UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR

ÁREA DE CONOCIMIENTOS DE CIENCIAS DEL MAR DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA MARINA

TESIS

GENÉTICA FORENSE APLICADA A LA IDENTIFICACIÓN DE TIBURONES EN PRODUCTOS MARINOS MAL ETIQUETADOS EN MERCADOS LOCALES DE LA PENÍNSULA DE BAJA CALIFORNIA

QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: BIÓLOGO MARINO

PRESENTA: ALEXIS ALEJANDRO JIMÉNEZ PÉREZ

DIRECTOR: PhD SERGIO FRANCISCO FLORES RAMÍREZ

LA PAZ, B.C.S., JUNIO DE 2015

Dedicatoria A mi madre, porque ella me dio las armas para poder enfrentar cualquier batalla y me enseño a nunca rendirme hasta el final. A pesar de cualquier resbalón o caída, ella estaba para ayudarme a levantarme A mi padre, porque me enseño a como hacer las cosas, por más dificultades que se te pongan el camino, además de todas sus enseñanzas como buen padre. A mis hermanos y mi sobrino, porque son el futuro y el legado más cercano de la idea y los sueños en los que he creído, y quiero seguir hacerlos crecer. A mis abuelos, porque aunque ya no los puedo ver físicamente, siento que están bastante orgullosos viéndome como el único representante de su legado que aspira a ser como ellos. A koke, porque fue un vivo ejemplo de la perseverancia y el único recuerdo que tengo de haber tenido algún hermano mayor en mi vida. A mi padrino Víctor Nuñez, porque me enseño una segunda forma de motivación en mi vida. Porque puedo considerarlo como un segundo padre. Al sueño vivo de Ícaro Artemis, porque siempre hay que tener una motivación y un sueño, que te motive a dar lo mejor de ti, aún cuando no exista. A los tiburones de México, porque son la primera y la más grande motivación en mi vida, y sin ellos no hubiera sido posible vivir mi sueño de convertirme en biólogo marino y seguir adelante. Además les debo mucho, y quiero hacer lo más que pueda para protegerlos de cualquier amenaza, así como dar a conocer el misterioso y bello mundo en el que viven, para que la gente deje de temerles y empecé a apreciarlos como yo lo hago. A las futuras generaciones, porque en ellos recae el futuro del planeta tierra y de los seres vivos que habitan en ella. Porque aún creo en que la humanidad puede cambiar, a pesar de todos los males que existen, y que solo hay incentivarlos por el buen camino, para que pueda existir este cambio. Al amor y a la pasión, porque sin tener la pieza fundamental de mi motivación que veo reflejado en estos dos elementos, no podría haber llegado hasta donde estoy, ni podré seguir adelante en mi camino. Además de que quiero transmitir al mundo mi enseñanza: que el amor es la fuerza más poderosa del universo, más no la única. A mis sueños, porque ser el mejor investigador de tiburones, es algo que me levanta día a día, cuando estoy por los suelos. Porque el verme en un futuro nadando entre tiburones constantemente, es algo que se acerca día a día, y que además dibuja una sonrisa sincera en mi rostro.

Agradecimientos A mi familia, desde Estados Unidos hasta Mérida, por todo el apoyo que me han brindado a lo largo de mi camino, y a pesar de los malos momentos vividos, hemos salido adelante y seguiremos saliendo adelante. A mi gran amigo, Edgar Becerril, ya que este proyecto no hubiera caído en mis manos de no haber sido por él. Además de ser una gran persona, y compartir momentos no solo como colegas, sino como amigos del alma, así como una misma pasión que nos motiva a sacar lo mejor de cada uno. También un ejemplo a seguir como persona e investigador. Solamente tu sabes amigo, lo importante y especial que eres para mi. Al Dr. Sergio Flores, ya que desde el momento en el que tome clases con él, sabía que tenía que tener mi formación académica con él. La forma en como piensa y desarrolla las problemáticas y posibles soluciones, son un ejemplo a seguir, para mi. Además de estar conmigo y compartir sus enseñanzas conmigo, desde que fui su alumno, hasta ser su colega. Al M. en C. Jorge Guzmán, por todo lo que me ha enseñado fuera y dentro del laboratorio. Por enseñarme las bases y la forma correcta de trabajar en un laboratorio para obtener los mejores resultados posibles. Por enseñarme con sus ejemplos de vida, como debe ser una persona metódica y exitosa. Por ser mi amigo, y compartir alegrías fuera y dentro de la investigación. Al Dr. Mauricio Hoyos, por señalarme la problemática existente con los tiburones en el mercado negro de Ensenada y brindarme el apoyo para llevar a cabo este trabajo de investigación muy importante. Por ser un ejemplo a seguir y motivarnos con sus pláticas de tiburones y personales. Por ser la persona en ayudarme a realizar mi sueño, de estar por primera vez con los tiburones blancos de Isla Guadalupe. Al Dr. Carlos Salomón, por enseñarme la forma correcta y propia de realizar trabajos de investigación importantes. Además de compartir dos pasiones muy grandes, la de trabajar con tiburones y la de jugar fútbol al máximo. Al B.M. Carlos Augusto Aguilar, por el tiempo compartido en la universidad y Pichilingue, así como las enseñanzas que me ha brindado como uno de los mejores maestros del departamento de Biología Marina. Así como también por, todas las alegrías y conocimientosfuera y dentro de la investigación Al Dr. Felipe Galván, por abrirme las puertas de su laboratorio desde el 3er semestre de la carrera y haberme brindado mis primeras enseñanzas académicas de tiburones. También por haber aceptado ser parte de mi comité de investigación. A José Pérez, por haberme recibido en el laboratorio. Por enseñarme antes que nadie, las formas de trabajar de un laboratorio, que después fueron pulidas. Por el tiempo que compartimos como colegas y compañeros.

A Judith Tiscareño, Indhira Terrazas e Isis San Juan, por el tiempo que compartieron y siguen compartiendo conmigo. Por las enseñanzas que me brindaron y me siguen brindando, además de las grandes alegrías que compartieron conmigo, así como los sentimientos que decubrí gracias a ellas. Especialmente a Juh. A Nancy Morales, por ser mi primera amiga de la carrera y haber compartido con ella los sueños y aspiraciones de ser paceños que destaquen de entre los demás como investigadores y como personas. Por el cariño y afecto especial que tenemos como amigos, así como la confianza que hemos tenido para compartir los problemas que nos aquejan. A Rabindranath Reyes, por ser mi primer amigo de la carrera. Por todo el tiempo que compartimos como amigos y todas las charlas en las que me hacía ver mis errores. A todos mis pupilos, encabezados por Dilan Ramos, Oscar Caldera y David López, ya que el haberle enseñado a ellos y compartido de mis experiencias, me motiva para seguir creciendo y seguir enseñando y motivando a más personas. A la palomilla del fútbol, por todo el tiempo que compartimos en las canchas. Por haber compartido mi pasión fuera de lo académico. Al Oggi, al afro, a Bryan Licona, Adrián Sánchez, Miguel Regalado, Daniel Gaxiola, Roberto Taylor, Ember Aybar, Juan Carlos Castro, Iván Hernández, Alfredo López, Carlos Godínez, Gabriel Peña, Salvador Sánchez, José Almazán, Edgar Carmona, José Pagola, Ulises Sifuente y demás jugadores de la carrera. A todos mis amigos y compañeros de la carrera, por todas las alegrías, enseñanzas y locuras que hicimos a lo largo de nuestro tiempo de estudio como estudiantes. A Christian Torres, Coralinda Angell, Janna Domínguez, Nefertiti Roldán, Zvi Hoffman, Ricardo Amaro, Benni, Filius Valle, Mariela Amador, Victor Tinoco, Lizeth Jordán, Luis Jiménez, Nicolás Martínez, Santiago Cadena, Eleazar Valenzuela, Alberto Beylán, Kenia Ramírez, Tefa, Airy González, junto con la generación de la tarde y demás compañeros que compartieron conmigo un salón de clases. A mi padrino Victor Nuñez, por el apoyo recibido a lo largo de mi desarrollo dentro de la carrera, tanto emocional como económico. Por ser una persona noble y generosa conmigo. A todas las personas que hicieron posible mi primer sueño de estar frente a frente el gran tiburón blanco, a Fernando Aguilar hijo y papá, al capitán del Sea Escape, a Shava, a los demás tripulantes del Sea Escape. A Francisco García, Elvia Leyva, Mario Amador, Enrique Troyo, Gustavo Jaime, Gerardo Gaspar, Adolfo Sandoval, Antonio Calleja, Francisco Calleja, Luis Angel Real, Miguel Macias, Julieta Benoit, Fray Flores, Ulises Sifuentes To Washington Western University students, especially Sara Spitzer, Bethany Williams and Erin Mathews, including Dr. Alejandro Acevedo. For being at La Paz during 5 weeks on 2014 summer. For allow me to share with them part of my life and passion.

A Betty, la secretaría del departamento de Biología Marina, por toda la ayuda propocionada para realizar los trámites durante la carrera. Y todo el apoyo que me brindo fuera de ella. A la Unidad Pichilingue, por el tiempo que me permitió estar en sus instalaciones, y en las noches más cansadas de trabajo, relajarme con el sonido del viento que tocaba para mí, así como los atardeceres hermosos que me brindaba para seguir adelante. Al laboratorio de Ecología Molecular y Conservación, por el tiempo en el que pase trabajando mi tesis y otros proyectos adjuntos. Por ilusionarme y hacerme descubrir mi gusto por el laboratorio. Por ser mi hogar por varios días. A la UABCS, por ser la univerdad que me brindó la educación que he recibido, junto al Departamento Académico de Biología Marina y todas las personas que lo comprenden, desde académicos hasta administrativos. A todas las personas que no mencionó, por no saber sus nombres o no recordarlos, pero que en su momento me ayudaron, con la más mínima acción a realizar mis sueños y haber estado en mi vida A Dios, por la vida que me dio. Por todo lo que me ha enseñado. Por todo lo que he compartido con Él espiritualmente. Por darme una motivación espiritual para darle sentido al modo de vida que llevo.

Índice Lista de figuras

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Lista de tablas

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Lista de anexos

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Glosario y acrónimos

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Resumen

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1. Introducción

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2. Antecedentes

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3. Justificación

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4. Hipótesis

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5. Objetivos

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5.1 Objetivo General

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5.2 Objetivos Particulares

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6. Materiales y métodos

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6.1 Colecta de porciones de carne de tiburón en mercados locales

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6.2 Extracción de ADN y verificación de su calidad

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6.3 Amplificación, secuenciación automática y análisis bioinformático de la región ITS2 de las muestras vía Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

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7. Resultados

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7.1 Colecta de muestras en mercados locales

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7.2 Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, “swordfish” y “cazón”.

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8. Discusión

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8.1 Colecta de muestras en mercados locales

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8.2 Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, “swordfish” y “cazón”.

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8.3 Estado de conservación de las especies de tiburones

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8.4 Caso tiburón blanco

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8.5 Productos de tiburón que se etiquetan como productos De especies de alto valor comercial: Fraude de “Marlín” y “Pez espada”

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9. Conclusiones

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10. Recomendaciones

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11. Bbliografia

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12. Anexos

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Lista de figuras Figura 1

Figura 2

Figura 3

Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a amplificar genes de especies protegidas mediante su amplificación utilizando la reacción en cadena de la polimerasa. 1) Toma de biopsia. 2) Extracción de ADN. 3) Reacción en Cadena de la Polimerasa. 4) Verificación de la amplificación de los genes o regiones deseadas para la identificación de alguna especie. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a tipificar genes de especies protegidas mediante su secuenciación automática. Se toman en cuenta los pasos para realizar una reacción en cadena de la polimerasa. 1) Verificación de la amplificación de la región deseada de una especie. 2) Secuenciación automática. 3) Obtención de secuencias. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo forense dirigido a identificar especies mediante la amplificación y secuenciación de secuencias ITS2. Se toman en cuenta los pasos anteriores desde la toma de biopsia hasta la obtención de la secuencia, en este caso ITS2. Los primers Forward y Reverse se anclan en la posición anterior y posterior, respectivamente, que corresponden al gen 5.8S y al gen 28S. De esta forma se obtiene la secuencia de la región ITS2 para cada especie.

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7

8

Figura 4

Mercado Negro de Ensenada, también conocido como mercado de Maricos

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Figura 5

“Swordfish” o “Pez espada” que se vende en el Mercado Negro de Ensenada

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Figura 6

Quilla caudal (señalada con la flecha roja) de una rebanada de troncho. Fue identificada como I. oxyrinchus.

