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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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˜ ESPANA

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k ES 2 092 969 kN´umero de solicitud: 9502552 kInt. Cl. : A61K 35/42

11 N.◦ de publicaci´ on:

SOLICITUD DE PATENTE

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22 Fecha de presentaci´ on: 29.12.95

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71 Solicitante/s: Centro Nacional de Sanidad

Agropecuaria (CENSA) Ctra. de Tapaste y 8 v´ıas San Jos´ e de las Lajas, Habana, CU

30 Prioridad: 29.12.94 CU 15394

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72 Inventor/es:

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74 Agente: Gil Vega, V´ıctor

43 Fecha de publicaci´ on de la solicitud: 01.12.96

43 Fecha de publicaci´ on del folleto de la solicitud:

01.12.96

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Manzanares Tapia, Dahis Angeles; D´ıaz Casa˜ nas, Elaine; Alfonso Lorenzo, Wilma Caridad; Escobar Medina, Arturo Camilo; Colome Dagnesses, H´ ector; Mu˜ noz P´ erez, Mar´ıa Cristina; Rabell Hern´ andez, Sergio Antonio; Hidalgo S´ anchez, Angela Olga y Noa P´ erez, Mario

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k kResumen:

54 T´ıtulo: Surfactante pulmonar natural de origen porcino.

ES 2 092 969 A1

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Surfactante pulmonar natural de origen porcino. El objeto de la presente invenci´on es un surfactante natural de uso terap´eutico obtenido por extracci´on org´anica de lavados pulmonares de cerdo, as´ı como su procedimiento de obtenci´on. El surfactante en cuesti´on contiene del 90 por ciento al 97 por ciento de fosfol´ıpidos, del 0,5 al 1,3 por ciento de prote´ınas hidr´ ofobas, m´as del 40 por ciento de fosfatidil-colina disaturada y m´as del 7 por ciento de fosfatidil-inositol con respecto a fosfol´ıpidos. M´as del 75 por ciento de la composici´on de ´acidos grasos de la fosfatidil-colina corresponde a ´acido palm´ıtico. El contenido total de los fosfol´ıpidos ani´ onicos (fosfatidil-glicerol + fosfatidil-inositol) es mayor del 12 por ciento respecto a fosfol´ıpidos. Una de sus formas farmac´euticas es un liofilizado estable de 2 a 8 ◦ C que se reconstituye en el momento de su uso. La aplicaci´ on del surfactante por v´ıa endotraqueal es adecuada para el tratamiento del s´ındrome de dificultad respiratoria del neonato, as´ı como de pacientes con estr´es respiratorio del adulto. Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

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ES 2 092 969 A1 DESCRIPCION Surfactante pulmonar natural de origen porcino. 5

