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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 183 606 kInt. Cl. : A61L 24/10, A61L 15/32

11 N´ umero de publicaci´on: 7

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˜ ESPANA

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A61L 15/42

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 99946186.6 kFecha de presentaci´on: 17.09.1999 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 1 140 235 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 10.10.2001

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54 T´ıtulo: Granulado de adhesivo de fibrina y procedimiento para su preparaci´ on.

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30 Prioridad: 23.12.1998 DE 198 59 611

21.06.1999 DE 199 28 372 21.06.1999 DE 199 28 371

Emil-von-Behring-Strasse 76 35041 Marburg, DE

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72 Inventor/es: Rapp, Mirna

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74 Agente: D´ıez de Rivera y Elzaburu, Ignacio

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

16.03.2003

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

16.03.2003

ES 2 183 606 T3

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73 Titular/es: Aventis Behring GmbH

Aviso:

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 183 606 T3 DESCRIPCION Granulado de adhesivo de fibrina y procedimiento para su preparaci´ on. 5

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Es objeto de la invenci´ on un granulado de adhesivo de fibrina que es capaz de deslizarse sin dificultad, que contiene todas las sustancias necesarias para formar un gel de fibrina estable, y que puede ser empleado directamente para adherir heridas. Se produce mediante secado por pulverizaci´ on en lecho fluidizado por medio de un gas fluidizante. Es sabido que, tras producirse una herida, su curaci´ on se inicia por medio de una cascada de activaci´on de varios factores de coagulaci´ on conectados en serie. Resulta por u ´ ltimo de ello la reacci´on entre la trombina activada y el fibrin´ ogeno, en presencia de iones calcio, para formar una matriz de fibrina, que finalmente cubre la herida y origina as´ı la hemostasia. Esta matriz de fibrina contin´ ua siendo reforzada por el factor XIII activado (F XIIIa) a trav´es de enlaces covalentes adicionales, con lo cual se incrementa su estabilidad mec´anica y su resistencia frente a una degradaci´ on proteol´ıtica prematura. En la cirug´ıa moderna, la hemostasia por medio de la adhesi´ on de fibrina adquiere cada vez m´ as importancia, ya que los denominados “adhesivos de fibrina” constituyen un biomaterial con buena tolerancia, y que favorece la cicatrizaci´on de las heridas. Estos m´etodos son sumamente adecuados para lograr la hemostasia en heridas fuertemente hemorr´ agicas en el caso de operaciones en ´organos internos parenquimatosos, en transplantes de piel, en la cirug´ıa de urgencia en traumatismos internos y externos, y sobre todo tambi´en para cubrir suturas, como protecci´ on para impedir hemorragias posquir´ urgicas. Por razones est´eticas, en la cirug´ıa otorrinolaringol´ ogica y en la cirug´ıa facial se prefiere para la cicatrizaci´on de heridas externas el adhesivo de fibrina en lugar del cierre por sutura. Tambi´en se utiliza cada vez m´as el adhesivo de fibrina en la cirug´ıa endosc´opica, por ejemplo para detener la hemorragia de u ´lceras g´astricas. R , conLos adhesivos de fibrina que se encuentran actualmente en el mercado, tales como Beriplast tienen, junto a sales inorg´ anicas y amino´acidos, los factores de coagulaci´on fibrin´ ogeno, trombina y factor XIII, obtenidos de plasma humano, y tambi´en alb´ umina y fibronectina para favorecer la cicatrizaci´on. Aunque el preparado posee muy buenas propiedades bioqu´ımicas y hemost´aticas, requiere una laboriosa preparaci´ on antes de su aplicaci´on. Se disuelven de manera independiente los liofilizados de fibrin´ ogeno y de fibrina, que se suministran separados, se recogen en jeringas separadas, y se sujetan en un soporte/dispositivo especial. Adem´ as de mucho tiempo, este procedimiento requiere tambi´en personal bien entrenado. Ya ha aparecido en el mercado una variante de adhesivo de fibrina con el nombre de R , en forma disuelta lista para el uso y dispuesta en jeringas, pero s´ olo puede conservarse a baja Tissucol no de agua antes de su uso. As´ı, ninguna de las temperatura (-20◦ C), y debe ser descongelada en un ba˜ dos variantes de adhesivo de fibrina pueden ser utilizadas en situaciones donde se precise un adhesivo de fibrina listo para el uso y utilizable inmediatamente, sin preparaci´on. Adem´ as, un adhesivo de fibrina listo para el uso y f´ acilmente dosificable ser´ıa incluso m´as econ´omico, porque no se precisa preparar innecesariamente material en exceso, que se desperdicia.

Una posible mejora en la manipulaci´ on del adhesivo de fibrina podr´ıa estar constituida por un adhesivo monocomponente, que contuviese en un compartimento todos los componentes necesarios para la formaci´ on de la fibrina. Sin embargo, el desarrollo de un adhesivo monocomponente en soluci´ on acuosa es muy dif´ıcil de realizar en la pr´ actica. No obstante, una posibilidad reside en mezclar los componentes del adhesivo de fibrina en estado seco, con lo cual, tras la aplicaci´on sobre la herida, se disolver´ıan en el fluido sangu´ıneo o en el exudado de la herida, y formar´ıan in situ una matriz de fibrina que dar´ıa lugar a la hemostasia. Es necesario para ello llevar el fibrin´ ogeno, que es dif´ıcilmente soluble por naturaleza, a una forma seca tal que se disuelva r´ apidamente y reaccione as´ı inmediatamente con la trombina. Los documentos WO 97/28832 y US-A- 4 453 939 describen polvos finos para detener hemorragias, que contienen trombina, factor XIII, fibrin´ ogeno y CaCl2 . En el documento US-A- 4 427 651 se describen mezclas para lograr la hemostasia, a base de trombina y fibrin´ ogeno, con un tama˜ no de part´ıcula de 0,1 a 5 µm.