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Figura 7

Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquirida como “Pez espada” (Swordfish). Se aprecia la coloración grisácea en todo el borde de la piel. Fue identificado como S. zygaena.

19

iii

Figura 8 Figura 9

Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquirida como “Pez espada” (Swordfish). Se aprecia la coloración blanca en la parte inferior. identificado I. oxyrinchus. Mercados localesFue de La Paz y unacomo cadena comercial nacional. En

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la parte superior izquierda se aprecia el Mercado Francisco I. Madero, en la parte inferior izquierda se aprecia el Mercado Municipal General Agustin Olachea Avilés, en la parte superior derecha se aprecia el Mercado Municipal Nicolás Bravo y en la parte inferior derecha se aprecia Chedraui Palacio. Figura 10

Verificación de la calidad de ADN. Se muestra el barrido de ADN conforme a la cantidad que se obtuvo. En la parte superior de izquierda a derecha: ENSM: 4,5,14,22,25, LADDER, ENSM: 26,27,28,29,30,31. En la parte inferior de izquierda a derecha: ENSM:33,34,35,36,37, LADDER, ENSM: 38,39,41,42,43,44.

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Figura 11

Amplificación de productos de PCR. Se muestra la presencia de la región amplificada de la región ITS2 para tiburones de las muestras de mercado mal etiquetadas. De izquierda a derecha: LADDER, ENSM:44,30,20,10,7,6 LPZM:9,8,7,6.

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Figura 12

Sphyrna zygaena, etiquetado como “Cazón Seco” que fue vendido en una cadena comercial nacional el 14 de julio del 2014.

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Figura 13

Tronchos de tiburones que son transportados hacia los puestos de venta en el mercado de Ensenada.

31

Figura 14

Pedazo de porción de carne adquirida como “Marlín” en estado de descomposición.

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Figura 15

Relación de tiburones identificados en los productos de “marlín”, “pez espada” y “cazón”. .

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Figura 16

Proporción de las etiquetas falsas en los mercados de productos pesqueros de la Península de Baja California .

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Figura 17

Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de “Marlín”

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Figura 18

Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de “Pez espada”

40

Figura 19

Relación de tiburones identificados bajo la etiqueta de “cazón”

41 iv

Lista de tablas Tabla I

Mercados de la península de Baja California de donde se obtuvieron las porciones de carne

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Tabla II

Relación tiburón identificado-producto marino vendido mal etiquetado en su totalidad, por ubicación y por temporalidad en este estudio.

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Tabla III

Productos pesqueros ofertados como “Marlín”, “Pez espada” y “Cazón” en el Mercado Negro de Ensenada obtenidos entre el 24 de agosto del 2012 y el 13 de septiembre del 2014.

28-29

Tabla IV

Productos pesqueros ofertados como “Cazón” y “Cazón Seco” en los mercados de La Paz, obtenidos entre el 14 de julio del 2014 y el 20 de marzo del 2015. Estatus de conservación de los tiburones encontrados en este trabajo en el marco internacional de legislación internacional para la protección de fauna silvestre. S. zyagena fue introducida como especie CITES en el apéndice II el 12 de julio del 2013 en 37 países. S. lewini fue introducida como especie CITES en el apéndice II el 12 de julio del 2013 en 127 países. *La población de estas especies se encuentran en decadencia. **Se desconoce la tendencia de la población de estas especies a aumentar o disminuir. ***Las especies de Mustelus de la región se encuentran en otras categorías: M. lunulatus, M. henlei y M. californicus están en la categoría de Preocupación Menor y M. albipinnis se encuentra en la categoría Datos insuficientes.

29

Tabla V

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Lista de anexos Anexo I

Método de extracción de ADN de LiCl.

56

Anexo II

Definición de los estados y apéndices de los organismos internacionales

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GLOSARIO Y ACRÓNIMOS: La mayoría de los conceptos fueron obtenidos de Rieger et al. 1991 y de la NOM-029-PESC2006 (DOF 2015). ADN: Ácido desoxirribonucleico. Un polímero de subunidades desoxirribonucleotidos que es el material genético primario de todas las células.

llamadas

ADN mitocondrial: Es una molécula circular, cerrada y de doble cadena. Presenta una herencia principalmente materna y su tasa de mutación permite introducir una escala temporal en la evolución molecular y estimar el tiempo de divergencia entre ellos. ADN nuclear: Es una molécula lineal, cerrada y de doble cadena. Se encuentra dentro del núcleo de las células en organismos eucariotas. Los genes nucleares siguen el patrón mendeliano de herencia. ADN polimerasa: Es una enzima que puede sintetizar una cadena nueva de ADN sobre una cadena molde. Alelo: Es cada una de las distintas modalidades que puede presentar un gen que informa para un carácter. Anillamiento: Hibridación de una cadena simple de ADN a otra cadena simple de ADN, debido a la unión en pares de las moléculas y la hibridación de secuencias complementarias. BLASTn: Herramienta básica para la búsqueda de alineaciones locales (nucleótidos), del inglés Basic Local Alignment Search Tool (Nucleotides). Es una herramienta para buscar secuencias similares dentro del GenBank. Encuentra el puntaje (score) más alto de las secuencias locales entre las secuencias que son analizadas y las secuencias que se encuentran en la base de datos. bp: Par de bases, del inglés base pairs. Son dos bases nitrogenadas pareadas dentro de una doble cadena de una molécula de ADN o ARN. Las bases nitrogenadas en el ADN son: AdeninaTimina y Citosina-Guanina. En el ARN se sustituye la Timina por el Uracilo. CITES: Convención Sobre el Comercio Internacional de Especies Amenazadas de Fauna y Flora Silvestres, del inglés Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Flora and Fauna. También conocido como la convención de Washington, es un acuerdo internacional entre gobiernos que tiene como objetivo asegurar que en el comercio internacional de especímenes de fauna y flora silvestres, no habrá ninguna amenaza para su supervivencia. CONAPESCA: Comisión Nacional de Acuacultura y Pesca. CSM: Convención sobre la Conservación de las Especies Migratorias de Animales Silvestres, del inglés Convention on the Conservation of Migratory Species of Wild Animals. Es la única convención global especializada en la conservación de las especies migratorias, sus hábitats y sus rutas de migración, la CMS complementa y coopera con varias organizaciones internacionales, ONGs y socios tanto en los de comunicación como en el sector empresarial.

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Desnaturalización: Es el proceso de separación de las cadenas de ADN. Se produce en un estrecho intervalo de temperatura. Las dos cadenas de la doble hélice se separan completamente cuando se rompen todos los puentes de hidrógeno que hay entre ellas. Dirección Forward: Sentido en el que está orientada una secuencia de ADN que va de 5’ a 3’. Hace referencia a la unión fosfodiester que va de la terminal 5’ de la molécula correspondiente (purina o pirimidina) a la terminal 3’. Evaluación múltiple de PCR: Es una técnica molecular usada para la amplificación de múltiples regiones en un solo experimento de PCR. Más de una secuencia objetivo puede ser amplificada mediante el uso de múltiples pares de primers en una reacción. Extensión: Proceso posterior al anillamiento, en el cual se sintetiza ADN mediante catálisis con una ADN polimerasa termoestable, adicionando nucleótidos al extremo 3’ del primer hibridado. Se realiza en ambas cadenas en dirección de la secuencia que se quiere amplificar. El resultado final es la obtención de dos cadenas de ADN a partir de la original. GAP: Es el espacio introducido en una alineación para compensar las inserciones o deleciones en una secuencia relativa a otra. Gen: Unidad básica Mendeliana. Unidad hereditaria que representa una región contigua de ADN (o ARN en el caso de los virus) que corresponde usualmente a una unidad de transcripción. GenBank: Es la base de datos de secuencias genéticas perteneciente al NIH (Institutos Nacionales de Salud de Estados Unidos, National Institutes of Health). Es una colección registrada de todas las secuencias de ADN disponibles al público. Genotipificación: Es el procedimiento mediante el cual se obtiene el genotipo (perfil genético) de un organismo. INAPESCA: Instituto Nacional de la Pesca. ITS2: Es una subporción del ADN ribosomal nuclear. Es una de las regiones más usadas frecuentemente para análisis filogenéticos a nivel género y especie (Coleman 2003). IUCN: Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza, del inglés International Union for Conervation of Nature. Es la organización más antigua y grande del mundo con más de 1200 miembros de ONGs y gubernamentales en 160 países. Se enfoca en evaluar y conservar la naturaleza, asegurando un uso efectivo y equitativo de los gobernantes y demostrando soluciones a los retos globales en el clima, el alimento y el desarrollo. Lista Roja de la IUCN: Es un inventario mundial que permite alertar el estado de la biodiversidad mundial. Provee información taxonómica, el estado de conservación e información de distribución de las plantas, hongos y animales que han sido evaluados usando los criterios y las categorías de esta misma lista roja. Locus: Posición ocupada por un gen en el cromosoma.

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Marcador: Alelo usado como una prueba experimental para marcar un núcleo, un cromosoma o un gen. Microsatélite: Conjunto de secuencias repetitivas en tándem, cuya unidad de repetición es de un tamaño comprendido entre 1 a 6 pares de bases. Estas secuencias están compuestas de ADN no codificante. También se les conocen como SSR (Secuencia Repetitiva Sencilla, del inglés Simple Sequence Repeat) o STR (Tandem Repetitivo Corto, del inglés Short Tandem Repeat). Oofagia: Modo de nutrición en los embriones de los tiburones lamnidos, donde los embriones se alimentan de ovocitos sin fertilizar que son enviados al útero para su alimentación (Castro 2011). PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa, del inglés Polymerase Chain Reaction. Es una técnica para amplificar secuencias de ADN in vitro por medio de la separación del ADN en dos hebras e incubándolas con primers y ADN polimerasa. Pellet: Cúmulo compacto de células y/o restos celulares que se producen en el fondo de un tubo después de una centrifugación o decantación. Pesca INDNR: Pesca ilegal, no declarada y no regulada. Pirosecuenciación: Es un método de secuenciación de ADN basado en la monitorización a tiempo real de la síntesis de ADN. Porcentaje de identidad: Es el grado en el cual dos secuencias de nucleótidos tienen los mismos residuos en las mismas posiciones en una alineación expresado en porcentaje. Primer: Cebador o iniciador en español. Es un oligonucleótido complementario a una de las dos hebras del ADN. Delimita la región del ADN de la cual se quieren obtener más copias. Normalmente esta constituido por 18 a 25 pares de bases. PROFEPA: Procuraduría Federal de Protección al Ambiente. Es el organismo encargado del cuidado y preservación del ambiente en todo el país, al igual que la inspección y vigilancia del cumplimiento de leyes para la protección ambiental. Score: Utilizado en el BLAST. Es la puntuación obtenida de una alineación. Se calcula al tener la sumatoria de la puntuación de las substituciones y la puntuación de los GAPs. Secuenciación automática: Es una técnica bioquímica que tiene como finalidad determinar el orden de los nucleótidos, de una moécula de Ácido Nucléico. SEMARNAT: Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales. Es una secretaría de estado del poder ejecutivo federal encargada de todo lo relacionado a la protección, restauración y conservación del medio ambiente, recursos naturales, bienes y servicios ambientales, así como del aprovechamiento de los mismos y del desarrollo sustentable de México. Tiburón: Cualquier especie de elasmobranquio que incluye a los organismos conocidos en el lenguaje común como “tiburones”, “cazones” y “angelitos” y que pertenecen taxónomicamente a la Subclase Elasmobranchii, Superorden Euselachii (Selachimorpha), cuya principal viii

característica externa es la de poseer generalmente cinco pares de aberturas branquiales dispuestas a los costados de la cabeza, aunque existen especies con seis y siete pares de aberturas branquiales. TRAFFIC: Análisis de Registros de Comercio de Flora y Fauna en el Mercado del inglés Trade Records Analysis of Flora and Fauna in Commerce. Es una red de monitoreo del comercio de vida salvaje. Actúa como una organización no-gubernamental a nivel mundial sobre el comercio de flora y fauna silvestre, en el contexto de la conservación de la biodiversidad y el desarrollo sustentable. Troncho: Cuerpo del pez al que se ha eviscerado y se le han cercenado la cabeza y de forma total o parcial las aletas, con la finalidad de facilitar su almacenamiento y conservación a bordo. Valor E: En estadísticos de BLAST, es el valor esperado. Este valor es el número de alineaciones con un score particular que se espera obtener por probabilidad cuando se comparan dos secuencias al azar. Entre más bajo sea el valor de E, más significativo será el puntaje (score) y la alineación.