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El objeto de la invenci´ on es un surfactante pulmonar natural para el tratamiento del s´ındrome de dificultad respiratoria del neonato (SDRN) y efectivo a bajas dosis en el tratamiento del s´ındrome de dificultad respiratoria del adulto (SDRA), as´ı como el m´etodo para su obtenci´ on. El surfactante pulmonar natural est´ a constituido fundamentalmente por tosfol´ıpidos, interviniendo tambi´en otros l´ıpidos, prote´ınas y peque˜ nas cantidades de carbohidratos. Estas sustancias forman parte de diversas estructuras morfol´ ogicas integrantes en su conjunto de un sistema que permite el intercambio gaseoso mediante la disminuci´on de la tensi´on superficial de modo a´rea-dependiente, evitando el colapso alveolar. Su acci´ on en la disminuci´ on de la tensi´on superficial estabiliza el balance de fluido en el pulm´on, protegi´endolo del edema. Adem´ as desempe˜ na un papel importante en la defensa inmunol´ ogica. En la d´ecada pasada se prob´ o la utilidad de la terapia del SDRN con la aplicaci´ on de surfactante ex´ogeno y actualmente comienza a probarse su uso en el SDRA donde la mortalidad alcanza de 50 a 70% incluso en pa´ıses desarrollados como EE.UU. (Shale, Thorax 42; 642-645, 1987). Se han utilizado diferentes preparaciones de surfactante ex´ ogeno que pueden agruparse en tres tipos fundamentales: el sint´etico, el humano, y el conocido como surfactante natural heter´ ologo. Todos contienen la sustancia dipalmitoilfosfatidil-colina (DPPC), fundamental en su acci´ on. El surfactante natural heter´ ologo ha demostrado gran eficacia en el tratamiento del SDRN y consiste fundamentalmente en un extracto org´anico de surfactante pulmonar bovino o porcino, el cual puede modificarse o no posteriormente, por la adici´ on o supresi´on de algunos componentes. Se caracteriza por la presencia de prote´ınas hidr´ ofobas a las cuales se le atribuye importancia fundamental en la acci´ on del producto (Possmayer, Am. Rev. Respiratory Disease 142; 749-752, 1990). Estas prote´ınas se han estudiado en humano, bovino y porcino y se conocen como prote´ınas asociadas a surfactante SPB y SPC. Se han obtenido distintos tipos de surfactantes naturales variando la fuente y el m´etodo de obtenci´ on y por tanto algunos aspectos de su composici´on bioqu´ımica. Dentro de los surfactantes naturales se encuentra el TA (US 4338301, A 61K 35/12) el cual es obtenido por un complejo m´etodo de operaciones al final del cual se a˜ nade DPPC. Adem´ as se a˜ naden otros l´ıpidos neutros por lo que el contenido de a´cidos grasos (5,9%) y triglic´eridos (5,6%), es relativamente alto (Taeusch et al, Pediatrics 77; 572-581, 1986). Robertson y Curstedt (EP 286011, US 5024995) describen un surfactante natural (Curosurf) preferentemente de origen porcino caracterizado por la ausencia de l´ıpidos neutros y cuyo contenido prot´eico se debe exclusivamente a prote´ınas hidr´ ofobas en el rango de 3 a 14 KDa. La sustancia activa es almacenada on antes de su uso terap´eutico, siendo est´eril a -20◦ C y resuspendida en soluci´on salina mediante sonicaci´ este paso cr´ıtico en la preparaci´ on. Este surfactante, en concentraci´ on de 10 mg/ml disminuye la tensi´ on superficial m´ınima en el surfact´ ometro de burbuja puls´ atil a valores de 5 din/cm a los 5 min de pulsaci´on. Este surfactante ha sido efectivo en el SDRN en dosis de 200 mg/ kg. Aunque los surfactantes naturales desarrollados hasta el momento tienen en com´ un la presencia de prote´ınas hidr´ ofobas y de DPPC, las preparaciones var´ıan en cuanto a composici´on fosfolip´ıdica, tanto en las cantidades de fosfatidil-colina y DPPC como en otros componentes menores como fosfatidilglicerol y fosfatidil-inositol, por citar los fosfol´ıpidos ani´ onicos a los que se ha atribuido importancia en la acci´on farmacol´ogica. otra variaci´on est´a dada por la composici´ on de l´ıpidos neutros. Se le atribuye un efecto positivo a la adici´ on de a´cido palm´ıtico y triglic´eridos en la actividad de surfactante (Tanaka et al, Chem. Pharm. Bull. 31; 4100-4109, 1983), aunque ´este no ha sido corroborado in vivo (Tabor et al, Pediatric Res. 27; 268-273, 1990). Estos aspectos secundarios en las formulaciones utilizadas como surfactante no parecen conducir a mucha diferencia en el tratamiento del SDRN. No obstante, en el SDRA las pruebas realizadas muestran diferencias fundamentales en las dosis utilizadas: de 200 a 300 mg de Curosurf por kg de peso (Richman et al, Europ. Respiratory J. 2; Suppl. 3; 1095 -1115, 1990) y 240 mg de dosis total en varias aplicaciones en el caso del TA (Nosaka et al, Lancet 336; 947-948, 1990). Estas diferencias de dosis son cruciales en la posibilidad real de utilizaci´on de estos productos en el SDRA. Los m´etodos descritos para la obtenci´ on de surfactantes heter´ ologos parten del lavado pulmonar o de un triturado de pulmones. En el primer caso se utiliza una centrifugaci´ on inicial a baja gravedad 2

ES 2 092 969 A1 (aproximadamente 1000 rpm) para eliminar detritus celulares, como en CK (Kobayashi et al, Respiration Physology 80; 181-192, 1990), Les (Yu et al, Lipids 18; 522-529, 1983), CLSE (Shapiro et al, Pediatrics 76; 593-599, 1985). 5

Por otra parte, los m´etodos de obtenci´ on de surfactantes a partir de pulmones triturados, macerados o sometidos a otro tratamiento similar incluyen siempre alg´ un paso necesario para la calidad del producto, tal como: adici´ on de DPPC y otros l´ıpidos (TA y SURVANTA) o eliminaci´ on de componentes no fosfolip´ıdicos por medios cromatogr´aficos (CUROSURF).