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Ya se han realizado ensayos para desarrollar, por medio de un procedimiento de liofilizaci´on especial, part´ıculas que contengan fibrin´ ogeno o trombina, y que, tras ser mezcladas entre s´ı, se activen sobre la herida. As´ı, en la solicitud de patente internacional WO 97/44015 se describe la preparaci´ on de las denominadas micropart´ıculas a base de fibrin´ ogeno o a base de trombina, que en cada caso son secadas 2

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por pulverizaci´ on de manera individual. Estas micropart´ıculas est´an constituidas, en m´ as de 90 %, por gr´ anulos con un tama˜ no de hasta 20 µm. Deben ser f´acilmente solubles, y se pueden emplear mezcladas entre s´ı para cicatrizar heridas. No obstante, constituye un inconveniente de estas micropart´ıculas el hecho de que se trate de un polvo extremadamente ligero, por lo cual no es posible una aplicaci´on directa, como el espolvoreo sobre una herida. Un polvo semejante requiere por tanto un sistema de aplicaci´ on especial, lo que limita dr´ asticamente su manipulaci´on y sus indicaciones cl´ınicas. Exist´ıa, pues, la misi´ on de desarrollar un granulado de adhesivo de fibrina, que fuese muy soluble, capaz de deslizarse sin dificultad, y que no formase polvo, y que por ello pudiera ser espolvoreado directamente sobre la herida, por ejemplo seg´ un el principio del salero. Esta misi´on ha sido cumplida, de acuerdo con la invenci´ on, por medio de un granulado de adhesivo de fibrina que es capaz de deslizarse sin dificultad, y que contiene trombina, factor XIII, fibrin´ ogeno y una sal de calcio en part´ıculas granuladas con un tama˜ no de part´ıcula de m´ as de 50 µm hasta aproximadamente 1000 µm, preferentemente con un tama˜ no de part´ıcula de 100 a 200 µm. Gracias a este tama˜ no de part´ıcula, el granulado de adhesivo de fibrina de acuerdo con la invenci´ on no forma polvo, es muy soluble y capaz de deslizarse sin dificultad, y puede ser aplicado de manera muy satisfactoria sobre la superficie de una herida o sobre un tejido h´ umedo, donde forma inmediatamente una matriz de fibrina. A un granulado de adhesivo de fibrina de este tipo se le pueden a˜ nadir adem´ as alb´ umina, fibronectina, amino´acidos y sales inorg´ anicas fisiol´ ogicamente tolerables. Se puede utilizar tambi´en como sistema de liberaci´on para factores biol´ ogicos, vegetales y/o sint´eticos. Estos factores pueden fomentar la cicatrizaci´ on o bien actuar como antifibrinol´ıticos, antibi´ oticos, agentes quimioterap´euticos, o bien inmunomoduladores. Se a˜ naden al granulado de adhesivo de fibrina durante el proceso de secado por pulverizaci´ on.

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A partir de la solicitud internacional de patente WO 96/15849 es ya conocido un principio de procedimiento adecuado para preparar el granulado de adhesivo de fibrina de acuerdo con la invenci´ on. En el citado documento se describe un procedimiento para secar plasma sangu´ıneo, fracciones de plasma sangu´ıneo o productos de plasma sangu´ıneo obtenidos a partir de los mismos, en el cual se pulveriza el material a tratar, en estado l´ıquido o disuelto, en un recipiente donde se puede hacer el vac´ıo, con lo cual el secado - hasta la forma de granulado - es realizado por medio de un gas fluidizante, en un lecho fluidizado. Sin embargo, este procedimiento no puede ser aplicado sin m´ as a fibrin´ ogeno y trombina, ya que estas sustancias, como es sabido, reaccionan al contacto con soluciones acuosas para formar fibrina. Por tanto, no se puede considerar el empleo de soluciones acuosas para el secado por pulverizaci´ on de estos componentes. Para, a pesar de ello, obtener ambos componentes en una sola part´ıcula, se suspenden los mencionados componentes, de acuerdo con la invenci´ on, en un u ´nico disolvente org´anico, y secan por pulverizaci´ on a partir de ello. El fibrin´ ogeno, la trombina y el factor XIII se pueden suspender de manera m´ as o menos homog´enea en disolventes org´anicos tales como los alcoholes inferiores, preferentemente isopropanol o etanol, acetona, nitrilos, ´esteres l´ıquidos de a´cidos carbox´ılicos, ´eteres, cloroformo, dimetilformamida y dimetilsulf´oxido, tambi´en en presencia de CaCl2 , sin que evidencien reacci´on para dar fibrina. Tras eliminar el disolvente org´anico son capaces de formar nuevamente fibrina en fase acuosa. De acuerdo con la invenci´ on, el secado por pulverizaci´ on se efect´ ua, o bien mediante el procedimiento de rociado por la parte superior, en el cual el l´ıquido es hecho circular en contracorriente respecto al gas fluidizante, o bien concurrentemente (procedimiento de rociado por la parte inferior). Inyectando a trav´es de una boquilla pulverizadora adecuada el material l´ıquido a tratar en el recipiente donde se puede hacer vac´ıo, se consigue una fina distribuci´ on. El gas fludizante sirve en este caso tanto para la fluidizaci´on del material a tratar como tambi´en para el aporte de calor. Por ello se utiliza como gas fluidizante un gas calentado. Midiendo la temperatura del producto durante el proceso en el lecho fluidizado, y mediante una regulaci´ on del proceso basada en la misma, se puede lograr un secado que no perjudique al producto. Como gas fluidizante se puede emplear aire o bien un gas inerte tal como nitr´ogeno. Se contin´ ua el secado durante el tiempo necesario para que el material a tratar quede un forma de granulado finamente dividido y presente un tama˜ no de part´ıcula de 50 µm hasta aproximadamente 1000 µm, con preferencia 100 a 200 µm.