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RESUMEN La pesca de tiburones a nivel mundial ha ido en aumento en los últimos años. Los productos que más se venden son sus aletas, su carne y sus mandíbulas. Sin embargo no existe un control adecuado para la contabilización real de tiburones que son pescados diariamente en diferentes partes del mundo. México cuenta con el Plan de Acción Nacional para el Manejo y Conservación de Tiburone, Rayas y Especies Afines en México, las Normas Oficiales Mexicanas: NOM-029 y NOM-059, entre otros instrumentos regulatorios para el manejo de este recurso pesquero. A pesar de esto, siguen existiendo irregularidades en los registros de captura y en la venta de tiburones. En la península de Baja California se encontraron algunas de estas irregularidades. En un sondeo realizado en un mercado de Ensenada y cuatro mercados de La Paz se obtuvieron 79 porciones de carne de distintos organismos desde el año 2012 al 2015. Se extrajo el ADN de las muestras con un método casero modificado de extracción de NaCl. Se amplificó la región ITS2 con primers universales para la identificación de tiburones y se secuenciaron. Del total de muestras que fueron vendidos como: “cazón”, “marlín” o “swordfish” se identificaron 8 especies de tiburones: Carcharodon carcharias, Isurus oxyrinchus, Sphyrna lewini, Sphyrna zygaena, Rhizoprionodon longurio, Carcharhinus falciformis, Mustelus mustelus. y Alopias pelagicus. El tiburón que más vendido en Ensenada como otras especie fue I. oxyrinchus. En La Paz el tiburón más vendido como “cazón” fue S. zygaena. Este trabajo demuestra el fraude que existe en algunos mercados de México, ya que se vendió tiburón blanco como “cazón”, especie que esta prohibida comercializar en México. Además de la sustitución de productos de productos de mayor calidad por especies de tiburón. Lo que hace evidente y necesario la ecocertificación de productos pesqueros en mercados locales. Palabras clave: Genética forense Productos mal etiquetados- Pesca ilegal, no declarada y no regulada- Expendio fraudulentos- Conservación.

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Introducción La actividad pesquera se ha extendido a todos los océanos y el impacto de esta actividad sobre los depredadores que en ellos habitan (e.g. tiburones y rayas) es objetivamente poco conocido (Baum et al. 2003). Hay evidencia que señala que la explotación pesquera enfocada a los organismos depredadores genera cambios sustanciales en la población de los depredadores, así como también en la diversidad de otras especies en los ecosistemas, en los que se realizan tales pesquerías (Schindler et al. 2002). La falta de datos sistematizados y específicos para los tiburones, así como los complicados marcos jurídicos, presentan verdaderos retos para evaluar y conservar la biodiversidad de estos grupos (Dulvy et al. 2014). Además del reto de encontrar la solución a la pesca incidental de tiburones, así como el problema que existe con el registro de tiburones al momento de desembarcar, lo que propicia que las estrategias acerca del manejo de tiburones, se vean obstaculizadas (Barker & Schluessel 2005). Siendo evidente, que los tiburones pelágicos están sujetos a niveles altos y no regulados de mortalidad por pesca incidental (Dulvy et al. 2008; Camhi et al. 2009). Los tiburones presentan múltiples estrategias de historia de vida, como en su desarrollo embrionario, ya que pueden ser ovíparos, vivíparos aplacentarios o vivíparos placentarios, o como en su distribución espacial, ya que habitan en todas las aguas del planeta, desde el Ecuador hasta las cercanías con los círculos polares árticos, y pueden encontrarse desde la superficie de las costas, hasta las zonas abisales (Castro 2011). Pero a pesar de la variabilidad en su forma de vida, tienen una baja fecundidad, viven muchos años y tienen un crecimiento muy lento, por lo que son altamente vulnerables a la sobreexplotación (Walker 1998). Acorde a la lista roja de la IUCN 43 especies pertenecientes a cinco órdenes y 16 familias distintas se encuentran en la categoría de “Vulnerable”, 15 especies pertenecientes a tres órdenes y seis familias distintas se encuentran en la categoría “En Peligro”, 9 especies pertenecientes a dos órdenes y cuatro familias distintas se encuentran en la categoría “En Peligro Crítico” y 59 especies pertenecientes a cinco órdenes y 15 familias distintas se encuentran en la categoría “Casi Amenazado” (Camhi et al. 2009).

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Basado en los estudios realizados de la lista roja de la IUCN, la tendencia poblacional del tiburón mako de aleta corta Isurus oxyrinchus es a decrecer. Debido a que es un tiburón que se distribuye por todo el mundo (Castro 2011), el impacto de las pesquerías a nivel regional dependerá del nivel de explotación al que esté sometido. Por ejemplo, la pesca del tiburón mako en las aguas orientales de Canadá es muy alta, pero aún así, no se aprecia que exista un efecto negativo en su población correspondiente a esa región (Campana et al. 2005). Las bases de información disponibles respectivas a impactos humanos sobres poblaciones de grandes depredadores (e.g. TRAFFIC) remarcan las siguientes características de la pesca INDNR (Pesca Ilegal, No Declarada y No Regulada): a) La pesca INDNR se ha extendido a nivel mundial, pero la información disponible indica que los “puntos calientes” de este tipo de pesca se localizan en América Central, América del Sur y en el Océano Pacífico occidental y central. b) La pesca INDNR se desarrolla en aguas nacionales por parte de buques nacionales y extranjeros. c) La pesca INDNR de tiburones por parte de buques extranjeros en aguas nacionales, involucra a menudo a países vecinos cercanos. d) La pesca INDNR extranjera puede resultar de acceso no autorizado o incumplimiento de las condiciones de acceso. e) La mayor parte de la pesca INDNR implica la retención de aletas. f) En la mayoría de los casos de pesca INDNR, las estimaciones nacionales de su efecto no son especie-específicos, es decir, no especifican el impacto que la actividad tiene en cada especie particular de tiburones. g) Las especies objetivo más frecuentes de la INDNR son los tiburones martillo (Sphyrna spp.) y el tiburón piloto (Carcharhinus falciformis). h) La pesca con palangre y con red de enmalle son los métodos utilizados con mayor frecuencia en este tipo de pesca. Las características de la pesca INDNR, tienen como consecuencia que los países en que se practican no cuenten con una base sólida para hacer juicios sobre: a) El impacto relativo de la pesca INDNR comparado al de la pesca legítima en las poblaciones de tiburones. 2

b) El impacto relativo de la pesca INDNR en diferentes especie de tiburones. Como resultado de lo anterior, la información disponible a nivel mundial indica que: a) La mayoría de las poblaciones de tiburones, siguen siendo manejadas pobremente b) Hay evidencia clara de que la pesca INDNR de tiburón está ocurriendo c) El alto valor de las aletas es un impulsor de la pesca INDNR México ha sido señalado como un país que practica la pesca INDNR, junto con Colombia, Ecuador, Nigeria, Nicaragua y Portugal. Este tipo de pesca y el comercio fraudulento que realizan, es un obstáculo en los esfuerzos internacionales para tener un manejo sustentable en las pesquerías, además de que crean una competencia desleal contra otros países donde se pesca y se venden productos marinos legalmente (Cisneros-Montemayor et al. 2013). A nivel nacional, la pesca de tiburones se lleva a cabo por medio de redes de enmalle y palangres en embarcaciones menores, de mediana altura y altura. El 60% de las capturas corresponden a las embarcaciones de mediana altura y altura, tanto en modalidades de pesca dirigida y pesca no dirigida (pesca incidental). Los derivados de tiburones destinados al consumo humano fluctúan entre 30,000 y 35,000 toneladas en las últimas décadas (CONAPESCA-INP 2004). A nivel nacional la SAGARPA, a través de la CONAPESCA en colaboración con la INAPESCA, han elaborado instrumentos regulatorios para las pesquerías de tiburones, rayas y especies afines: 1) la Ley General de Pesca y Acuacultura Sustentables, 2) la Ley General del Equilibrio Ecológico y Protección al Ambiente, 3) la Carta Nacional Pesquera, 4) el Plan de Acción Nacional para el Manejo y Conservación de Tiburones, Rayas y Especies Afines en México (el cual fue derivado del Plan de Acción Internacional para la conservación y ordenación de tiburones de la FAO), 5) Programa de Sistema de Información, 6) Programa de Difusión, Educación y Capacitación, 7) Programa de Inspección y Vigilancia, 8) Programa de Investigación, 9) Programa de Colaboración Interinstitucional y 10) y 11) las Normas Oficiales Mexicanas NOM-029-PESCA-2006 y NOM-059-SEMARNAT-2010 (INAPESCA 2006). La verificación del cumplimiento de la regulación pesquera corresponde a la CONAPESCA, en tanto que a la SEMARNAT le corresponde la formulación, conducción y aplicación de la política ambiental y a través de la PROFEPA le compete la verificación, inspección y vigilancia en aspectos ambientales y de conservación de las especies, especialmente de las catalogadas en 3

estatus de protección especial. Asimismo, a la Secretaría de Marina le corresponde la vigilancia en el ámbito marítimo federal, por lo que interviene en el control y seguimiento relacionado con el cumplimiento de las leyes federales, reglamentos y normas, conforme a lo establecido por la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal (CONAPESCA-INP 2004). En la costa occidental de la península de Baja California se han reportado la pesca de juveniles de tiburones (Cartamil et al. 2011, Santana-Morales et al. 2012). Eso es un gran problema al no conocer el tamaño de las poblaciones de tiburones, debido a que no se permite que se reproduzcan y probablemente se está incidiendo en áreas de crianza (Stevens et al. 2000; Santana-Morales et al. 2012), lo que resulta en una lenta recuperación de las poblaciones, sobre las especies que son explotadas. En los estados de Baja California y Baja California Sur las especies que más se pescan son el tiburón azul (Prionace glauca) y el tiburón mako de aleta corta (Isurus oxyrinchus) (Cartamil et al. 2011, Ramírez-Amaro et al. 2013). En México, la regulación de captura de tiburones está limitada a dos categorías. La categoría “cazón”, donde serán reportados todos los tiburones que midan 1.5 m o menos, con esta misma denominación, sin especificar la especie a la que corresponde. Y la categoría “tiburón”, donde son reportados todos los tiburones que midan más de 1.5 m, con la denominación de su nombre científico o nombre común (DOF 2007). Es necesario encontrar nuevos análisis para evaluar el estado de conservación de los tiburones, así como métodos prácticos para llevar a cabo un buen manejo en las pesquerías, y de tal manera determinar stocks pesqueros, así como también evaluar estudios demográficos poblacionales en el contexto de la pesca INDNR (Dudgeon et al. 2012). La aplicación de técnicas moleculares en la genética forense se ha ido desarrollando rápidamente conforme la creación de nuevos análisis y la presión que existe para evaluar el estado de conservación de las especies que se encuentran amenazadas (Hueter et al. 2004). Entre este tipo de técnicas, aquellas correspondientes a la genética forense son aplicadas cuando no se pueden identificar partes de animales por técnicas morfométricas o a simple vista y su importancia recae en identificar especies que se encuentran en peligro de extinción que están siendo comercializados a conciencia de los vendedores o, en los casos en que los comerciantes no tengan el conocimiento adecuado de lo que venden (Alacs et al. 2009).

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Dentro de la genética forense, existen distintos métodos que además de cumplir con la función de la identificación de especies, también proporcionan información en a nivel poblacional, filogeográfico y filogenético (Alacs et al. 2009). Uno de estos métodos es la secuenciación de ADN mitocondrial y nuclear que es utilizada principalmente para la identificación de especies (Alacs et al. 2009). La pirosecuenciación es utilizada en la identificación de especies y en la genotipifación de identidades de poblaciones, identidades a nivel individuo y el grado de parentesco que puedan llegar a tener los organismos con polimorfismos de nucleótidos sencillos (SNP) (Ronaghi et al. 1998; Alacas et al. 2009). Los primers especie-específicos son utilizados como una manera rápida y eficiente de identificar una especie, sin dar más información a detalle (Pank et al. 2001; Alacs et al. 2009). Por último, los microsatélites que también son llamados repeticiones cortas del tándem (STR) o repeticiones sencillas del tándem (SSR), no son óptimas para la identificación a nivel de especie, pero son excelentes para identificaciones a nivel individuo, población y parentesco entre individuos (Ellegren 2004; Alacs et al. 2009). Un problema que en general enfrenta la genética forense consiste en obtener ADN de productos altamente procesados (Alacs et al. 2009), ya que frecuentemente se intenta extraer ADN de especímenes que fueron procesados por largo tiempo, lo que conlleva a la degradación o a la contaminación de los ácidos nucleicos (Holmes et al. 2009).

