UNCPBA – FCV – SAMP - Ciclo Lectivo 2015 ÁREA DE MICROBIOLOGÍA CURSO: Microbiología - Carrera de Medicina Veterinaria CONTENIDO PROGRAMÁTICO Y BIBLIOGRAFÍA SUGERIDA PARA CADA TRABAJO PRÁCTICO. PROTOCOLOS DE TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. TEMARIO DE LAS EVALUACIONES.

TRABAJO PRÁCTICO 1 Contenido Programático: TÉCNICA MICROBIOLÓGICA. Normas mínimas de laboratorio. Descripción y manejo del equipamiento del Laboratorio Microbiológico. Manejo del microscopio óptico. Observación bacteriana: directa con fondo oscuro, extendidos con diferentes tinciones, Gram, Giemsa, Ziehl Neelsen y fucsina. Objetivos: - Conocer la distribución de los elementos en la mesada de trabajo. - Conocer y aplicar las buenas prácticas de laboratorio. - Adquirir destreza en el manejo del microscopio óptico. Normas generales de uso del laboratorio para el trabajo de los alumnos: Para el desarrollo de todas las prácticas que incluyan TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser minuciosamente observadas. 1. Usar siempre guardapolvo en el laboratorio. 2. Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente el Protocolo para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y técnica. 3. Accidentes personales, tales como derrame de reactivos, cortes y quemaduras, deben comunicarse inmediatamente al Docente a cargo. 4. El orden y la limpieza son esenciales en todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada práctica cada grupo de alumnos se responsabilizará de limpiar cuidadosamente su zona de trabajo y de la disposición adecuada del material utilizado. 5. Los productos inflamables (alcohol, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. 6. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de su contenido y de los posibles riesgos de su manipulación. 7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. Apagar, desenchufar, y limpiar antes de taparlos. 8. Todos los materiales de desecho que hayan entrado en contacto con microorganismos (como material descartable, placas de Petri o tubos), deben colocarse en bolsas de autoclave preparadas para tal efecto, para proceder posteriormente a su esterilización. Las pipetas de vidrio y los cubreobjetos y portas usados se colocarán en recipientes especiales para vidrio con su correspondiente solución desinfectante. 9. Nunca deben sustraerse cultivos de microorganismos del laboratorio. 10. Lavarse las manos con jabón o con un desinfectante si es necesario, antes de dejar el laboratorio. PROTOCOLO PARA LOS ALUMNOS - Observar durante el transcurso del práctico normas mínimas de trabajo microbiológico, aplicando sistemas de protección biológica y de contención, alrededor del microorganismo;

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alrededor del operador; y para la protección del medio ambiente frente a posibles escape y diseminación indeseada de microorganismos. Normas mínimas para la persona: guardapolvo prendido, uñas cortas, cabello recogido, apuntes, libros y carpetas, alejados del área de siembra, etc.. - Limpieza de mesadas, previo y posterior uso con alcohol 70º, ó lavandina diluida. Disposición de los elementos en la mesa de trabajo. - Verificar los elementos de trabajo en la mesa y distribución adecuada de los mismos. - Trabajar dentro del área de protección del mechero. - Practicar manejo del microscopio, reconocimiento de sus partes. Enfoque. - Observación en campo oscuro: bacterias móviles - Observación de coloraciones: Gram, Giemsa, Ziehl Neelsen y fucsina. Bibliografía: - Bayley-Scott "Diagnóstico Microbiológico". Ed. Panamericana 1973 - Finegold S.,Baron. “Bailey Scott. Diagnóstico microbiológico”.Ed. Panamericana. 7º Ed.1991. - Carter, G. R. "Bacteriología y Micología Veterinaria". Ed. El Manual Moderno" 1985 - Carter, G. R. "Fundamentos de Bacteriología y Micología Veterinaria". Ed. Acribia 1989 - Collins C.H., Patricia M. Lyne. Métodos microbiológicos. Editorial Acribia, 5º ed. 1989. - Delgado Iribarren y cols. “Laboratorio clínico. Microbiología” Ed. Inter- Mcgraw - Hill, 1994. - Paraje-Paraje-Nobile "Microbiología Clínica" Ed. Britania 1984 . - Stanchi, N.O. y cols. “Microbiología Veterinaria” Ed. Inter - Médica, 1ra edición, 2005. - Fotocopias del Centro de Est. de Vet. Microbiología. Bibliografía de lectura básica sugerida.

