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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 185 701 kInt. Cl. : A01M 1/00, A01M 1/02

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 95916463.3 kFecha de presentaci´on: 21.04.1995 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 758 194 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 19.02.1997

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54 T´ıtulo: Un nuevo sistema de trampa para moscas de la fruta.

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73 Titular/es: The United States of America

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72 Inventor/es: Heath, Robert R. y

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74 Agente: Lehmann Novo, Mar´ıa Isabel

30 Prioridad: 22.04.1994 US 231213

Represented by The Secretary of The Department of Agriculture Washington, DC 20250, US

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.05.2003

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 185 701 T3

01.05.2003

Aviso:

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Epsky, Nancy D.

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 185 701 T3 DESCRIPCION Un nuevo sistema de trampa para moscas de la fruta. 5

Antecedentes del invento Campo del invento

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El presente invento se refiere a un nuevo m´etodo y a un nuevo aparato para vigilar y/o controlar moscas de la fruta de la familia de los tefr´ıtidos utilizando est´ımulos qu´ımicos y visuales. Descripci´ on de la t´ ecnica

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El control de las moscas nocivas frug´ıvoras reviste una considerable importancia econ´ omica para la producci´ on y la exportaci´ on de frutas y vegetales. Los agentes reguladores y de cuarentena dedican esfuerzos sustanciales a detectar especies reci´en introducidas de moscas de la fruta, econ´ omicamente importantes. La mosca mediterr´ anea de la fruta, Ceratitis capitata constituye una plaga frug´ıvora importante debido a su amplia distribuci´ on y a su importante gama de hospedantes (Enkerlin y otros, en World Crop Pests, vol. 3A; Moscas de la fruta, su biolog´ıa, enemigos naturales y control, de Elsevier Science Publishers, 1989). Debido a la amenaza que suponen y al potencial de su introducci´ on en los EE.UU., se ha puesto mucho ´enfasis en la detecci´on y erradicaci´on de la C. capitata. El desarrollo de se˜ nuelos mejorados es necesario para vigilar y eliminar los individuos de estas y otras moscas nocivas de la fruta, as´ı como para impedir el establecimiento de colonias en zonas que, en la actualidad, no padecen estas plagas. Los m´etodos desarrollados para vigilar, controlar y erradicar las moscas de la fruta frug´ıvoras (Tefr´ıtidos) se han basado de manera extensiva en el uso de atrayentes qu´ımicos. Como se˜ nuelos para especies de Dacus se utilizan metil-eugenol m´as dibromo, cuelure m´ as dibromo, sales de amonio y una mezcla de 1,7 dioxaspiro[5,5] undecano con un α-pineno o n-nonanal y espiroacetal. Como se˜ nuelo para especies de Rhagoletis se utilizan una composici´on de acetato de hexilo, acetato de (E)-2-hexen-1ilo, butil2-metilbutonato, hexanoato de propilo, propanoato de hexilo, hexanoato de butilo, y butonato de hexilo. El Trimedlure (Beroza y otros., en J. Agric. Food Chem., 9:361-365, 1960) es utilizado para atraer a las moscas mediterr´aneas macho de la fruta. Aunque el Trimedlure es eficaz para atraer a las moscas mediterr´ aneas macho de la fruta, s´ olo es d´ebilmente activo a la hora de atraer o es totalmente ineficaz para atraer a las moscas mediterr´ aneas hembra de la fruta (Nakagawa y otros, en el Journal of Economic Entomology 63: 227-229 1970). Los se˜ nuelos usuales utilizados corrientemente para vigilar y detectar plagas frug´ıvoras son cebos de prote´ınas tales como hidrolizado de levadura en fermentaci´ on (Greany y otros, Ent. exp. & Appl., 21: 63-70, 1977) e hidrosilado de prote´ınas (McPhail, en J. Econ. Entomol, 32; 758-761, 1939). El problema con los se˜ nuelos de prote´ınas es que capturan gran n´ umero de insectos no buscados. Adem´ as, los u ´ nicos se˜ nuelos que est´an disponibles para atraer a las moscas de la fruta, tanto hembras como machos, son los cebos de prote´ınas. Las moscas de la fruta adultas necesitan az´ ucar para sobrevivir (Christenson & Foote, en Annual Review of Entomology 5: 171-192,1960), y la secreci´on dulce de los insectos hom´opteros est´a reconocida como una importante fuente de alimento para los tefr´ıtidos adultos (Christenson y otros, en Annual Review of Entomology 5: 171-192,1960): Las moscas hembra de la fruta tambi´en necesitan prote´ınas para asegurar su fecundidad y esta necesidad de prote´ınas es la base principal para las trampas para detecci´on de moscas hembra de la fruta. Las trampas McPhail, que son trampas de vidrio en forma de campana con un dep´ osito de agua (Newell, en Journal of Economic Entomology 29: 116-120, 1936) cebadas con prote´ınas, se utilizan com´ unmente para vigilar las moscas de la fruta en todas las zonas frut´ıcolas del mundo. Las trampas McPhail son poco pr´ acticas y su uso presenta numerosas desventajas. El servicio de la trampa requiere la adici´ on de agua y de cebo en una forma algo dif´ıcil, para lo cual la trampa es vuelta boca abajo, se a˜ nade el cebo y, luego, se devuelve a la trampa a una posici´ on erecta. Este procedimiento tiene como resultado, con frecuencia, que se derrame el cebo y el cebo derramado se convierte en una fuente de alimento para las moscas fuera de la trampa. La retirada de los insectos atrapados tambi´en exige un esfuerzo considerable, ya que el contenido de la trampa ha de ser filtrado a trav´es de un tamiz para separar los insectos de la soluci´on del cebo. Las soluciones de cebo de prote´ınas capturan gran n´ umero de insectos no buscados y se requiere un tiempo considerable para separar las moscas de la fruta nocivas la plaga de los insectos no buscados. Las moscas de la fruta recuperadas de estas trampas est´ an, frecuentemente, muy descompuestas, llegando a faltarles partes. Esto incrementa la dificultad para diferenciar las moscas est´eriles marcadas de las moscas f´ertiles no marcadas cuando se utilizan estas trampas en conjunto con programas de liberaci´on de insectos est´eriles. Otros factores que contribuyen a dificultar el despliegue de trampas McPhail incluyen el tama˜ no y el peso de la trampa y la 2