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Antecedentes La genética forense en la vida silvestre es un campo de estudio que tiene como objetivo principal sintetizar la genética poblacional, la ecología molecular, la filogenética molecular y la filogeografía de las especies que se encuentran amenazadas, para desarrollar las mejores soluciones a retos específicos en miras de la conservación de vida silvestre (Ogden et al. 2009). Las técnicas moleculares son de gran utilidad para la genética forense de la vida silvestre, ya que se puede asignar el origen geográfico de productos comerciales, algo que es casi imposible determinar por métodos morfológicos. Además, se pueden identificar las poblaciones que son explotadas intensamente en el comercio internacional (Alacs et al. 2009). Un ejemplo a nivel internacional de la aplicación de técnicas moleculares en la genética forense es la sobreexplotación de las pesquerías. En este caso, por medio de polimorfismos de nucleótidos sencillos, los cuales consisten en las variaciones de un nucleótido de una secuencia del genoma, los pescados que son vendidos en el mercado europeo, pueden ser asignados a su población de origen con altos niveles de precisión (Nielsen et al. 2012). De esta manera, pueden aplicarse estas técnicas moleculares enfocadas a la genética forense a problemas locales. En Dinamarca, se reportó que un barco pesquero había sobrepasado sus límites de captura de bacalao en el Mar Norte. El capitán de la embarcación aseguró que había conseguido sus productos legalmente del Mar Báltico. Como la misma especie de bacalao se encontraba en ambos mares, se usaron marcadores “microsatélites”, para determinar que dicho cargamento pesquero había violado el límite de captura de bacalao en el Mar Norte. De tal manera que al capitán de esa embarcación se le fue impuesto una multa por las autoridades locales (Stokstad 2010). Los primeros trabajos de biología molecular para la identificación de especies, se llevaron a cabo, por medio de proteínas (Bunch et al. 1976; McClymont et al. 1982, Mardini 1984). En general estas técnicas comprendían la identificación de animales a través de la colecta de sus tejidos, sangre o proteínas fáciles de extraer, con el fin de obtener un método que fuese sensitivo, replicable, económico y eficiente, con el fin de identificar tejidos de especies que fueran muy cercanas entre sí. Después se innovaron técnicas para la identificación de especies por medio de genes (Thommasen et al. 1989; Cronin et al. 1991; Baker & Palumbi 1994).

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En estos trabajos se ha buscado la identificación de animales mediante el uso de técnicas de ADN recombinante, como la reacción en cadena de la polimerasa (Fig. 1) y la secuenciación automática (Fig. 2). De esta forma se podrían reforzar las leyes dirigidas a la conservación de la vida silvestre.

Fig. 1. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a amplificar genes de especies protegidas mediante su amplificación utilizando la reacción en cadena de la polimerasa.1) Toma de biopsia. 2) Extracción de ADN. 3) Reacción en Cadena de la Polimerasa. 4) Verificación de la amplificación de los genes o regiones deseadas para la identificación de alguna especie.

Fig. 2. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo dirigido a tipificar genes de especies protegidas mediante su secuenciación automática. Se toman en cuenta los pasos para realizar una reacción en cadena de la polimerasa. 1) Verificación de la amplificación de la región deseada de una especie. 2) Secuenciación automática. 3) Obtención de secuencias. El locus ITS2 se ha usado como un marcador genético para identificar especies de seres vivos con la ayuda de evaluaciones de la PCR (Fig. 3), y se han usado principalmente en organismos microscópicos, algas e invertebrados (Bakker et al. 1992, Lott et al. 1993, Epe et al. 1999).

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Fig. 3. Sucesión de pasos implícitos en el protocolo forense dirigido a identificar especies mediante la amplificación y secuenciación de secuencias ITS2. Se toman en cuenta los pasos anteriores desde la toma de biopsia hasta la obtención de la secuencia, en este caso ITS2. Los primers Forward y Reverse se anclan en la posición anterior y posterior, respectivamente, que corresponden al gen 5.8S y al gen 28S. De esta forma se obtiene la secuencia de la región ITS2 para cada especie. El primer trabajo realizado con este marcador genético para la identificación de tiburones, consistió en una evaluación múltiple de la PCR con dos especies que son muy similares entre sí: C. plumbeus y C. obscurus. Se usaron 26 muestras de C. obscurus y 51 muestras de C. plumbeus para generar los primeros primers especie-específicos de la región ITS2 y pudieran ser utilizados como un método rápido de identificación de estas especies (Pank et al. 2001). Este trabajo sirvió como línea base para la elaboración de primers especie-específico para dos especies de tiburones: tiburón blanco (Chapman et al. 2003) y tiburón peregrino (Magnussen et al. 2007). En el 2005 se detuvo a un comerciante de la costa este de Estados Unidos con un cargamento de 900 kg de aletas secas de tiburón destinados a mercados asiáticos. Se identificaron 21 tiburones blancos, por medio de ensayos quíntuples de PCR con las regiones ITS2 y citocromo b (Shivji et al. 2005) Este mismo marcador molecular se ha usado en otras partes del mundo. En Chile se colectaron 654 aletas secas de tiburones de dos diferentes puntos de venta en el puerto de Coquimbo.

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En este estudio se realizaron evaluaciones múltiples de la PCR usando los primers universales del locus ITS2 para conocer la identidad de los tiburones a los cuales pertenecían las aletas. Se usaron 10 primers especie-específicos para la identificación de 10 especies diferentes: Alopias vulpinus, A. superciliosus, C. obscurus, Isurus oxyrinchus, I. paucus, Prionace glauca, S. lewini, S. zygaena y S. mokarran. Debido a la complejidad de identificar aletas de tiburones que son comercializadas internacionalmente, esta herramienta genética-forense es utilizada para resolver estos tipos de problemas. (Sebastián et al. 2008). Se realizó un estudio similar en HongKong, donde se colectaron 596 aletas secas de 11 mercados distintos. Se usaron primers especieespecíficos y universales de la región ITS2 y por medio de una evaluaciones múltiples de PCR, se identificaron a las especies correspondientes de cada aleta adquirida, en las que figuran las especies: P. glauca, I. oxyrinchus, C. falciformis, C. plumbeus, C. leucas, C. longimanus, Galeocerdo cuvier, S. Lewini, S. zygaena y Alopias. Spp (Clarke et al. 2006)

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Justificación En las secciones previas se hace referencia a la incidencia de pesca de tiburones catalogada como ilegal, no declarada y no regulada tanto a nivel internacional como nacional. Esta actividad se señala como la causa principal de la situación precaria que guardan las poblaciones de tiburones más explotadas. Debido a la falta de trabajos constantes y de peso científico a nivel nacional, en cuanto a la toma de datos en las pesquerías de tiburones, cabe mencionar que existe un vacío de información importante respecto a la cuantificación objetiva del impacto que tienen las actividades pesqueras en las poblaciones de tiburones en México. Lo anterior indica la idoneidad de explorar a escala regional, qué especies de tiburones son las más impactadas por la pesca ilegal, y los incentivos que la impulsan. Y así revelar posibles actividades de apoyo a estrategias de gestión más eficientes en varios niveles de la cadena de valor, desde el momento en que el animal es capturado hasta el momento en que sus productos son comercializados. Además cabe destacar la importancia de los tiburones en su medio natural como depredadores en la cima de la cadena trófica y el efecto que causaría el impacto de este tipo de pesca, debido a que presentan estadíos de madurez sexual tardíos, fecundidad baja y períodos de gestación largos y por consecuente propiciaría una recuperación muy lenta en sus poblaciones ante dicho impacto. En este contexto, se percibió que una tarea fundamental es la identificación de especies que son pescadas ilegalmente, lo cual constituye una herramienta muy valiosa para su seguimiento, control y vigilancia. Un incentivo importante que impulsa la pesca INDNR es el intento de eludir la limitación de las capturas, lo que indirectamente propicia la venta de pescado: 1. Falseando el nombre de su especie. 2. Falseando su fecha de captura. 3. Con etiqueta falsa. 4. Falseando el reporte de su origen geográfico.

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Por lo tanto la identificación a nivel de especie de productos pesqueros con la apariencia de tiburón, se percibe aquí como una de las tareas esenciales en las que debe sustentarse el marco jurídico contra las actividades ilegales. Por otra parte, esta trazabilidad también representa una garantía para la salud pública y la protección del consumidor, siendo una herramienta útil para asegurar la vigilancia y certificar el origen de los peces a lo largo de la cadena de suministro de alimentos. Lo descrito previamente, cobra especial importancia en el marco del creciente interés por vender y consumir productos, cuya extracción es amigable con la ecología (Brécard et al. 2009). Esto se basa en un sistema de etiquetado ecológico, que asegura a los consumidores que el producto que adquieren se ha producido de acuerdo con normas ambientales dirigidas a la sustentabilidad, y reduce el impacto sobre los ecosistemas en el método de producción. La comunidad europea ha puesto en marcha un amplio debate sobre los sistemas de etiquetado de los productos pesqueros, el cual ha derivado en el reglamento (CE) no 104/2000 y 2065/2001. El cual dicta que los productos pesqueros deben ser etiquetados con el nombre de la especie, dar información correcta sobre su zona de captura e incluso su clase de edad, aplicando en todos los estados de la Unión Europea. Independientemente de las presiones internacionales que señalan a México como un país que practica la pesca INDNR, sería deseable, para los consumidores, la propuesta de normas de etiquetado en los productos que se venden en los mercados de pescado y mariscos, así como un control previo que certifique la aplicación correcta de tales normas. Por lo anterior, se decidió explorar la dificultad de desarrollar tal tarea, desde un punto de vista superficial, a través de la identificación a nivel de especie de los productos de pescado semiprocesados o congelados, que no son directamente identificables, pero que se sospechó que correspondían a especies de tiburones. La aplicación de técnicas moleculares y químicas han revelado herramientas poderosas para este fin, y han aportado evidencia contundente de la gran frecuencia del etiquetado incorrecto de mariscos y tiburones en la industria europea, especialmente en términos de sustitución de especies (Blanco et al. 2008; Filonzi et al. 2010; Miller & Mariani 2010; Miller et al. 2011).

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Además de que en algunos casos son el único medio de identificación de especies, debido a que no se pueden detectar por guías de identificación, ya que los productos están procesados, o se venden en partes (tronchos, aletas, mandíbulas, etc) que son muy difíciles de identificar. México ha sido señalado como uno de los principales países en los se efectúa la pesca INDNR. A nivel internacional y nacional acorde a evidencias reportadas (Cisneros-Montemayor et al. 2013; Worm et al. 2013), este tipo de pesca tiene impactos nocivos en las especies de tiburones que son su objetivo. El incentivo que impulsa a este tipo de actividades es el intento de eludir la imitación de capturas, lo que indirectamente propicia la venta de productos etiquetados de manera fraudulenta y de esta forma, generar ganancias que no corresponden a la venta del producto “tiburón” al ofrecerlo como especies de mayor valía comercial, lo que se tipifica como fraude. Lo anterior justifica el desarrollo un trabajo como el presente, dirigido a verificar si en los mercados de productos pesqueros importantes de la península de Baja California se incurre en estas actividades irregulares, mediante el uso de técnicas forenses genéticas aplicadas a la vida silvestre.

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Hipótesis Acorde a lo descrito en la sección de justificación se derivaron las siguientes hipótesis de trabajo: Ho: Las muestras de productos pesqueros, que se ofrecen en mercados importantes en la península de Baja California como especies pelágicas de alto valor (e.g. Xiphias gladius, Kajikia audax, Tetrapturus angustirostris, Makaira nigricans), se tipificarán como la especie ofertada y no como alguna especie de tiburón. HA: Las muestras de productos pesqueros, que se ofrecen en mercados importantes en la península de Baja California como especies pelágicas de alto valor (e.g. Xiphias gladius, Kajikia audax, Tetrapturus angustirostris, Makaira nigricans), se tipificarán como pertenecientes a alguna especie de tiburón. Ho1: Las muestras tipificadas como pertenecientes a especies de tiburón, no corresponderán a especies de tiburones que estén protegidas por la NOM-029-PESC-2006, se encuentren en la lista roja de la IUCN o en algún apéndice del CITES y/o CSM. HA1: Entre las muestras tipificadas como pertenecientes a especies de tiburón se identificarán especies protegidas por la NOM-029-PESC-2006, referenciadas en la lista roja de la IUCN o en algún apéndice del CITES y/o CSM.