TRABAJO PRÁCTICO 2 Contenido programático: TALLER- Resolución de Cuestionario. Discusión e informe grupal. Microbiología: Definición. Breve reseña histórica y Taxonómica. Clasificación de Linneo, Haeckel, Stanier, Murray, Whitakker, Clasificación en Dominios: Wöese. Protistas: diferencias entre Procariotas y Eucariotas. Definición de bacteria. Dimensiones y morfología bacteriana. Teorías de Gram. Estructuras comunes: pared celular, membrana citoplasmática, citoplasma, vacuolas, inclusiones, ribosomas, mesosomas, equivalente nuclear. Ultraestructura, composición química y función de cada una de ellas. Estructuras no comunes: Flagelo, cápsula. Estructuras de adhesión: pili, glucocalix, slime, película biológica. Ultraestructura, composición química, visualización y función. Esporo bacteriano: capas del esporo, composición química, visualización y función; procesos de esporulación y germinación; resistencia. Actinomicetales, clamidias, ricketsias y micoplasmas: diferencias estructurales y morfológicas con las bacterias típicas. Objetivos - Reconocer y categorizar los microorganismos. - Reconocer distintas formas bacterianas. - Reconocer las estructuras bacterianas comunes. - Reconocer cada una de las estructuras bacterianas no comunes Bibliografía. A la bibliografía de los Trabajos Prácticos anteriores agregar: - Gutierrez Vazquez, J. "Microorganismos", EA Serie de Biología Nro 6. - Palleroni, N "Principios generales de Microbiología", OEA Serie de Biología Nro 7 1980. - Walter-Mc Bee-Temple "Introducción a la Microbiología" - Tortora-Funke-Case Introducción a la microbiología" Ed. Acribia. 1993. - Davis-Dulbecco "Tratado de Microbiología" Ed. Salvat 1979 y 1984 ..

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- Basualdo, J.A.; Coto, C. E.; de Torres, R. A. “Microbiología biomédica” Ed. Atlante s.r.l., 1996 - Brooks – Jawetz “Microbiología Médica” 1992 Ed. El Manual Moderno.

TRABAJO DE LOS ALUMNOS Se conformarán tres grupos de trabajo en cada laboratorio. (Aproximadamente 7 alumnos por mesada) - cada Grupo designará a uno de sus integrantes como Secretario, que será responsable de la escritura del Informe del Taller. - Se entrega a cada Grupo el cuestionario (c/ 3 interrogantes) para responder, previa discusión entre la totalidad de los integrantes. Podrán solicitar orientación a los docentes y consultar la bibliografía disponible. - Finalizado el tiempo de discusión (aprox. 20’) elaboraran un Informe escrito que uno de los integrantes expondrá/leerá al resto de la clase. En la hoja del Informe deberá constar Fecha, Comisión y Apellido y Nombre de los integrantes. Al finalizar la exposición los alumnos recibirán las preguntas de la Evaluación Individual 1. Recordar de poner apellido, nombre, fecha y comisión en la hoja de evaluación.