ES 2 185 701 T3 naturaleza fr´ agil del vidrio.

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Se sabe que de los cebos de prote´ınas se liberan centenares de compuestos (Morton & Bateman, Aust. J. Agric. Res. 32:905-916, 1981). Ejemplos de algunos componentes vol´ atiles de cebos para insectos a base de prote´ınas hidrolizadas comerciales son fenilacetaldehido, ´acido ac´etico, alcohol de furfurilo, 2acetilfurano, benzaldehido, metanol, 2-acetilpirol, furfural, 5-metil-2-fenil-2-hexenal, 5-metil-2[(metiltio)metil]-2-hexenal y amon´ıaco. El amon´ıaco (Bateman & Morton, Aust. J Agric. Res. 32:883-903, 1981; Mazor y otros, en Entomol. Exp. Appl. 43:25-29, 1987), el a´cido ac´etico (Keiser y otros, Lloydia 38:141152, 1976) y diversos otros vol´ atiles (Buttery y otros, en J. Agric. Food Chem. 31:689-692, 1983) han sido investigados como atrayentes para las moscas de la fruta. Sin embargo, estos informes no ofrecen informaci´ on relacionada con las cantidades liberadas ni con las relaciones de los compuestos probados o con la efectividad de estos agentes qu´ımicos, en comparaci´on con las trampas McPhail. Se sabe que varias moscas de la fruta de la familia de los tefr´ıtidos son atra´ıdas por determinados colores y formas como reproducciones visuales de hojas o de frutas. Se ha informado que especies de tefr´ıtidos tales como la mosca de la fruta del Caribe, Anastrepha suspensa (Loew); la mosca del gusano de la manzana, Rhagoletis pomonella (Walsh), la mosca europea de la cereza, R. cerasi (L.), la mosca mediterr´ anea de la fruta y la mosca de la aceituna, son atra´ıdas hacia paneles rectangulares de color amarillo, es decir, se˜ nuelos visuales bidimensionales que imitan al follaje (Greany y otros, en Entomol. Exp. Appl. 21:63-70, 1977; Prokopy, en Environmental Entomology 1:720-726, 1972; Prokopy & Boller, en Journal of Economic Entomology 64: 1444-1447, 1971; Prokopy & Economopoulos, en Z. Ang. Entomol. 80:434-437,1976). Se ha informado que esferas pintadas, es decir, se˜ nuelos visuales tridimensionales que imitan a la fruta hospedante atraen a la mosca del gusano de la manzana (esferas rojo oscuro), a la mosca de la c´ascara de la nuez, R. completa Cresson, (esferas verdes), y a la mosca mediterr´anea de la fruta (esferas negras o amarillas) (Prokopy, Canadian Entomologist 109:593-596, 1977; Riedl & Hislop, Environmental Entomology 14: 810-814, 1985; Nakagawa y otros, Entomol, Exp. Appl. 24:193-198, 1978). En la actualidad todas las trampas que utilizan se˜ nuelos visuales, singularmente o en combinaci´on con atrayentes qu´ımicos se basan en el uso de materiales pegajosos para retener los insectos capturados. Estos materiales son dif´ıciles de utilizar y las trampas exigen un mantenimiento constante para retirar las numerosas moscas no buscadas capturadas y, tambi´en, para reponer el material pegajoso. Algunas especies de moscas de la fruta han sido atrapadas con una combinaci´ on de est´ımulos visuales de imitaciones de frutas o de hojas y se˜ nuelos qu´ımicos exentos de feromonas. Reising y otros, en Environmental Entomology 11:1294-1298, 1982, describen la captura de moscas del gusano de la manzana utilizando esferas rojas cebadas con vol´atiles sint´eticos de manzana. Riedl & Hislop, antes citados, informaron que la adici´on de carbonato de amonio como est´ımulo basado en alimentos, mejoraba la respuesta de las moscas de la c´ascara de la nuez ante rect´angulos amarillos y esferas verdes, pero a costa de una p´erdida de selectividad para dichas moscas. Nakagawa y otros, antes citados, informaron que la adici´ on del se˜ nuelo qu´ımico Trimedlure a rect´ angulos amarillos o a esferas negras, mejoraba la atracci´on para los machos de las moscas mediterr´aneas de la fruta. Se ha informado sobre combinaciones de se˜ nuelos a base de feromonas con imitaciones visuales. Se ha demostrado el ensayo en campo satisfactorio de trampas cebadas con feromonas sexuales para machos de la mosca de la aceituna, Dacas oleae (Gmelin), empleando la feromona producida por la hembra (Jones y otros, Bulletin of Entomological Research 73:97-106, 1983; Mazomenos & Haniotakis, en el Journal of Chemical Ecology 11:397-405, 1985). Se ha informado sobre la captura de moscas hembra de la fruta bas´ andose en feromonas producidas por los machos, en combinaci´ on con una esfera como se˜ nuelo visual, para la mosca mediterr´ anea de la fruta (Heath y otros, en el Journal of Chemical Ecology 17:1925-1940) y para la mosca de la papaya, Toxotrypana curvicauda Gerstaecker, (Landolt y otros, en Environmental Entomology 21: 1154-1159, 1992). La atracci´ on de las moscas hembra de la fruta por feromonas de machos solamente ocurre cuando la mosca hembra est´ a fisiol´ ogicamente preparada para aparearse. As´ı, las moscas hembra de la fruta pueden ser atra´ıdas por feromonas sexuales producidas por los machos s´olo durante breves per´ıodos de su vida adulta, y en los procedimientos de captura est´andar no se utiliza ninguna en la actualidad. Hasta la fecha, no existe ning´ un sistema, basado en alimentos, que atraiga tanto a los machos como a la hembras de la mosca de la fruta que no utilice una soluci´ on de cebo acuosa en trampas de vidrio o agentes qu´ımicos sint´eticos en trampas con material pegajoso para capturar estas moscas de la fruta. As´ı, son necesarios m´etodos m´as convenientes para proporcionar una trampa “seca” para insectos, para vigilar la mosca mediterr´anea de la fruta. Sumario del invento Por tanto, un objeto del presente invento es proporcionar una trampa para vigilar y/o controlar in3