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Objetivos Objetivo General I.

Verificar por medio de análisis genético forense, si se utilizan especies de tiburones para suplantar productos pesqueros de mayor calidad en algunos de los principales mercados locales de la península de Baja California, y de ser así, si las especies de tiburones con que se realiza este tipo de fraude se encuentran protegidas por algún organismo nacional o internacional.

Objetivos Particulares i.

En cinco mercados de productos pesqueros representativos de la península de Baja California Sur, determinar mediante la amplificación y secuenciación automática de la región ITS2 si los productos pesqueros que se expenden etiquetados como “marlín”, “pez espada” (“Swordfish”) o “cazón” en realidad son especies de tiburones que se venden de manera fraudulenta.

ii.

Identificar, en su caso, a las especies de tiburones que se expenden de manera fraudulenta como “marlín”, “pez espada” o “cazón” y verificar con qué frecuencia se encuentran entre las mismas, especies protegidas por organismos internacionales y nacionales de conservación.

iii.

Generar información genética y de capturas ilegales, no declaradas y/o no reguladas acerca de las especies de tiburones que están siendo pescadas y vendidas como “marlín”, “pez vela” o “cazón”, con el fin de sugerir modificaciones de inspección y vigilancia en la NOM-029 a la SAGARPA a través de la INAPESCA y CONAPESCA, utilizando análisis genéticos forenses en este tipo de mercados, en vista de este tipo de pesca y comercio.

iv.

Crear una base de datos de las secuencias de la región ITS2 para las diversas especies de tiburones que se hayan identificado.

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Materiales y métodos Colecta de porciones de carne de tiburón en mercados locales En el año 2012, una persona de nacionalidad inglesa que trabaja en la industria de la filmación llegó al mercado negro de Ensenada (Fig. 4) con la preocupación de creer haber encontrado cuerpos de juveniles de tiburón blanco que se vendían en ese mismo mercado, por lo cual contactó a distintos investigadores, entre ellos al Dr. Mauricio Hoyos, experto en tiburones en México, para hablar sobre el tema.

Fig. 4. Mercado Negro de Ensenada, también conocido como mercado de Mariscos. Tras haber recibido dicho llamado y con observaciones previas realizadas en tal mercado, el Dr. Hoyos confirmó que existía la probabilidad de poder encontrar juveniles de tiburón blanco que fueran vendidos como “marlín” o “pez espada”. Ese mismo año Dr. Hoyos y su estudiante Edgar Becerril compraron 10 rebanadas de troncho de los productos que ofertaban como “pez

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espada” y “marlín”. Esas rebanadas de tronchos fueron conservadas en alcohol etílico al 96% y llevadas a La Paz. Las rebanadas de tronchos fueron entregadas al Dr. Sergio Flores y a su alumno Alexis Jiménez. En ese momento se platicaron sobre los avistamientos que se creían tener de juveniles de tiburón blanco siendo vendidos en el mercado negro de Ensenada, por lo que surgió el proyecto de evaluar las rebanadas de tronchos que se obtuvieran por medio de análisis de genética forense y verificar si corresponderían a tiburón blanco. En el 2013, Edgar Becerril proporcionó dos rebanadas de troncho más a la colección que se tenían del mercado negro de Ensenada. En el 2014, se realizaron las evaluaciones de las 12 rebanadas de troncho obtenidas. Al verificar los resultados y observar que no había ninguna evidencia genética de que alguna rebanada de troncho correspondiera a tiburón blanco y al encontrar una especie de tiburón martillo, especie protegida a nivel internacional, se tomó la decisión de ampliar el estudio a las especies de tiburones que pudieran estar protegidas por instituciones internacionales, además de ampliar el número de mercados de donde se pudieran obtener porciones de carne de tiburón, donde se sospechara que hubiera algún comercio fraudulento.

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En todo el estudio se visitaron 5 mercados locales de productos pesqueros en dos localidades de la península de Baja California. Un mercado en Ensenada y cuatro en La Paz (Tabla I). Tabla I. Mercados de la península de Baja California de donde se obtuvieron las porciones de carne Mercado Negro o Mercado de Mariscos

Ubicación Ensenada

Dirección

Puestos de venta

Boulevard costero esquina Miramar

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Municipal Nicolás Bravo

La Paz

Nicolás Bravo esquina con Guillermo Prieto

5

Francisco I. Madero

La Paz

Revolución de 1910 entre Santos Degollado y Melchor Ocampo

4

Municipal General Agustin Olachea Avilés

La Paz

Ignacio Allende entre Venustiano Carranza y Juan Dominguez Cota

3

Chedraui "Palacio"

La Paz

Isabel La Católica #1915 entre Nicolás Bravo y Antonio Rosales

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En el año 2014 en Ensenada, se compraron rebanadas de troncho frescas de “Marlín”, “Swordfish” (o pez espada, el etiquetado del producto en ocasiones solo estaba en inglés) (Fig. 5) o “cazón”, bajo una falsa identidad. Esta identidad correspondía a un chef del interior de la república mexicana, que tenía un trabajo temporal en Ensenada y se dedicaba a preparar diariamente platillos elaborados exclusivamente con “marlín” y “swordfish”. En los primeros 5 días de la aparición del falso chef en el mercado, este les hacía preguntas a los vendedores sobre cuales productos pesqueros de marlín o pez espada que ofertaban en sus puestos de venta, tenían la mejor calidad para consumo. Con el paso de los días, los vendedores se acostumbraron a su presencia y le vendían sus productos sin tener sospecha alguna, de que las rebanadas de troncho eran compradas con otro fin.

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Fig. 5. “Swordfish” o “Pez espada” que se vende en el Mercado Negro de Ensenada a $60.00 M.N por kilogramo.

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Se puso atención en los tronchos que se veían sospechosos y tuvieran alguna de estas características: A.) La presencia de una quilla caudal lateral (Fig. 6).

Fig. 6. Quilla caudal (señalada con la flecha roja) de una rebanada de troncho. Fue identificada como I. oxyrinchus. B.) Una coloración grisácea en todo el borde de la piel (Fig. 7).

Fig. 7. Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquirida como “Pez espada” (Swordfish). Se aprecia la coloración grisácea en todo el borde de la piel. Fue identificado como S. zygaena.

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C.) Una coloración blanca en la parte inferior (Fig. 8).

Fig. 8. Rebanada de troncho del Mercado Negro de Ensenada adquirida como “Pez espada” (Swordfish). Se aprecia la coloración blanca en la parte inferior. Fue identificado como I. oxyrinchus. Todas las muestras de Ensenada se cortaron en pequeñas rebanadas y se conservaron en alcohol etílico 96%.

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La obtención de porciones de carne de tiburón en La Paz empezó en el verano del 2014 y concluyó en el mes de marzo del 2015. Todas las porciones de carne de tiburón fueron obtenidas mediante la compra directa en los mercados (Fig. 9), además de qué se conservaron en un congelador a -20 °C.

Fig. 9. Mercados locales de La Paz y una cadena comercial nacional. En la parte superior izquierda se aprecia el Mercado Francisco I. Madero, en la parte inferior izquierda se aprecia el Mercado Municipal General Agustin Olachea Avilés, en la parte superior derecha se aprecia el Mercado Municipal Nicolás Bravo y en la parte inferior derecha se aprecia Chedraui Palacio. Todas las muestras se transportaron al laboratorio de Ecología Molecular y Conservación de la Universidad Autónoma de Baja California Sur, unidad Pichilingue, donde se efectuaron los siguientes procedimientos:

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Extracción de ADN y verificación de su calidad El ADN de las porciones de carne se extrajo siguiendo el protocolo de extracción modificado de NaCl (Aljanabi & Martinez 1997) descrito en el ANEXO I. La integridad del ADN se verificó mediante electroforesis en un gel de agarosa de 1%, con 1.5 μL de bromuro de etidio [10 mg/mL], cargando 10 μL de ADN genómico por 2 μL de buffer de carga (Azul de bromo-fenol). Cada gel se corrió a 110 V por dos horas (Fig. 10).

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Fig. 10. Verificación de la calidad de ADN. Se muestra el barrido de ADN conforme a la cantidad que se obtuvo. En la parte superior de izquierda a derecha: ENSM: 4,5,14,22,25, LADDER, ENSM: 26,27,28,29,30,31. En la parte inferior de izquierda a derecha: ENSM:33,34,35,36,37, LADDER, ENSM: 38,39,41,42,43,44.

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Amplificación, secuenciación automática y análisis bioinformático de la región ITS2 de las muestras vía Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

Para amplificar y secuenciar la secuencia diagnóstica especie específica de las muestras colectadas se utilizaron los primers universales para la identificación de tiburones FISH28SR: 5’-TCC TCC GCT TAG TAA TAT GCT TAA ATT CAG C-3’ y FISH5.8SF: 5’-TTA GCG GTG GAT CAC TCG CGT CGT-3’ (Pank et al. 2001) que amplifican completamente la región del gen ITS2, así como pequeñas porciones de los genes 5.8 S (anterior a la región ITS2) y 28 S (posterior a la región ITS2) en los límites de 800 y 1500 bp. Para una reacción de 25 μL se utilizaron 13.5 μL de agua destilada, 5 μL de GoTaq® Flexi Buffer 5X, 2 μL de MgCl2 25 mM, 1 μL de dNTP’s [10 mM], 1 μL de cada primer [12.5 pm], 1 μL de ADN y 0.25 μL de GoTaq® DNA Polymerase [0.25u] El perfil de termociclado constó de tres fases: en la primera fase una desnaturalización inicial a 95 °C por 2 minutos, en la segunda fase se corrieron 35 ciclos de tres pasos: el primer paso correspondiente a una desnaturalización a 95 °C por 1 minuto, el segundo paso al anillamiento a 65 °C por 1 minuto y el tercer paso a la extensión de 72 °C por 1 minutos, en la tercera y última fase se corrió una extensión final de 72 °C por 5 minutos. Los resultados se verificaron en un gel de agarosa de 1%, con 1 μL de bromuro de etidio [10 mg/mL], cargando 3 μL de producto de PCR por 1 μL de buffer de carga (Azul de bromo-fenol). El gel se corrió a 80 V por tres horas (Fig. 11).

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Fig. 11. Amplificación de productos de PCR. Se muestra la presencia de la región amplificada de la región ITS2 para tiburones de las muestras de mercado mal etiquetadas. De izquierda a derecha: LADDER, ENSM:44,30,20,10,7,6 LPZM:9,8,7,6. Todos los productos de PCR del tamaño esperado, se mandaron a secuenciar automáticamente (Macrogen, Corea) en dirección Forward, seleccionando aquellas con cromatogramas de alta calidad, las que se editaron mínimamente con el Software ChromasPro. Las secuencias editadas se analizaron con BLASTn para determinar las especies de tiburones a las que pertenecen, mediante el porcentaje de identidad, el puntaje (score) y el valor esperado (Valor E) que presentaron.

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Resultados Colecta de muestras en mercados locales Se obtuvieron 79 muestras en 5 mercados de productos marinos locales de la península de Baja California. De La Paz se consiguieron un total de 18 muestras y de Ensenada 60 muestras. En el año 2012, 10 muestras fueron conseguidas, en el 2013, dos muestras, en el 2014, 40 muestras y en el 2015, 16 muestras (Tabla II). Tabla II. Relación tiburón identificado-producto marino vendido mal etiquetado en su totalidad, por ubicación y por temporalidad en este estudio.

Ubicación Especies de tiburón Isurus oxyrinchus Sphyrna zygaena Alopias pelagicus Mustelus mustelus Carcharhinus falciformis Carcharodon carcharias Sphyrna lewini Rhizoprionodon longurio

Vendido como "Swordfish/ Marlin" "Swordfish/ Marlin" y ”Cazón seco” "Swordfish/ Marlin" "Cazón" "Cazón seco" & “Swordfish

Año

No. individuos

La Paz

Ensenada

2012

2013

2014

2015

45

1

44

8

2

34

1

18

9

9

2

0

7

9

5

0

5

0

0

5

0

4

4

0

0

0

0

4

3

2

1

0

0

2

1

“Cazón”

1

0

1

0

0

1

0

"Cazón"

1

1

0

0

0

0

1

"Cazón"

1

1

0

0

0

1

0

18

60

10

2

50

16

78

26

Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, “swordfish” y “cazón”.

