skin reaction, causes skin irritation, causes serious eye irritation, harmful to aquatic life with long lasting effects.

• Do not interchange vial or bottle caps and stoppers; this will lead to cross contamination of reagents. • Incubation times or temperatures other than those specified may give erroneous results.

• HRP Conjugate contains an ingredient listed under California Chapter 3, Safe Drinking Water and Toxic Enforcement Act of 1986, Section 12000, Chemicals Known to Cause Cancer or Reproductive Toxicity. The listed ingredient is thimerosal, known to the State of California to be a reproductive toxicant. HRP Conjugate contains Mercury. Dispose according to local, state or federal laws.

• Color developer is light sensitive. Store in amber bottle. If using reagent boats, dispense only a quantity appropriate for run size, approximately 2 mL for each microtiter strip. • Store diluted Wash Solution in a clean container to avoid contamination. Do not discard unused diluted Wash Solution until all Microtiter Wells have been utilized or passed expiration date.

• Safety Data Sheets for this product are available upon request.

• The wash step is critical. Insufficient washing can cause erroneous results. Use of an automated washing apparatus may require additional washes. If the negative control absorbance is over 0.100 absorbance units, increase the number of washes until the negative control absorbance is in the acceptable range (< 0.100 absorbance units).

• Follow your national, regional, and local ordinances accordingly for waste disposal regulations.

Performance Considerations • Do not use kit components beyond expiration date. The date is printed on individual component labels and on the kit box.

• Cross contamination of patient samples could cause false results. • Control urines, samples, and reagent solutions must be pipetted directly to the bottom of each well. 6

Preparation of Reagents

Specimen Collection and Processing

All reagents must equilibrate to room temperature before use.

Urine specimens should be collected in standard sterile containers, stored at room temperature or refrigerated (2-8°C), and assayed within 24 hours of collection. Alternatively, specimens may be stored at 2-8°C for up to 14 days or at -10 to -20°C for longer periods before testing. Long term storage conditions have not been determined. Boric acid may be used as a preservative. Other preservatives have not been evaluated.

Wash Solution - Dilute the entire volume (40 mL) of the Wash Concentrate to 400 mL with distilled or deionized water. Mix well. Do not discard unused diluted Wash Solution until the kit lot expires or is used up. NOTE: Upon storage at 2-8°C, wash concentrate may form a crystalline precipitate. Before use, warm to room temperature and be sure all of the crystals have dissolved.

Whenever possible, urine specimens should be shipped in leakproof containers at 2-8°C or frozen.

Positive and Negative Control Urines - Control Urines which have been stored frozen must be thawed and mixed sufficiently before use.

Urine specimens stored at -20 to 8°C which contain excess urates, phosphates or other dissolved salts may be found with salt crystals after storage. It is acceptable to warm these specimens to 37°C in order to facilitate dissolving these crystals before assay.

All other reagents are supplied ready to use.

Storage Instructions

Urine specimens exhibiting large particulates should be filtered before running in the assay, as this may indicate contamination of the specimen.

Positive and Negative Control urines may be stored at -10 to -20°C if stored in aliquots or at 2-8°C as supplied. All other kit components should be stored at 2-8°C.

Materials Required but Not Provided

Color developer is light sensitive and must be stored in an amber bottle at 2-8°C.

Pipettors and/or pipets that can accurately and precisely deliver 50, 100, 200 and 250 µL volumes.

Diluted Wash Solution may be stored at 2-30°C until the expiration of the specific kit lot in which it was a reagent.

Microtiter plate reader at 450 nm.

Indications of Instability or Deterioration of Reagents

Graduated cylinder to dilute Wash Concentrate to 400 mL.

Changes in the physical appearance of the reagents supplied may indicate instability or deterioration of these materials. Do not use reagents which are visibly turbid.

Distilled or deionized water to dilute Wash Concentrate.

Reproducible decrease in Positive Control Urine ratio results below 3.0 may indicate instability of reagents or coated microtiter wells.

EN

Stock bottle to store diluted Wash Solution.