TRABAJO PRÁCTICO 3 Contenido programático: TALLER Resolución de Cuestionario. Discusión e informe grupal. Fisiología bacteriana: Metabolismo. Composición química de la célula bacteriana. Definición de crecimiento. Síntesis de macromoléculas; nutrición o incorporación de nutrientes. Clasificación en Autótrofos y Heterótrofos. Reacciones: catabolismo, anfibolismo, anabolismo. METABOLISMO. Enzimas: Definición. Clasificación por sustrato y por sitio de reacción. Reacciones químicas involucradas en la producción de Energía: OXIDO-REDUCCION. Sistemas metabolizables de los hidratos de carbono (vías metabólicas). Clasificación de las oxidaciones biológicas por aceptor final de hidrógeno: respiración aeróbica, respiración anaeróbica y fermentación. Clasificación de los microorganismos por fuentes de obtención y utilización del 02; enzimas respiratorias: superóxidodismutasa, catalasa y oxidasa. Definición de crecimiento. Requerimientos mínimos para el crecimiento "in vitro": nutrientes, temperatura, pH, humedad, oxígeno, iones, sales, oligoelementos, presión osmótica, etc. Cultivo "in vitro": medios de cultivo, definición y clasificación. Fisiología bacteriana: Reproducción Reproducción asexual: Objetivo, mecanismo de la fisión binaria. Duración del Proceso. Curva de crecimiento bacteriano: gráfico, fases. Medición del crecimiento. Reproducción sexual: Objetivo. Tipos: transformación, conjugación, transducción; definición y descripción de cada uno. Diferencias fisiológicas en actinomicetales, clamidias, ricketsias y micoplasmas. Biotecnología: definición. Plásmidos: definición. Distintos tipos. Función. Clonado. Aplicación de la biotecnología en Medicina Veterinaria y otras ciencias. Objetivos: - Conocer y analizar el modo en que se nutren y crecen las bacterias. - Conocer los requerimientos nutritivos de las bacterias para el crecimiento “in vitro”. - Reconocer la forma de reproducción de los Protistas. - Conocer los principios básicos de la biotecnología y su aplicación. Bibliografía: Idem Trabajos Prácticos anteriores.

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TRABAJO DE LOS ALUMNOS Se conformarán tres grupos de trabajo en cada laboratorio. (Aproximadamente 7 alumnos por mesada) - cada Grupo designará a uno de sus integrantes como Secretario, que será responsable de la escritura del Informe del Taller. - Se entrega a cada Grupo el cuestionario (c/ 3 interrogantes) para responder, previa discusión entre la totalidad de los integrantes. Podrán solicitar orientación a los docentes y consultar la bibliografía disponible. - Finalizado el tiempo de discusión (aprox. 20’) elaboraran un Informe escrito que uno de los integrantes expondrá/leerá al resto de la clase. En la hoja del Informe deberá constar Fecha, Comisión y Apellido y Nombre de los integrantes. Al finalizar la exposición los alumnos recibirán las preguntas de la Evaluación Individual 2. Recordar de poner apellido, nombre, fecha y comisión en la hoja de evaluación.

TRABAJO PRÁCTICO 4 Contenido Programático: TEÓRICO PRÁCTICO. Resolución de caso clínico. Proceso sistemático para el aislamiento e identificación de bacterias a partir de muestras clínicas. Normas para el examen bacteriológico. Muestras: Selección, toma, conservación y envío de Muestras clínicas. Requisitos generales y especiales para la toma y envío de muestras clínicas al Laboratorio de Diagnostico. Muestras clínicas que requieren normas especiales. Eliminación del material infeccioso. Objetivo: adquirir conceptos teóricos para la adecuada selección y envío de muestras clínicas. Bibliografía: Idem Trabajos Prácticos anteriores y contenido de las clases teóricas sobre géneros bacterianos expuestos con anterioridad.