De un total de 79 secuencias analizadas, 78 pertenecen a ocho especies de tiburones: Carcharodon carcharias, Isurus oxyrinchus, Sphyrna lewini, Sphyrna zygaena, Rhizoprionodon longurio, Carcharhinus falciformis, Mustelus mustelus y Alopias pelagicus. La otra secuencia corresponde a Rhinobatos productus (Pez Guitarra). Las especies identificadas en Ensenada corresponden a: I. oxyrinchus, S. zygaena, A. pelagicus, C. falciformis y C. carcharias. En la muestra que fue obtenida como “cazón” se identificó a C. carcharias, especie protegida a nivel nacional e internacional (Tabla III).

27

Tabla III. Productos pesqueros ofertados como “Marlín”, “Pez espada” y “Cazón” en el Mercado Negro de Ensenada obtenidos entre el 24 de agosto del 2012 y el 13 de septiembre del 2014. Muestra Localidad E1 E2 E3 E4 E5 E6 E7 E8 E9 E10 E11 E12 E13 E14 E15 E16 E17 E18 E19 E20 E21 E22 E23 E24 E25 E26 E27 E28 E29 E30 E31 E32 E33 E34 E35 E36 E37 E38 E39 E40 E41 E42 E43 E44 E45 E46 E47 E48 E49

Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada

Fecha 24-ago-12 25-ago-12 10-sep-12 11-sep-12 11-sep-12 08-nov-12 08-nov-12 08-nov-12 08-nov-12 08-nov-12 18-sep-13 18-sep-13 25-ago-14 26-ago-14 26-ago-14 27-ago-14 27-ago-14 27-ago-14 28-ago-14 28-ago-14 28-ago-14 29-ago-14 29-ago-14 29-ago-14 09-sep-14 30-ago-14 30-ago-14 30-ago-14 30-ago-14 31-ago-14 31-ago-14 31-ago-14 31-ago-14 31-ago-14 01-sep-14 01-sep-14 01-sep-14 02-sep-14 02-sep-14 02-sep-14 03-sep-14 03-sep-14 03-sep-14 03-sep-14 04-sep-14 09-sep-14 09-sep-14 09-sep-14 09-sep-14

Vendido como “Marlin” “Marlin” “Marlin” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Marlin” “Marlin” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Marlin” “Marlin” “Marlin” “Swordfish” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Cazón” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Marlin” “Swordfish” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish”

Especie I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus S. zygaena I. oxyrinchus S. zygaena I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus A. pelagicus I. oxyrinchus A. pelagicus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus S. zygaena S. zygaena I. oxyrinchus I. oxyrinchus C. carcharias S. zygaena A. pelagicus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus S. zygaena I. oxyrinchus S. zygaena S. zygaena I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus

Valor E 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 2e-96 3e-168 4e-74 0.0 0.0 0.0 4e-19 0.0 0.0 0.0 2e-81 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 1e-170 0.0 0.0 0.0 3e-96 0.0 0.0 4e-112 0.0 0.0 0.0 6e-64 0.0 2e-160 2e-60 6e-157 0.0 0.0

Identidad 92% 92% 93% 90% 93% 99% 94% 99% 90% 95% 93% 91% 88% 89% 78% 89% 99% 96% 69% 90% 97% 93% 78% 95% 88% 92% 99% 90% 91% 92% 96% 90% 92% 91% 86% 78% 94% 95% 82% 96% 83% 89% 82% 89% 88% 73% 88% 91% 88%

28

Tabla III. Continuación E50 E51 E52 E53 E54 E55 E56 E57 E58 E59 E60

Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada Ensenada

29-ago-14 09-sep-14 10-sep-14 10-sep-14 11-sep-14 11-sep-14 12-sep-14 12-sep-14 12-sep-14 13-sep-14 13-sep-14

“Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Marlin” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish” “Swordfish”

S. zygaena A. pelagicus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus C. falciformis A. pelagicus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus I. oxyrinchus

0.0 0.0 2e-109 0.0 4e-139 0.0 0.0 7e-149 6e-55 1e-140 6e-138

92% 99% 88% 94% 84% 90% 99% 85% 80% 84% 83%

Las especies de tiburón identificadas en La Paz correspoden a: S. lewini, S. zygaena, I. oxyrinchus, R. longurio, C. falciformis y M. mustelus. La distribución de esta última especie no pertenece al océano Pacífico. La especie R. productus es la única que no pertenece al grupo de los tiburones (Tabla IV). Tabla IV. Productos pesqueros ofertados como “Cazón” y “Cazón Seco” en los mercados de La Paz obtenidos entre el 14 de julio del 2014 y el 20 de marzo del 2015. Muestra Localidad

Fecha

LP1

La Paz

14-jul-14

LP2

La Paz

14-jul-14

LP3

La Paz

14-jul-14

LP4 LP5 LP6 LP7 LP8 LP9 LP10 LP11 LP12 LP13 LP14 LP15 LP16 LP17 LP18 LP19

La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz La Paz

14-jul-14 21-mar-15 21-mar-15 21-mar-15 21-mar-15 21-mar-15 21-mar-15 21-mar-15 28-mar-15 28-mar-15 28-mar-15 28-mar-15 28-mar-15 28-mar-15 28-mar-15 28-mar-15

Vendido como “Cazón” "Cazón seco" "Cazón seco" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón" "Cazón

R. longurio

Valor E 0.0

C. falciformis

0.0

97%

S. zygaena

0.0

97%

R. productus M. mustelus M. mustelus M. mustelus C. falciformis M. mustelus I. oxyrinchus S. lewini S. zygaena S. zygaena S. zygaena S. zygaena S. zygaena S. zygaena S. zygaena S. zygaena

0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0

94% 92% 92% 93% 91% 91% 93% 99% 98% 97% 98% 99% 98% 99% 98% 98%

Especie

Identidad 91%

29

Se extrajo ADN de dos muestras procesadas y empaquetadas en una cadena comercial nacional etiquetadas como “Cazón Seco” (Fig. 12) y su secuencia correspondió a dos especies diferentes: S. zygaena y C. falciformis.

Fig. 12. Sphyrna zygaena, etiquetado como “Cazón Seco” que fue vendido en una cadena comercial nacional el 14 de julio del 2014.

30

Discusión Colecta de muestras en mercados locales Este trabajo se realizó con miras a la conservación de los tiburones dentro de las aguas de jurisdicción mexicanas correspondientes al Océano Pacífico, siendo el primero en su tipo. El mercado de Ensenada cuenta con 14 puestos de venta, en donde se comercializan productos marinos de 08:00 AM a 04:00 PM. Estos productos son guardados en hieleras y ofrecidos al público en unas tablas de madera inclinadas al aire libre. En ocasiones se podían observar cuerpos de tiburones sin cabezas, ni aletas siendo transportadas por medio de una carretilla hacia los puestos de venta (Fig. 13).

Fig. 13. Tronchos de tiburones que son transportados hacia los puestos de venta en el mercado de Ensenada. En los mercados de La Paz, tres eran locales, en donde se vendían los productos marinos a la vista del público, pero cubiertos con un plástico o dentro una vitrina, para evitar cualquier tipo de contaminación. Estos mercados contaban con un horario de 08:00 AM a 04:00 PM.

31

El cuarto mercado era una cadena comercial nacional y vendían productos marinos que estaban procesados, empaquetados y etiquetados como “Cazón Seco”. Esta cadena comercial contaba con un horario de 08:00 AM a 11:00 PM. Al obtener muestras del mercado de Ensenada, en algunas ocasiones se conseguían en estado de descomposición (Fig. 14). El estado sanitario de la carne vendida se debe a las pobres condiciones de preservación en los puestos de venta, lo cual derivaría en la obtención de un ADN degradado (Holmes et al. 2009). Por tal motivo se desechó una de las muestras conseguidas (debido a su olor fétido).

Fig. 14. Pedazo de porción de carne adquirida como “Marlín” en estado de descomposición. Para el caso de las muestras conseguidas durante el 2014 en los mercados de La Paz, se obtuvieron en una fecha correspondiente a la veda de la NOM-029-PESC-2006 para el Pacífico Mexicano (DOF 2007). Por lo que tendría que haberse determinado si este producto fue extraído durante la veda con bas en características de textura y organolépticas, para verificar si se estaba rompiendo con la veda o este producto había estado almacenado, y había sido capturado durante el periodo permitido. Perfil genético-forense de las muestras de “marlín”, “swordfish” y “cazón”. En el caso de la identificación de una muestra conseguida en un mercado de La Paz y vendida como “cazón”, se obtuvo R. productus, especie que corresponde a la familia Rhinobatidae y es 32

endémica del Pacífico Oriental, desde San Francisco hasta el Golfo de California (Ebert 2003). En este caso se observa que por lo menos una especie de raya también es vendida como “cazón”. En algunos lados de Baja California Sur es comercializada como cazón (Villavicencio-Garayzar 1996). Se identificaron 4 individuos como M. mustelus en este trabajo, especie cuya distribución no corresponde al océano Pacífico. M. mustelus y M. punctulatus son los únicos tiburones del género Mustelus que aparecen en el Gen Bank con el marcador ITS2. Pero en la parte occidental y oriental de la península de Baja California solo se tienen registradas a las especies: M. californicus, M. henlei, M. lunulatus y M. albipinnis (Castro 2011). Por lo cual las secuencias que se obtuvieron podrían ser de estas cuatro especies. M. lunulatus junto con M. californicus son de los tiburones más abundantes en aguas someras en el Golfo de California. M. lunulatus tiene una posible área de crianza en la parte superior del Golfo de California. Esta misma especie es pescada en gran abundancia de manera local en el Golfo de California. Es vivíparo placentario con un periodo de gestación puede durar hasta 11 meses. En el Golfo de California, su temporada de dar a luz es de a mediados de febrero a finales de abril. El ciclo de reproducción de los tiburones del género Mustelus es anual (Pérez Jiménez 2006). M. henlei se distribuye desde la Bahía de Humboldt en California hasta el Golfo de California. Es un vivíparo placentario con un periodo de gestación de 10 meses (Pérez Jiménez & SosaNishizaki 2008). En marzo los embriones alcanzan su máximo desarrollo (Pérez Jiménez 2006). M. californicus se distribuye desde la parte norte de California hasta el Golfo de California (Pérez Jiménez et al. 2005). Es un vivíparo placentario con un periodo de gestación de 11 meses. En el Golfo de California da a luz en los meses de abril y mayo (Pérez Jiménez 2006). Se cree que puede haber un área de crianza en la parte superior del Golfo de California (Pérez Jiménez 2006). M. albipinnis se distribuye a lo largo de toda la península de Baja California. Es un vivíparo placentario. Solo se han registrado reportes de embriones en el mes de marzo (Pérez Jiménez et al. 2005). Las demás especies identificadas si cuentan con una distribución en el Pacífico Mexicano. 33

C. falciformis habita en aguas cálidas tropicales y sub-tropicales. En el Pacífico Oriental se distribuye desde la península de Baja California hasta el sur de Perú. Es un vivíparo placentario. Su periodo de gestación es de 12 meses (Castro 2011). R. longurio habita las aguas tropicales del Pacífico Oriental desde el sur de California hasta Perú (Kano et al. 1967). Es muy común en el Golfo de California y en el Pacífico Mexicano. Ha sido descrito como el tiburón más abundante de la familia Carcharhinidae dentro del Golfo de California (Thomson et al. 1979). Existen registros de que esta especie es altamente migratoria, ya que hacen movimientos por temporadas donde van de norte a sur de la península de Baja California (Kato & Hernández Carvallo 1967; Márquez-Farías et al. 2005). Es un tiburón vivíparo placentario con un periodo de gestación de 10 a 12 meses. Su ciclo reproductivo es anual y las hembras dan a luz de abril a junio (Márquez-Farías et al. 2005). S. zygaena habita en aguas templadas de todo el mundo y es raro encontrarlo en aguas tropicales. En el Pacífico Oriental es encontrado desde California Central hasta Chile (Miller & Lea 1972). Es localmente abundante en el Golfo de California. Es un vivíparo placentario. Tiene un ciclo reproductivo cada dos años (Castro 2011). S. lewini es un tiburón circumtropical de aguas costeras y oceánicas. En el Pacífico Oriental se distribuye desde California hasta Chile. Es vivíparo placentario con un ciclo reproductivo anual y un periodo de gestación de 10 meses (Castro 2011). Los juveniles son capturados en altas proporciones en la zona costera con redes de enmalle por sus habitos alimenticios y la forma de la cabeza que los hace altamente vulnerables al arte de pesca (Anislado y Robinson 2001). A. pelagicus se distribuyen en el Pacífico Oriental desde California hasta el sur de México, incluyendo el Golfo de California. Es un vivíparo aplacentario con alimentación por oofagia en su desarrollo embrionario. Se reproduce durante todo el año y tiene un ciclo reproductivo anual (Castro 2011). I. oxyrinchus se encuentra en aguas tropicales, sub-tropicales y templadas de todos los océanos. Es un vivíparo aplacentario con alimentación por oofagia en su desarrollo embrionario. Su periodo de gestación es de un año (Castro 2011). Además de la identificación a nivel especie, sería deseable la asignación de cada uno de los tiburones a su población de origen, ya que se sabe que todas estas especies se pescaron en el 34