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EN Assay Procedure

Quality Control

1. Reserve well A1 for substrate blank. 2. Pipette 100 µL of well-mixed Positive Control, Negative Control and patient specimens into the appropriately labelled duplicate wells. 3. Pipette 100 µL of anti-Legionella HRP Conjugate into all previously pipetted wells, except A1. 4. Gently tap the plate to mix reagents within wells, being careful to avoid splashing and cross-contamination of wells. 5. Incubate at room temperature (20-25°C) for 2 hours. 6. After incubation, decant or aspirate sample and conjugate mixture from wells. If decanting, blot strips on absorbent toweling. 7. Add 250 µL per well of Wash Solution. Decant or aspirate. Repeat wash step for a minimum of three washes (see Precautions: Performance Considerations). 8. Pipet 200 µL of Color Developer to all previously pipetted wells, including A1 (substrate blank). 9. Incubate in the dark at room temperature (20-25°C) for 15 minutes. Covering the plate is sufficient. 10. After incubation, stop color development by pipetting 50 µL of Stop Solution to each previously pipetted well, including A1. 11. Gently tap plate to mix reagents. NOTE: All the wells should appear yellow, not green. Green color indicates insufficient mixing. 12. Read absorbances immediately at 450 nm on a microtiter plate reader, blanking against well A1 (substrate blank).

The Positive and Negative Control Urine must be included with each run of patient specimens in order to calculate patient test results and to monitor test performance. These control samples are ready to use as supplied, and must be tested in the same manner as patient specimens. Additionally, known positive and negative urine specimens may be run as controls. The average absorbance of the Negative Control Urine should be less than or equal to 0.100. The average absorbance of the Positive Control Urine must be greater than or equal to three (3) times that of the Negative Control Urine. Results of each replicate of the duplicate wells from patient samples, Positive Control Urine and Negative Control Urine must correspond (both score as either positive or negative in the assay). Otherwise, the test result is not valid and should be repeated. Do not report patient test results if controls do not meet above criteria for acceptability15,16,17.

Calculation of Results The absorbance of the well A1 (substrate blank) should be subtracted from the absorbance of each well, to obtain a corrected absorbance for use in the calculation of patient results.

Calculation of Mean Absorbance Determine the mean absorbance of the duplicate Positive Control Urine, Negative Control Urine and patient urine by: MEAN Absorbance = Absorbance (1) + Absorbance (2) 2 8

Calculation of RATIO to Negative

Limitations of the Test

Determine the ratio of Positive Control Urine absorbance to Negative Control Urine absorbance and of patient urine absorbance to Negative Control Urine absorbance in the following manner:

This assay has been validated using urine samples only. Other samples (e.g., plasma, serum or body fluids) that may contain Legionella antigen have not been tested. The Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA test will not detect infections caused by other serogroups and L. micdadei or L. longbeachae; culture is recommended for suspected pneumonia to detect causative agents other than L. pneumophila serogroup 1 and to confirm infection.

RATIO = MEAN Positive Control Urine or Patient Urine Absorbance MEAN Negative Control Absorbance A typical positive result might be 0.300 Absorbance = 7.5 RATIO 0.040 Absorbance

The diagnosis of Legionnaires’ disease cannot be based on clinical or radiological evidence alone. There is no single satisfactory laboratory test for Legionnaires’ disease. Culture results, serology and antigen detection methods should all be used along with clinical findings for diagnosis.

Interpretation of Results Urine samples that have a RATIO value greater than or equal to 3 are to be considered positive for the presence of Legionella pneumophila serogroup 1 antigen. Positive specimens may be retested to confirm results.

Excretion of Legionella antigen in urine may vary depending on the individual patient and their underlying illness or treatment. Some individuals have been shown to excrete antigen for an extended period of time, so that a history of a recent respiratory illness compatible with Legionnaires’ disease should be sought. Early treatment with appropriate antibiotics may also decrease antigen excretion in some individuals. Antigen excretion may begin as early as 3 days after onset of symptoms and persist for up to 1 year afterwards9.

Urine samples that have a RATIO value less than 3 are considered negative. A negative test result does not rule out the possibility of Legionella infection due to other serogroups or species of Legionella.

Results Reporting

RATIO Recommended Report

Antigenuria may persist for prolonged periods and may therefore indicate previous infection rather than current infection.

≥ 3.0 Presumptive positive for the presence of L. pneumophila serogroup 1 antigen in urine, suggesting current or past infection. < 3.0 Presumptive negative for L. pneumophila serogroup 1 antigen in urine, suggesting no recent or current infection. Legionnaires’ disease cannot be ruled out since other serogroups and species may also cause disease.

EN

Testing diuretic urine may affect the ability of the test to detect antigen.

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EN Expected Values and Performance Characteristics

2. Correlation of Results

1. Expected Values

A total of 294 patient urine specimens were evaluated using the Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA Test kit and a commercially available method.

