AISLAMIENTO Y TIPIFICACION DE UNA CEPA DE HERPES VIRUS BOVINO I , DEL a rlPo VULVOVAGINITIS PUSTULAR INFECCIOSA. Arcelia Alvarado Islasb Alvarado Aguilar Seth~nb Pedro Mejia sanchezb Octavio De Paz Villafan b Concepci6n Vilchis Melgarejob RESUMEN De un estudio serol6gico realizado en la Comisi6n del Lago de Texcoco, Edo. de Mexico, fueron seleccionados dos bovinos con altos niveles de anticuerpos contra el Herpes Virus Bovino I (BHV-1). EI virus se reactiv6 con dexametazona, aislandolo a partir de una lesi6n vesicular en vulva. Se caracteriz6 biol6gicamente mediante inoculaci6n en dos becerras libres de anticuerpos contra el BHV-1; una por via intranasal y otra por via intravaginal, con la cepa de Campo, titulo viral de 105.8TCIDSO%. La becerra inoculada por via nasal presento eritema en la mucosa de los ollares, y la inoculada por via vaginal, lesiones drasticas que iniciaron con eritema y finalizaron con necrosis en vulva. En ambas se desarrollaron anticuerpos contra el BHV-1. Por otra parte, se. inocularon dos grupos de conejos, uno con la cepa de Campo y otro con la cepa de referencia IBR 758, en los que se realizaron pruebas de sueroneutralizacion cruzada con resultados positivos. Finalmente, se realiz6 la diferenciaci6n entre las cepas IBR 758, Colorado y de Campo, con la medici6n del tamano de placas formadas en la titulaci6n de la infectividad; quedando estas dentro de un rango de 0.5 a 2.5 mm. de diametro. En la caracterizaci6n bioquimica, se compararon los perfiles de polipeptidos estructurales de la cepa de Campo y de referencia (IBR 758), siendo estos similares para ambas; detectandose 18 protein as en la de Campo y 17 en la de referencia (IBR 758), encontrando en la detecci6n una mayor abundancia de la protein a VP4; 10 cual es caracterlstico de las cepas tipo vulvovaginitis pustular infecciosa (IPV). Palabras Clave: Vulvovaginitis Pustular Infecciosa, Rinotraqueitis Infecciosa Sovina, Herpes Virus Bovino Tipo I Tec • Pecu. Mex. Vol. 31 No.2 (1993)

abortos y balanopostitis (1, 2). La manifestaci6n de estas formas clinicas va a depender de diversos factores como: cepa involucrada, dosis, edad, estado inmune de los animales, etc. La vulvovaginitis es la forma cHnica que fue primeramente descrita en Europa (3) y es una de las presentaciones mas importan­ tes desde el punta de vista econ6mico. Hasta la techa, en nuestro pais, no habfa sido posible mediante los metodos tradicfonales, poder diterencias entre las cepas pat6genas que producen las manifestaciones 'cHnicas descritas, asf como entre estas y las cepas vacunales.

INTRODUCCION EI virus de la Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR), conocido como Herpes Virus Bovino 1 (BHV-1), es un agente infeccioso de los bovinos capaz de producir gran variedad de manifestaciones clfnicas como: afecciones del aparato respiratorio, conjun­ tivitis, encefalitis en becerros, vaginitis (IPV), a) Recibido para su publicaci6n el 17 de diciembre de 1992. b) Proyecto IBR. CENID.Microbiologia, INIFAP­ . SARH, Kilometro 15.5 carretera Mexico·Toluca, C.P. 05' 10. MexiCO, D.F.

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Esto ultimo, tier en los estudios r ta una alta incid informandose a tos. Sin embar sentativo de est canace si la S€ cepas vacunale estas ultimas, te de cepas que ir reproductivos 0 EI gran inte nuestro pars y Norteamerica, r contar can me cepas de BHV-1 la enfermedad vacunaci6n intel EI presente ti el estudio de un zona, donde se pas contra el BI­ Texcoco, Mex. MATERIALES't

CULTI Se emplearc de la Ifnea MDBf ney), mantenida: Modificado supl bovino, caldo ( estreptomicina ) CE Las cepas vir IBR 758, can titl letal en cultivo d cepa Colorado, TCID50%. AISU Durante un e en la "Comisi6n ~ de Mexico, se ~ (hem bra y mach, contra el BHV-1 fueron trasladac CENID-Microbic cuarentena y se, durante cuatro ( Posterior al trate