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El granulado de adhesivo de fibrina de acuerdo con la invenci´ on puede ser preparado con o sin material excipiente previamente dispuesto en el recipiente donde se puede hacer vac´ıo. Como material excipiente entran aqu´ı en consideraci´ on, sobre todo, az´ ucares y az´ ucar-alcoholes tales como sacarosa, lactosa o manita, que son bien tolerados biol´ ogicamente. No obstante, tambi´en se pueden emplear como material excipiente prote´ınas tales como seroalb´ umina. Es especialmente preferido emplear como material excipiente los mismos componentes del adhesivo de fibrina, es decir, fibrin´ ogeno, factor XIII, trombina, CaCl2, o sus mezclas, en estado de polvo, sobre los cuales se pulveriza la soluci´on acuosa o suspensi´on 3

ES 2 183 606 T3 en disolvente org´ anico de los componentes del adhesivo de fibrina, para formar el granulado. Entonces no es en absoluto necesario a˜ nadir ning´ un material excipiente adicional tal como un az´ ucar, manita o alb´ umina. 5

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Un procedimiento especialmente preferido consiste en un secado por pulverizaci´on en dos pasos, en el cual se prepara primeramente un granulado de fibrin´ ogeno. Este granulado puede contener tambi´en, adem´ as de fibrin´ ogeno, otras prote´ınas, hidratos de carbono, amino´ acidos y sales inorg´ anicas fisiol´ ogicamente tolerables, e incluso adem´ as una sal de calcio. El tama˜ no de part´ıcula de este granulado asciende a m´as de 50 µm hasta aproximadamente 1000 µm, pero se prefiere un tama˜ no de part´ıcula de 100 a 200 µm. Sobre este granulado de fibrin´ ogeno se roc´ıa una fina suspensi´ on de trombina en un disolvente org´ anico, que puede contener iones calcio disueltos, si ´estos no hab´ıan sido a˜ nadidos ya al granulado de fibrin´ ogeno. La concentraci´on de iones calcio asciende a 1 hasta 100 mM, preferentemente 10 a 50 mM. Se obtiene de esta manera un granulado de adhesivo de fibrina con un tama˜ no de part´ıcula que se sit´ ua preferentemente entre 100 y 200 µm, y tiene una estructura granular, muy f´ acilmente soluble. No se originan part´ıculas compactas tales como bolitas, sino un granulado con muchos canales finos. As´ı se consigue un tama˜ no de part´ıcula relativamente grande, con lo cual el producto no produce polvo, y es f´acilmente soluble, similar al conocido caf´e instant´ aneo. Este granulado puede ser espolvoreado de manera muy satisfactoria sobre la superficie de una herida, y al contacto con un medio acuoso forma inmediatamente un gel de fibrina resistente y el´astico.

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No obstante, el granulado de adhesivo de fibrina de acuerdo con la invenci´ on se puede obtener tambi´en mediante secado por pulverizaci´ on de concentrado de fibrin´ ogeno, a partir de una soluci´ on acuosa, y sobre un material previo, por ejemplo manita. 25

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En este caso se obtiene primeramente un granulado de fibrin´ogeno y manita, sobre el cual se roc´ıan a continuaci´on trombina y sal de calcio, por ejemplo a partir de una suspensi´ on en isopropanol. El disolvente org´anico impide la formaci´ on de fibrina que se producir´ıa al contacto del fibrin´ ogeno y la trombina. Por u ´ ltimo, es posible tambi´en preparar por separado granulados de fibrin´ ogeno y granulados de trombina con el tama˜ no de part´ıcula antes indicado, en procedimientos independientes, pudiendo ser secadas por pulverizaci´ on ambas sustancias a partir de soluciones acuosas. Con todo, en la preparaci´ on del granulado de trombina se precisa una cantidad suficiente de material de soporte, ya que en el adhesivo de ogeno. Se fibrina la cantidad de trombina en peso es menor, en un factor de 102 a 103 , que la de fibrin´ mezclan entre s´ı estos dos granulados, y se pueden emplear despu´es de manera an´ aloga para la hemostasia y la cicatrizaci´on de heridas. Los granulados de adhesivo de fibrina preparados seg´ un los procedimientos antes mencionados fueron investigados despu´es en cuanto a sus propiedades biomec´anicas, y se consiguieron los siguientes resultados:

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Fuerza de arrancamiento tras adhesi´ on a la piel in vitro (superficie de adhesi´ on: 2,25 cm2 ) Resultado de un estudio comparativo, por medio de una lista de aleatorizaci´ on, acerca de la fuerza necesaria para arrancar el granulado unitario (trombina, fibrin´ ogeno y factor XIII en una part´ıcula), la mezcla de granulados (granulado de fibrin´ ogeno + granulado de trombina) y el adhesivo de fibrina l´ıquido R ): (Beriplast Sustancia ensayada

Fuerza de arrancamiento

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Granulado unitario (granulado mixto)

3,3 N

Mezcla de granulados

1,8 N

R Beriplast

1,5 N

Los valores medidos muestran con claridad las ventajas del granulado unitario (granulado mixto) frente a la mezcla de granulados, en lo que se refiere a las propiedades biomec´anicas. La cantidad de componentes activos era aproximadamente id´entica en las tres sustancias ensayadas.

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ES 2 183 606 T3 Adem´as, el granulado de adhesivo de fibrina de acuerdo con la invenci´ on puede ser conservado tanto a temperatura ambiente como tambi´en a temperaturas de 2-8◦C durante al menos 6-8 meses, sin que los componentes individuales pierdan sensiblemente en actividad. 5

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El granulado de adhesivo de fibrina capaz de deslizarse sin dificultad, de acuerdo con la invenci´ on, se distingue de los adhesivos de fibrina conocidos hasta la fecha por una manipulaci´ on m´ as simple, ya que no son necesarias medidas preparatorias, y se encuentra siempre en estado listo para el uso. Por tanto, es especialmente adecuado para la cirug´ıa de emergencia. Posee adem´as la ventaja de una aplicaci´ on extremadamente sencilla, siendo esparcido sobre la superficie de la herida del mismo modo que se utiliza un salero. Resulta sumamente apropiado para aplicaciones quir´ urgicas en las cuales se deba conseguir una r´ apida hemostasia mediante la absorci´ on de la sangre y al mismo tiempo una adhesi´ on mediante fibrina. Aunque con los granulados antes mencionados se facilita considerablemente el empleo del adhesivo de fibrina y pueden disminuirse laboriosos preparativos operatorios, con empleo de personal especializado y los dispositivos correspondientes, existe por otro lado la necesidad de preparaciones sencillas de fibrina, que se puedan llevar en el malet´ın de urgencias de cada m´edico y sean inmediatamente aptas para el uso en el lugar del accidente sin prolongados preparativos. Se ha podido hallar ahora una soluci´ on a este problema mediante el desarrollo de un granulado efervescente o de un polvo efervescente, con el fin de producir una espuma adecuada para detener la hemorragia, que adem´as de la mezcla de granulados o del granulado mixto, de acuerdo con la invenci´ on, que contienen fibrin´ ogeno, factor XIII, trombina y una sal de calcio soluble, contiene tambi´en las sustancias necesarias para producir CO2 .

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El granulado efervescente o el polvo efervescente de acuerdo con la invenci´ on poseen, junto a muchas otras caracter´ısticas beneficiosas, la ventaja de que la formaci´on de espuma esponja y ahueca la masa de granulado, y facilita la entrada de l´ıquido en el interior de las part´ıculas de granulado. Se forma as´ı de manera muy r´ apida una espuma de fibrina estable, que cubre la herida sangrante, y que ocasiona una r´ apida detenci´ on de la hemorragia. De este modo la formaci´ on de la espuma puede tener lugar directamente sobre la herida, ofreciendo las secreciones de la misma herida la humedad necesaria para la formaci´ on de espuma. No obstante, tambi´en se puede formar la espuma, por ejemplo, sobre una c´ apsula o sobre un platillo, a˜ nadiendo humedad, y disponer despu´es la espuma ya formada y lista, sobre la herida sangrante. Gracias a su gran flexibilidad, la espuma as´ı formada puede ser empleada no s´ olo para cubrir externamente las heridas, sino tambi´en en el caso de hemorragias de heridas quir´ urgicas, introduciendo la espuma para taponar la herida quir´ urgica y extendi´endola despu´es sobre el tejido sangrante, con lo cual se origina una r´ apida detenci´ on de la hemorragia. Se puede mejorar a´ un m´ as el valor terap´eutico del granulado efervescente o del polvo efervescente de acuerdo con la invenci´on, a˜ nadiendo a los mismos sustancias activas biol´ ogicas, vegetales o sint´eticas que favorezcan la curaci´ on de la herida, tales como inmunoglobulinas, agentes quimioterap´euticos o antibi´ oticos. Durante la preparaci´ on del granulado o del polvo efervescente, se roc´ıan estas sustancias sobre el granulado de adhesivo de fibrina seco, que es capaz de deslizarse sin dificultad, o bien se mezclan con el mismo. Tambi´en se puede preparar con ello un comprimido efervescente, que contenga en una forma exactamente dosificada y f´acilmente manipulable todo lo necesario para obtener una espuma adecuada para lograr detener una hemorragia. Por regla general es suficiente aplicar el granulado efervescente o el polvo efervescente en una cantidad que, dependiendo del tama˜ no de la herida sangrante, contenga fibrin´ ogeno en una cantidad de 0,1 a 2,5 g y trombina en una cantidad inferior a 10 unidades internacionales (U.I.). Si se emplea un comprimido efervescente, se pueden tallar en ´este ranuras de fragmentaci´on que, para detener la hemorragia de heridas m´as peque˜ nas, permitan romper una parte del comprimido si la cantidad de espuma producida con el fragmento de comprimido ya es suficiente para detener la hemorragia.