One hundred twenty-five randomly selected, presumed negative, uncharacterized urine specimens were tested using the Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA kit. One hundred twenty-one specimens tested negative for the presence of Legionella urinary antigen. The four presumed negative samples giving positive results were tested twice more. In one assay, two of the four samples tested low positive and two tested negative, and in the second assay, all samples tested negative.

The results of this correlation are as follows: Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA

Commercial Method

Distribution of Expected Values Ratio to Negative Control Number of Samples

0.000.99

1.001.99

2.002.99

3.003.99

4.004.99

5.005.99

6.00+

37

68

16

2

1

1

0

+

–

+

127

3

–

0

164

Sensitivity = 97.7% (0.951 to 1.00 95% Confidence Interval) Specificity = 100% Accuracy = 99%

Statement of Cross-Reactivity Of the 164 negative specimens: 76 specimens were bacteremic (other than Legionella sp.) pneumonia patients, 34 had urinary tract infections (UTI), 16 had other pulmonary conditions, 19 had Mycobacterial infections, and 2 were pneumonias caused by transtracheal aspirates (TTA).

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3. Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA Kit Precision

Ordering and Contact Information

Within Assay Precision Within Assay Precision was determined on three urine samples containing different antigen concentrations. The samples were run in twenty replicates. Each sample was correctly identified as being positive or negative 100% of the time.

Reorder numbers: #851-000: Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA

Mean (absorbance)

Standard Deviation

Coefficient of Variation (%)

Negative

0.062

0.002

3.2

Low Positive

0.189

0.005

2.7

High Positive

0.581

0.011

1.9

Sample

US OUS

Technical Support Advice Line Further information can be obtained from your distributor, or by contacting Alere™ Technical Support on:

Between Assay Precision Between assay precision was determined on three urine samples containing different antigen concentrations. Each sample was analyzed on two lots of reagents in a total of 33 assays. The samples were correctly identified as being positive or negative 100% of the time. Mean (absorbance)

Standard Deviation

Coefficient of Variation (%)

Negative

0.047

0.013

27.7

Low Positive

0.187

0.036

19.5

High Positive

0.439

0.036

8.2

Sample

US + 1 877 866 9365

[email protected]

Africa, Russia, CIS + 972 8 9429 683

[email protected]

Asia Pacific + 61 7 3363 7711

[email protected]

Canada + 1 800 818 8335

[email protected]

Europe & Middle East + 44 161 483 9032 [email protected] Latin America + 57 2 6618797

11

EN

1-877-441-7440 +1-321-441-7200

[email protected]

FR mise en place précoce d’une antibiothérapie adaptée. Selon les estimations, la bactérie Legionella pneumophila serait responsable de 80 à 85 % des cas signalés d'infections à Legionella, la majorité des cas étant causée par L. pneumophila sérogroupe 1 uniquement3. Les méthodes actuelles de détection en laboratoire de la pneumonie causée par la bactérie Legionella pneumophila imposent le prélèvement d'un échantillon respiratoire (par exemple, expectorations, lavage broncho-alvéolaire, aspiration transtrachéale, biopsie pulmonaire) ou de sérums appariés (prélevés pendant la phase aiguë et pendant la convalescence) pour établir un diagnostic précis. Ces techniques s'appuient sur la mise en culture de Legionella, l'immunofluorescence directe (DFA), des sondes ADN et l'immunofluorescence indirecte (IFA). Toutes ces techniques reposent sur l'obtention d'un échantillon respiratoire adéquat pour une sensibilité suffisante ou sur le prélèvement de sérums sur un intervalle de temps allant de deux à six semaines. Malheureusement, les patients atteints de légionellose présentent souvent une toux relativement non productive. Cela implique donc de recourir, chez de nombreux patients, à une procédure invasive pour obtenir un échantillon respiratoire. Le diagnostic établi selon des techniques sérologiques est généralement rétrospectif par nature et même dans ce contexte, les patients sont réticents à produire les échantillons nécessaires.

Utilisation prévue Pour usage diagnostique in vitro. Ce kit est un système sur dosage immunoenzymatique (DIE) destiné à un USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO pour la détection qualitative de la présence de l'antigène Legionella pneumophila sérogroupe 1 (antigène L. pneumophila sérogroupe 1) dans l'urine humaine en complément de la mise en culture pour le diagnostic présumé de la légionellose (antécédents ou maladie actuelle).

