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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 114 570 kInt. Cl. : A61K 31/557

11 N´ umero de publicaci´on: 6

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˜ ESPANA

A61K 49/04 A61K 49/00

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 92922216.4 kFecha de presentaci´on : 22.10.92 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 609 336 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 10.08.94

T3

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54 T´ıtulo: Utilizaci´ on de derivados de prostaciclina para la inhibici´ on o el tratamiento de trastornos de

la microcirculaci´ on en el caso de la toma de agentes de contraste por rayos X, resonancia magn´ etica nuclear o ultrasonidos.

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73 Titular/es: Schering Aktiengesellschaft

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72 Inventor/es: Klopp, Rainer;

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74 Agente: Lehmann Novo, Mar´ıa Isabel

30 Prioridad: 22.10.91 DE 41 35 193

Mullerstrasse 170/178 13353 Berlin, DE

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.06.98

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 114 570 T3

01.06.98

Aviso:

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Niemer, Wolfgang; Schippel, Wolfgang y Krause, Werner

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 114 570 T3 DESCRIPCION

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´ Los agentes de contraste son agentes auxiliares indispensables en el diagn´ostico m´edico. Estos hacen posible un contraste cada vez m´ as intenso en las radiograf´ıas obtenidas as´ı como un mejor reconocimiento de los diferentes tejidos y ´organos. Entre otros, ´estos encuentran su aplicaci´on en procedimientos de examen por rayos X, ultrasonidos y resonancia magn´etica. A esta gama de aplicaciones muy u ´ tiles se oponen un gran n´ umero de efectos colaterales indeseados, tales como por ejemplo alteraciones de las c´elulas endoteliales, perjuicio para los eritrocitos, influencia sobre el sistema de coagulaci´ on de la sangre, trastorno de la microcirculaci´on hasta llegar a la hemostasia total, ampliaci´on de un trastorno ya existente de la microcirculaci´on en un tejido pat´ ogeno, alteraciones en la barrera hematoencef´alica o influencia negativa sobre la presi´on sangu´ınea. Corresponde una importancia especial al trastorno de la microcirculaci´ on. La microcirculaci´on es funcionalmente la parte m´ as importante del sistema circulatorio. En la regi´on de la microcirculaci´on tiene lugar el intercambio de sustancias. En el caso de un trastorno de la microcirculaci´on se pueden observar, entre otros fen´ omenos, una disminuci´ on de los puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas, aumento de adhesiones de las c´elulas sangu´ıneas en la pared interna de las v´enulas y agregaci´ on de eritrocitos. La vasomoci´on arteriolar es asimismo perjudicada. Toda una serie de enfermedades, no solamente del sistema cardiocirculatorio, han de ser atribuidas a trastornos de la microcirculaci´on. Por lo tanto, se ha de desear indispensablemente evitar un trastorno de la microcirculaci´on como repercusi´on de la administraci´on de un agente de contraste, o tratarlo inmediatamente. El documento de patente europea EP-A-0.217.419 divulga una composici´ on para la inhibici´ on de trastornos en el caso de la realizaci´ on de una angioplastia, la cual contiene prostaciclina y un agente de contraste angiogr´afico. El documento EP-A-0.385.859 describe una composici´on para la inhibici´ on o el retardo del crecimiento de c´elulas cancerosas malignas, la cual contiene prostaciclina y un agente radioterap´eutico. De los derivados de prostaciclina qu´ımicamente estables se conocen ya un gran n´ umero de efectos farmacol´ogicos.

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Sorprendentemente, se descubri´ o por fin que los derivados de prostaciclina, en el caso de una administraci´on poco antes o despu´es de una toma de agentes de contraste por rayos X, ultrasonidos o NMR (de Nuclear Magnetic Resonance = resonancia magn´etica nuclear) o en el caso de administraci´on en com´ un con los agentes de contraste mencionados, mantienen o restablecen la microcirculaci´ on en un grado considerable.

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El invento concierne a la utilizaci´on de un derivado de prostaciclina o del correspondiente clatrato con β-ciclodextrina o de la forma encapsulada con liposomas para la preparaci´ on de un medicamento destinado a la inhibici´ on o al tratamiento de trastornos de la microcirculaci´ on en el caso de la toma de agentes de contraste por rayos X, NMR o ultrasonidos. Preferiblemente, el presente invento concierne a la utilizaci´on de uno o varios derivados de prostaciclina de la f´ ormula general I

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en la que

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ES 2 114 570 T3 R1 significa hidr´ ogeno o un radical alquilo C1 -C4 , n significa de 0 a 3, 5

X e Y, independientemente uno de otro, significan un grupo -CH2 - o un a´tomo de ox´ıgeno, Z significa hidr´ ogeno, fluoro o CN, A significa un grupo trans -CH=CH o un grupo -C≡C-,

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W significa un grupo hidroximetileno libre o funcionalmente modificado en el grupo hidroxi, pudiendo el grupo hidroxi estar en posici´ on α o β, D significa un grupo alquileno C1 -C5 saturado lineal o ramificado, 15

E significa un grupo -C≡C-, R2 significa un grupo alquilo C1 -C2 , 20

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ogeno, R3 significa un grupo hidroxi libre o funcionalmente modificado y, caso de que R1 signifique hidr´ sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles as´ı como sus clatratos con α, β ´o γ-ciclodextrina al igual que su forma encapsulada con liposomas, o de ataprost, beraprost, BW-15AU, ciprosteno, CS 570, FCE 22509, naxaprosteno, RS 93427, SC 39902 o taprosteno, para la preparaci´ on de un medicamento destinado a inhibir o tratar trastornos de la microcirculaci´ on en el caso de la toma de agentes de contraste por rayos X, ultrasonidos o NMR.