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En la presente invenci´on se aprovechan las caracter´ısticas del extracto lip´ıdico del surfactante natural de origen porcino obtenido de una masa de cerdos relativamente homog´enea en cuanto a edad y peso.

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Encontramos que en esta especie pod´ıa obtenerse una composici´on bioqu´ımica compatible con los requisitos fundamentales de un surfactante pulmonar en cuanto a DPPC, fosfol´ıpidos ani´ onicos y prote´ınas hidr´ ofobas, con un contenido moderado de l´ıpidos neutros, fundamentalmente triglic´eridos mediante un procedimiento de obtenci´ on sencillo a partir de lavado pulmonar. En este caso se eliminan o se var´ıan las condiciones de la centrifugaci´ on inicial a bajas gravedades que caracterizan los m´etodos de obtenci´ on de otros surfactantes despu´es de haberse determinado que ese paso afectaba el rendimiento y no mejoraba la composici´on del producto. En el caso de la obtenci´ on a partir del lavado pulmonar no es necesaria la adici´on de componentes sint´eticos como en el caso del TA, ni la inclusi´ on de m´etodos cromatogr´aficos como el caso del CUROSURF. El surfactante obtenido conserva la presencia de l´ıpidos neutros procedentes del pulm´ on porcino, fundamentalmente acil-glic´eridos, que migran mayormente como triglic´eridos en cromatograf´ıa de placa fina.

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Una caracter´ıstica remarcable de este surfactante es su elevado nivel de fosfol´ıpidos ani´ onicos (fostidilglicerol + fosfatidil-inositol), superior al referido para los otros surfactantes de origen natural. Los fosfol´ıpidos ani´ onicos intervienen en la actividad del producto facilitando la acci´ on de las prote´ınas hidr´ ofobas y tambi´en est´an involucrados en la formaci´on de una estructura funcional muy importante in vivo: la mielina tubular.

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El surfactante obtenido, al menos iguala las caracter´ısticas tensioactivas del surfactante de origen porcino Curosurf in vitro, y su uso en muy bajas dosis (alrededor de 1,4 mg/kg de peso en aplicaciones repetidas), ha permitido obtener resultados preliminares en el SDRA, para el cual se han utilizado dosis muy superiores de Curosurf (200 mg/kg de peso en aplicaciones repetidas).

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El objeto de la invenci´on es un surfactante natural de uso terap´eutico y su m´etodo de obtenci´ on, basado en el extracto org´anico obtenido de lavados pulmonares de cerdo, que contiene de 91 a 97% de fosfol´ıpidos, de 0,5 a 1,3% de prote´ınas hidr´ ofobas, m´as de un 40% de fosfatidil-colina disaturada y m´ as del 7% de fosfatidil-inositol respecto a fosfol´ıpidos. M´ as del 75% de la composici´ on de a´cidos grasos de la fosfatidil-colina corresponde a a´cido palm´ıtico. El presente surfactante contiene m´ as del 2% de acilglic´eridos con predominio de triglic´eridos, aprovechando las posibles ventajas de esta composici´ on propia del surfactante porcino. El contenido total de los fosfol´ıpidos ani´ onicos, fosfatidil -glicerol y fosfatidilinositol es mayor de 12% respecto a fosfol´ıpidos. Una de sus formas farmac´euticas es un liofilizado estable al menos por un a˜ no de 2 a 8◦ C, que es reconstituido al momento de su uso y administrado por v´ıa endotraqueal. El surfactante reconstituido es capaz de disminuir la tensi´ on superficial a valores inferiores a 5 din/cm a los 5 min de pulsaci´ on a concentraciones de 5 mg/ml. Esta preparaci´on result´ o eficaz en el SDRN en dosis de 100 mg de fostol´ıpidos / kg de peso, y sorprendentemente result´ o beneficioso en el SDRA utilizando 100 mg de fosfol´ıpidos (aproximadamente 1,4 mg/kg de peso) en varias aplicaciones. Ejemplo 1