TRABAJO PRÁCTICO 5 Contenido Programático: TÉCNICA MICROBIOLÓGICA. Exposición Grupo experto Bioseguridad y riesgo. Definición de riesgo. Riesgos Biológicos: riesgo microbiológico. Sistemas de protección biológica. Contención biológica. Esterilización. Desinfección. Medios de cultivo: criterios de uso Introducción al Proceso sistemático para el aislamiento e identificación de bacterias a partir de muestras clínicas. Conocer los pasos del proceso para un correcto diagnóstico microbiológico Concepto de aislamiento. Elección y siembra de medios primarios. Siembras en agar sangre y medios selectivos. Técnica de Siembra de bacterias: en medios líquidos, sólidos y semisólidos. Inoculación en tubo: en medio líquido; en medio sólido, por estría y por punción. Inoculación en placa por estría y por dispersión. Incubación aerobia, anaerobia y microaerófila. Pautas de orientación para el uso de esquemas mínimos de identificación de acuerdo al proceso sistemático de muestras clínicas. Elección y siembra de medios diferenciales. Pruebas bioquímicas más usuales. Acción sobre azúcares, proteínas y producción de enzimas. Interpretación de pruebas bioquímicas y tablas de identificación. Objetivos: - Conocer el riesgo microbiológico y su prevención. - Conocer los medios de cultivo más usuales en bacteriología y el fundamento de su empleo. - Conocer las distintas técnicas de siembra de bacterias en medios de cultivo, de acuerdo al propósito de la misma.

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Algunas precauciones para el trabajo de los alumnos: 1. Se debe trabajar dentro del área de protección del mechero. 2. Los medios inoculados (sembrados) deben colocarse en las estufas de cultivo con su identificación respectiva, ej.: número de mesa, nombre, naturaleza del espécimen o sustrato del cual se aísla. 3. Los cubreobjetos y portaobjetos deben tomarse por los bordes para evitar que se engrasen y proceder a marcarlos con lápiz dermatográfico en el reverso. 4. Los tubos de ensayo con medios de cultivos o cultivos de microorganismos, nunca deben abrirse en posición vertical, sino lo más horizontalmente posible (inclinados) y para quitar el tapón se mantendrán inclinados con una mano y se abrirán con la otra, que sostendrá a su vez el ansa y el tapón. Una vez abierto, se flamea por algunos segundos el orificio, repitiendo dicha operación una vez realizada la siembra. 5. El tapón nunca debe dejarse sobre la mesada. 6. Antes de utilizar las ansas que sirven para las siembras, éstas deben flamearse al rojo en posición vertical bajo la acción de la llama; también debe flamearse ligeramente el mango. Antes de efectuar la siembra debe esperarse algunos segundos a que se enfríen, pudiendo enfriarse también en el borde de la placa de Petri que contiene el medio de cultivo. Inmediatamente después de haberlas utilizado, deben flamearse nuevamente. 7. Concepto de aislamiento: Para identificar un microorganismo presente en una muestra clínica es necesario manejarlo en un cultivo puro, libre de otro tipo de microorganismos. Para hacer esto, debe aislarse una sola célula de todas las demás y ser cultivada de tal manera que su progenie también permanezca aislada. Para este objeto una de las formas es sembrar la muestra en un medio sólido en placa donde cada célula dará origen a una colonia aislada que representa una población de microorganismos. PROTOCOLO PARA LOS ALUMNOS - Este práctico dará comienzo con la exposición de Grupo Experto quienes ubicarán el tema en el Proceso-Sistemático y explicarán las técnicas, definiciones o conceptos y propósitos. - Observar durante el transcurso del práctico normas mínimas de trabajo microbiológico, aplicando sistemas de protección biológica y de contención. - Limpieza de mesadas, previo uso con alcohol 70º. - Verificar los elementos de trabajo en la mesa y distribución adecuada de los mismos. - Aplicación de la esterilización y desinfección. - Práctica de las distintas técnicas de siembra. Ver Carpeta de mesa. Materiales para trabajar por mesada Práctica de siembra en distintos medios: Medios sólidos en placa para diseminación por estría Medios sólidos en agar inclinado (picos de flauta) Medios semisólidos para punción Medios de cultivo líquidos. Caldos Ordenar y limpiar la mesada posterior uso con alcohol 70º. Bibliografía: A la bibliografía recomendada en los Trabajos Prácticos, agregar: - OPS/OMS. "Cuarentena Animal" Volumen 3, Capítulo XI Limpieza y Desinfección. 1986. - Asociación Argentina de Microbiología "Bioseguridad en el Laboratorio". ABCL, Suplemento Nro 4, 1988 y Nro 1, 1990. - Cowan-Steel "Manual para la identificación de Bacterias de Importancia Médica". Ed. CECSA 1974