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Con las mezclas de granulados o los granulados mixtos de acuerdo con la invenci´ on, se pueden confeccionar adem´ as preparaciones gal´enicas que se pueden utilizar muy satisfactoriamente para la hemostasia, que son aplicables de una manera muy sencilla, y que se encuentran disponibles de manera inmediata, en caso necesario, en el lugar del accidente, sin requerir laboriosos preparativos.

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Este objetivo se consigue mediante un ap´ osito no tejido, biodegradable, que detiene la hemorragia incluso en el caso de lesiones cut´aneas extensas. En este caso se aplica un granulado de adhesivo de fibrina sobre el material de soporte compuesto por un pol´ımero biodegradable, bien sea directamente o 5

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bien junto con una sustancia auxiliar biocompatible, en la cual se ha incluido el adhesivo de fibrina. Como material de soporte adecuado para esto son apropiados, sobre todo, col´ageno, queratina, gelatina, hidratos de carbono o derivados de celulosa, naturales o modificados qu´ımicamente. El material de soporte puede estar constituido por un pol´ımero sint´etico, biodegradable. Son apropiados, entre otros, poli(´ acidos hidroxicarbox´ılicos), poli´esteres, policianoacrilatos, poliamino´acidos, polialcoholes y siliconas. Sobre este material de soporte se aplica preferentemente un preparado que contiene fibrin´ ogeno en una cantidad de 0,05 a 50 mg/cm2 , preferentemente 1 a 20 mg/cm2 , as´ı como trombina en una cantidad de 1 µg a 10 nadir al preparado de mg/cm2, preferentemente 0,05 a 2 mg/cm2 . Para mejorar la adherencia se pueden a˜ adhesivo de fibrina, en calidad de sustancias auxiliares, polietilenglicol (PEG) con un tama˜ no molecular adecuado, o una mezcla de varios polietilenglicoles con distintos tama˜ nos moleculares. Se puede conseguir una mejora adicional de la hemostasia si se aplica el ap´ osito no tejido, antes descrito, sobre una venda o un parche. En este caso la venda debe estar revestida con un ap´ osito no tejido, de acuerdo con la invenci´on, en el lugar previsto para ser aplicado sobre la herida sangrante. Para fabricar las vendas de acuerdo con la invenci´on se emplean preferentemente polietilenglicol 4000 o polietilenglicol 6000, o mezclas de los mismos. En este caso, para preparar la masa de revestimiento se disuelve el polietilenglicol en un disolvente org´anico, preferentemente isopropanol, que se emplea en una concentraci´on de 0,5 a 70 %, preferentemente en una concentraci´ on de 5 a 30 % (peso/volumen). Se extiende el granulado de adhesivo de fibrina sobre la venda, y despu´es se humedece con la soluci´on de isopropanol y polietilenglicol 6000. Despu´es de eliminar por evaporaci´on el disolvente org´anico, se obtiene un ap´ osito no tejido, biodegradable, que posee un revestimiento de adhesivo de fibrina con buena adherencia. El disolvente org´anico es adem´as sumamente apropiado para el revestimiento, ya que es f´acilmente eliminable por evaporaci´ on, impide la reacci´on de formaci´ on de fibrina, y garantiza la conservaci´ on de la actividad de los componentes individuales. Adem´as, tras el tratamiento en un disolvente org´ anico, preferentemente isopropanol, se conserva la forma del granulado. Por regla general, el ap´ osito no tejido de acuerdo con la invenci´on est´a provisto s´ olo por una cara con el preparado hemost´ atico, en forma de pomada o en forma de gel, que se ha descrito. No obstante, existen tambi´en casos de aplicaci´on en los cuales es preferible revestir por las dos caras el ap´ osito no tejido. Si se rodea la herida con una venda de este tipo, el efecto hemost´ atico del adhesivo de fibrina se desarrolla de inmediato sobre la herida, tan pronto como bajo la acci´ on de la secreci´on de la herida se forma la fibrina a partir de los componentes contenidos en el vendaje cubriente. A´ un se puede facilitar en muchos casos la aplicaci´on si se aplica el ap´osito no tejido, de acuerdo con la invenci´ on, sobre un material plano, impermeable al agua o permeable al agua, adecuado para la fabricaci´ on de parches, dejando en los m´argenes del parche superficies adhesivas que est´en revestidas con un adhesivo con buena tolerancia fisiol´ ogica. Con un parche semejante se puede cubrir de manera r´ apida, sencilla y duradera la herida sangrante, y provocar una hemostasia inmediata. Tambi´en se puede conseguir detener una hemorragia de manera sencilla mediante un preparado en forma de pomada o en forma de gel que est´e compuesto a base de una base para pomadas hidr´ ofila y anhidra, en la cual se encuentren incluidas part´ıculas de adhesivo de fibrina. Son adecuadas como bases hidr´ ofilas y anhidras para pomadas, en especial, polioles, por ejemplo polietilenglicoles, polipropilenglicoles, o copol´ımeros de etileno y propileno, en el seno de los cuales est´an distribuidas de manera homog´enea las part´ıculas de adhesivo de fibrina, y que absorben la humedad contenida en las secreciones de la herida. Con la entrada de humedad se forma inmediatamente, a partir de los componentes del adhesivo de fibrina, un entramado de fibrina que cubre r´ apida y eficazmente la herida, y hace que se detenga la hemorragia. Resulta evidente que para este uso no son adecuadas bases para pomadas que contengan grasas y sean hidrorrepelentes.