ES 2 185 701 T3 sectos nocivos frug´ıvoros empleando un est´ımulo qu´ımico basado en alimentos. Otro objeto del presente invento es proporcionar una combinaci´ on de est´ımulos visuales y qu´ımicos que atraiga a los insectos nocivos frug´ıvoros y los induzca a quedar atrapados. 5

Otro objeto del presente invento es proporcionar una trampa cil´ındrica para insectos nocivos frug´ıvoros, que contenga un cebo qu´ımico a base de alimentos.

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Todav´ıa otro objeto del presente invento es proporcionar una trampa para insectos nocivos frug´ıvoros que contenga un cebo qu´ımico a base de alimentos, preparado con acetato de amonio y 1,4 diaminobutano (putrescina). Otro objeto del presente invento es proporcionar una trampa para insectos nocivos frug´ıvoros que incluya un panel interior t´ oxico.

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Todav´ıa otro objeto del presente invento es proporcionar una trampa para capturar selectivamente insectos nocivos frug´ıvoros sexualmente inmaduros que no se han apareado, sexualmente maduros que no se han apareado o sexualmente maduros ya apareados. 20

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Otro objeto del presente invento es proporcionar una composici´ on para atraer insectos nocivos frug´ıvoros, que incluye acetato de amonio y 1,4 diaminobutano. Otro objeto del presente invento es proporcionar una composici´ on acuosa que puede aplicarse como pintura, que contiene un estimulante del deseo de alimentarse, un agente t´ oxico y un pigmento para matar insectos nocivos frug´ıvoros. Otros objetos y ventajas del invento resultar´ an evidentes a partir de la siguiente descripci´ on. Breve descripci´ on de los dibujos

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La Figura 1a muestra el cuerpo de la trampa en un plano u ´nico. La Figura 1b muestra el aparato del invento en vista en despiece ordenado.

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La Figura 1c muestra el montaje de una tapa de extremo del dispositivo del invento. La Figura 2 muestra los reg´ımenes de liberaci´on de amon´ıaco que se utilizaron en experimentos con dosis bajas, medias y altas.

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La Figura 3a muestra la comparaci´on de los porcentajes de hembras de moscas mediterr´aneas de la fruta capturadas con trampas que no contienen agentes qu´ımicos, solamente acetato de amonio, solamente putrescina, y acetato de amonio y putrescina. Las barras de un grupo (dosis baja frente a dosis media) que tienen la misma letra, no son significativamente diferentes.

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La Figura 3b muestra la comparaci´on de los porcentajes de machos de moscas mediterr´aneas de la fruta capturadas con trampas que no contienen agentes qu´ımicos, solamente acetato de amonio, solamente putrescina, y acetato de amonio y putrescina. Las barras de un grupo (dosis baja frente a dosis media) que tienen la misma letra, no son significativamente diferentes.

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La Figura 4a muestra la comparaci´on de los porcentajes de hembras de moscas mediterr´aneas de la fruta capturadas utilizando material sint´etico con trampas transparentes y de distintos colores. Las barras que tienen la misma letra no son significativamente diferentes. La Figura 4b muestra la comparaci´on de los porcentajes de machos de moscas mediterr´aneas de la fruta capturadas utilizando material sint´etico con trampas transparentes y de distintos colores. Las barras que tienen la misma letra no son significativamente diferentes.

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La Figura 5a muestra la comparaci´on de los n´ umeros de hembras de moscas mediterr´ aneas de la fruta capturadas con dos versiones de la nueva trampa frente a una trampa de vidrio est´ andar, cebada con agua y prote´ınas, (barras), y el porcentaje de moscas no apareadas por trampa (fragmento de gr´ afico de tarta) utilizando una dosis baja de cebo sint´etico. Las barras que tienen la misma letra no son significativamente diferentes.