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TRABAJO PRÁCTICO 6 Contenido Programático: TÉCNICA MICROBIOLÓGICA Introducción al Proceso sistemático para el aislamiento e identificación de bacterias a partir de muestras clínicas. Concepto de aislamiento. Elección y siembra de medios primarios. Siembras en agar sangre y medios selectivos. Observación del crecimiento en medios líquidos y sólidos. Morfología de colonias: parámetros para su descripción. Morfología bacteriana: Observación bacteriana: directa con fondo oscuro, extendidos con Gram. Concepto de cultivo puro. Pautas de orientación para el uso de esquemas mínimos de identificación de acuerdo al proceso sistemático de muestras clínicas. Elección y siembra de medios diferenciales. Pruebas bioquímicas más usuales. Acción sobre azúcares, proteínas y producción de enzimas. Interpretación de pruebas bioquímicas y tablas de identificación. Objetivos: - Conocer y describir las características del crecimiento bacteriano en distintos medios. - Conocer las distintas formas de montaje de bacterias para su observación. - Reconocer las distintas morfologías bacterianas. - Clasificar las bacterias por morfología y reacción al Gram. - Aplicar las técnicas para la adecuada interpretación de la observación microscópica. - Conocer los pasos del proceso para un correcto diagnóstico microbiológico. PROTOCOLO PARA LOS ALUMNOS - Observar durante el transcurso del práctico normas mínimas de trabajo microbiológico, aplicando sistemas de protección biológica y de contención. - Limpieza de mesadas, previo uso, con alcohol 70º. - Verificar los elementos de trabajo en la mesada y distribución adecuada de los mismos. - Aplicación de la esterilización y desinfección. - Describir el crecimiento bacteriano en distintos medios de cultivo. Ver Carpeta de Mesa. - Verificar la existencia de los elementos para realizar: morfología de colonias a partir de las placas usadas para aislamiento. Seguir los parámetros descriptivos de la Carpeta de Mesa. - Hacer coloración de Gram. Ver Carpeta de Mesa. - Práctica de las distintas técnicas de observación de bacterias: coloración de Gram y en fresco. - Clasificar las bacterias por morfología y reacción al Gram. - Ordenar y limpiar la mesada posterior uso con alcohol 70º. Bibliografía: Idem Trabajos Prácticos anteriores.

TRABAJO PRÁCTICO 7 Contenido Programático: TÉCNICA MICROBIOLÓGICA Técnicas micológicas. Microscopía, observación directa y con tinción, preparación del espécimen; reconocimiento de formas y estructuras fúngicas. Cultivo: técnicas de siembra, en placa y en tubo, para levaduras y mohos. Morfología de colonias. Mostración de cultivos y observación de extendidos. Objetivos - Conocer los requerimientos nutritivos de los hongos para el crecimiento “in vitro” - Aprender las técnicas de observación macro y microscópica de los hongos - Reconocer y categorizar los distintos tipos de hongos de acuerdo a su forma y estructuras. - Reconocer la forma de reproducción de los hongos.