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Se obtienen pulmones del matadero de cerdos sacrificados al final del per´ıodo de ceba lo que asegura de forma estable un material homog´ eneo. Se realizan lavados con soluci´on fisiol´ ogica, desech´andose los que presenten coloraci´on rosada. Estos lavados son tamizados y centrifugados en centr´ıfuga de flujo continuo a menos de 8000 rpm y menos de 0,5 l/min y el residuo es extra´ıdo con cloroformo-metanol 2: 1. Se realiza una reextracci´on y luego se precipita con acetona. Se obtiene un rendimiento de m´ as de 200 mg/animal. El producto obtenido es filtrado con membranas Sartorius de 0,45 y 0,22 uM y a partir de ese mo3

ES 2 092 969 A1 mento manejado en condiciones as´epticas. Se realiza evaporaci´ on, resuspensi´ on en suero fisiol´ ogico y dispensaci´on en bulbos. El producto final puede presentarse en forma l´ıquida o liofilizado. En este u ´ltimo on. caso es estable por 1 a˜ no de 2 a 8◦C y se redisuelve al momento de aplicaci´on en agua para inyecci´ 5

La composici´on del producto se mantiene estable de lote a lote. La tabla I muestra la composici´ on de 9 lotes obtenidos de procesos independientes.

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Composici´ on de diferentes lotes de surfactante (96%) (Se indica el rango de valores valores y entre par´entesis el n´ umero de lotes, si ´este difiere de 9).

TABLA I

Fosfol´ıpidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ∗Acil-glic´eridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Colesterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ∗∗Prote´ınas hidr´ ofobas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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91 - 95 3,7 - 5,0 (4) 0,3 - 1,6 0,5 - 1,3

% de Fosfol´ıpidos 20

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Fosfatidil-colina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Fosfatidil-inositol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Fosfatidil-glicerol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Esfingomielina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Fosfatidil-etanol-amina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Fosfatidil-serina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Lisofosfatidil-colina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . No identificado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

65,0 - 71,4 11,4 - 13,3 5,4 - 7,7 3,6 - 5,1 3,7 - 4,8 1,1 - 1,8 0,6 - 1,5 0,5 - 2,2

% de ac. palm´ıtico/fosfatidil-colina . . . . . . . . . % de ac. grasos disaturados/ fosfatidil-colina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . % de fosfatidil-colina disaturada/ fosfol´ıpidos totales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

75,9 - 85,1 (3)

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81,4 - 94,4 (3) 44,3 - 46,8 (3)

∗ principalmente triglic´eridos en cromatograf´ıa de placa fina. 40

Identificaci´ on de las prote´ınas hidr´ ofobas.

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Las prote´ınas hidr´ ofobas fueron separadas de los fosfol´ıpidos por cromatograf´ıa en geles combinados LH-20 y LH -60, obteni´endose dos fracciones prot´eicas fundamentales, que fueron identificadas por secuenciaci´on aminoac´ıdica del extremo amino terminal como las prote´ınas SPB (Phe-Pro-lleu -Pro-LeyPro-Phe) y SPC (Leu-Arg-lleu-Pro). El peso molecular aparente obtenido por electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones no reductoras fue de 16 kDa para la fracci´ on identificada como SPB y 6 KDa para la identificada como SPC.

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Ejemplo 2 Evaluaci´ on en el surfact´ ometro de Enhorning o de burbuja puls´ atil.

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Las propiedades superficiales de dos lotes obtenidos seg´ un el ejemplo 1 fueron evaluadas en el Surfact´ ometro de Burbuja Puls´ atil (Enhorning, J. Appl. Physiology 43; 198-203, 1977) en presencia de cloruro de sodio al 0,9% y cloruro de calcio 1,5 mM. El menos activo de los dos lotes evaluados present´o un valor de tensi´ on superficial m´ınima de 3,20 ± 0,95 a los 2 min de pulsaci´on para una concentraci´ on andez-Regalado et al, Rev. de fosfol´ıpidos de 10 mg/ml y un 50% de compresi´ on del a´rea a 37◦ C (Fern´ Cubana Invest. Biomed. 12; 93-99, 1993). Posteriormente otros 5 lotes del producto fueron evaluados en condiciones similares pero sin la adici´ on de calcio, encontr´ andose valores de 1,93 ± 0,28 din/cm a los 5 min de pulsaci´on para una concentraci´ on de 5 mg/ml (Manzanares et al, Rev. Salud Anim., 16; 51-58, 1994). Curvas presi´ on-volumen en conejos 4

ES 2 092 969 A1 de 27 d´ıas de gestaci´on.