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La Figura 5b muestra la comparaci´on de los n´ umeros de hembras de moscas mediterr´aneas de la fruta, hembras, capturadas con dos versiones de la nueva trampa, frente a una trampa de vidrio est´ andar, cebada con agua y prote´ınas (barras), y el porcentaje de moscas no apareadas por trampa (fragmento de gr´ afico de tarta) utilizando una dosis media de cebo sint´etico. Las barras que tienen la misma letra no son significativamente diferentes. La Figura 5c muestra la comparaci´on de los n´ umeros de hembras de moscas mediterr´aneas de la fruta, capturadas con dos versiones de la nueva trampa, frente a una trampa de vidrio est´ andar, cebada con agua y prote´ınas (barras), y el porcentaje de moscas no apareadas por trampa (fragmento de gr´ afico de tarta) utilizando una dosis elevada de cebo sint´etico. Las barras que tienen la misma letra no son significativamente diferentes. Descripci´ on detallada del invento

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El invento proporciona, por vez primera, un sistema para vigilar y/o controlar moscas de la fruta sin utilizar soluciones acuosas de prote´ınas. El m´etodo y el aparato del invento incorporan una combinaci´on singular de est´ımulos visuales y qu´ımicos que no s´olo atraen a las moscas de la fruta, sino que las inducen a entrar en un cilindro de manera que puedan ser atrapadas y se las pueda matar o controlar de otra forma. Hemos descubierto que podemos combinar un est´ımulo visual, que imite a la fruta o a las hojas hospedantes, con dos agentes qu´ımicos aislados a partir de cebos de alimentos amon´ıaco y 1,4 diaminobutano (putrescina). Cuando estos dos agentes qu´ımicos est´an presentes en cantidades efectivas, el aparato no s´ olo atrae a las moscas sino que, tambi´en, las hace entrar en la trampa, las retiene en ella y mata a las moscas atrapadas induci´endolas a alimentarse en un panel, en el interior de la trampa, que contiene un se˜ nuelo visual, un estimulador del apetito y un agente t´ oxico. Este es, asimismo, el primer uso de una combinaci´ on de un se˜ nuelo visual externo, agentes qu´ımicos sint´eticos basados en alimentos, y un estimulador del apetito, con un t´ oxico que provoca la muerte de las moscas de la fruta que responden al aparato. La atracci´on y la captura de moscas de la fruta con una trampa cil´ındrica cebada con una mezcla qu´ımica sint´etica fueron inesperadas, en vista de que la t´ecnica anterior ense˜ na que las moscas de la fruta no responden a se˜ nuelos visuales de forma cil´ındrica (Nakagawa y otros, Entomol. Exp. Appl., 1978, antes citado). Adem´as, se descubri´ o que las moscas hembra de la fruta con distintas edades fisiol´ ogicas, pueden ser atra´ıdas en forma selectiva merced a una bien definida liberaci´on de agentes qu´ımicos atrayentes. La capacidad para atraer a las hembras antes de que se apareen, incrementa en gran manera el valor del sistema de captura por cuanto permite la eliminaci´ on de las hembras antes de que ovopositen en la fruta. Aunque es sabido que de los cebos de prote´ınas se liberan numerosos agentes qu´ımicos, se desconoc´ıa hasta ahora la capacidad de atracci´ on de algunos de estos agentes qu´ımicos liberados a distintas dosis. Espec´ıficamente, aunque se ha sugerido el amon´ıaco como agente qu´ımico capaz de atraer a muchas moscas de la fruta, solamente se le ha observado, por ejemplo, una moderada capaz de atracci´ on para, por ejemplo, la mosca mediterr´ anea de la fruta (Baker y otros, en el Journal of Economic Entomology 83:2235-2245, 1990). Aunque est´a disponible una composici´ on comercial que contiene acetato de amonio que liberar´ a amon´ıaco, no se dispone de datos cuantitativos fiables relacionados con el r´egimen de liberaci´on de amon´ıaco a partir de esta composici´on. Adem´ as, no se hab´ıan descrito hasta ahora m´etodos para hacer variar el r´egimen de liberaci´on de esta composici´on. Hemos descubierto que es necesaria una mezcla de amon´ıaco (procedente de una composici´ on de acetato de amonio) y putrescina para atraer a las moscas de la fruta. Hemos descubierto que las moscas hembra de la fruta, dependiendo de su estado fisiol´ ogico, prefieren distintos reg´ımenes de liberaci´on de esta mezcla. Bas´andose en este descubrimiento, por ejemplo, pueden dise˜ narse trampas para capturar moscas hembra de la fruta sexualmente inmaduras que no se han apareado, sexualmente maduras que no se han apareado o sexualmente maduras que ya se han apareado, haciendo variar la cantidad de la mezcla qu´ımica liberada. Los aspectos singulares del dise˜ no de trampa incluyen aspectos tanto conceptuales como anal´ıticos del comportamiento de la mosca de la fruta. El dise˜ no de la trampa cil´ındrica es singular y proporciona una forma tridimensional que, vista por la mosca, se asemeja, aparentemente, a una fruta hospedante. De igual manera, como las moscas de la fruta vuelan contra el viento hacia fuentes de olores atractivos, una trampa con, al menos, tres orificios ofrece un sistema en el que se liberan agentes qu´ımicos con independencia de la direcci´on del viento. Adem´ as, la emisi´on de agentes qu´ımicos desde el interior de la trampa, tienta a las moscas a entrar en ella. El dise˜ no de la trampa permite utilizar una multitud de combinaciones de colores. El dise˜ no de la trampa result´ o particularmente dif´ıcil de conseguir debido a que la t´ecnica anterior no proporcionaba, por ning´ un lado, los mecanismos necesarios que dieran como resultado la retenci´on de las moscas atrapadas sin emplear materiales pegajosos. Bas´andose en observaciones realizadas sobre el comportamiento de las moscas que han entrado en la trampa, hemos 5

