PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI EN ALIMENTOS UTILIZANDO AGAR VRB-MUG Sección Microbiología de Alimentos 1.

PRT-712.02-037

Fecha emisión: 1996 Revisión: 5 Fecha revisión: 12-09-2011 Página 1 de 8

OBJETIVO

Enumerar los microorganismos E. coli presentes en una muestra de alimento 2.

CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE

Muestras de alimentos que se requiera realizar método rápido de Recuento de E. coli 3.

FUNDAMENTO

La incorporación de 4-methylumbelliferyl- beta- D- glucoronide (MUG) en Agar Rojo Neutro permite la detección de E. coli de entre otras colonias coliformes a través de la detección de la actividad beta- glucoronidasa. E. coli produce la enzima beta-glucoronidasa la cual hidroliza el MUG produciendo un compuesto fluorogénico detectable con luz UV a 366 nm. Las cepas típicas de E. coli, colonias rojas con precipitación biliar, muestran fluorescencia. Los coliformes que no son E. coli pueden producir colonias rojas con zonas de precipitación biliar pero son MUG negativas. 4.

REFERENCIAS

4.1

Bacteriological Analytical Manual Online Septiembre 2002 Capitulo 4, letra G

5.

TERMINOLOGÍA

5.1

No Aplica

6.

MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

6.1

EQUIPOS

6.1.1

Todo lo requerido para el método convencional, PRT-712.02-008.

6.1.2

Lámpara UV 6 Watt

6.2

MATERIALES

6.2.1

Lentes UV

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6.3

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MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

6.3.1

Todo lo requerido para el método convencional PRT-712.02-008

6.3.2

Agar VRB-MUG (100 ug. de MUG/ ml. de medio)

7.

DESARROLLO

7.1

TEST PRESUNTIVO

7.1.1

Realizar el método convencional descrito en el punto 7 del PRT-712.02-008 Método de recuento en placa para la determinación de coliformes en alimentos, utilizando agar VRB-MUG.

7.1.2

Utilizar cepa de E. coli como control positivo.

7.1.3

Al término del período de incubación, observar la fluorescencia de las colonias bajo luz UV.

7.1.4

Anotar los resultados en el “Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos”

7.2

CÁLCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS

7.2.1

Considerar para hacer el recuento aquellas colonias que presentan fluorescencia bajo la luz UV.

7.2.2

Los resultados del Recuento de E. coli se expresan cuantitativamente en Nº ufc/g o mL. de muestra.

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REGISTROS -

Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos

-

Registro cepas control de incubadoras

-

Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli

-

Registro control de ambiente

9.

ANEXOS -

Anexo Nº 1. RG-712.00-072. Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos.

-

Anexo Nº 2. RG-712.00-004. Registro cepas control de incubadoras.

-

Anexo Nº 3. RG-712.00-006. Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli

-

Anexo Nº 4. RG-712.00-009. Registro control de ambiente.

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Anexo Nº 1. RG-712.00-072 Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos Nº:...................................Tipo de muestra :.......................................................Analista..................................................

Fecha /hora recolección.............................Fecha/hora análisis:.....................Tº Ambiental…………….

E. coli y coliformes Medios

CLST (S) #

CBCB #

Incubadora/ Baño term.

PORCION DE MUESTRA (mL) COLIFORMES PRESUNTIVO CLST o VRBA 24 / 48 hrs.a 35ºC COLIF. CONFIRMATIVO CBVB 24 / 48 hrs. a 35 ºC E.coli CONFIRMATIVO Caldo E.C: a 44,5ºC 24 h / 48 h PRUEBAS BIOQUÍMICAS IMViC

Indol RM V. P Citrato

Diluyente #

VRBA #

Caldo EC #

C. Tripotona #

C. RM-VP #

C. Koser #

Pipeta 1/5 mL #

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P/A

Pre-enriq. #

TT #

Rapa. #

Iodo #

Verde Bri. #

XLD #

Hecktoen #

Bismuto #

TSI #

LIA #

MIO #

Pipeta 1/5 mL #

Incubadora /Baño ter.

Caldos enriquecimiento Agares Selectivos

Tetrathionato Rappaport T°C…… T°C…… Agar Bismuto Sulfito Colonias: Colonias:

Tetrathionato Rappaport T°C…… T°C…… Agar Hektoen Colonias: Colonias:

Tetrathionato Rappaport T°C…… T°C…… Agar XLD Colonias: Colonias:

TSI LIA MIO SEROLOGIA Otros

N.M.P. Coliformes :......................................germ/g

Rto coliformes....................ufc/g

N.M.P. E. coli :.............................................germ /g

Rto de E. coli......................ufc/g

P/A E.coli /g:............................................................. P/A Salmonella en 25 o 50 g :..............................................Fecha informe……………………………

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Anexo Nº 2. RG-712.00-004 Registro cepas control de incubadoras

FECHA

Incub. Nº inventario

Incub. Nº inventario

Incub. Nº inventario

Incub.Nº inventario

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

CONTROLES

CONTROLES

CONTROLES

CONTROLES

LST BVB VRB LST BVB VRB LST BVB (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - )

INIC:

VRB LST BVB VRB (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - )

Anexo Nº 3. RG-712.00-006 Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli FECH A

Caldo Lauril Sulfato Triptosa concentra d

Caldo Lauril Sulfato Triptosa simple

Agar Caldo Rojo Bilis Neutro Verde Cristal Brillant Violeta e (VRB)

Cald o EC

Cald o A-1

Agar Rojo Neutro Cristal Violeta Glucosa (VRBG)

Agar MacConke y Sorbitol

Agar glucosa (enterobacteria)

INIC

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Anexo Nº 4. RG-712.00-009 Registro control de ambiente LABORATORIO:......................................................................................................MES :....................................................................................AÑO :.............................. FECHA /

LOTE MEDIO

CONTROL AMBIENTE MESON DE TRABAJO Lado izquierdo Placa abierta Placa cerrada

Lado derecho Placa abierta Placa cerrada

CONTROL AMBIENTE FLUJO LAMINAR Izquierda fondo Placa Placa abierta cerrada

Izquierda afuera Placa Placa abierta cerrada

Derecha fondo Placa Placa abierta cerrada

Derecha afuera Placa Placa abierta cerrada

INIC