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Bibliografía: A la bibliografía recomendada en los Trabajos Prácticos, agregar: - Lurá de Calafell “Introducción al estudio de la micología” UNL, Ciencia y Técnica. 1997 - Negroni, R. “Micología Médica” Ed. López Libreros - Deacon, J.W. “Introducción a la micología moderna” Ed. Limus-Noriega. 1990 - Rippon, J. “Tratado de Micología Médica” Ed. Interamericana McGraw-Hill. 1990 - Van Gelderen, A. y cols. “Serie Los Hongos 1. Temas de micología básica” U.N. Tucumán. 2001

PROTOCOLO PARA LOS ALUMNOS - Observar durante el transcurso del práctico normas mínimas de trabajo microbiológico, aplicando sistemas de protección biológica y de contención. - Verificar los elementos de trabajo en la mesa y distribución adecuada de los mismos. - Limpieza de mesadas, previo uso, con alcohol 70º. - Aplicación de la esterilización y desinfección. - Describir el crecimiento fúngico: - Observación de caracteres micromorfológicos. Preparados de muestras: observación de micelios o formas de resistencia Preparados de macro y microcultivos: observación de micelios, esporos de reproducción y de resistencia - Observación de Caracteres macromorfológicos Observación de cultivos, morfología de colonias, uso de la Lupa. Ver Carpeta de mesa. - Montaje entre portaobjetos y cubreobjetos de muestras y cultivos con coloración vital: azul de lactofenol. - Ordenar y limpiar la mesada posterior uso con alcohol 70º. Al finalizar, los alumnos recibirán las preguntas de la Evaluación Individual 3. Recordar de poner apellido, nombre, fecha y comisión en la hoja de evaluación. Bibliografía: Idem Trabajos Prácticos anteriores.

TRABAJO PRÁCTICO 8 Contenido Programático: TÉCNICA MICROBIOLÓGICA. Exposición Grupo experto Pruebas de susceptibilidad bacteriana a los antibióticos. Método por difusión: antibiograma. Concentración inhibitoria mínima (CIM). Criterio de su adecuado y oportuno uso. Objetivo - Conocer técnicas e interpretar resultados de pruebas de susceptibilidad bacteriana a los antibióticos. PROTOCOLO PARA LOS ALUMNOS - Este práctico dará comienzo con la exposición de Grupo Experto quienes ubicarán el tema en el Proceso-Sistemático y explicarán las técnicas: Definición o concepto. Propósito. Condiciones inherentes al medio de cultivo, al microorganismo y al antibiótico. Resultados. Interpretación. - En las mesadas de trabajo encontrarán 3 placas sembradas con bacterias aisladas a partir de muestras clínicas y sus correspondientes monodiscos. - Con asistencia docente los alumnos deben medir los halos de inhibición y con apoyo bibliográfico, hacer la lectura y ver las tablas correspondientes. Comentarios. - Leer CIM. Criterios de uso. Al finalizar, los alumnos recibirán las preguntas de la Evaluación Individual 4. Recordar de poner apellido, nombre, fecha y comisión en la hoja de evaluación. Bibliografía: Idem Trabajos Prácticos anteriores. 7

TEMARIO DE LAS EVALUACIONES. Lista de los temas que se serán evaluados en los prácticos.

EVALUACIÓN Nº 1 Microbiología: Definición. Breve reseña histórica y Taxonómica. Clasificación de Linneo, Haeckel, Stanier, Murray, Whitakker, Clasificación en Dominios: Wöese. Protistas: diferencias entre Procariotas y Eucariotas. Definición de bacteria. Dimensiones y morfología bacteriana. Teorías de Gram. Normas mínimas de laboratorio. Descripción y manejo del equipamiento del Laboratorio Microbiológico. Manejo del microscopio óptico. Observación bacteriana: directa con fondo oscuro, extendidos con diferentes tinciones, Gram, Giemsa, Ziehl Neelsen y fucsina. Estructuras comunes: pared celular, membrana citoplasmática, citoplasma, vacuolas, inclusiones, ribosomas, mesosomas, equivalente nuclear. Ultraestructura, composición química y función de cada una de ellas. Estructuras no comunes: Flagelo, cápsula. Estructuras de adhesión: pili, glucocalix, slime, película biológica. Ultraestructura, composición química, visualización y función. Esporo bacteriano: capas del esporo, composición química, visualización y función; procesos de esporulación y germinación; resistencia. Actinomicetales, clamidias, ricketsias y micoplasmas: diferencias estructurales y morfológicas con las bacterias típicas.