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Se utilizaron conejas de 27 d´ıas de gestaci´on, sacrificadas con una dosis de tiopental de 200 mg/kg de peso. Al cabo de 15 mn se extrajeron los conejos inmaduros (gazapos) por ces´ area, y fueron pesados, canulados y asignados a los grupos control y experimental. Se aplic´o el surfactante en dosis de 80 mg/kg o el volumen de suero fisiol´ ogico equivalente. La c´anula fue conectada a una pipeta de 2 ml conectada por el otro extremo con un recipiente conteniendo agua. La diferencia entre el plano de la pipeta y el nivel de agua se hizo variar entre 0 y 30 cm de altura realiz´ andose cada experimento con 6 gazapos y 2 cielos de compresi´on. (Fern´ andez-Regalado et al, Rev. Cubana Pediatr´ıa, 63; 36-47, 1991). Se midi´ o el volumen de expansi´ on m´axima a 25 cm de presi´ on por kg de peso (Vmax) y la relaci´ on entre el volumen de aire retenido durante la descompresi´ on a 5 cm de agua y el volumen m´ aximo (V5/Vmax). El an´ alisis se complement´o con la prueba de flotabilidad pulmonar de los pulmones aislados y la evaluaci´ on anatomopatol´ ogica de fragmentos correspondientes a los distintos l´ obulos que fueron fijados, incluidos en parafina y te˜ nidos seg´ un la t´ecnica de hernatoxilina-eosina para evaluaci´ on cualitativa del par´enquima, design´ andose aireaci´on positiva cuando m´ as del 50% de la superficie alveolar present´o clara demarcaci´on de los lobulillos.

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Fueron evaluados 5 lotes, obteni´endose en el primer ciclo como promedio un Vmax de 43,3 y V5/Vmax de 0,62. En el segundo ciclo el Vmax medio fue de 54,9 con V5/Vmax de 0,63. En el examen microsc´opico se encontr´ o un 85% de aireaci´ on en los tratados y 100% de flotabilidad. En el grupo control el Vmax fue siempre menor que 5 y la relaci´on V5/Vmax menor que 0,5 para ambos ciclos, no presentando flotabilidad y apariencia de pulmones fetales con predominio de zonas atelect´ asicas con engrosamiento de la pared septal. Ensayo de maximizaci´ on de Magnusson y Kligman.

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Se us´ o esta prueba para evaluar el efecto sensibilizante del surfactante pulmonar siguiendo el protocolo de Magnusson y Kligman (J. lnvest. Dermatology 52; 268-276, 1969). Durante el per´ıodo de observaci´ on los animales no presentaron s´ıntomas cl´ınicos de enfermedad ni alteraci´ on de la coloraci´ on de la piel, clasific´ andose en todos los casos como no reacci´on. la misma respuesta se encontr´ o en el grupo control. El producto se clasific´o como sensibilizante d´ebil o de grado 1, con 0% de animales sensibilizados. Ejemplo 3

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El producto obtenido seg´ un ejemplo 1 fue empleado en 23 reci´en nacidos pre-t´ermino (peso medio 1368 g y 30,5 semanas de edad gestacional) con signos cl´ınicos y radiol´ ogicos de SDRN severo. El surtactante fue instilado en dosis de 100 mg/kg y a la hora se manifest´ o aumento en la presi´on arterial de as de 9,3 kP en todos los casos, con un valor medio de incremento de 19,2 kP. La ox´ıgeno (PaO2 ) de m´ relaci´on presi´ on arterial-presi´on alveolar de ox´ıgeno (PaO2 /FiO2 ) se incremento 2,5 veces en las primeras 72 horas y se observ´o mejor´ıa radiol´ ogica de grado a las 24 horas de la administraci´ on. En seis pacientes se administr´ o una segunda dosis. Ejemplo 4

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En un hospital se sigui´ o durante un a˜ no el estudio de los reci´en nacidos con SDRN. De los 20 pacientes diagnosticados se aplic´ o a 7 el surfactante obtenido seg´ un el ejemplo 1 y se tomaron como control los otros 13, administr´andose aire en vez del producto al hacer el simulacro de administraci´ on y control´andose los mismos par´ametros en ambos grupos.