Pacífico Mexicano. Por lo que sería importante ver si son tiburones que tienen poblaciones locales o son tiburones migratorios de poblaciones fuera del Pacífico Mexicano. Por ejemplo, se sabe que en la región sur del Golfo de California, C. falciformis, R. longurio, S. zygaena y S. lewini se reproducen principalmente en Bahía Santa María-Altata, Sinaloa (Salomón-Aguilar et al. 2009), por lo que algunas de las porciones de carne obtenidas como “cazón” pudieran pertenecer a estas zonas de reproducción. En GenBank solo se encuentran 59 secuencias de tiburones reportadas con la región ITS2, mientras que para citocromo oxidasa I (COI) hay 262 secuencias de tiburones, para citocromo b (CYTB) hay 97 secuencias de tiburones y para el gen ribosomal 16S hay 181 secuencias de tiburones. Antes del presente trabajo, se refería al código de barras de ADN como un método promisorio para la identificación de especies específicas (Hebert et al. 2003). Esta técnica se basa en el análisis de la variabilidad de una secuencia de nucleótidos corta (en animales) que constituye la subunidad 1 del gen mitocondrial Citocromo Oxidasa para evaluar diferencias entre especies (Hebert et al. 2003). La técnica se ha utilizado con éxito en numerosos taxa desde invertebrados (Hebert et al. 2004 (b); Hogg & Hebert 2004; Hajibabaei et al. 2006) a vertebrados (Hebert et al. 2004; Clare et al. 2006; Yoo et al. 2006), permitiendo diferenciar entre distintas especies, a menudo de manera consistente con las clasificaciones morfológicas (Ward et al. 2005; Ferri et al. 2009). En las 262 secuencias de tiburones del gen COI, no se encontró a la especie R. longurio, especie que si se pudo identificar con la región ITS2 y que es considerada coloquialmente como cazón junto con las cuatro especies del género Mustelus. Cabe resaltar la importancia de usar un solo tipo de marcador genético para la identificación de especies. En el caso de los marcadores mitocondriales, estos acumulan sustituciones en las secuencias mucho más rápido que los marcadores ribosomales ITS. Por otro lado, los marcadores ribosomales ITS son una herramienta excelente para la identificación rápida de especies conocidas, debido a su bajo nivel de polimorfismo intraespecífico (Blouin 2002).

Estado de conservación de las especies de tiburones El estado de conservación de las especies de tiburones de este estudio (Tabla V) dictamina que las especies C. carcharias y S. lewini son las que reciben mayor protección a nivel internacional, 35

por parte de 3 instituciones mundiales para la conservación de la naturaleza: en el estado de “Vulnerable” y “En peligro” respectivamente, de la lista roja de la IUCN, ambos en el apéndice II del CITES y S. lewini en el apéndice II, mientras que C. carcharhias en el apéndice I y II del CSM. En México, S. lewini, no se encuentra en ninguna de las Normas Oficiales Mexicanas para su protección especial (DOF 2007; DOF 2010) a diferencia de C. carcharias que es la única especie, de este estudio, que recibe protección a nivel nacional, ya que queda estrictamente prohibida la venta total o parcial de tiburón blanco en México (DOF 2007; DOF 2010; DOF 2014). Hasta el 14 de septiembre del 2014 se incluye a S. zygaena y S. lewini como especies CITES en el apéndice II (Sosa-Nishizaki et al. 2014), un día después del último muestreo de este estudio. Tabla V. Estatus de conservación de los tiburones encontrados en este trabajo en el marco internacional de legislación internacional para la protección de fauna silvestre. S. zyagena fue introducida como especie CITES en el apéndice II el 12 de julio del 2013 en 37 países. S. lewini fue introducida como especie CITES en el apéndice II el 12 de julio del 2013 en 127 países. *La población de estas especies se encuentran en decadencia. **Se desconoce la tendencia de la población de estas especies a aumentar o disminuir. ***Las especies de Mustelus de la región se encuentran en otras categorías: M. lunulatus, M. henlei y M. californicus están en la categoría de Preocupación Menor y M. albipinnis se encuentra en la categoría Datos insuficientes. Autoridades Internacionales Lista Roja de IUCN CITES CSM

C. carcharias

M. A. pelagicus mustelus** *

S. lewini

R. longurio

Casi Vulnerable* Vulnerable En Vulnerable* Vulnerable* Vulnerable* amenazados * * peligro** *

Datos insuf.**

Apéndice II

I. oxyrinchus

N/A

Apéndices I Apéndice II y II

S. zygaena

C. falciformis

Apéndice II

N/A

N/A

N/A

Apéndice II

N/A

N/A

Apéndice II

N/A

Apéndice II

Apéndice II

N/A

De los tiburones identificados a nivel especie, en varios casos se trató de especies que se encuentran protegidas por organismos internacionales. El 92.1% de estos tiburones se encuentran en una categoría de riesgo de la lista roja de la IUCN, el 87.2% se encuentra en la categoría de vulnerable, el 3.7% en la categoría Casi Amenazados y el 1.2% se encuentra en la categoría En Peligro. El 23.9% de estos tiburones se encuentran en el apéndice II del CITES. El

36

71.2% de estos tiburones se encuentran en el apéndice II del CSM y solo el 1.2% se encuentra en el apéndice I de la misma autoridad internacional (Fig. 15).

Isurus oxyrinchus (58.2%) Sphyrna zygaena (21.5%) Alopias pelagicus (6.3%) Mustelus mustelus (5%) Carcharhinus falciformis (3.7%) Carcharodon carcharias (1.2%)

Fig. 15. Relación de tiburones identificados en los productos de “marlín”, “pez espada” y “cazón”. En el Pacífico Mexicano la veda de tiburones y rayas corresponde desde el 01 de mayo hasta el 31 de agosto, entrando en vigor en el año 2013 (DOF 2007). En este trabajo se detectó una violación a esta Norma Oficial Mexicana, ya que se vendieron productos frescos de cazón el 14 de julio del 2014. Es muy importante tener una vigilancia constante en la identificación de especies de tiburones y/o rayas comerciales, ya que es un tema relevante para asegurar un correcto etiquetado de productos marinos y mejorar el conocimiento de las especies capturadas, en cuestión de los volúmenes que son pescados por temporalidad, además de mejorar el manejo de las pesquerías de tiburones, frente a las respectivas autoridades (Blanco et al. 2008).

37

Caso tiburón blanco

Como se mencionó anteriormente, el tiburón blanco es la única especie que recibe protección a nivel nacional. La muestra en la que se encontró la identidad genética de tiburón blanco fue en una porción de carne de “Cazón” vendida en Ensenada. Su distribución es cosmopolita y tiene poblaciones importantes en el Pacífico Nororiental (California, Isla Guadalupe, Hawaii), en el Indo-Pacífico (Autralia-Nueva Zelanda) y en las costas occidentales y orientales de Sudáfrica. Cuando son juveniles es más probable encontrarlos en aguas costeras (Compagno 2001). Para la región que comprende el Pacífico Mexicano existen avistamientos de juveniles de tiburón blanco en la parte occidental de la península de Baja California (Santana-Morales et al. 2012), mientras que en el Golfo de California se tienen registros de 38 avistamientos (GalvánMagaña et al. 2010). De 1999 al 2010 se pescaron en la parte occidental de la península de Baja California 111 individuos juveniles, lo cual sugiere que la región correspondiente a San Sebastián Vizcaíno pueda ser una posible área de crianza (Santana-Morales et al. 2012). Con la evidencia que se obtuvo en este trabajo, respecto a esta especie, se tendrán que implementar medidas de acción y vigilancia en los mercados de productos pesqueros locales de la península de Baja California.

38

Productos de tiburón que se etiquetan como productos de especies de alto valor comercial: Fraude de “Marlín” y “Pez espada”.

Los resultados de este estudio apuntan casos de sustitución de especies de tiburones en mercados productos pesqueros de la península de Baja California. La totalidad de pruebas genéticas realizadas a las muestras de productos pesqueros ofertadas como marlín y pez espada señalaron inequívocamente que no se trataban de los productos ofertados si no de diferentes especies de tiburones y particularmente de las especies I. oxyrinchus y S. zygaena (Tabla II). El 27.84% de muestras obtenidas fueron de “Marlín”, el 46.83% fueron de “Pez espada” y el 25.31% fueron de “Cazón” (Fig. 16.)

"Cazón" (25.31%)

"Marlín" (27.84%)

"Pez espada" (46.83%)

Fig. 16. Proporción de las etiquetas falsas en los mercados de productos pesqueros de la Penísula de Baja California. De tal modo que, de los productos obtenidos como “Marlín” (22 productos), el 81.81% correspondió a I. oxyrinchus (18 productos), el 13.63% correspondió a S. zygena (Tres productos) y el 4.54% correspondió a A. pelagicus (Un producto) (Fig. 17).

39

I. oxyrinchus (81.81%)

S. zygaena (13.63%)

A. pelagicus (4.54%)

Fig. 17. Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de “Marlín”. De los productos obtenidos como “Pez espada” (37 productos), el 70.27% correspondió a I. oxyrinchus (26 productos), el 16.21% correspondió a S. zygaena (Seis productos), el 10.81% correspondió a A. pelagicus (Cuatro productos) y el 2.70% correspondió a C. falciformis (Un producto) (Fig. 18).

I. oxyrinchus (70.27%)

S. zygaena (16.21%)

A. pelagicus (10.81%)

C. falciformis (2.70%)

Fig. 18. Relación de tiburones identificados bajo la falsa etiqueta de “Pez espada”.

40

De los productos obtenidos como “Cazón” (20 productos), el 45% correspondió a S. zygaena (Nueve productos), el

20% correspondió a M. mustelus (Cuatro productos), el 10%

correspondió a C. falciformis (Dos productos) y el 25% restante correspondió a C. carcharias, I. oxyrinchus, S. lewini, R. longurio y a R. productus equitativamente (Con un producto cada uno) (Fig. 19).