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El adhesivo de fibrina contenido en los preparados de acuerdo con la invenci´on contiene una mezcla seca de fibrin´ ogeno, factor XIII, trombina, y una sal de calcio soluble. Tambi´en se puede envasar convenientemente el preparado en un tubo para pomadas, y as´ı se puede conservar durante largo tiempo y puede ser empleado inmediatamente en dicha forma.

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Naturalmente, la eficacia de los preparados adecuados para la hemostasia, que se han descrito en lo que antecede, s´olo est´ a garantizada si antes de su aplicaci´ on se ha evitado la entrada de l´ıquidos acuosos y con ello la formaci´ on prematura de fibrina. Se ha de prestar atenci´ on a ello ya en la confecci´on de los preparados. En ´esta, se amasan de manera en s´ı conocida las mezclas de granulados o granulados mixtos de acuerdo con la invenci´on, con las bases para pomadas hidr´ ofilas, pero anhidras. El preparado en forma de pomada o en forma de gel as´ı resultante puede ser extendido despu´es sobre el material de soporte biodegradable, para fabricar un ap´ osito no tejido, o bien ser utilizado directamente.

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ES 2 183 606 T3 Se puede conseguir una mejora adicional de los preparados de acuerdo con la invenci´ on si, adem´as del adhesivo de fibrina, se a˜ naden otras sustancias activas biol´ogicas, vegetales o sint´eticas que favorezcan la curaci´ on de la herida, tales como inmunoglobulinas, agentes quimioterap´euticos o antibi´ oticos. 5

El ap´ osito no tejido, la venda o el parche de acuerdo con la invenci´on, o bien el preparado en forma de pomada o en forma de gel, tambi´en de acuerdo con la invenci´ on, pueden ser empleados eficazmente, de manera muy simple, para conseguir la hemostasia de heridas internas o externas. Los siguientes Ejemplos ilustran la invenci´on.

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Ejemplo 1 Preparaci´ on de granulado de fibrin´ ogeno sin material soporte previamente dispuesto 15

Se sec´o por pulverizaci´ on una soluci´ on, con un contenido de 10 % de prote´ına, de concentrado de R (que conten´ıa tambi´en factor XIII), en lecho fluidizado y por medio del procedifibrin´ ogeno Beriplast miento de rociado por la parte superior. Este procedimiento se llev´o a cabo en una instalaci´ on GPCG 1 de la raz´on social Glatt GmbH, y se encuentra reivindicado y descrito con detalle en la solicitud internacional de patente WO 96/15849. Las condiciones eran:

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Temperatura de entrada

37◦ C

Temperatura de salida

30◦ C

Presi´on de pulverizaci´ on

3,0 bar

Ritmo de pulverizaci´ on

3,2 g/minuto

El granulado de fibrin´ ogeno preparado de esta manera ten´ıa un tama˜ no medio de part´ıcula de 100 µm, y era muy soluble. Las determinaciones anal´ıticas de la actividad demostraron que la actividad del fibrin´ ogeno y del factor XIII no se hab´ıan visto afectadas por el proceso de secado por pulverizaci´on en estas condiciones. Ejemplo 2

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Preparaci´ on de granulados de fibrin´ ogeno con material soporte previamente dispuesto

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Se dispusieron previamente en la c´ amara de secado por pulverizaci´ on 200 g de manita o de alb´ umina. Sobre este material previo se rociaron 100 g de concentrado de fibrin´ ogeno, en lecho fluidizado, y en las siguientes condiciones:

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Temperatura de entrada

30◦ C

Temperatura de salida

24◦ C

Presi´on de pulverizaci´ on

2,5 bar

Ritmo de pulverizaci´ on

3,0-8,0 g/minuto

Result´ o un granulado capaz de deslizarse sin dificultad, y muy soluble, con un tama˜ no de part´ıcula de 100 µm, en el cual se hallaban de nuevo por completo las actividades del fibrin´ ogeno y del factor XIII. Ejemplo 3

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Preparaci´ on de granulado de adhesivo de fibrina Sobre el granulado de fibrin´ ogeno preparado en el Ejemplo 1 o en el Ejemplo 2 se roci´ o una suspensi´on o en las siguientes condiciones: isopropan´ olica de trombina y CaCl2 . El proceso se desarroll´

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ES 2 183 606 T3

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Temperatura de entrada

30◦ C

Temperatura de salida

25◦ C

Presi´on de pulverizaci´ on

2,5 bar

Ritmo de pulverizaci´ on

3,0-8,0 g/minuto

El granulado de adhesivo de fibrina preparado de este modo, con un tama˜ no de part´ıcula de 100 µm, era capaz de deslizarse sin dificultad, no produc´ıa polvo, y al contacto con una soluci´ on acuosa formaba inmediatamente un co´ agulo de fibrina estable, es decir, reticulado covalentemente por el factor XIII. Ejemplo 4

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Preparaci´ on de granulado de trombina Sobre un material de manita o de seroalb´ umina humana previamente dispuesto, se roci´ o una soluci´ on de trombina al 0,3 %. Las condiciones fueron las siguientes:

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25

30

Temperatura de entrada

30◦ C

Temperatura de salida

23◦ C

Presi´on de pulverizaci´ on

2,5 bar

Ritmo de pulverizaci´ on

4,2 g/minuto

El tama˜ no medio de part´ıcula del granulado formado era aproximadamente 65 µm. Este granulado era capaz de deslizarse sin dificultad y no produc´ıa polvo. Se pod´ıa mezclar bien con el granulado de fibrin´ ogeno, y se pod´ıa utilizar asimismo como adhesivo de fibrina. Ejemplo 5

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Preparaci´ on de un granulado de adhesivo de fibrina a partir de una suspensi´ on isopropan´ olica que contiene todos los componentes del adhesivo de fibrina De manera an´aloga a los Ejemplos 1 y 2, en una c´amara de secado por pulverizaci´ on en la cual, o bien no se hab´ıa dispuesto previamente pr´ acticamente ning´ un material, o bien se hallaba un material de soporte tal como manita, alb´ umina, o bien uno o varios componentes del adhesivo de fibrina, en forma de polvo, se roci´o una suspensi´on isopropan´ olica que conten´ıa todos los componentes del adhesivo de fibrina, es decir, fibrin´ ogeno, factor XIII, trombina, CaCl2 o mezclas de los mismos, y a continuaci´on se sec´o por pulverizaci´ on en lecho fluidizado. El proceso se desarroll´ o en las siguientes condiciones:

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Temperatura de entrada

30◦ C

Temperatura de salida

25◦ C

Presi´on de pulverizaci´ on

2,5 bar

Ritmo de pulverizaci´ on

3,0 a 8,0 g/minuto

El granulado de adhesivo de fibrina preparado de este modo, con un tama˜ no de part´ıcula de aproximadamente 100 µm, era capaz de deslizarse sin dificultad, no produc´ıa polvo, y al contacto con una soluci´on acuosa formaba inmediatamente un co´ agulo de fibrina estable reticulado. Ejemplo 6 Preparaci´ on de una venda biodegradable revestida con adhesivo de fibrina

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R Tipo 6 (Ethicon GmbH), de 50 x 50 mm2 , se aplicaron 250 mg de adhesivo Sobre un parche Ethisorb de fibrina en polvo o granulado, y se distribuyeron homog´eneamente (= 10 mg de polvo o granulado de adhesivo de fibrina por cm2 ). Despu´es se rociaron uniformemente sobre el revestimiento un total de 2,5

8

ES 2 183 606 T3 ml de una soluci´ on al 20 % de PEG 6000 en isopropanol. Tras eliminar por evaporaci´ on el isopropanol se obtuvo una venda biodegradable, compuesta por un material de soporte y un revestimiento de adhesivo de fibrina con buena adherencia, que no se agrietaba ni se desprend´ıa al doblar la venda. 5

Ejemplo 7 Preparaci´ on de una venda biodegradable revestida con adhesivo de fibrina

10

15

Sobre un fieltro de Vicryl (Ethicon GmbH), con un tama˜ no de 20 x 30 mm2 , se aplicaron 60 mg de adhesivo de fibrina en polvo o granulado, y se distribuyeron homog´eneamente (= 10 mg de polvo por on al cm2 ). Despu´es se rociaron uniformemente sobre el revestimiento un total de 0,6 ml de una soluci´ 20 % de PEG 6000 en isopropanol. Tras eliminar por evaporaci´on el isopropanol se obtuvo una venda flexible y biodegradable, provista de un revestimiento de adhesivo de fibrina con buena adherencia. Ejemplo 8 Fieltro de col´ ageno revestido con adhesivo de fibrina

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Se a˜ nadieron de manera homog´enea 250 mg de adhesivo de fibrina en polvo o granulado, al fieltro de col´ageno Interceed (Johnson & Johnson), con un tama˜ no de 50 x 50 mm2 . Despu´es se roci´o sobre el revestimiento un total de 0,6 ml de una soluci´ on de PEG 6000 al 10 % en isopropanol. Despu´es de evaporar por evaporaci´ on el isopropanol se obtuvo un fieltro de col´ ageno combinado con adhesivo de fibrina.

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ES 2 183 606 T3 REIVINDICACIONES

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1. Granulado de adhesivo de fibrina capaz de deslizarse sin dificultad, caracterizado porque presenta part´ıculas de granulado con un tama˜ no de part´ıcula de m´as de 50 µm hasta aproximadamente 1000 µm, que contienen trombina, factor XIII, fibrin´ ogeno y una sal de calcio. 2. Granulado de adhesivo de fibrina seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizado porque las part´ıculas de granulado tienen un tama˜ no de part´ıcula de 100 a 200 µm.