Esto ultimo, tiene gran importancia ya que en los estudios precedentes, se nos presen­ ta una alta incidencia de anticuerpos (4, 5), informandose ademas algunos aislamien­ tos. Sin embargo, no se sabe 10 repre­ sentativo de estos resultados, pues se des­ conoce si la seroconversi6n es debida a cepas vacunales 0 pat6genas y dentro de estas ultimas, tampoco se sabe si se trata de cepas que indican signos respiratorios, reproductivos 0 nerviosos. EI gran intercambio de bovinos entre nuestro pais y los Estados Unidos de Norteamerica, reafirma la importancia de contar con metodos para diferenciar las cepas de BHV-1, ya que en el pars vecino, la enfermedad es endemica y se realiza vacunaci6n intensiva. EI presente trabajo tiene como objetivo, el estudio de un aislamiento hecho en una zona, donde se habian detectado anticuer­ pos contra el BHV-1 : Comisi6n del Lago de T excoco, Mex.

se obtuvieron muestras de exudado nasa', ocular y vaginal, as! como tejido vaginal. Ademas, se obtuvieron muestras sanguineas los dfas 0,3,7,13 Y 15, obser­ vando al mismo tiempo, sl existfa 0 no la presencia de signos 0 lesiones atribuibles al BHV-1. Para el alslamiento viral, se inocularon monoestratos celulares de la linea MDBK 100% confluentes con las muestras de ex­ udados y tejido vaginal, constatando el efecto citop,Hico a las 24 y 48 horas postinfecci6n. La detecci6n de los niveles de anticuerpos alcanzados, fue mediante la tecnica de sueroneutralizaci6n en placa (9), utilizando para la prueba la cepa de refer­ encia IBR 758 Y la titulaci6n de la cepa de Campo aislada por la tecnica de Reed and Muench (10, 11). PRUEBA BIOLOGICA EN BOVINOS Se emplearon dos becerras de aproximadamente 6 meses de edad, libres deanticuerpos contra el BHV-1, a las que se mantuvo en cuarentena. La primera de elias, se inocul6 por via intranasal, depositando 1 ml de suspensi6n viral (cepa de Campo) por fosa nasal. La segunda por via intravaginal, inoculando 1 ml en mucosa vaginal y 0.5 ml en genitales externos. De ambas becerras, se obtuvieron muestras de exudado nasal, ocular y vaginal, los dias 1 al 8 posteriores a la inoculaci6n, a fin de constatar la excreci6n viral (7). Se obtuvieron muestras sanguineas los dfas 0, 3, 5, 7, 9, 14, Y 19, para la detecci6n de los titulos de anticuer­ pos par la tecnica de sueroneutralizaci6n, observando al mismo tiempo la presencia de signos 0 lesiones sugestivas al BHV-1. PRUEBA BIOLOGICA EN CONEJOS Con la finalidad de observar si existfa identidad entre la cepa de Campo aislada y la de referencia IBR 758, se trabaj6 con dos grupos de conejos, formados cada uno de ellos por un adulto y dos gazapos, ademas de un grupo control con un adulto y un gazapo. EI grupo 1 fue inoculado con la cepa de Campo aislada, el grupo 2 con la cepa de referenda IBR 758 Y el grupo 3 (control), con

MATERIAlES Y METODOS CULTIVO DE TEJIDOS Se emplearon monoestratos celulares de la linea MDBK (Madin Darby Bovine Kid­ ney), mantenidas en mediode cultivo MEM­ Modificado suplementado, con suero fetal bovino, caldo de tripticaseina y fosfato, estreptomicina y penicilina. CEPAS VIRALES Las cepas virales de referencia fueron la IBR 758, con titulo de 106 .4 TCI D500/0 (Dosis letal en cultivo de tejidos 50%), as! como la cepa Colorado, con titulo viral de 106 .3 TCID500/0. AISLAMIENTO VIRAL Durante un estudio serol6gico realizado en la "Comisi6n del Lagode Texcoco", Edo. de Mexico, se seleccionaron dos bovinos (hembra y macho), con titulo de anticuerpos contra el BHV-1 de 1:32. Ambos anirnales fueron trasladados a las instalaciones del CENID-Microbiologia, se les mantuvo en cuarentena y se les trat6 con dexametazona durante cuatro dias consecutivos (6, 7, 8). Posterior al tratamiento, duante nueve dfas

