• Análisis de la arquitectura: patrones • Análisis citológico
Morfología • Identificación del problema • Diseño de los estudios subsiguientes: Inmunohistoquímicos Moleculares Citogenéticos (FISH)
Técnicas de diagnóstico
Morfología
Histología
Inmunofenotipo
Inmunohistoquímica Citometría de flujo
Genética
FISH PCR
Ag
CD79a CD20 CD23 bcl-2 bcl-6 CD10
Ag
CBMV
CPNH
Burkitt
CB
CC
Ag
CD79a CD20 CD23 bcl-2 bcl-6 CD10 Burkitt
Inmunohistoquímica • Fijación • Recuperación antigénica • Reacción antígeno-anticuerpo • Detección de la reacción
Inmunohistoquímica • Fijación • Recuperación antigénica • Reacción antígeno-anticuerpo • Detección de la reacción
BCL2 enz
BCL2 mw 15’
BCL2 aut 6’
Inmunohistoquímica Morfología • Fijación • Recuperación antigénica • Reacción antígeno-anticuerpo • Detección de la reacción
AB-P c D1
Dextrano-P c D1
CSA c D1
Inmunohistoquímica Morfología • Selección de un panel de ac. primarios • Evaluación de los controles int. y ext. • Identificación de las células tumorales • Interpretación del resultado
- Niño de 2 años - Tumoracion intranasal - Sospecha de linfoma T/NK de tipo nasal - Se solicita realización de CD56
CD56
Desmina
Inmunohistoquímica Morfología
• Selección de un panel de ac. primarios • Evaluación de los controles int. y ext. • Identificación de las células tumorales • Interpretación del resultado
Porta con control
Inmunohistoquímica Morfología
Control externo
+
+
-
-
Control interno
+
-
+
-
Inmunohistoquímica Morfología
“ Bajo condiciones inapropiadas cualquier anticuerpo puede dar resultados aparentemente positivos en cualquier tejido”
- Niño de 9 años - Sin antecedentes patológicos - Dolor abdominal - Masa abdominal - Tumoración gástrica
CD20
MPX
Inmunohistoquímica Morfología
• Selección de un panel de ac. primarios • Evaluación de los controles int. y ext. • Identificación de las células tumorales • Interpretación del resultado
• Células tumorales Se detecta: …….. No se detecta: ………. • Células acompañantes Se detecta: …… No se detecta: ……
- Varón de38 años - Astenia anorexia y pérdida de peso - No adenopatías - Nódulos pulmonares bilaterales de 1 a 20 mm de Ø - Sospecha de linfoma T pulmonar. Se remite muestra para estudio del reordenamiento del gen que codifica el TcR
• Improntas o extendidos iicitológicos • Secciones de tejido incluido iien parafina
FISH Morfología
Detección de fusiones (“dual-color, dual-fusion”) Sondas Detección de roturas (“split”, “break-apart”)
FISH Morfología
Detección de fusiones (“dual-fusion”) Sondas Detección de roturas (“split”, “break-apart”)
A A
B B
A B A B A B
A
A B B
BCL-2 BCL-2 IgH IgH
A A X X B B
A A A B B
A
A B B
BCL-2 IgH
FISH: detección de fusiones Morfología • Ventajas Proporciona información sobre i los dos genes implicados en la iiiiiiiiiitranslocación • Inconvenientes Dificil de interpretar
FISH Morfología
Detección de fusiones (“dual-fusion”) Sondas Detección de roturas (“split”, “break-apart”)
A
A B B
A
A B B
FISH: detección de roturas Morfología • Ventajas Facil de interpretar • Inconvenientes iiiiiiiSolo nos proporciona información iiiiiiisobre uno de los genes implicados iiiiiiien la translocación
Técnicas de diagnóstico
Morfología
Histología
Inmunofenotipo
Inmunohistoquímica Citometría de flujo
Genética
FISH PCR
PCR Morfología
• Detección de translocaciones • Detección de clonalidad
A B A B A B
B
B
PCR Morfología
“Un resultado positivo tiene
mucho más valor que un resultado negativo”
PCR Morfología t (14;18) en Linfomas Foliculares Regiones estudiadas MBR
Falsos negativos %
MBR+3´MBR
55%
MBR+mcr
48%
MBR+mcr+3´MBR
42%
58%
PCR Morfología MBR
mcr
3´MBR
PCR Morfología
• Detección de translocaciones • Detección de clonalidad
“Los estudios de clonalidad no deben utilizarse para establecer el linaje de un linfoma”
- Mujer de 68 años - Desde hace 6 meses presenta en la mitad superior de la espalda un nódulo solitario de 2cm de Ø que no se halla ulcerado - No se detectan otras lesiones ni adenopatías
CD20
IgH
TcR
Recapitulación y diagnóstico
• Diagnóstico de una entidad reconocida por la OMS • Linfoma de dificil clasificación • Infiltración linfoide de significado incierto