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3. Granulado de adhesivo de fibrina seg´ un las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque contiene adicionalmente alb´ umina, fibronectina y/u otras sustancias que favorecen la curaci´ on de las heridas. 4. Granulado efervescente o polvo efervescente para producir una espuma adecuada para detener una hemorragia, caracterizados porque contienen, adem´ as del granulado de adhesivo de fibrina capaz de deslizarse sin dificultad de las reivindicaciones 1 a 3, tambi´en sustancias necesarias para producir CO2 . 5. Granulado efervescente o polvo efervescente seg´ un la reivindicaci´ on 4, caracterizado porque para anico fisiol´ ogicamente tolerable. producir CO2 contiene una mezcla de un carbonato y un a´cido org´

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6. Preparado para detener hemorragias, caracterizado porque contiene un ap´ osito no tejido, constituido por un material de soporte biodegradable, que est´ a revestido con un granulado de adhesivo de fibrina capaz de deslizarse sin dificultad seg´ un las reivindicaciones 1 a 3. 7. Preparado seg´ un la reivindicaci´ on 6, caracterizado porque el ap´ osito no tejido est´ a revestido con una base para pomadas hidr´ ofila y anhidra, en la cual est´ a incluido el adhesivo de fibrina de las reivindicaciones 1 a 3. 8. Ap´ osito no tejido seg´ un las reivindicaciones 6 y 7, caracterizado porque el material de soporte biodegradable est´ a compuesto por col´ageno, queratina, gelatina, hidratos de carbono o derivados de celulosa, naturales o modificados qu´ımicamente. 9. Ap´ osito no tejido seg´ un las reivindicaciones 6 y 7, caracterizado porque el material de soporte biodegradable est´ a compuesto por un pol´ımero del grupo de los poli(´ acidos hidroxicarbox´ılicos), los poli´esteres, los policianoacrilatos, los poliamino´ acidos, los polialcoholes o las siliconas.

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10. Ap´ osito no tejido seg´ un las reivindicaciones 6 a 9, caracterizado porque contiene fibrin´ ogeno en una cantidad de 0,05 a 50 mg/cm2 , y trombina en una cantidad de 1 µg a 20 mg/cm2. 11. Ap´ osito no tejido seg´ un las reivindicaciones 6 a 10, caracterizado porque el preparado que contiene adhesivo de fibrina ha sido aplicado por un solo lado o por ambos lados sobre el material de soporte. 12. Venda caracterizada porque est´ a revestida, sobre el lado previsto para ser aplicado sobre la herida sangrante, con un ap´ osito no tejido de las reivindicaciones 6 a 11.

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13. Parche caracterizado porque est´ a compuesto por un material plano impermeable al agua o permeable al agua, que est´ a revestido, en el lugar previsto para ser aplicado sobre la herida sangrante, con un ap´ osito no tejido de las reivindicaciones 6 a 11, y tiene en los m´ argenes superficies adhesivas. 14. Preparado para detener hemorragias, caracterizado porque est´ a compuesto por una base para pomadas hidr´ ofila y anhidra, en la cual est´ an incluidas las part´ıculas de un adhesivo de fibrina seg´ un las reivindicaciones 1 a 3. 15. Procedimiento para preparar el granulado de adhesivo de fibrina de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque se suspenden todos los componentes del adhesivo de fibrina en un disolvente org´ anico y se secan por pulverizaci´on en un recipiente en donde se puede hacer vac´ıo, por medio de un gas fluidizante y en un lecho fluidizado, hasta un tama˜ no de part´ıcula de m´as de 50 µm hasta 1000 µm, preferentemente 100 a 200 µm. 16. Procedimiento seg´ un la reivindicaci´ on 15, caracterizado porque se prepara con o sin un material de soporte dispuesto previamente en el recipiente. 17. Procedimiento para preparar un adhesivo de fibrina seg´ un las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque primeramente se prepara un granulado de fibrin´ ogeno, sobre el cual se roc´ıa una suspensi´on 10

ES 2 183 606 T3 de un disolvente org´anico que contiene trombina, a˜ nadi´endose, o bien al granulado de fibrin´ ogeno, o bien a la soluci´on de trombina, una sal de calcio.

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18. Procedimiento para preparar un granulado de adhesivo de fibrina seg´ un las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque se mezclan entre s´ı las part´ıculas de granulado de fibrin´ ogeno y de granulado de trombina, preparadas por separado, que tienen en cada caso un tama˜ no de part´ıcula de m´as de 50 µm hasta aproximadamente 1000 µm.

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19. Procedimiento para preparar un preparado seg´ un las reivindicaciones 6 a 14, caracterizado porque se aplica como revestimiento sobre un material de soporte biodegradable el adhesivo de fibrina que se presenta como mezcla de granulados o como granulado mixto.

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20. Procedimiento para preparar el preparado seg´ un la reivindicaci´ on 14, caracterizado porque se amasa con la base para pomadas hidr´ ofila y anhidra, un adhesivo de fibrina que se presenta como mezcla de granulados o como granulado mixto.

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21. Procedimiento para preparar un preparado seg´ un las reivindicaciones 6 a 14, caracterizado porque se a˜ naden al granulado de adhesivo de fibrina otras sustancias activas biol´ ogicas, vegetales o sint´eticas que favorecen la curaci´ on de heridas, tales como inmunoglobulinas, agentes quimioterap´euticos o antibi´ oticos. 22. Granulado de adhesivo de fibrina seg´ un las reivindicaciones 1 a 5 o un preparado las reivindicaciones 6 a 14, caracterizado porque se emplea para la curaci´on de heridas en la cirug´ıa, en la histoterapia, y/o como material de soporte para factores biol´ ogicos.

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23. Ap´ osito no tejido, venda, parche o pomada, o preparado en forma de gel, seg´ un las reivindicaciones 6 a 14, para la hemostasia de heridas internas o externas.

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24. Empleo de un granulado efervescente o de un polvo efervescente seg´ un las reivindicaciones 4 y 5 para preparar mediante compresi´ on un comprimido efervescente.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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