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~------------------

..................--~

medio de cultivo esteril. En todos y cada uno concentraciones 20, 40, 60 Y 80 Jtg/ml; pozos 6 al 9 la cepa IBR-758 en el mismo de ellos se emplearon las vias: intravenosa, orden de concentracion y en el pOlO 10 la intra peritoneal·, intraconj untival, intradermica, intranasal e intravaginal. . proteina control. EI corrimiento fue por 4-5 Se colectaron muestras sangulneas los horas y la tindon fue con azul de coomasie dfas3, 7, 9,13, 16y21, observandoal mismo (14,15,16). tiempo sus constantes fisiologicas (12). La RESULTADOS detecdon de anticuerpos fue por la tecnica de sueroneutralizacion en placa por dos AISLAMIENTO VIRAL ocasiones: en la primera se utilizo la cepa Posteriormente al tratamiento con de referencia IBR 758 Y en la segunda la dexametalOna, ambos bovinos tuvieron cepa de Campo aislada. ligeros incrementos de temperatura (0.5 C), CARACTERIZACIONPOR MEDICION DE el macho con abundante secrecion nasal y PLACAS la hembra con exudados nasal y vaginal, asl Mediante la tecnica de tituladon de la como la presencia de vesiculas en vulva a infectividad por recuento de placas (10, 11), partir del octavo dfa (fotograffa 1). se contaron y midieron en un microscopio La presencia viral en los monoestratos estereoscopico las placas IIticas celulares infectados con los exudados se producidas por la cepa de Campo, comparandose con las formadas por las • determino en base al efecto dtopatico entre las 24 y 40 horas postinfeccion (cuadro 1), cepas de referenda IBR 758 Y Colorado concardando la positividad de las muestras (13). con la abundanda en el tipo de secrecion CARACTERIZACION POR PRUEBA colectada. Se selecciono el aislamiento BIOQUIMICA Para la realizacion de la electrofaresis de proveniente de tejido vaginal para la replicacion y estudios superiores en base a proteinas estructurales en geles de su pureza, siendo el titulo viral de 105 .8 poliacrilamida, se emplearon las cepas IBR D 758 Y la cepa de Campo, replicadas previa­ TCI 50%. La grafica No.1 muestra la evolucion de mente en la linea celular MDBK. Las suspen­ los niveles de anticuerpos en los animales siones virales obtenidas fueron clarificadas tratados. Puede observarse que para el dla por centrifugacion (3000 xg/10 minutos), o habfan descendido en ambos animales a seguidas de ultracentrifugacion (40 000 1:4, y para los d las 7 y 13 postratamiento, se xg/hora a 4C) por tres ocasiones. Final­ mente, los botones se resuspendieron en 1 incrementaron hasta 1:64 y 1:32 respectiva­ mente. ml de solucion buffer fosfato salina, pH 7.2. PRUEBA BIOLOGICA EN BOVINOS Se determino el contenido proteico de Despues de la infeccion con la cepa de ambas cepas par la tecnica de Lowry (10). Se elaboraron geles de poliacrilamida al 7.5 Campo, la temperatura en ambas becerras estuvo cerca de 10 normal, con ligeros in­ y 10% Ylas muestsras virales fueron dilufdas crementos, similares a los que aparecieron en concentraciones de 20,40,60 Y 80 ,Ltg de en los bovinos tratados con dexametazona. proteina par mililitro. Para los controles, se manejaron suspensiones celulares de la La becerra inoculada par via nasal presento ligero eritema en la mucosa de los ollares linea MDBK y una proteina control como (fot?grafla 2), y la inoculada por vIa genital, marcador de peso molecular (albumina leslones drasticas que iniciaron con bovina). La desnaturalizacion fue por eritema, formacion de vesiculas, pustulas y ebullicion con 2-mercaptoetanol por 5 minutos. Para el corrimento las muestras se finalizando con necrosis en vulva (fotograffa depositaron en 10 pozos de los geles de la 3). En los monoestratos celulares infec­ siguiente manera: pozo 1, control de celulas tados con los exudados se detecto nueva­ MDBK: Pozos 2 al 5 la cepa de Campo en

TEC.PE

ARTICLE ISOLATION AN VULVOVAGINIl Arcelia Alvarac Octavio de Pa:2

BIBLIOGRAPH SCROTAL CIRe FERTILITY IN Ti Ruben Dario M

INVESTIGATIO PREVALENCE ( OF TAMAULIPA Alfonso Falc6r

A RETROSPEC" WITH CYSTICEI ABAnOIR INC Rodrigo Rosari Alanis .............. .