EVALUACIÓN Nº 2 Metabolismo bacteriano: definición. Composición química de la célula bacteriana. Definición de crecimiento. Síntesis de macromoléculas; nutrición o incorporación de nutrientes. Clasificación en Autótrofos y Heterótrofos. Reacciones: catabolismo, anfibolismo, anabolismo. METABOLISMO. Enzimas: Definición. Clasificación por sustrato y por sitio de reacción. Reacciones químicas involucradas en la producción de Energía: Óxido-Reducción. Sistemas metabolizables de los hidratos de carbono (vías metabólicas). Clasificación de las oxidaciones biológicas por aceptor final de hidrógeno: respiración aeróbica, respiración anaeróbica y fermentación. Clasificación de los microorganismos por fuentes de obtención y utilización del 02; enzimas respiratorias: superóxidodismutasa, catalasa y oxidasa. Definición de crecimiento. Requerimientos mínimos para el crecimiento "in vitro": nutrientes, temperatura, pH, humedad, oxígeno, iones, sales, oligoelementos, presión osmótica, etc. Cultivo "in vitro": medios de cultivo, definición y clasificación. Reproducción asexual: Objetivo, mecanismo de la fisión binaria. Duración del Proceso. Curva de crecimiento bacteriano: gráfico, fases. Medición del crecimiento. Reproducción sexual: Objetivo. Tipos: transformación, conjugación, transducción; definición y descripción de cada uno. Actinomicetales, clamidias, ricketsias y micoplasmas: diferencias fisiológicas con las bacterias típicas. Biotecnología: definición. Plásmidos: definición. Distintos tipos. Función. Clonado. Aplicación de la biotecnología en Medicina Veterinaria y otras ciencias. Relación Agente- Huésped susceptible- Medio ambiente: características principales de los elementos que componen el ecosistema. Evolución del concepto de enfermedad. Teorías 8

epidemiológicas. Etapa empírica: fenómeno epidémico, Etapa científica: teorías unicausal y multicausal, Etapa ecológica: triada ecológica, Etapa integradora: aspecto social. Asociaciones biológicas. Distintas asociaciones de la vida bacteriana: simbiosis, comensalismo, parasitismo. Comunidades microbianas: película biológica. Flora normal. Hábitat Natural. Bacterias saprófitas, patógenas obligadas, patógenas oportunistas. Definiciones de: Viabilidad. Infección. Patogenicidad. Virulencia. Enfermedad. Mecanismos naturales que regulan el equilibrio dinámico en la relación Huésped-Agente Líneas de defensa del organismo. (específicos e inespecíficos). Relación Huésped-Agente: propiedades patógenas ó mecanismo de acción patógena de las bacterias: Invasión de tejidos y superficies: colonización, parasitismo extracelular, cápsula, enzimas extracelulares, parasitismo intracelular, adaptación al microambiente. Adherencia. Producción de toxinas: endotoxinas y exotoxinas. Variación antigénica. Bibliografía: A la bibliografía recomendada en los Trabajos Prácticos, agregar: - Rodríguez Leiva, M. Relación Hospedante- Parásito. Mecanismo de patogenicidad de los microorganismos. OEA. Serie de Biología Nro 14 1981. - Rosenberg, F. Principios de epidemiología. Centro Panam. Fiebre Aftosa - Birberstein E. y cols.. Tratado de microbiología veterinaria. Ed Acribia S.A., 1994. - Quinn, P. y cols. Microbiología y Enfermedades Infecciosas. Veterinarias. Ed. Acribia 2002.