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Como resultado de la administraci´on del surfactante se obtuvo a los 10 mn un incremento medio de la o con aumento de PaO2 a la terapia con surfactante. ParaPaO2 de 10 a 31 kP. Un paciente no respondi´ lelamente en el grupo control el aumento fue de 8 a 12,7 kP en el mismo per´ıodo. La relaci´on PaO2 /PaO2 aument´ o de 0,13 a 0,38 en el grupo tratado a los 10 min, descendiendo a 0,29 a las 4 horas. Los pacientes del grupo control presentaron un aumento de 0,09 a 0,17 en 30 min, manteni´endose este valor a las 4 horas y durante el resto del tiempo siempre inferiores a las del grupo tratado. A las 4 horas se encontr´ o mejor´ıa radiol´ ogica evidente en los pacientes tratados, desapareciendo en algunos las lesiones pulmonares. El tiempo de ventilaci´ on mec´anica de los sobrevivientes tratados disminuy´ o respecto al control.

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5

ES 2 092 969 A1

Ejemplo 5

5

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Un surfactante preparado de acuerdo con el ejemplo 1 fue utilizado en el tratamiento del SDRA en un paciente politraumatizado a consecuencia de heridas de arma de fuego, que despu´es de ser intervenido quir´ urgicamente present´o peritonitis fecal, sliock hemorr´ agico y sepsis generalizada. Se diagnostic´o fallo multiorg´ anico con expresi´ on precoz de SDRA. Se aplic´o el surfactante en dosis de 100 mg de fosfol´ıpidos totales en cada aplicaci´on. Los resultados de dos aplicaciones se muestran a continuaci´on: TABLA 3 Resultados de la aplicaci´ on del surfactante obtenido seg´ un ejemplo 1 en SDRA (paciente 1)

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FiO2 PaO2 (Torr) PaO2 /FiO2

primera aplicaci´on

segunda aplicaci´ on

antes

4h

antes

4h

0,6 60 100

0,6 72 120

0,4 73 183

0,4 116 290

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Intervalo entre aplicaciones: 83 h

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Ejemplo 6 El surfactante obtenido seg´ un el ejemplo 1 se aplic´o en un paciente de 23 a˜ nos con s´ındrome de aplastamiento, fallo multiorg´ anico con insuficiencia renal aguda y posteriormente SDRA. Los resultados de dos aplicaciones en dosis de 100 mg de fosfol´ıpidos totales se muestran a continuaci´ on:

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En este paciente se realiz´o una primera aplicaci´ on despu´es de 10 d´ıas de SDRA mantenido, con un FiO de 0,5 se elev´ o la PaO de 51,4 a 80,7 y posteriormente a 180,7, correspondiendo a incrementos de la relaci´ on PiO/FiO de 102,8 a 161,4 y posteriormente a 361,4. Cinco d´ıas despu´es, tras una reca´ıda de los valores de PaO se aplica el producto en dosis de 1,00 mg de fostol´ıpidos cada 24 h obteni´endose los siguientes resultados: TABLA 4 Aplicaci´ on de surfactante en SDRA (paciente 2)

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aplicaci´on

primera

segunda

tercera

antes

2:30h

10 h

antes

3h

3:30h

antes

0:30h

0,5 62 124

0,4 127 318

0,4 156 389

0,4 74 185

0,4 110 275

0,4 229 572

0,5 58 116

0,5 137 274

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FiO2 PaO2 (Torr) PaO2 /FiO2 55

Los valores obtenidos en la tercera aplicaci´ on se mantuvieron estables hasta el d´ıa siguiente. D´ıas m´ as tarde fue aplicado un u ´ltimo ciclo de tratamiento luego del cu´ al cedi´ o de forma estable el SDRA. 60

Ejemplo 7 Se administr´ o el surfactante obtenido en el ejemplo 1 a un paciente con deficiencia respiratoria progresiva causada aparentemente por la inhalaci´ on de acetona y tricloro-etileno. Presentaba arritmia card´ıaca, 6