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descubierto que la naturaleza trasl´ ucida de la trampa pintada da como resultado la incapacidad de las moscas atrapadas para discernir que el orificio por el que han entrado tambi´en podr´ıa servir como v´ıa de escape. Las moscas encerradas en las trampas caminan, t´ıpicamente, siguiendo el per´ımetro del orificio y evitan la luz brillante del propio orificio. El dise˜ no de la trampa tiene zonas trasl´ ucidas, transparentes o que dejan pasar la luz en la parte superior y en la parte inferior y, adem´ as de servir como soporte estructural para la forma cil´ındrica, las a´reas transparentes de la parte superior y de la parte inferior aprovechan la respuesta instintiva de las moscas a ser imperativamente fotot´ acticas (a ir hacia la luz). Esta respuesta facilita el movimiento de las moscas capturadas hacia las partes superior o inferior de la trampa, en lo que se percibe como un mecanismo de escape pero, en cambio, el resultado es que las moscas se posan sobre paneles coloreados, que tambi´en son parcial o totalmente trasl´ ucidos, que contienen un fuerte estimulante del apetito en combinaci´ on con un t´ oxico. La t´ecnica anterior ense˜ na que las moscas de la fruta que tocan az´ ucar, por ejemplo sacarosa, con sus tarsos (pies) desarrollan una r´apida respuesta al az´ ucar para alimentarse y que puede mezclarse un t´ oxico con el az´ ucar y, as´ı, se proporciona un sistema letal para las moscas. Los sistemas previamente documentados emplean materiales granulados y no proporcionan instrucciones sobre c´ omo combinar un se˜ nuelo visual con un estimulante del apetito y un t´ oxico. Merced a una serie de esfuerzos de investigaci´on, hemos descubierto que una composici´ on de una soluci´ on acuosa de sacarosa y agente t´ oxico puede mezclarse con pinturas a base de agua. Esta composici´ on singular puede aplicarse como pintura sobre una superficie y, utilizando la pintura como se˜ nuelo visual, esta combinaci´ on atrae a las moscas encerradas en la trampa hacia las ´areas espec´ıficas que contienen el estimulante del apetito y el t´ oxico. El t´ oxico est´ a contenido en la trampa y se necesita una concentraci´ on m´ınima de agente t´ oxico en cada trampa, debido a la combinaci´ on de estimulante del apetito y se˜ nuelo visual presentado con el t´ oxico. La disposici´ on del sistema t´ oxico dentro de la trampa es cr´ıtica para proteger al t´ oxico contra condiciones ambiente adversas que puedan originar el deterioro del sistema t´oxico. Espec´ıficamente, la exposici´on al agua (por ejemplo, de lluvia) tendr´ıa como resultado la p´erdida del estimulante del apetito debido a la solubilidad de la sacarosa en el agua. La nueva combinaci´ on de est´ımulos visuales y qu´ımicos del invento, proporciona una herramienta para la detecci´on de la mosca de la fruta y para estimar la densidad de sus colonias, as´ı como medios para controlar estas plagas. La capacidad que aporta el invento para atraer a moscas de la fruta de ambos sexos, sugiere las siguientes aplicaciones beneficiosas desde el punto de vista econ´omico: (1) la detecci´on de una nueva infestaci´ on, (2) la vigilancia de colonias adultas existentes con el fin de predecir futuros niveles de infestaci´on para programar mejor (y reducir) el tratamiento con pesticidas usuales; y (3) el control de la reproducci´ on en colonias adultas atrayendo a una parte demogr´ aficamente significativa de la poblaci´on de hembras para su subsiguiente destrucci´ on.

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Una ventaja particular del invento es que incluye agentes qu´ımicos atrayentes, basados en alimentos y que atraen a las moscas de la fruta tanto hembras como machos. Como el invento da como resultado la captura o la muerte de las moscas hembra de la fruta que son sexualmente inmaduras o maduras, se hayan apareado o no, elimina directamente del campo el potencial reproductivo, reduciendo de forma eficiente las colonias potenciales de moscas de la fruta nocivas y salvando a frutas y vegetales de ser infestados. Otra ventaja del invento reside en que permite la detecci´ on de colonias y cambios de colonias de moscas de la fruta y proporciona medios para controlar estas moscas de la fruta en cultivos de fruta, para reducir o evitar las p´erdidas provocadas por las plagas. Hay varias caracter´ısticas del invento que influyen en su funcionamiento y su eficacia. Aqu´ellas incluyen el color de los est´ımulos visuales y el r´egimen de de liberaci´on de los est´ımulos qu´ımicos. El comportamiento del invento cuando se instala en un a´rbol hospedante viene dictado por la atracci´ on de los agentes qu´ımicos que acercan a las moscas a la trampa y por la respuesta a corta distancia de las moscas ante las caracter´ısticas visuales de los est´ımulos visuales. Se utiliza como sistema modelo la mosca mediterr´anea de la fruta, Ceratitis capitata. Sin embargo, el sistema es aplicable al control de otros insectos nocivos frug´ıvoros. Un experto con conocimientos normales en la t´ecnica podr´ıa determinar f´ acilmente qu´e se˜ nuelos visuales son necesarios para capturar una colonia espec´ıfica de moscas de la fruta de la familia de los tefr´ıtidos. Construcci´ on de la trampa. La trampa 10 (Figura 1b) comprende tres componentes principales: el cuerpo principal 12 de la trampa, que es un recipiente cil´ındrico pintado al menos parcialmente, fabricado de R R , hoja de acetato, MYLAR , cualquier material flexible, transparente, adecuado, tal como LEXAN R R y ACRYLITE , por ejemplo, con al menos tres orificios 14 (Figura 1a) que permiten butirato, BIVAX la entrada de los insectos, y que contiene un cebo 28, 30 y un agente t´ oxico 20, 21; dos tapas extremas 6