S. zygaena (45%)

M. mustelus (20%)

C. falciformis (10%)

I. oxyrinchus (5%)

S. lewini (5%)

C. carcharias (5%)

R. longurio (5%)

R. productus (5%)

Fig. 19. Relación de tiburones identificados bajo la etiqueta de “Cazón”. Actualmente, las naciones preocupadas por practicar la pesca sustentable y los consumidores que buscan promoverla, presentan una creciente tensión a los temas de calidad y seguridad alimentaria. La comunidad científica a través de los medios masivos de comunicación y redes sociales están promoviendo dicho conocimiento en la sociedad. En lo que respecta a los alimentos se ha evidenciado que de tener conocimiento, los consumidores son reacios a consumir alimentos alterados, cuya modificación puede ocurrir durante los procesos de manufactura estándar, y cada vez es más frecuente el que se preste atención a los ingredientes con que se preparan los alimentos. En especial cuando se busca satisfacer determinados requerimientos nutrimentales o cumplir con requerimientos médicos específicos. Debido a lo anterior, las naciones y los consumidores son cada vez más demandantes respecto a la calidad de sus alimentos, en particular en lo que corresponde a casos como los que aquí se tratan respecto a la trazabilidad y el etiquetado detallado de los productos. En años recientes, los medios de comunicación han resaltado la existencia de fraudes en el rubro de los productos 41

pesqueros comestibles (Marko et al. 2004; Smith et al. 2008; Wong & Hanner 2008), fomentado por lo difícil que es reconocer las especies de este tipo de productos, los que se expenden altamente procesados para satisfacer los requerimientos de los consumidores (Blanco et al. 2008). Por ejemplo, numerosas especies de peces tienen un sabor y textura similares, y es muy difícil identificar a la especie correcta cuando el pescado se entrega sin sus partes corporales diagnósticas (e.g. piel, escamas, cabeza y aletas), especialmente cuando es procesado en filetes o rebanadas. Se ha observado también la sustitución o el etiquetado erróneo de productos pesqueros en el mercado (como en este caso), expendedoras de pescado y restaurantes. Lo que puede llegar a ser peligroso, debido a la presencia de sustancias tóxicas o alergénicas e incluso dañina como en el caso de la comercialización de especies amenazadas (Holmes et al. 2009; Ward et al. 2008; Wong & Hanner 2008). Otro problema implícito en la trazabilidad de productos pesqueros se relaciona al hecho de que en las mesas de los que consumen estos productos, es cada vez más común la presencia de peces que han sido capturados no solo en distintos países, sino que también en distintos continentes. A pesar de ello, la nomenclatura de los peces que se comercializan no está estandarizada globalmente; de hecho, distintas especies pueden ser identificadas bajo el mismo nombre vernáculo como se aprecia en este trabajo. En el caso de nombre cazón, que se identificaron especies como C. carcharias, S. zygaena, S. lewini, I. oxyrinchus, C. falciformis, R. longurio, Mustelus sp. e inclusive una especie de raya, R. productus. Asimismo, una sola especie puede recibir distintos nombres dependiendo de la región, dentro del mismo país como la especie C. falciformis que puede recibir el nombre de tiburón sedoso, tiburón tunero, tiburón piloto o tiburón aleta de cartón en varias regiones de México. Los resultados demuestran que este enfoque de identificación basado en una secuencia especieespecífica de ADN, es altamente coherente para encontrar elasmobranquios entre productos pesqueros que se ofertan como “Marlín” y “Pez espada” en el mercado mexicano a nivel de especies. El porcentaje de fraudes comerciales basados en la venta de productos de tiburones en vez de los productos pesqueros ofertados como “Marlín” y “Pez espada” es extremadamente alto en los mercados de Ensenada. 42

Lo descrito merece consideración respecto a los siguientes aspectos económicos: el marlín y el pez espada son productos pesqueros valorados en la Pesquería del Pacífico Mexicano en 120$/kg desde el 2013. Como se aprecia en este trabajo estos productos son sustituidos por especies de menor valor, por ejemplo el precio de valor del tiburón mako (que usan para hacer tacos) en el mismo Mercado Negro de Ensenada oscila entre $50.00 y $70.00 el kilogramo. La discrepancia en los precios es evidente, y el impacto económico en los vendedores y consumidores es claro. Sin embargo, independientemente de los aspectos económicos, una de las alamas que emergen de este estudio es relativa a los problemas potenciales para la salud humana (alérgenos y parásitos) debido a las substituciones de especies. En el mercado global de productos pesqueros estas sustituciones no pueden considerarse de importancia secundaria. Atendiendo a esta consideración, los temas de conservación implícita en el manejo de las especies de peces comercializadas (especialmente especies amenazadas, en peligro o en su defecto, en el caso de especies desconocidas que están siendo diezmadas) emergen como una gran preocupación (Ward et al. 2008; Wong & Hanner 2008; Holmes et al. 2009)

43

Conclusiones -Se detectó la sustitución de productos de “Marlín” o “Pez espada”, por especies de tiburones. -Los tiburones que se encontraron reciben protección a nivel internacional, y en mayor medida el tiburón blanco y los tiburones martillo. A nivel nacional solo el tiburón blanco recibe protección a nivel nacional. -La presencia de tiburón blanco en una de las muestras obtenidas incita a realizar más proyectos de investigación de este tipo, para conocer los lugares de donde provienen dichos organismos, si corresponden a áreas de crianza o no, en caso de ser juveniles, como lo sugiere la literatura. -Se encontró fraude en los productos pesqueros de Ensenada al ofertarse productos de mayor calidad. -Se confirmó el uso de marcados moleculares para la identificación de especies comerciales, de tal modo que sea un paso para certificar el mercado legalmente. De esta forma, se podría poner en práctica la eco-certificación en la calidad de los productos que son vendidos, en este caso, usando marcadores moleculares que certifiquen la venta real de marlín.

Recomendaciones -Usar un marcador genético más amplio, en cuestión de número de especies, o en su defecto, hacer la comparación con dos tipos de marcadores distintos. -Realizar muestreos en época de veda, para ver si existe la venta ilegal de tiburones y rayas. -Usar primers especie-específicos de los tiburones que se distribuyen en el Pacífico Mexicano, como un método más económico de identificación de los tiburones que están siendo pescados en este tipo de mercados -Que en cada desembarque, investigadores de las autoridades pertinentes (INAPESCA), realicen muestreos al azar de los tronchos, en el mercado de Ensenada, durante un periodo de tiempo constante, con el fin de tener una caracterización de los tiburones que son vendidos de manera fraudulenta. -Ampliar este estudio a más mercados, en todo el país.

44

-Asignar a la población de origen, cada uno de los tiburones que son encontrados, con el fin de evaluar el impacto que conlleva este tipo de pesca INDNR.

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ANEXOS ANEXO I Método de extracción de ADN de LiCl. 1. Cortar finamente ~100 mg de tejido y colocarlos en un tubo Eppendorf. 2. Añadir 300-400 μL de buffer de extracción (100 mM NaCl, 50 mM Tris-Hcl, 50 mM EDTA, 1% SDS, pH 8.0).

3. Añadir 7-10 μL de proteinasa-K [10 mg/mL]. 4. Poner las muestras en incubación a 56 ºC con agitación por inversión constante manual por 2-3 horas. 5. Añadir 300 μL de LiCl [3M] y agitar por 1 minuto en el vortex. 6. Añadir 600 μL de cloroformo-alcohol isoamílico 24:1. 7. Poner en agitación durante 30 minutos a 700 rpm. 8. Centrifugar a 14,000 rpm por 20 minutos a 4°C. 9. Transferir la fase acuosa sobrenadante a un nuevo tubo, con cuidado de no tomar parte de la fase acuosa inferior. 10. En caso de tomar parte de la fase acuosa inferior, centrifugar por 5 minutos a máxima velocidad. 11. Repetir los pasos 6, 7 y 8, y transferir la fase acuosa a un nuevo tubo. 12. Añadir 1000 μL de alcohol etílico al 100% y 50 μL de acetato de sodio [3M] y mezclar por inversión. 13. Dejar en precipitación a -20°C por una noche (18 horas). 14. Centrifugar a 14,000 rpm por 40 minutos a 4°C. 15. Decantar el supernadante y agregar 750 μL alcohol etílico al 70%. 16. Poner en agitación por 10 minutos a 700 rpm. 17. Centrifugar a 14,000 rpm por 20 minutos a 4°C y decantar el supernadante. 18. Evaporar los residuos de alcohol en un horno a 50-60 °C por una hora. 19. Resuspender el pellet de ADN en 50-100 μL de TE 1X en el horno a 40°C por 30 minutos. La integridad del ADN se verifica por electroforesis en gel de agarosa 1%, cargando 10 μL de ADN con 2 μL de buffer de carga (Azul de Bromo-Fenol). 56

ANEXO II Definición de los estados y apéndices de los organismos internacionales Lista roja de la IUCN Casi Amenazado: Un taxón está Casi Amenazado cuando ha sido evaluado según los criterios y no satisface, actualmente, los criterios para En Peligro Crítico, En Peligro o Vulnerable, pero está próximo a satisfacer los criterios, o posiblemente los satisfaga, en un futuro cercano. Datos Insuficientes: Un taxón se incluye en la categoría de Datos Insuficientes cuando no hay información adecuada para hacer una evaluación, directa o indirecta, de su riesgo de extinción basándose en la distribución y/o condición de la población. Un taxón en esta categoría puede estar bien estudiado, y su biología ser bien conocida, pero carecer de los datos apropiados sobre su abundancia y/o distribución. Datos Insuficientes no es por lo tanto una categoría de amenaza. Al incluir un taxón en esta categoría se indica que se requiere más información y se reconoce la posibilidad de que investigaciones futuras demuestren apropiadamente una clasificación de amenazada. Es importante hacer un uso efectivo de cualquier información disponible. En muchos casos habrá que tener mucho cuidado en elegir entre Datos Insuficientes y una condición de Amenaza. Si se sospecha que la distribución de un taxón está relativamente circunscrita, y si ha transcurrido un período considerable de tiempo desde el último registro del taxón, la condición de Amenazado puede estar bien justificada. En Peligro: Un taxón está En Peligro cuando la mejor evidencia disponible indica que cumple cualquiera de los criterios “A” a “E” para En Peligro y, por consiguiente, se considera que se está enfrentando a un riesgo de extinción muy alto en estado de vida silvestre. Criterios: A.- Reducción del tamaño poblacional observada, estimada, inferida o sospechada entre el 50% y el 70% de la población en los últimos o los próximos 10 años. B.- Distribución geográfica con una extensión de presencia estimada menor a 5,000 km2 o una distribución geográfica con un área de ocupación estimada menor a 500 km 2. C.- Tamaño de la población estimada en menos de 2500 individuos maduros. D.- Se estima que el tamaño de la población es menor de 250 individuos maduros. E.- El análisis cuantitativo muestra que la probabilidad de extinción en estado de vida silvestre es de, al menos un 20% dentro de 20 años o cinco generaciones, dependiendo de cuál sea el período más largo (hasta un máximo de 100 años). Preocupación Menor: Un taxón se considera de Preocupación Menor cuando, habiendo sido evaluado no cumple ninguno de los criterios que definen las categorías de En Peligro Crítico, En Peligro, Vulnerable o Casi Amenazado. Se incluye en esta categoría taxones abundantes y de amplia distribución. 57

Vulnerable: Un taxón está Vulnerable cuando la mejor evidencia disponible indica que cumple cualquiera de los criterios “A” a “E” para Vulnerable y, por consiguiente, se considera que se está enfrentando a un riesgo de extinción muy alto en estado de vida silvestre. Criterios: A.- Reducción del tamaño poblacional observada, estimada, inferida o sospechada entre en un 30% y el 50% de la población en los últimos o los próximos 10 años. B.- Distribución geográfica con una extensión de presencia estimada menor a 20,000 km2 o una distribución geográfica con un área de ocupación estimada menor a 2,000 km2. C.- Tamaño de la población estimada en menos de 10,000 individuos maduros. D.- Población muy pequeña o restringida con un tamaño de la población estimado en menos de 1,000 individuos maduros E.- El análisis cuantitativo muestra que la probabilidad de extinción en estado de vida silvestre es de, al menos un 10% dentro de 100 años.

CITES Apéndice II: Incluye especies no necesariamente amenazadas de extinción, pero cuyo comercio debe controlarse para evitar que así sea. También incluye especies que necesitan regularse por su similitud con otras. El comercio internacional se permite, pero bajo ciertos requisitos: -Requerir la previa concesión y presentación de un permiso de exportación otorgado por una Autoridad Científica del Estado manifestando que la exportación no perjudicará a la supervivencia de esa especie, por una Autoridad Administrativa del Estado verificando que el espécimen no fue obtenido en contravención de la legislación vigente en dicho Estado sobre la protección de su fauna y flora y por una Autoridad Administrativa del Estado de exportación verificando que todo espécimen vivo será acondicionado y transportado de manera que se reduzca al mínimo el riesgo de heridas, deterioro en su salud o maltrato. -Que una Autoridad Científica de cada parte vigilará los permisos de exportación expedidos por ese Estado para especímenes de especies incluidas en el Apéndice II y las exportaciones efectuadas de dichos especímenes. -La importación de cualquier espécimen de una especie incluida en el Apéndice II requerirá la previa presentación de un permiso de exportación o de un certificado de reexportación. - La reexportación de cualquier espécimen de una especie incluida en el Apéndice II requerirá la previa concesión y presentación de un certificado de reexportación.

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-La introducción procedente del mar de cualquier espécimen de una especie incluida en el Apéndice II requerirá la previa concesión de un certificado expedido por una Autoridad Administrativa del Estado de introducción. CSM Apéndice I: Incluye a las especies migratorias que presenten evidencia confiable, tomando en cuenta la mejor evidencia científica posible, que indique que tales especies están en peligro. Apéndice II: Incluye a las especies migratorias que tienen un status de conservación no favorable y que requieren acuerdos internacionales para su conservación y manejo, así como aquellas especies que tienen un status de conservación que podrían beneficiarse significativamente de la cooperación internacional que puede ser alcanzada por acuerdos internacionales.

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