EVALUACIÓN Nº 3 Bioseguridad y riesgo. Definición de riesgo. Riesgos Biológicos: riesgo microbiológico., Definición de incidente. Accidente. Sistemas de protección biológica. Contención biológica. Esterilización. Desinfección. Antisepsia. Antimicrobianos: Agentes físicos: Temperatura, calor seco fuego directo, hornos,, calor húmedo autoclave pasteurización. . Mecanismos de acción sobre bacterias, hongos y virus. Controles de esterilización. Filtración. Radiaciones. Mecanismos de acción sobre bacterias, hongos y virus. Agentes químicos: agentes químicos antimicrobianos más comunes. Clasificación: orgánicos e inorgánicos. Mecanismos de acción sobre los microorganismos. Clasificación e los microorganismos de acuerdo a su resistencia a los desinfectantes; niveles de acción germicida, compuestos químicos para cada nivel. Índice fenólico. Introducción al Proceso sistemático para el aislamiento e identificación de bacterias a partir de muestras clínicas. Conocer los pasos del proceso para un correcto diagnóstico microbiológico Concepto de aislamiento. Medios de cultivo: clasificación. Criterios de uso Elección y siembra de medios primarios. Siembras en agar sangre y medios selectivos. Técnica de Siembra de bacterias: en medios líquidos, sólidos y semisólidos. Inoculación en tubo: en medio líquido; en medio sólido, por estría y por punción. Inoculación en placa por estría y por dispersión. Incubación aerobia, anaerobia y microaerófila. Observación del crecimiento en medios líquidos y sólidos. Morfología de colonias: parámetros para su descripción. Morfología bacteriana: Observación bacteriana: directa con fondo oscuro, extendidos con Gram. Micología general. Definición de hongos. Morfologías. Célula fúngica: estructuras; composición química, ultraestructura, función. Estructuras de resistencia (clamidosporo, artrosporo)

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Metabolismo fúngico: necesidades de nutrientes y sus fuentes. Respiración, fermentación. Enzimas, metabolitos primarios y secundarios. Requerimientos mínimos para el crecimiento “in vitro”: nutrientes, temperatura, pH, humedad, oxígeno, iones, sales, oligoelementos, etc. Reproducción fúngica: Reproducción asexual en levaduras y en mohos, tipos (internos, externos), esporangio, conidios. Crecimiento fúngico, formación de thalo. Reproducción sexual: condiciones, mecanismos, tipos de cuerpos fructíferos. Proceso sistemático para el aislamiento e identificación fúngica. Crecimiento fúngico Técnicas micológicas. Cultivo: técnicas de siembra, en placa y en tubo, para levaduras y mohos. Observación de morfologías y estructuras. Morfología de colonias. Microscopía, observación directa y con tinción, preparación del espécimen; reconocimiento de formas y estructuras fúngicas. Bibliografía. A la bibliografía de los trabajos prácticos anteriores agregar: - Asociación Argentina de Microbiología. Bioseguridad en el laboratorio. ABCL,suplemento Nro. 4, 1988 y Nro. 1, 1990 - Lurá de Calafell “Introducción al estudio de la micología” UNL, Ciencia y Técnica. 1997 - Negroni, R. “Micología Médica” Ed. López Libreros - Deacon, J.W. “Introducción a la micología moderna” Ed. Limus-Noriega. 1990 - Van Gelderen, A. y cols. Serie Los Hongos 1. Temas de micología básica. U.N.T. 2001

EVALUACIÓN Nº 4 Proceso sistemático para el aislamiento e identificación de bacterias a partir de muestras clínicas Normas para el examen bacteriológico. Muestras: Selección, toma, conservación y envío de Muestras clínicas. Muestras clínicas que requieren normas especiales. Eliminación del material infeccioso. Antibióticos: definición, clasificación. Modo de acción sobre los microorganismos. Desarrollo de resistencia. Pruebas de susceptibilidad bacteriana a los antibióticos. Método por difusión: antibiograma. Concentración inhibitoria mínima (CIM). Técnicas: Definición o concepto. Propósito. Criterio de su adecuado y oportuno uso. Condiciones inherentes al medio de cultivo, al microorganismo y al antibiótico. Resultados. Interpretación.

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