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retirables, 16, 17 para permitir un acceso r´ apido a la trampa para retirar los insectos, limpiarla y sustituir el cebo; dos colgadores de alambre 18, 19 que pueden montarse por fricci´on en los extremos del cuerpo 12 de la trampa, uno de ellos, 18, para unir los cebos 28, 30 en el interior de la trampa 10 y otro, 19, para mantener la trampa montada y sostener todo el conjunto de un a´rbol (Fig. 1b). Un cebo qu´ımico sint´etico 28, 30 para atraer a las moscas de la fruta y dos paneles t´oxicos 20, 21 para matar a los insectos que respondan a la trampa, est´ an situados en el interior de la trampa seca. El cuerpo principal 12 es una pieza rectangular de 15,0 cm de ancho (siendo a y b, cada uno, de 7,5 cm) x 30,0 cm de largo (siendo c, d, e y f, 5, 10, 10 y 5 cm, respectivamente) y 0,025 mm de grosor, de un material flexible transparente cortada, por ejemplo, de un rollo de 1,0 m de ancho x 30,5 m, de l´ amina de acetato transparente Grafix (P/N n´ um. 44008, de United States Plastics Corp., de Lima, OH, EE.UU.). Tres orificios 14 de 2,2 cm de di´ ametro est´ an cortados a lo largo del eje geom´etrico longitudinal, separados en 10 cm a la izquierda y a la derecha del centro. Una tira g 26 de 7,62 cm de anchura en el cuerpo principal 12, centrada tambi´en a lo largo del eje geom´etrico longitudinal del cuerpo principal 14 (a 3,81 cm de cada borde exterior), est´a pintada a pistola para proporcionar un se˜ nuelo visual. En esta investigaci´on puede utilizarse uno de tres colores brillantes, por ejemplo, naranja, amarillo o verde fluorescente (de pinturas ColorWorks Fluorescent Spray, de la Krylon Division de la Sherwin-Williams Co., de Solon, OH, EE.UU.). La pieza de pl´ astico rectangular pintada se enrolla para formar un cilindro de 9,0 cm de di´ ametro, con la superficie pintada mirando hacia dentro y los extremos solapados encintados juntos mediante el uso de una pieza 27 de 15 cm de longitud de cinta adhesiva por ambas caras Scotch TM Brand de 1,27 cm de ancho (de la 3M Corp., de St. Paul, MN., EE.UU.). El exterior de la trampa seca puede recubrirse con un material R R y TANGLE-FOOT . pegajoso, tal como, por ejemplo, adhesivo TANGLE TRAP Las dos tapas extremas 16, 17 retirables, una para la parte superior y otra para la inferior, se fabrican utilizando, por ejemplo, platos Petri de pl´ astico de calidad para laboratorio, de 100 x 15 mm, est´ andar (P/N n´ um. 3488-B28, de Thomas Scientific, de Swedesboro, NJ., EE.UU.). las dos mitades (Figura 1c) de los platos Petri se pegan utilizando cloruro de metileno, ya que una mitad es menor y ajusta dentro de la otra, formando la uni´ on resultante una peque˜ na garganta en la que puede montarse por fricci´on la pared del cilindro de pl´ astico (cuerpo principal). Tanto la tapa extrema superior como la inferior tienen un orificio de 0,16 cm que las taladra atraves´andolas por completo por el centro. Una pieza 19 de 35 cm de alambre de acero galvanizado, calibre 20, est´a enfilada a trav´es de todo el conjunto y se curva en un a´ngulo de 90◦ despu´es de salir por la tapa extrema inferior, manteniendo as´ı montada la trampa seca. La secci´on superior del alambre se curva para formar un gancho para colgarla de un a´rbol. Adem´ as del orificio central de la tapa extrema superior, un segundo orificio de 0,16 cm est´ a taladrado a 1,0 cm de ´el, para permitir que otra pieza peque˜ na (10 cm de longitud) del mismo alambre de acero 18, curvada a modo de gancho, sea utilizada como punto para colgar los cebos qu´ımicos 28, 30 dentro de la trampa. Paneles t´ oxicos. Dos peque˜ nos paneles 20, 21 de cart´ on, pintados (Figura 1b), que contienen un estimulador del apetito y una toxina, se sit´ uan en la superficie 23 (Figura 1b) de las tapas extremas empleando cinta adhesiva por ambas caras, y se utilizan para matar las moscas que entren en la trampa. El agente t´ oxico utilizado es, por ejemplo, metomil de calidad t´ecnica (de E.I. DuPont De Nemours and Co., de Newark, DL, EE.UU.; 98 %[Al]). Otros agentes t´ oxicos adecuados son, por ejemplo, Malation, Diclorvos y Naled. Se utiliza sacarosa de calidad ACS (de Mallinkrodt, Paris, KY), por ejemplo, como estimulador del apetito. Podr´ıa utilizarse cualquier az´ ucar. El se˜ nuelo visual de color es, por ejemplo, pintura de l´atex 100 % acr´ılica Hunter Green (de The Glidden Co., de Cleveland, OH, EE.UU.). El panel puede ser de color distinto del color aplicado al cilindro. Adem´as, el panel puede ser, por ejemplo, una pieza de cart´on coloreado a la que se le ha aplicado una soluci´ on de az´ ucar/t´ oxico y/o un material pegajoso. Se prepar´ o una mezcla de pintura/az´ ucar/pesticida en una relaci´ on de 1,0:0,5:0.01, disolviendo 18 mg de pesticida en 0,8 ml de agua y a˜ nadiendo luego esta mezcla a una soluci´ on de az´ ucar previamente mezclada (1 g de sacarosa en 3,2 ml de agua). Despu´es de combinada la mezcla de pesticida y az´ ucar, se a˜ nadieron 2,0 g de pintura y se agit´ o la mezcla. Se utiliz´o como sustrato para la soluci´on t´ oxica una pieza rectangular de cart´ on encerado de 13x8 cm. Se prepar´ o un borde exterior de 5 mm de ancho x 1 mm de grueso utilizando cinta adhesiva de Tefl´ on (Batik Protective Overlay, Berghol America, Concord, CA, EE.UU.) para mantener la soluci´ on sobre el cart´ on. Se transfirieron un total de 3,4 g de soluci´ on a un panel antes de transcurridas 2 horas desde la preparaci´ on y se dej´ o secar al aire antes de usarlo. El panel se cort´ o en ocho piezas de 4x3,25 cm y dos de estos paneles se situaron sobre las superficies 23 de las tapas extremas 16 y 17, en cada trampa. Agentes qu´imicos sint´eticos y reg´imenes de liberaci´ on utilizados para atracci´ on. Nuestra investigaci´on muestra que el amon´ıaco y la putrescina son liberados por los cebos de prote´ınas y que, cuando se 7