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De modo especialmente preferido, el presente invento concierne a la utilizaci´ on de los derivados de prostaciclina iloprost, un clatrato con iloprost, cicaprost, un clatrato con cicaprost, eptaloprost o un clatrato con eptaloprost.

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Como grupos alquilo en R1 han de considerarse grupos alquilo de cadena lineal o ramificada que tienen 1-4 ´atomos de C, tales como por ejemplo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y terc.-butilo. ogeno, metoxi, etoxi, Los grupos alquilo R1 pueden estar eventualmente sustituidos con ´atomos de hal´ fenilo o di-alquil(C1-C2 )-aminas. Como sustituyentes se mencionar´ an por ejemplo a´tomos de fl´ uor, cloro o bromo, o fenilo, dimetilamino, dietilamino, metoxi o etoxi. Los grupos alquilo R1 preferidos son metilo, etilo y dimetilaminopropilo.

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Como grupo alquilo R2 se mencionar´an metilo y etilo. Los grupos hidroxi en R3 y W pueden presentarse como grupos hidroxi libres, estando el grupo hidroxi en W preferiblemente situado en posici´ on α, o pudiendo estar funcionalmente modificado, por ejemplo por eterificaci´on o esterificaci´on. Son preferidos los grupos hidroxi libres. Como radicales de ´eter o acilo entran en consideraci´on los radicales conocidos por un experto en la materia. Se prefieren radicales de ´eter f´acilmente disociables tales como, por ejemplo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofuranilo, α-etoxi-etilo, trimetil-sililo, dimetil-terc.-butil-sililo, difenil-terc.-butil-sililo o tribencil-sililo.

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Como grupo alquileno D entran en consideraci´ on grupos alquilo saturados, lineales o ramificados, con 1-5 ´atomos de C, por ejemplo metileno, etileno, 1- ´o 2-propileno, etil-etileno, trimetileno, tetrametileno, pentametileno, 1-metil-dimetileno, 1-metil-trimetileno y 1-metil-tetrametileno.

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anicas y org´ anicas, tal Para la formaci´ on de sales con los ´acidos libres (R1 = H) se adecuan bases inorg´ como son conocidas por un experto en la materia para la formaci´on de sales fisiol´ogicamente compatibles. A modo de ejemplo, se mencionaran: hidr´ oxidos de metales alcalinos tales como el hidr´oxido de sodio o de potasio, hidr´ oxidos de metales alcalino-t´erreos tal como hidr´ oxido de calcio, amon´ıaco, aminas tales como etanol-amina, dietanol-amina, trietanol-amina, N-metil-glucamina, morfolina, tris(hidroximetil)metil-amina, etc.

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Los clatratos con α, β ´ o γ-ciclodextrina se obtienen an´ alogamente a la prescripci´on dada en el documento de patente PCT WO 87/05294. Los clatratos preferidos son los formados con β-ciclodextrina.

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ES 2 114 570 T3 Los liposomas se preparan p. ej. de acuerdo con el procedimiento descrito en “Pharmazie in unserer Zeit 11, 98 (1982)”.

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La preparaci´ on de los compuestos de f´ormula I se describe detalladamente en los documentos de patente europea EP-B 2234 B1 y EP 11591 B1. En el documento EP 11591 B1 se describen para los derivados de prostaciclina de la f´ ormula I las siguientes propiedades farmacol´ ogicas:

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Disminuci´on de la resistencia vascular arterial perif´erica y coronaria, inhibici´ on de la agregaci´ on de trombocitos y disoluci´ on de trombos plaquetarios, citoprotecci´ on mioc´ardica y por consiguiente disminuci´on de la presi´ on sangu´ınea sist´emica, sin disminuir al mismo tiempo el volumen de los latidos ni la circulaci´on sangu´ınea por la coronaria; tratamiento de apoplej´ıa, profilaxia y terapia de enfermedades card´ıacas coronarias, trombosis coronaria, del infarto card´ıaco, enfermedades arteriales perif´ericas, arterioesclerosis y trombosis, terapia del choque, inhibici´ on de la broncoconstricci´ on, inhibici´ on de la secreci´on de a´cidos g´astricos y citoprotecci´ on de las mucosas estomacales e intestinales; propiedades antial´ergicas, disminuci´on de la resistencia vascular pulmonar y de la presi´ on sangu´ınea pulmonar, fomento de la circulaci´ on sangu´ınea por los ri˜ nones, aplicaci´on en lugar de heparina o como adyuvante en la di´ alisis o hemofiltraci´ on, conservaci´on de conservas de plasma sangu´ıneo, especialmente de conservas de plaquetas sangu´ıneas, inhibici´ on de los dolores del parto, tratamiento de toxicosis del embarazo, aumento de la circulaci´on sangu´ınea por el cerebro, etc. Adem´ as, los nuevos compuestos an´alogos a prostaglandina poseen propiedades antiproliferativas. En el documento EP 86404 B1 se describe la aplicaci´on de carbaciclinas para la profilaxia y terapia de ataques isqu´emicos del sistema nervioso central (SNC), para la citoprotecci´on en el h´ıgado y en el p´ ancreas as´ı como la combinaci´on con β-bloqueadores o diur´eticos. A partir del documento WO 86/00808 es conocida la citoprotecci´on de los ri˜ nones as´ı como la idoneidad de los derivados de prostaciclina de la f´ ormula I para el tratamiento de o´rganos que se han de trasplantar. En el documento de patente alemana DE 3526.362 A1 se describe la combinaci´ on de los derivados de prostaciclina de la f´ ormula I con antagonistas de tromboxano para su aplicaci´ on en el caso de sintomatolog´ıas tromb´ oticas o tromboemb´ olicas. A partir del documento DE 35-44.663 A1 se conoce la combinaci´ on de derivados de prostaciclina de la f´ ormula I con agentes fibrinol´ıticos para la inhibici´ on de retrombosis despu´es de una trombosis.