Résumé et explication du test La légionellose, ou maladie du légionnaire, doit son nom à une épidémie survenue en 1976 lors du congrès de la Légion américaine à Philadelphie. Elle est causée par la bactérie Legionella pneumophila et se définit comme une maladie respiratoire fébrile aiguë dont le degré de sévérité va de l'atteinte bénigne à une pneumonie mortelle1. Depuis lors, il est établi que la maladie se présente sous des formes épidémiques et endémiques, et que les symptômes cliniques des cas sporadiques ne permettent pas de les différencier rapidement des autres infections respiratoires. Selon les estimations, environ 25 000 cas d'infections à Legionella se déclarent tous les ans2. Les facteurs de risque connus incluent l'immunosuppression, le tabagisme, la consommation d'alcool et une bronchopneumopathie concomitante2. Le taux de mortalité qui en résulte, qui peut atteindre 25 % chez les patients immunocompétents non traités, peut être réduit par un diagnostic rapide de la maladie et la 12

Berdal4 a démontré dès 1979 qu'un antigène soluble spécifique était présent dans l'urine des patients atteints de légionellose5,6,7,8. La présence d'un antigène spécifique fait de l'urine un échantillon idéal pour le prélèvement, le transport et la détection, tant dans la phase précoce que dans les phases ultérieures de la maladie9. Le kit Binax™ Legionella Urinary Antigen EIA utilise la méthodologie de microtitration ELISA pour la détection de l'antigène soluble dans l'urine des patients présentant une infection à Legionella pneumophila sérogroupe 1.

Principes de la procédure Les puits de microtitration contenus dans le kit sont revêtus d'un anticorps polyclonal spécifique de l'antigène L. pneumophila sérogroupe 1. L'urine du patient est ajoutée dans les puits de microtitration et, s'il est présent, l'antigène L. pneumophila sérogroupe 1 est capturé par les puits de microtitration revêtus d'anticorps (phase solide). Le conjugué HRP anti-Legionella ajouté en même temps que l'échantillon du patient se lie à l'antigène L. pneumophila sérogroupe 1. Après incubation, les puits sont décantés et lavés afin d'éliminer toute trace d'antigène et de conjugué non liés. Un révélateur de couleur est ajouté aux puits et incubé. La réaction enzymatique est stoppée à l'aide d'une solution d'arrêt et les valeurs d'absorbance des couleurs ainsi obtenues sont lues sur un lecteur de microplaques. Les échantillons dont les valeurs d'absorbance sont supérieures ou égales à 3 fois la valeur du contrôle négatif sont considérés comme positifs.

Matériel fourni 1

2

3

Puits de microtitration - Chaque kit contient 96 puits de microtitration revêtus d'IgG anti-Legionella pneumophila sérogroupe 1. Prêts à l'emploi. Stocker entre 2 et 8 °C.

FR

Contrôle d'urine négatif - Un (1) flacon contenant 2 ml d'urine humaine normale et un conservateur. Prêt à l'emploi. Stocker congelé entre -10 et -20 °C en aliquots ou entre 2 et 8 °C tel que fourni.

5

Conjugué HRP - Un (1) flacon contenant 15 ml d'IgG anti-Legionella pneumophila sérogroupe 1 purifiées conjuguées à de la peroxydase de raifort (HRP) dans un tampon Tris avec stabilisateur de protéines. Contient du thimérosal à moins de 0,02 % (conservateur). Prêt à l'emploi. Stocker entre 2 et 8 °C.

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Révélateur de couleur - Un (1) flacon contenant 25 ml de solution de substrat chromogène contenant du tétraméthylbenzidine (TMB) et du peroxyde d'hydrogène. Prêt à l'emploi. Stocker entre 2 et 8 °C.

7

Solution d'arrêt - Un (1) flacon contenant 10 ml de solution à 1 N de H2S04. Stocker entre 2 et 8 °C.

Précautions

Considérations relatives à la sécurité •  MANIPULER LES ÉCHANTILLONS D'URINE ET LES CONTRÔLES D'URINE POSITIF ET NÉGATIF COMME S'ILS POUVAIENT TRANSMETTRE UN AGENT INFECTIEUX.