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utilizan acetato de amonio y putrescina en combinaci´on, sin interferencia por parte de otros agentes qu´ımicos liberados por los cebos de prote´ınas, ejercen una fuerte atracci´ on sobre las moscas de la fruta. El amon´ıaco, el a´cido ac´etico (del acetato de amonio) y la putrescina, se utilizan en combinaci´ on con los est´ımulos visuales en una cantidad efectiva. Una “cantidad efectiva” se define como la cantidad de mezcla qu´ımica que proporciona un r´egimen de liberaci´on de la mezcla desde una membrana que atrae a las moscas de la fruta a la posici´ on de un cebo a un r´egimen significativamente mayor que aqu´el al que son atra´ıdas las moscas hacia un lugar en el que no hay cebo. El acetato de amonio est´a contenido en una membrana de liberaci´ on hecha de, por ejemplo, polietileno, polipropileno, poli(cloruro de vinilo), Mylar y material acr´ılico, como lo describen Leonhardt y otros en Insect Pheromone Technology Chemistry and Applications, en ACS Symposium Series 190, 1982, y Kydonisus, en Controlled Released Pesticides, en ACS Symposium Series 53, 1977, que se incorporan a esta memoria como referencias. Tambi´en puede utilizarse una preparaci´ on comercialmente disponible de acetato de amonio a partir de una membrana de R (Concep Inc., Bend, OR, EE.UU.). Adem´as, la cantidad de amon´ıaco y liberaci´ on denominada BioLure de ´acido ac´etico puede cuantificarse como se describe en el Ejemplo 1 siguiente. Un margen de reg´ımenes de liberaci´ on preferidos es de, aproximadamente, unos 40 µg/h a 600 µg/h. Un margen m´ as preferido de reg´ımenes de liberaci´on es de 45-400 µg/h. Una cantidad m´ as preferida es de 45, 120 y 400 µg/h para las dosis baja, media y alta, respectivamente. Un margen de reg´ımenes de liberaci´on preferidos para el ´acido ac´etico es de, aproximadamente, 1,0 µg/h a 16 µg/h. Un margen de liberaci´ on m´ as preferido es de 1,5 a 13 µg/h. Una cantidad m´ as preferida es de 1,5, 3 y 13 µg/h para dosis baja, media y alta, respectivamente. Se pone 1,4 diaminobutano en un vial como preparaci´ on l´ıquida sustancialmente pura. Un margen preferido para el 1,4 diaminobutano es de, aproximadamente, 25-300 µl de una preparaci´ on l´ıquida sustancialmente pura (neta) de 1,4 diaminobutano. Un margen m´ as es de, aproximadamente, 50200 µl de una preparaci´ on l´ıquida sustancialmente pura de 1,4 diaminobutano, como antes se ha descrito. Una cantidad m´ as preferida es de 50, 100 y 200 µl para una dosis baja, media y alta, respectivamente. La membrana de liberaci´ on 30 y el vial 28 cuelgan, cada uno, del colgador 18 de alambre. Sin embargo, el parche y el vial pueden disponerse en cualquier punto dentro del cuerpo principal de la trampa. Factores tales como la densidad de la colonia de insectos, la estructura de la edad de la colonia objetivo, la temperatura, la velocidad del viento y el r´egimen de liberaci´on influir´ an sobre la respuesta de las moscas y, por tanto, sobre el n´ umero real de moscas atrapadas. Factores tales como la temperatura, la velocidad del viento y el sustrato de liberaci´ on, influir´ an sobre el r´egimen de liberaci´on de los agentes qu´ımicos. La cantidad de compuesto en un conjunto de circunstancias particulares que proporcionar´ a un r´egimen de liberaci´ on dentro del margen efectivo, puede determinarse f´ acilmente mediante una prueba en campo de respuesta a la dosis, como se describe en el Ejemplo 2 siguiente. En las trampas cebadas u ´nicamente con putrescina o en las vac´ıas se capturaron pocas moscas, machos o hembras. Excepto para las moscas mediterr´aneas macho de la fruta en los ensayos con dosis medias, el acetato de amonio s´ olo fue significativamente mejor que cualquier trampa vac´ıa o cebada s´olo con putrescina. La adici´ on de putrescina al acetato de amonio, sin embargo, increment´ o significativamente el porcentaje de capturas de hembras con respecto al acetato de amonio s´olo a cualquier dosis, e increment´o significativamente las capturas de moscas macho de la fruta con respecto a todas las otras trampas con dosis medias. La combinaci´on puede describirse como sin´ergica para las moscas mediterr´aneas de la fruta y, posiblemente, para otras moscas de la fruta. Color de la trampa. El color de la trampa afecta significativamente a la captura de moscas de la fruta. Se atraparon significativamente m´ as moscas mediterr´aneas hembra de la fruta en trampas verdes que en trampas transparentes. Las moscas mediterr´ aneas macho de la fruta prefer´ıan las trampas amarillas y las capturas en las trampas amarillas es significativamente mayor que en las trampas naranja. Las moscas mejicanas de la fruta (Anastrepha ludens [Loew]) no diferencian entre ninguno de los colores. No obstante, el porcentaje de moscas mejicanas de la fruta atrapadas es significativamente mayor en trampas de colores que en trampas transparentes. Los detalles de los experimentos que se realizaron para determinar el efecto del color de la trampa sobre la atracci´on de las moscas de la fruta, se describen en el Ejemplo 2. Usos del invento. El invento se utiliza como herramienta de vigilancia, control y/o detecci´on. Un m´etodo consiste en desplegar la trampa y tabular las capturas para determinar la magnitud y la situaci´ on de la infestaci´on por mosca de la fruta. Puede determinarse entonces el uso econ´omico de sistemas apropiados para la gesti´on de las plagas. El m´etodo de atrapar las moscas puede servir, tambi´en, como m´etodo de control y se describe con detalle en lo que sigue en el Ejemplo 3. El invento se utiliza en combinaci´on con la aplicaci´on de insecticidas u otras medidas de control. El invento se utiliza para atraer moscas y para inducirlas a entra en una trampa donde entran en contacto con una cantidad efectiva de agente t´ oxico con el fin de conseguir su control. Una “cantidad efectiva” del agente t´ oxico es aqu´ella que sea letal para un insecto expuesto a ella o que, al menos, no llegue a ser letal pero sea suficiente para incapacitar al insecto en cuanto a una futura actividad de apareamiento 8