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En el documento DE 36-08.088 A1 se describen los clatratos de los derivados de carbaciclina de la f´ ormula I. A partir del documento DE 36-31.169 A1 se conoce, adicionalmente a las formas de administraci´on descritas en el documento EP 11591 B1, la forma de administraci´ on por v´ıa t´ opica. La utilizaci´on de los derivados de prostaciclina de la f´ ormula I o del correspondiente clatrato con β-ciclodextrina o de la forma encapsulada con liposomas para la preparaci´ on de un medicamento destinado a la inhibici´ on o al tratamiento de trastornos de la circulaci´ on en el caso de la toma de agentes de contraste por rayos X, NMR o ultrasonidos no se menciona en ninguna de las publicaciones o patentes precedentes.

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De manera enteramente sorprendente, las investigaciones en un modelo con animales han puesto de manifiesto que los derivados de prostaciclina de la f´ormula I se pueden utilizar con ´exito en el caso del tratamiento o de la evitaci´ on de trastornos de la microcirculaci´on por toma de agentes de contraste por rayos X, ultrasonidos o NMR.

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Los trastornos de la microcirculaci´on, observados en el caso de la aplicaci´on de un agente de contraste en un experimento con animales, tales como p. ej. una reducci´ on dr´ astica de los puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas en la red microvascular, aumento de eritrocitos agregados, adhesiones multiplicadas de c´elulas sangu´ıneas blancas (leucocitos) en la pared interna de las v´enulas, as´ı como perjuicio de la vasomoci´ on arteriolar, son especialmente pronunciados en los minutos 2◦ y 7◦ despu´es de la toma del agente de contraste, lo cual coincide con las experiencias cl´ınicas acerca de efectos colaterales de agentes de contraste y complicaciones con tales agentes de contraste (la denominada reacci´on inmediata despu´es de aproximadamente 2 minutos o la denominada reacci´on tard´ıa despu´es de aproximadamente 7 minutos).

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En el caso de la toma de agentes de contraste que contienen part´ıculas, tal como se presentan en algunos agentes de contraste por ultrasonidos o agentes de contraste por NMR, se manifiesta oportuna una toma de los derivados de prostaciclina de la f´ ormula I para el tratamiento o la evitaci´ on de trastor4

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nos de la microcirculaci´on, incluso aunque sea relativamente peque˜ no el trastorno de la microcirculaci´on observado en el caso de la investigaci´on en un tejido sano. En efecto, no se debe de pasar por alto el hecho de que en estados patol´ ogicos vasculares, y s´olo entonces se efect´ ua en general una investigaci´ on con toma de un agente de contraste, que pueden incluso ampliar los trastornos existentes en las part´ıculas de agente de contraste anegadas en la microcirculaci´ on.

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La aplicaci´on de los derivados de prostaciclina de la f´ ormula I antes de -, simult´ aneamente con - y despu´es de la toma de agentes de contraste produce una amplia evitaci´ on o un trastorno decisivamente disminuido de la microcirculaci´on, que se vinculan con un m´ as r´apido restablecimiento de la microperfusi´ on. Los derivados de prostaciclina de la f´ ormula I se pueden aplicar por v´ıa t´opica o intravasal (i. a. (intraarterial), i. v. (intravenosa)). El agente de contraste se administra por v´ıa intravasal (i. a., i. v.).

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La dosis de los derivados de prostaciclina es de 1,60,0004 µg/kg de masa corporal, preferiblemente de 1,20,0004 µg/kg de masa corporal. Para la combinaci´ on se adecuan agentes de contraste por rayos X, ultrasonidos y NMR.

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Agentes de contraste preferidos son iotrolano, iopromida, iohexol, iosimida, metrizamida, sales de a´cido amidoac´etico, ´acido iotrox´ınico, iopamidol, (2,3-dihidroxi-N-metilpropil)(2-hidroxi-etil)diamida de ´acido 5-hidroxi-acetamido-2,4,6-triyodo-isoft´ alico, [(1RS,2SR)-2,3-dihidroxi-1-hidroximetil-propil]amida de a´cido 3-carbamoil-5-[N-[2-hidroxi-etil)-acetamido]-2,4,6-triyodo-benzoico, dispersiones de ´ester et´ılico de iodipamida, gadolinio-DTPA, gadolinio-DOTA, el complejo con gadolinio de 10-[1-hidroximetil-2,3R R , Magnevist , dihidroxi-propil]-1,4,7-tris(carboximetil)-1,4,7,10-tetraaza-ciclododecano], Pro Hance

R Omniscan , quelatos con porfirinas de hierro o manganeso, dispersiones estables de magnetitas, dispersiones de micropart´ıculas de galactosa con o sin aditivos en agua, una soluci´ on de galactosa o dispersiones R , de microesferas con aire encerrado, especialmente cianoacrilatos o miquioesferas de alb´ umina, Echovist R . y Levovist

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La unidad de dosificaci´ on de los agentes de contraste puede ser de 1-350 mg de yodo/l para agentes de contraste por rayos X, de 1-1.000 µg de part´ıculas/kg de peso corporal para agentes de contraste por ultrasonidos y de 0,01-0,5 moles para agentes de contraste por NMR. Estos datos pueden ser sin embargo s´olo valores orientativos, puesto que la dosis de un agente de contraste es dependiente en gran manera de la deseada aplicaci´on. Para la combinaci´ on son apropiados los derivados de prostaciclina, especialmente los mencionados en la reivindicaci´on 2.