Concentré de lavage - Un (1) flacon contenant 40 ml de solution saline tamponnée au phosphate à 0,1 M, un détergent et un conservateur. Diluer le contenu avec de l'eau distillée ou désionisée pour obtenir 400 ml de concentré prêt à l'emploi. Stocker entre 2 et 30 ˚C. Contrôle d'urine positif - Un (1) flacon contenant 2 ml d'urine humaine comportant l'antigène Legionella pneumophila sérogroupe 1 et un conservateur. Prêt à l'emploi. Stocker congelé entre -10 et -20 °C en aliquots ou entre 2 et 8 °C tel que fourni.

4

• Les contrôles d'urine fournis dans le kit ont été stérilisés à l'autoclave pendant au moins 15 minutes à 121 °C et filtrés sur un filtre à membrane de 0,2 µm, et contiennent de l'acide borique à 0,8 % (conservateur). Bien qu'ayant été traités selon ces méthodes acceptées d'inactivation des micro-organismes, il ne faut pas partir du principe que ces méthodes garantissent une inactivation complète. 13

FR Considérations relatives aux performances

• Ne pas pipeter à la bouche. Ne pas manger, fumer ou boire dans des zones où sont manipulés les échantillons ou les réactifs du kit. Porter des gants jetables tout au long de la réalisation du test. Mettre les gants au rebut dans un conteneur pour déchets présentant un danger biologique. Se laver soigneusement les mains par la suite. Éviter tout contact avec la peau ou les muqueuses.

• Ne pas utiliser les composants du kit au-delà de leur date d'expiration. La date est imprimée sur l'étiquette de chaque composant ainsi que sur la boîte du kit. • Ne pas substituer des réactifs provenant d'autres lots de kits. Les réactifs sont spécifiques au kit. Chaque lot de kit a été optimisé pour la détection de l'antigène Legionella pneumophila sérogroupe 1 directement à partir d'échantillons cliniques. La dilution et l'altération des réactifs peuvent entraîner une perte de sensibilité.

• La solution d'arrêt contient de l'acide sulfurique et doit être manipulée conformément aux réglementations existantes s'appliquant à la sécurité du laboratoire ainsi qu'aux bonnes pratiques de laboratoire. Danger : Provoque des brûlures de la peau et des lésions oculaires graves.

• Éviter toute contamination microbienne des réactifs. La contamination microbienne peut affecter la sensibilité du dosage.

• Le révélateur de couleur contient du N,N-diméthylformamide (composant du mélange). Peut être nocif en cas d'ingestion, d'inhalation ou d'absorption par la peau.

• Ne pas échanger les capuchons et les bouchons des flacons ou des bouteilles afin d'éviter toute contamination croisée des réactifs.

• La solution de lavage contient du ProClin® 300. Attention : Peut provoquer une allergie cutanée, provoque une irritation cutanée, provoque une sévère irritation des yeux, nocif pour les organismes aquatiques, entraîne des effets néfastes à long terme.

• Des durées d'incubation ou des températures autres que celles spécifiées peuvent produire des résultats erronés. • Le révélateur de couleur est photosensible. Stocker dans une bouteille ambrée. En cas d'utilisation de fioles à réactifs, distribuer uniquement une quantité convenant à la taille de la série, soit environ 2 ml pour chaque bandelette de microtitration.

• Le conjugué HRP contient un ingrédient répertorié dans la liste établie en vertu de la loi de Californie Safe Drinking Water and Toxic Enforcement Act de 1986, Chapitre 3, Section 12000, Chemicals Known to Cause Cancer or Reproductive Toxicity. L'ingrédient en question est le thimérosal, reconnu par l'État de Californie comme étant un produit toxique pour la reproduction. Le conjugué HRP contient du mercure. Mettre au rebut conformément aux lois locales, régionales ou nationales.

• Stocker la solution de lavage diluée dans un conteneur propre afin d'éviter toute contamination. Ne pas éliminer la solution de lavage diluée non utilisée tant que tous les puits de microtitration n'ont pas été utilisés ou tant que leur date d'expiration n'est pas écoulée.

• Les fiches de données de sécurité de ce produit sont disponibles sur demande. • Suivre les réglementations nationales, régionales et locales concernant la mise au rebut des déchets.

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• L'étape de lavage est essentielle. Un lavage insuffisant peut produire des résultats erronés. L'utilisation d'appareils de lavage automatisés peut nécessiter des lavages supplémentaires. Si

la valeur d'absorbance du contrôle négatif excède 0,100 unité d'absorbance, augmenter le nombre de lavages jusqu'à ce que la valeur d'absorbance du contrôle négatif figure dans la plage acceptable (