ASSESSMENT ( CONTAMINATE MICE. Rene N. Marqu Salazar, Irma T

REPRODUCTIVI LAMBS IN TWO Jorge Urrutia IV Ochoa Corderc

FORAGE PROD TO FOUA cun Francisco O. C Sanchez Altam RESUMENES .. SUMMARIES ...

74

FOTOGRAFIA 1.- PRESENCIA DE VESICULAS EN VULVA, A PARTIR DEL OCTAVO

DIA POSTERIOR AL TRATAMIENTO CON DEXAMETAZONA.

CUADRO 1. EFECTO CITOPATICO EN MONOESTRATOS CELULARES MDBK INOCULADOS CON EXUDADOS DE LOS BOVINOS TRATADOS CON DEXAMETAZONA.

rlPo DE EXUDADO DIAS POSTERIORES AL TRATAMIENTO H E M

B R A

1

2

NASAL OCULAR VAGINAL

3

4

5

6

7

8

9

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

M

A C H

NASAL OCULAR

+

0 - Ausencia de efecto citopatico + Presencia de efecto citopatico

75

+

+

+

+

+

FOTOGRAFIA 2.- BECERRA EN PRUEBA BIOLOGICA, INOCULADA POR VIA INTRANASAL CON LA CEPA DE CAMPO AISLADA, CON ERITEMA Y VESICULAS EN MUCOSA DE LOS OLLARES A PARTIR DEL DIA DOS POST-INQCULACION.

FOTOGRAFIA 3.- BECERRA EN PRUEBA BIOLOGICA, INOCULADA POR VIA VAGINAL CON LA CEPA DE CAMPO AISLADA, CON ERITEMA, VESICULAS, PUSTULAS Y NECROSIS EN VULVA.

76

entre ambas cepas. CARACTERIZACION POR MEDICION DE PLACAS La grafica 3 muestra el tamano y numero de placas formadas por las cepas de refer­ encia IBR 758 Y Colorado, las que al com· pararse con las producidas por !a cepa de Campo, fueron similares en cuanto a su numero y diametro, siendo este ultimo de un rango de 0.5 a 2.5 mm. CARACTERIZACION POR PRUEBA BIOQUIMICA En la electroforesis de proteinas estruc­ turales en' geles de poliacrilamia, asi como en las diferentes concentraciones empleadas, los perfiles de los poUpeptidos fueron similares tanto en la cepa IBR 758 como en la de Campo (fotografia 4). En la comparaci6n esquematica de las protefnas, se detectaron 18 aminoacidos en la cepa de Campo y 17 en la IBR 758. ASI mismo, se observaron diferencias menores facilmente identificables, como la mov~idad y peso molecular ligeramente mayor en la proteina VP7: la presencia de una protefna

mente la presencia viral con base en el efec· to citopatico; concordando la positividad de las muestras con la Via de inoculaci6n empleada (cuadro 2). En la grafica No.2, se observa la formaci6n de anticuerpos en las becerras inoculadas con la cepa de Campo. La respuesta inmunol6gica inici6 a partir del noveno y catorceavo dfa, con tltulos de an· ticuerpos de 1:8 y 1:32. PRUEBA BIOLOGICA EN CONEJOS Tanto en los grupos 1 y 2, inoculados con capas pat6genas, como en el control, las constantes fisiol6gicas permanecieron dentro de 10 normal, sin secreciones ni lesiones.a la necropsia. Se detect6 la presencia de anticuerpos en los grupos 1 y 2 en el diagn6stico por sueroneutralizaci6n, tanto con la cepa IBR 758 como con la cepa de Campo, siendo en algunas ocasiones el titulo en una diluci6n mayor en los sueros trabajados con la cepa IBR 758, mientras que, el grupo control permaneci6 siempre negativo (Cuadro 3). Estos resultados demuestran la identidad

CUADRO 2. EFECTO CITOPATICO EN MONOESTRATOS CELULARES MDBK INOCULADOS CON EXUDADOS DE BECERRAS INFECTADAS CON LA CEPA DE CAMPO, AISLADA EN TEXCOCO EDO. DE MEXICO. INOCULACION TIPO DE EXUDADO

DIAS POSTERIORES A LA INOCULACION 1 234 567 8 ..............