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La dosis de los derivados de prostaciclina para la combinaci´ on est´a situada en el margen ya indicado para la toma realizada por separado. Si las propiedades f´ısicas de las soluciones o dispersiones de agentes de contraste no garantizasen la estabilidad del derivado de prostaciclina durante un per´ıodo de tiempo prolongado, se prefiere para este caso la combinaci´on en unidades de dosificaci´ on por separado. Signos de referencia Figura 1

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Representaci´on de la disminuci´ on porcentual de los puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas en la red microvascular en combinaci´on con las condiciones de partida 1 - Grupo 1 de animales, bolo con diatrizoato 55

2 - Grupo 2 de animales, a los 5 minutos de la toma de diatrizoato y la inyecci´on de iloprost. t - Dato de tiempo en [min] % - Puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas.

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ES 2 114 570 T3 Figura 2 Representaci´on del aumento porcentual de la proporci´ on de eritrocitos agregados en n´ umero total de c´elulas en la red microvascular en comparaci´on con las condiciones de partida 5

1, 2, t - v´ease la Figura 1 % - Proporci´ on de eritrocitos agregados en [ %]

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Figura 3 Representaci´on del n´ umero de c´elulas sangu´ıneas que se adhieren a una superficie definida de pared interna de v´enulas 1, 2, t - v´ease la Figura 1

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CS - N´ umero de las c´elulas sangu´ıneas A - Superficie definida de la pared interna de las v´enulas.

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Figuras 4, 5 y 6 Representaci´on de espectros de frecuencia de la vasomoci´on arteriolar. Ejemplo 1

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En ratas narcotizadas de la raza Wistar-Sch¨ onwalde (narcosis con una mezcla de uretano y cloralosa - i. p. (intraperitoneal), i. m. (intramuscular) -, 10 % de uretano en una soluci´ on isot´ onica de NaCl, 2 % de α-cloralosa en una soluci´on isot´ onica de NaCl; 0,6 ml/100 g de masa corporal como dosis inicial, 0,2 ml/100 g de masa corporal como dosis de mantenimiento en caso necesario) se hace avanzar un microcat´eter para la inyecci´on intraarterial del agente de contraste desde la arteria car´ otida com´ un (A. carotis communis) hasta el arco a´ortico. Se efect´ ua la inyecci´on en una sola vez de un bolo caliente a la temperatura corporal, de amidotrizoato/urografina con 600 mg de I/kg de masa corporal. El per´ıodo del tiempo de inyecci´on es de 30 s. La aplicaci´on del iloprost se efect´ ua a los 5 min despu´es de la toma de un agente de contraste, en el caso de aplicaci´ on por v´ıa intraarterial por la misma v´ıa de inyecci´on que el agente de contraste, en el caso de aplicaci´on por v´ıa intravenosa a trav´es de la vena femoral (V. femoralis) y en el caso de aplicaci´on por v´ıa t´ opica a trav´es de los intestinos y del mesenterio. La dosis de iloprost es de 0,8-1,6 µg de iloprost/kg de masa corporal en 2,0 ml de soluci´on/kg de masa corporal. En el caso de aplicaci´on por v´ıa t´ opica se utilizan 3 gotas de esta soluci´on. El n´ umero de los animales sometidos a ensayo es de 45 en el caso de la aplicaci´on por v´ıa intraarterial, de 25 en el caso de la aplicaci´ on por v´ıa intravenosa y de 20 en el caso de aplicaci´on por v´ıa t´opica. Los animales testigos reciben una soluci´ on fisiol´ ogica de cloruro de sodio en la correspondiente aplicaci´on. El n´ umero de los animales testigos es de 12 en el caso de una aplicaci´on por v´ıa intraarterial e intravenosa y de 20 en el caso de una aplicaci´ on por v´ıa t´ opica. Resultados La comprobaci´ on de los hallazgos se efect´ ua en un animal narcotizado en condiciones marginales constantes por microscop´ıa intravital al trasluz y por luz reflejada en el mesenterio y en los intestinos expuestos dentro de una soluci´on de ba˜ no regulada termost´ aticamente. El registro de los datos se efect´ ua usualmente en el intervalo de desde 5 minutos antes de la toma del agente de contraste hasta 15 minutos despu´es de la toma de agente de contraste, en cada minuto. Los puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas de la microcirculaci´on intestinal aumentan por la toma de iloprost. La comparaci´on con el testigo sin tratar pone de manifiesto que el iloprost amortigua claramente los trastornos de la circulaci´on, inducidos por el agente de contraste amidotrizoato, en el intervalo de tiempo, cl´ınicamente importante, de los minutos 5◦ hasta 10◦ p. a. (despu´es del an´ alisis) y que se consigue un restablecimiento mas r´apido de la microperfusi´ on fisiol´ ogica. La Figura 1 muestra la disminuci´ on porcentual de los puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas en la red microvascular del mesenterio en el caso de la toma de un agente de contraste en comparaci´on con las condiciones de partida as´ı como la repercusi´on de la toma de iloprost. Se comparan dos grupos de animales: el grupo 1 ha recibido en el momento t = 0 un bolo con diatrizoato; el grupo 2 recibi´ o despu´es del bolo con diatrizoato en el momento t = 0 un bolo con iloprost de 0,8 µg/kg 6

ES 2 114 570 T3 en el momento t = 5. La representaci´on por barras indica valores medios y las l´ıneas situadas encima la desviaci´on t´ıpica S.

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La proporci´ on porcentual de eritrocitos agregados en el n´ umero total de c´elulas en la red mesenterial es grandemente disminuida mediante el iloprost, es decir que se acelera la disminuci´on del n´ umero de eritrocitos agregados.