ES 2 092 969 A1 recidiva a ventilaci´on mec´anica. Se administr´ o una dosis total de 100 mg de fosfol´ıpidos. Los resultados de dicha aplicaci´ on se muestran a continuaci´ on. 5

TABLA 5 Aplicaci´ on de surfactante en el SDRA (paciente 3)

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primera aplicaci´on

FiO2 PaO2 (Torr) PaO2 /FiO2

antes

1h

6h

0,6 73 121

0,6 110 183

0,6 126 210

20

Dos aplicaciones posteriores con intervalos de 12h permitieron alcanzar al d´ıa siguiente una FiO2 de ametros estables por 48h, al cabo de las cuales se comen0,4, PaO2 de 123 torr con relaci´on de 307, par´ zaron las maniobras de extubaci´on. 25

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40

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7

ES 2 092 969 A1 REIVINDICACIONES

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1. Un surfactante pulmonar de origen porcino que contiene de 90 a 97% de fosfol´ıpidos, de 0,5 a 1,3% de prote´ınas hidr´ ofobas que incluyen las prote´ınas SPB y SPC y m´ as de un 2% de acil-glic´eridos con predominio de triglic´eridos provenientes de la fuente natural. M´ as del 40% de la composici´ on fosfolip´ıdica corresponde a fosfatidil-colina disaturada, el contenido de fostatidil-inositol es superior al 7% en relaci´ on a fosfol´ıpidos y el contenido total de los fosfol´ıpidos ani´ onicos (fosfatidil-glicerol y fosfatidil-inositol) es mayor de 12% respecto a fosfol´ıpidos. 2. Un surfactante pulmonar de acuerdo con la reivindicaci´ on 1 que en una concentraci´ on de 5 mg/ml sea capaz de disminuir la tensi´on superficial m´ınima a valores inferiores a 5 din/cm en un tiempo igual o inferior a 5 min de pulsaciones en un surfact´ ometro de burbuja puls´ atil a 37◦ C, 20 rpm. 3. Un surfactante pulmonar de acuerdo con la reivindicaci´ on 1 eficaz en el tratamiento del SDRN en dosis repetidas de 100 mg/kg de peso. 4. Un surfactante pulmonar de acuerdo con la reivindicaci´ on 1 que en dosis repetidas menores de 200 on mg de fosfol´ıpidos totales en cada aplicaci´on causa un incremento estable de la PaO2 y de la relaci´ ogica evidente en el SDRA. PaO2 /FiO2 , as´ı como mejor´ıa radiol´

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5. M´etodo para la obtenci´ on de surfactante pulmonar de origen porcino a que se refieren las reivindicaciones anteriores, que comprende obtener soluciones electrol´ıticas de lavado pulmonar; centrifugar la fase menos densa o el lavado pulmonar a menos de 8 000 rpm y velocidad de flujo inferior a 0,5 l/min, posteriormente extraer el residuo con mezcla de disolventes org´anicos y precipitar con acetona.

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kES 2 092 969 kN. solicitud: 9502552 kFecha de presentaci´on de la solicitud: 29.12.95 kFecha de prioridad: 29.12.94

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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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˜ ESPANA

◦

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INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

k

51 Int. Cl.6 :

A61K35/42

DOCUMENTOS RELEVANTES Categor´ıa

Documentos citados

Reivindicaciones afectadas

A

EP-0286011-A (CHIESI FARMACEUTICI S.p.A.) 12.10.88 * todo el documento *

1-5

A

US-4338301-A (F. TETSURO et al.) 06.07.82 * todo el documento *

1-5

A

EP-0119056-A (TOKYO TANABE COMPANY LTD.) 19.09.84 * todo el documento *

1-5

A

US-4397839-A (Y. TANAKA) 09.08.83 * todo el documento *

1-5

Categor´ıa de los documentos citados X: de particular relevancia

on no escrita O: referido a divulgaci´

Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la

on P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentaci´

misma categor´ıa A: refleja el estado de la t´ecnica

de la solicitud es de la fecha E: documento anterior, pero publicado despu´ de presentaci´ on de la solicitud

El presente informe ha sido realizado × para todas las reivindicaciones Fecha de realizaci´ on del informe 29.10.96

para las reivindicaciones n◦ : Examinador A. Maquedano Herrero

P´ agina

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