~.-~~~~~.~~

BECERRAINOCULADA POR VIA VAGINAL NASAL OCULAR VAGINAL BECERRA INOCLILADA POR VIA NASAL

---~

--~-.-

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

~~~.~.-~-~---.--~.

NASAL OCULAR VAGINAL

+

- AUSENCIA DE EFECTO CITOPATCO + PRESENCIA DE EFECTO CITOPATICO

77

+

CUADRO 3.- NIVELES DE ANTICUERPOS EN CONEJOS INOCULADOS CON CEPA 758 0 CEPA DE CAMPO, OBTENIDOS EN PRUEBAS DE SUERONEUTRALIZACION CRUZADA CON LAS MISMAS CEPAS DIAS POSTERIORES A LA INOCULACION Y CEPA EMPLEADA EN SUERONEUTRALIZACION VIRUS NUM.DE INOCULADO ANIMAL

9

7

3 758

C*

758

C*

758

C*

13 758 C*

1:4

1:2

1.4

1 :4

1:8

1:4

1:8

1:4

1:2 758

16. _ - - _.........21_ . ­ 758 C* 758 C*

2

1 :8

1:8

1:4

1:2

1:4

1:2

1:2

1:2

1:2

1 :2

3

1:2

1:2

1 :4

1 :2

1:4

1:2

1:4

1 :2

1:4

1:2

4 CEPA DE

5

CAMPO

6

MUERTE

PO R

MANEJO

1:8

1:2

1:8

1:4

1:8

1:4

1:8

1:4

1:8

1:2

1:8

1:4

1 :8

1:4

1:4

1:4

7 CONTROL

8

.. C = CEPA DE CAMPO

CUADRO 4.- PESOS MOLECULARES DE LOS POLIPEPTIDOS ESTRUCTURALES DE LAS CEPAS 758 Y CE CAMPO, 9 DE LOS CUALES SON DEL TIPO GLiCOSILADO. - - - _ .. - - - - ­

PROTEINA

PESO MOLECULAR

.......___ . _ _ (p~_~Tqt-j_$L. VP1 VP2 VP3 VP4 VP5 VP6 VP7 VP8 VP9 VP10 VP11 VP12 VP13 VP14 VP15 VP16 VP17 VP18 VP19 VP20 VP21

180000 150000 139000 120000 99000 90000 86000 83000 76000 68000 66000 62000 54000 53000 43000 41 000 38000

78

PROTEINAS

__G~ICOSt~DAS.

+ + + + + + + + +

FOTOGRAFIA 4.- PERFIL DE LOS POLIPEPTIDOS ESTRUCTURALES DE LAS CEPAS 758 Y DE CAMPO. DE IZaUIERDA A DERECHA BANDA 1, CONTROL DE CELULAS MDBK, BANDAS 2 A 5, CEPA DE CAMPO EN CONCENTRACIONES 20,40,60 Y 60 mg; BANDAS 6, A 9, CEPA 758 EN MISMAS CONCENTRACIONES Y BANDA 10, PROTEINA CONTROL (ALBUMINA BOVINA).

menor situada entre la VP4 y VP5, con un peso molecular de aproximadamente 150,000 y 139,000 daltons, y una mayor abundancia en la VP4 de la cepa de Campo (Cuadro 5). En el cuadro 5 se obseNan los pesos moleculares de los polipeptidos de ambas cepas, estos fueron desde 180,000 daltons para la VP3, hasta 38,000 daltons para la VP19; de los cuales 9 fueron del tipo glicosilado.

DISCUSION Y CONCLUSIONES

Basandose en las manifestaciones clfnicas obseNadas tanto en los bovinos tratados con dexametazona, as! como en las becerras inoculadas con la cepa de Campo (eritema, lesiones vesiculares en vulva, etc.), se sospech6 que el BHV-1 es­ tudiado, era del tipo Vulvovaginitis Pustular Infecciosa (IPV). Corroborando esto con la _

79

GRAFICA 1.- EVOLUCION DE LOS NIVELES DE ANTICUERPOS EN DOS BOVINOS TRATADOS CON DEXAMETAZONA DURANTE CUATRO DIAS CONSECUTIVOS PARA EL AISLAMIENTO VIRAL.

1:128

TITULO DE ANTICUERPOS .----~---------------------,

1:64 1:32 1:16 1:8 -

1:2 OL----~~----~----~----~

o

6

15

10

DIAS

CUADRO 5.­ COMPARACION ESQUEMATICA DE LAS PROTEINAS ESTRUCTURALES DE LA CEPA LOS ANGELES REPORTADAS POR PASTORETT Y COL. CON LA CEPA 758 Y DE CAMPO.

'H

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20

GRAFICA 2.- EVOLUCION DE LOS NIVELES DE ANTICUERPOS CONTRA EL VIRUS DE IBR EN DOS BECERRAS INFECTADAS EXPERIMENTALMENTE CON LA CEPA DE CAMPO AISLADA. 1:64

TITULOS DE ANTI CUERPOS '~----------------,

INOCUlACION VIA NASAL

1:32 1:16 INOCULACION VIA VAGINAL

1:8 1:4 1:2 0~==~===±==~===L~----~--L-------~------~

o OIMH08T1CO

5 pan

25

20

15

10

DIAS

IIUI!ROHI!!UmAlIZI!CIOH'

OON LA OS,"" DE RliFERIHClA IIIR 158 .

GRAFICA 3.- TAMANO Y NUMERO DE PLACAS OBTENIDAS CON LA CEPA DE CAMPO Y DOS CEPAS DE REFERENCIA. NUMERO DE PLACAS