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La Figura 2 muestra el aumento porcentual de la proporci´ on de eritrocitos agregados en el n´ umero total de c´elulas en la red microvascular del mesenterio en el caso de la toma de un agente de contraste en comparaci´on con las condiciones de partida as´ı como la repercusi´on de la toma de iloprost. Los grupos 1 y 2 de animales fueron tratados como en el experimento precedente. La representaci´ on de los valores medios o de la desviaci´on t´ıpica se efect´ ua como en la Figura 1.

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La disminuci´ on del n´ umero de las c´elulas blancas sangu´ıneas (leucocitos) adherentes junto a la pared interna de las v´enulas es intensamente acelerada como mediante el iloprost.

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La Figura 3 muestra el n´ umero de c´elulas sangu´ıneas adherentes junta a una superficie definida de pared interna de v´enulas del mesenterio en funci´ on del tiempo. Los grupos 1 y 2 de animales fueron tratados como en el experimento precedente. La representaci´on de los valores medios o de la desviaci´ on t´ıpica se efect´ ua como en la Figura 1. Ejemplo 2

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En ratas adultas narcotizadas [masa corporal X=304,7 g (S=35,4 g)] de la raza Wistar (narcosis con una mezcla de uretano y cloralosa - i. p., i. m. -, 10 % de uretano en una soluci´on isot´ onica de NaCl, 2 % de α-cloralosa en una soluci´on isot´ onica de NaCl; 0,6 ml/100 g de masa corporal como dosis inicial, 0,2 ml/100 g de masa corporal como dosis de mantenimiento en caso necesario) se hace avanzar un microcat´eter para la inyecci´on intravasal del agente de contraste o bien en la arteria car´ otida com´ un hasta llegar al arco a´ortico (inyecci´on intraarterial) o se introduce en la vena femoral (inyecci´ on intravenosa). Se efect´ ua la inyecci´on en una sola vez de un bolo caliente a la temperatura corporal de diatrizoato/urografina con 600 mg de I/kg de masa corporal. El per´ıodo de tiempo de inyecci´on es de 30 s. La aplicaci´on de iloprost se efect´ ua a los 5 min despu´es de la toma del agente de contraste, en el caso de aplicaci´on por v´ıa intravasal por la misma v´ıa de inyecci´on que el agente de contraste o en el caso de aplicaci´on por v´ıa t´ opica a trav´es de los intestinos y del mesenterio. La dosis de iloprost es de 1,6-0,0004 µg de iloprost/g de masa corporal en 2,0 ml de soluci´ on/kg de masa corporal. En el caso de aplicaci´ on por v´ıa t´ opica, se utilizan 3 gotas de esta soluci´on. Como sustancia comparativa se aplica una soluci´ on fisiol´ ogica de cloruro de sodio con un volumen correspondiente. Por causa de las peque˜ nas diferencias de las masas corporales de los animales sometidos a ensayo se puede aplicar en todos los animales sometidos a ensayo un volumen de bolo casi igual, de aproximadamente 1 ml. El n´ umero de los animales sometidos a ensayo es de 10 por cada grupo sometido a tratamiento. Se determinan las siguientes magnitudes de medici´ on (caracter´ısticas):

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- N´ umero de los puntos nodales en los que realmente se han perfundido c´elulas en la red microvascular ( %, variaci´ on porcentual del n´ umero en comparaci´on con las condiciones de partida);

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- N´ umero de los eritrocitos agregados en el lecho de corriente microvascular ( %, proporci´ on porcentual de eritrocitos agregados en el n´ umero total de c´elulas del lecho de corriente observado; como agregaci´ on de eritrocitos se observa una adherencia mutua m´ as larga de por lo menos 2 a 3 eritrocitos, no siendo diferenciados los diferentes tipos de la agregaci´on);

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- N´ umero de las c´elulas sangu´ıneas adherentes junto a la pared interna de las v´enulas (CS/A; n´ umero de las c´elulas sangu´ıneas que se adhieren al endotelio de las v´enulas durante m´ as de 5 segundos referido a una superficie definida de la pared interna de v´enulas A 18.000 µm2 , que est´a dado en el caso de un di´ ametro de las v´enulas dv = 40 µm por una longitud axial de las v´enulas Iv = 40 µm)

60

- Vasomoci´on arteriolar (determinaci´on del di´ ametro interno de una arteriola con un di´ ametro de aproximadamente 45 µm en un sitio determinado por cada segundo en un intervalo de observaci´ on de aproximadamente 15 minutos; determinaci´ on del espectro de frecuencias y amplitudes de la oscilaci´on de la vasomoci´on). Las magnitudes de medici´on, cuando no se indica otra cosa distinta, se determinan en microvasos con unos di´ ametros ≤ 40 µm. Las mediciones de las caracter´ısticas microcirculatorias son llevadas a cabo en el 7

ES 2 114 570 T3 mesenterio del intestino delgado (Intestinum tenue) y la mucosa del propio intestino delgado en segmentos completos, en cada caso id´enticos. Para ello, en un animal narcotizado y regulado termost´ aticamente se expone por v´ıa quir´ urgica el intestino y se guarda en una soluci´ on de ba˜ no regulado termost´ aticamente, caliente a la temperatura del n´ ucleo corporal (equivalente al l´ıquido intraperitoneal). 5

10

15

La representaci´on de la red microvascular se efect´ ua con ayuda de una unidad de investigaci´ on microsc´opica intravital en un procedimiento combinado de observaci´on al trasluz y de luz reflejada en el ´organo no lesionado con revisi´ on y tratamiento de im´ agenes con el apoyo de un ordenador. Las comprobaciones de los hallazgos por microscop´ıa vital se llevan a cabo en condiciones marginales macrocirculatorias constantes. Antes de la determinaci´on por microscop´ıa intravital de los valores medidos se obtiene en cada caso un cuadro de conjunto orientativo sobre la red microvascular completa de todo el segmento mesenterial o intestinal - inclusive sus otros flujos de afluencia y salida, la geometr´ıa y la jerarqu´ıa de las ramificaciones y la identificaci´ on funcional de los vasos. La identificaci´ on anat´ omica de los vasos en un preparado histol´ ogico coloreado se efect´ ua despu´es del final del experimento dentro del marco de la investigaci´on histopatol´ ogica definitiva de todos los animales sometidos a ensayo. El registro de los datos se efect´ ua usualmente en un intervalo de 5 minutos antes de la toma del agente de contraste hasta 10 minutos despu´es de la toma del agente de contraste, en cada minuto.