14~----------------------------------

__________

OOlOI"lACO

12 10 8 6

4 2 oL-~~~~~-L~~~~~~~~__-L~~~~~~

o

0.11

1.0

1.11

0.11

1.0

1.8

.t." ...

DIAMETRO (Mllfmetros) 81

0.1f

1.0.. 1.8

1.0

positividad en los aislamientos virales, a par­ tir de las muestras de exudado y tejido vaginal. Resultados comparables a los ob­ tenidos por Rossi y colaboradores (7). Algunos autores (12) afirman que el con­ ejo es un buen modelo de laboratorio para la presentaci6n de signos y lesiones causadas por el BHV-1. En este caso, nin­ guno de ellos present6 alteraciones en sus constantes fisiol6gicas ni lesiones; sin em­ bargo, respondieron inmunogEmicamente, haciendo posible la realizaci6n de pruebas de sueroneutralizaci6n cruzada y con ello corroborar nuevamente, que la cepa pertenecia al tipo BHV-1. En cuanto ala caracterizaci6n de la cepa de campo por el tamano y numero de las placas formadas por el virus, esta fue similar a las cepas de referencia IBR-758 y Colorado. permaneciendo dentro de un mismo rango. Estos resultados se asemejan a los obtenidos por Pastoret y colaboradores (Cuadro 5) al comRarar las cepas los Angeles 92/2/w y 89/4/W9 . Finalmente, en la comparaci6n de las proteinas estructurales de la cepa de Campo y la IBR-758, la similitud en los per­ files de sus bandas protefcas, asi como el numero, movilidad y peso molecular, nos conduce a aflrmar que la cepa de Campo alslada es un Herpes Virus Bovino 1. La mayor abundancia en la proteina VP4 es caracterfstico de las cepas tipo Vul­ vovaginitas Pustular Infecciosa (IPV), segun 10 informa Pastoret y colaboradores (17). SUMMARY Two cattle, strong positivies to a neutralizing antibody test against Bovid herpesvirus 1 (BHV1), were selected from a contaminated experimental farm (Texcoco Mexico). After dexamethasone treatment, the BHVI virus was reactived and isolated from a vaginitis lesion of one of these animals. Two antibody free female calves, to BHV1 were infected with the isolated virus, one of them by intranasal route and the other by genital route. The genital route inoculated calf, developed drastic necrotic lessions, in vaginal mucosa and the intranasal route inoculated calf developed some erythema in nasal mucosa. After infection, both calves developed specific antibodies to the BHV1 virus. On the other hand, one group of rabbits were inmunized against the isolated virus and

82

a second group of rabbits were inmunized against 758 BHV1 reference strain, Sera of these animals reacted with both strains after inmunization, Isolated virus and 758 strains have been compared on the basis of the mean sizes of their plaques produced in MDBK cells. No differences was found (0.5 to 2.5 mm diametre range fQr both strains). Structural proteins of isolated virus and 758 strain were compared by polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weights of the structural polypeptides of both strains are distributed in the same way. Isolated virus differed in VP4 polypeptide. This specific variation is charac­ teristic of IPV BHV1 strains. Key Words: Infectious Pustular Vulvovaginitis, Infec­ tious Bovine Rhinotracheitis, Bovid Herpesvirus 1

FOTOGRA ES'

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CO CE 10,

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menor situada peso molecul 150,000 y 139, abundancia en (Cuadro 5). En el cuadr moleculares de cepas, estos fu para la VP3, h, VP19; de los glicosilado.

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