20

Resultados: El n´ umero de los puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas aumenta m´as r´ apidamente por toma de iloprost. 25

La proporci´ on de eritrocitos agregados en el n´ umero total de c´elulas sangu´ıneas en la red disminuye m´as r´apidamente despu´es de la toma de iloprost.

30

El n´ umero de c´elulas sangu´ıneas adheridas a la pared interna de las v´enulas disminuye mediante iloprost.

35

En la siguiente tabla se indican los resultados de medici´ on acerca de los hallazgos antes descritos en la red microvascular de la mucosa del intestino delgado. Un grupo de animales recibi´ o inyectado un bolo con diatrizoato (columna 1), un segundo grupo recibi´ o una aplicaci´ on por v´ıa intravenosa de 0,8 µg/kg de iloprost a los 5 minutos despu´es de la inyecci´on del bolo con diatrizoato (columna 2). x designa el valor medio, LI designa el l´ımite inferior y LS designa el l´ımite superior del intervalo de confianza.

40

El espectro de frecuencias de la vasomoci´on arteriolar experimenta por la toma de iloprost menores desviaciones respecto del estado normal que en el caso de aplicaci´on por v´ıa intravenosa (v´eanse las Figuras 4-6). La Figura 4 muestra el espectro de frecuencias de un animal testigo;

45

50

la Figura 5 muestra el espectro de frecuencias de un animal en el 7◦ minuto despu´es de la aplicaci´on por v´ıa intravenosa de diatrizoato; y la Figura 6 muestra el espectro de frecuencias de un animal al que se administr´ o a los 5 minutos despu´es de la aplicaci´on por v´ıa intravenosa de diatrizoato, por la misma v´ıa de inyecci´on, iloprost con una dosis de 0,8 µg/kg, en el 7◦ minuto despu´es de la toma del agente de contraste, es decir en el 2◦ minuto despu´es de la inyecci´on (p. i.) de iloprost.

55

60

8

ES 2 114 570 T3 Intervalo de confianza de 95 % para valores medios de las modificaciones de diferentes par´ ametros (caracter´ısticas) de la microcirculaci´ on intestinal

5

Caracter´ıstica 10

Aplicaci´ on de diatrizoato/urografina (valor de la magnitud al 7◦ min p. i. menos el valor de la magnitud en el momento 0 min)

Aplicaci´ on de iloprost/ilomedina en el 5◦ minuto p. i. del agente de contraste diatrizoato/urografina (valor de la magnitud en el 7◦ min p. i. del agente de contraste, es decir en el 2◦ min p. i. del iloprost, menos el valor de la magnitud en el minuto 0)

15

N´ umero de los puntos nodales en los que realmente se han perfundido c´elulas sangu´ıneas en comparaci´on con las condiciones de partida en %

x LI LS

-22,0 -27,3 -16,7

-11,0 -19,8 -2,2

20

Proporci´ on de c´elulas sangu´ıneas rojas agregadas en el n´ umero total de c´elulas en el lecho de corriente microvascular en %

x LI LS

26,5 21,9 31,2

6,2 1,7 10,7

N´ umero de c´elulas sangu´ıneas (CS) adherentes en una determinada superficie de pared interna de v´enulas A = 18.000 µm2 (CS/A)

x LI LS

19,5 16,3 22,7

6,4 -0,1 12,9

25

30

Ejemplo 3 35

40

45

50

En ratas adultas narcotizadas [masa corporal X=304,7 g (S=35,4 g)] de la raza Wistar (narcosis con una mezcla de uretano y cloralosa - i. p., i. m. - 10 % de uretano en una soluci´on isot´ onica de NaCl, 2 % de α-cloralosa en una soluci´on isot´ onica de NaCl; 0,6 ml/100 g de masa corporal como dosis inicial, 0,2 ml/100 g de masa corporal como dosis de mantenimiento en caso necesario) se introduce un microcat´eter para inyecci´ on intravasal del agente de contraste o bien en la arteria car´ otida com´ un hasta llegar al arco a´ortico (inyecci´on intraarterial) o se introducen en la vena femoral (inyecci´ on intravenosa). Se efect´ ua la inyecci´on en una sola vez de un bolo a la temperatura corporal de diatrizoato/urografina con 600 mg de I/kg de masa corporal. El per´ıodo de tiempo de inyecci´on es de 30 s. La aplicaci´on de iloprost se efect´ ua simult´aneamente con la toma del agente de contraste, en el caso de aplicaci´on por v´ıa intravasal por la misma v´ıa de inyecci´on que el agente de contraste o en el caso de aplicaci´on por v´ıa t´ opica pasando por los intestinos y el mesenterio. La dosis de iloprost es de 1,6-0,0004 µg de iloprost/kg de masa corporal en 2,0 ml de soluci´on/kg de masa corporal. En el caso de aplicaci´ on por v´ıa t´opica se utilizan 3 gotas de esta soluci´on. Como sustancia comparativa se aplica una soluci´ on fisiol´ ogica de cloruro de sodio con un volumen correspondiente. Por causa de las peque˜ nas diferencias entre las masas corporales de los animales sometidos a ensayo se puede aplicar a todos los animales sometidos a ensayo un volumen de bolo casi igual, de aproximadamente 1 ml. El n´ umero de los animales sometidos a ensayo es de 10 por cada grupo sometido a tratamiento. Se determinan las siguientes magnitudes de medici´ on (caracter´ısticas):

55

- N´ umero de los puntos nodales en los que realmente se han perfundido c´elulas en la red microvascular ( %, variaci´ on porcentual del n´ umero en comparaci´on con las condiciones de partida);

60

- N´ umero de los eritrocitos agregados en el lecho de corriente microvascular ( %, proporci´ on porcentual de eritrocitos agregados en el n´ umero total de c´elulas del lecho de corriente observado; como agregaci´ on de eritrocitos se observa una adherencia mutua m´ as larga de por lo menos 2 a 3 eritrocitos, no siendo diferenciados los diferentes tipos de la agregaci´on); - N´ umero de las c´elulas sangu´ıneas adherentes junto a la pared interna de las v´enulas (CS/A; n´ umero de las c´elulas sangu´ıneas que se adhieren al endotelio de las v´enulas durante m´ as de 5 segundos 9

ES 2 114 570 T3 referido a una superficie definida de la pared interna de v´enulas A 18.000 µm2 , que est´a dado en el caso de un di´ ametro de las v´enulas dv = 40 µm por una longitud axial de las v´enulas Iv = 40 µm) 5

10

15

20

25

30

- Vasomoci´on arteriolar (determinaci´on del di´ ametro interno de una arteriola con un di´ ametro de aproximadamente 45 µm en un sitio determinado por cada segundo en un intervalo de observaci´ on de aproximadamente 15 minutos; determinaci´ on del espectro de frecuencias y amplitudes de la oscilaci´on de la vasomoci´on). Las magnitudes de medici´on, cuando no se indica otra cosa distinta, se determinan en microvasos con unos di´ ametros ≤ 40 µm. Las mediciones de las caracter´ısticas microcirculatorias son llevadas a cabo en el mesenterio del intestino delgado (Intestinum tenue) y la mucosa del propio intestino delgado en segmentos completos, en cada caso id´enticos. Para ello, en un animal narcotizado y regulado termost´ aticamente se expone por v´ıa quir´ urgica el intestino y se guarda en una soluci´ on de ba˜ no regulado termost´ aticamente, caliente a la temperatura del n´ ucleo corporal (equivalente al l´ıquido intraperitoneal). La representaci´on de la red microvascular se efect´ ua con ayuda de una unidad de investigaci´ on microsc´opica intravital en un procedimiento combinado de observaci´on al trasluz y de luz reflejada en el ´organo no lesionado con revisi´ on y tratamiento de im´ agenes con el apoyo de un ordenador. Las comprobaciones de los hallazgos por microscop´ıa vital se llevan a cabo en condiciones marginales macrocirculatorias constantes. Antes de la determinaci´on por microscop´ıa intravital de los valores medidos se obtiene en cada caso un cuadro de conjunto orientativo sobre la red microvascular completa de todo el segmento mesenterial o intestinal - inclusive sus otros flujos de afluencia y salida, la geometr´ıa y la jerarqu´ıa de las ramificaciones y la identificaci´ on funcional de los vasos. La identificaci´ on anat´ omica de los vasos en un preparado histol´ ogico coloreado se efect´ ua despu´es del final del experimento dentro del marco de la investigaci´on histopatol´ ogica definitiva de todos los animales sometidos a ensayo. El registro de los datos se efect´ ua usualmente en un intervalo de 5 minutos antes de la toma del agente de contraste hasta 10 minutos despu´es de la toma del agente de contraste, en cada minuto. Resultados: El n´ umero de puntos nodales en los que se han perfundido c´elulas sangu´ıneas aumenta m´as r´ apidamente por la toma de iloprost.

35

La proporci´ on de eritrocitos agregados en el n´ umero total de c´elulas sangu´ıneas en la red disminuye r´ apidamente despu´es de la toma de iloprost.

40

El n´ umero de c´elulas sangu´ıneas que se adhieren a la pared interna de las v´enulas disminuye mediante iloprost.

45

En la siguiente tabla se indican los resultados de medici´ on acerca de los hallazgos antes descritos en la red microvascular de la mucosa del intestino delgado. Un grupo de animales recibi´ o inyectado un bolo con diatrizoato (columna 1), un segundo grupo recibi´ o una aplicaci´ on por v´ıa intravenosa de 0,8 µg/kg de iloprost a los 5 minutos despu´es de la inyecci´on del bolo con diatrizoato (columna 2). x designa el valor medio, LI designa el l´ımite inferior y LS designa el l´ımite superior del intervalo de confianza.

50

El espectro de frecuencias de la vasomoci´on arteriolar experimenta por la toma de iloprost menores desviaciones respecto del estado normal que en el caso de aplicaci´on exclusiva de agentes de contraste.

55

60

10

ES 2 114 570 T3 Intervalo de confianza de 95 % para valores medios de las modificaciones de diferentes par´ ametros (caracter´ısticas) de la microcirculaci´ on intestinal

5

Caracter´ıstica 10

Aplicaci´ on de diatrizoato/urografina (valor de la magnitud al 7◦ min p. i. menos el valor de la magnitud en el momento 0 min)

Aplicaci´ on de iloprost/ilomedina al mismo tiempo que el agente de contraste diatrizoato/urografina (valor de la magnitud en el 7◦ min p. i. del agente de contraste, es decir en el 2◦ min p. i. del iloprost, menos el valor de la magnitud en el minuto 0)

15

N´ umero de los puntos nodales en los que realmente se han perfundido c´elulas sangu´ıneas en comparaci´on con las condiciones de partida en %

x LI LS

-22,0 -27,3 -16,7

-10,4 -17,9 -2,9

20

Proporci´ on de c´elulas sangu´ıneas rojas agregadas en el n´ umero total de c´elulas en el lecho de corriente microvascular en %

x LI LS

26,5 21,9 31,2

5,7 2,1 9,2

N´ umero de c´elulas sangu´ıneas (CS) adherentes en una determinada superficie de pared interna de v´enulas A = 18.000 µm2 (CS/A)

x LI LS

19,5 16,3 22,7

5,8 0,4 11,2

25

30

LI - L´ımite inferior LS - L´ımite superior 35

x - Valor medio

40

45

50

55

60

11

ES 2 114 570 T3 REIVINDICACIONES

5

1. Utilizaci´on de un derivado de prostaciclina o del correspondiente clatrato con α-ciclodextrina o de la forma encapsulada con liposomas para la preparaci´on de un medicamento destinado a la inhibici´ on o al tratamiento de trastornos de la microcirculaci´ on en el caso de la toma de un agente de contraste de rayos X, NMR o ultrasonidos. 2. Utilizaci´on de los derivados de prostaciclina de la f´ ormula general I

10

15

20

25

en la que ogeno o un radical alquilo C1 -C4 , R1 significa hidr´ 30

n significa de 0 a 3, X e Y, independientemente uno de otro, significan un grupo -CH2 - o un a´tomo de ox´ıgeno, 35

Z significa hidr´ ogeno, fluoro o CN, A significa un grupo trans -CH=CH o un grupo -C≡C-,

40

W significa un grupo hidroximetileno libre o funcionalmente modificado en el grupo hidroxi, pudiendo el grupo hidroxi estar en posici´ on α o β, D significa un grupo alquileno C1 -C5 saturado lineal o ramificado, E significa un grupo -C≡C-,

45

R2 significa un grupo alquilo C1 -C2 , ogeno, R3 significa un grupo hidroxi libre o funcionalmente modificado y, caso de que R1 signifique hidr´ 50

sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles as´ı como sus clatratos con α, β ´o γ-ciclodextrina al igual que su forma encapsulada con liposomas, o ataprost, beraprost, BW-15AU, ciprosteno, CS 570, FCE 22509, naxaprosteno, RS 93427, SC 39902 o taprosteno, para la preparaci´ on de un medicamento destinado a inhibir o tratar trastornos de la microcirculaci´ on en el caso de la toma de agentes de contraste de rayos X, ultrasonidos o NMR.

55

3. Utilizaci´on de un derivado de prostaciclina de la f´ ormula general I

60

12

ES 2 114 570 T3

5

10

15

en la que 20

ogeno o un radical alquilo C1 -C4 , R1 significa hidr´ n significa de 0 a 3, X e Y, independientemente uno de otro, significan un grupo -CH2 - o un a´tomo de ox´ıgeno,

25

Z significa hidr´ ogeno, fluoro o CN, A significa un grupo trans -CH=CH o un grupo -C≡C-, 30

W significa un grupo hidroximetileno libre o funcionalmente modificado en el grupo hidroxi, pudiendo el grupo hidroxi estar en posici´ on α o β, D significa un grupo alquileno C1 -C5 saturado lineal o ramificado,

35

E significa un grupo -C≡C-, R2 significa un grupo alquilo C1 -C2 , ogeno, R3 significa un grupo hidroxi libre o funcionalmente modificado y, caso de que R1 signifique hidr´

40

sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles as´ı como sus clatratos con α, β ´o γ-ciclodextrina al igual que su forma encapsulada con liposomas, para la preparaci´ on de un medicamento destinado a inhibir o tratar trastornos de la microcirculaci´ on en el caso de la toma de agentes de contraste de rayos X, ultrasonidos o NMR. 45

4. Utilizaci´on de uno de los derivados de prostaciclina ataprost, beraprost, BW-15AU, ciprosteno, CS 570, FCE 22509, naxaprosteno, RS-93427, SC 39902 o taprosteno, para la preparaci´ on de un medicamento destinado a inhibir o tratar trastornos de la microcirculaci´ on en el caso de la toma de agentes de contraste por rayos X, NMR o ultrasonidos. 50

5. Utilizaci´on de iloprost o de un clatrato con iloprost seg´ un la reivindicaci´ on 3. 6. Utilizaci´on de cicaprost o de un clatrato con cicaprost seg´ un la reivindicaci´ on 3. 55

7. Utilizaci´on de eptaloprost o de un clatrato con eptaloprost seg´ un la reivindicaci´ on 3. 8. Utilizaci´on de a´cido 5 - [(E) - (1S,5S,6S,7R) - 7 - hidroxi - 6 - [(3S,4S) - 3 - hidroxi - 4 - metil 1,6 - nonadiinil] - biciclo - [3.3.0]oct - 3 - iliden] - pentanoico o con el correspondiente clatrato seg´ un la reivindicaci´on 3.

60

13

ES 2 114 570 T3 9. Utilizaci´on del a´cido 5 - [(E) - (1S,5S,6S,7R) - 7 - hidroxi - 6 - [(3S,4S) - 3 - hidroxi - 4 - metil - 1,6 - nonadiinil] - biciclo - [3.3.0]oct - 3 - iliden] - 5 - fluoro - 3 - oxa - pentanoico o con el correspondiente clatrato seg´ un la reivindicaci´ on 3. 5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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