ES 2 185 701 T3 o de puesta de huevos. Ilustrativos de la amplia variedad de agentes t´ oxicos que pueden utilizarse con el invento son, por ejemplo, Metomil, Malation, Diclorvos y Naled, o una combinaci´on de dos o m´ as de ellos. 5

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Otro m´etodo es el de control de las moscas de la fruta empleando el invento para detectar la situaci´ on y los l´ımites de infestaciones localizadas de mosca de la fruta, y emplear en la zona agentes quimioesterilizantes, biorreguladores, par´asitos, predadores u otros agentes de control biol´ ogico para las moscas de la fruta. Ejemplos Los siguientes ejemplos ilustran el uso del invento para el control de insectos nocivos frug´ıvoros utilizando la mosca mediterr´ anea de la fruta como modelo de prueba. Est´ an destinados a ilustrar adicionalmente el invento y no a limitar su alcance seg´ un queda definido por las reivindicaciones.

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Ejemplo 1 Se determin´o el r´egimen efectivo de liberaci´on de amon´ıaco a partir del cebo qu´ımico. 20

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Se˜ nuelos qu´ımicos. El cebo sint´etico utilizado en este estudio consiste en una mezcla de amon´ıaco, a´cido ac´etico y 1,4 diaminobutano (putrescina). Se utiliz´ o para todos los estudios una composici´on coR , mercial conteniendo 7 gramos de acetato de amonio a partir de una membrana de liberaci´ on (BioLure de Consep Inc., Bend, OR, EE.UU.). La composici´on libera amon´ıaco y a´cido ac´etico como vol´atiles. Se ajust´ o el r´egimen de liberaci´on del parche de acetato de amonio cambiando el a´rea expuesta de la membrana de liberaci´ on: El a´rea de la superficie expuesta de la membrana ensayada era de 1,0 cm2 (dosis 2 ametro baja), 1,4 cm (dosis media) y un parche completo con una superficie de membrana de 4,0 cm de di´ o una preparaci´ on sustancialmente pura de putrescina neta en o un a´rea de 6,3 cm2 (dosis alta). Se ensay´ un peque˜ no vial a 50, 100 o 200 µl por vial (dosis baja, media y alta, respectivamente). Las tasas de liberaci´ on de amon´ıaco desde los parches con las tres dosis se determinaron utilizando una sonda electroqu´ımica espec´ıfica para amon´ıaco, selectiva de iones (Orion, Boston, MA, EE.UU.). Se coloc´o un parche en un matraz Erlenmeyer, se purg´o el matraz durante 1 h con un flujo de aire de 1 litro por minuto y los vol´ atiles se dirigieron luego a un sistema de rociado que consist´ıa en un tubo de dispersi´on de gas (n´ um. 7198 de Ace Glass, Vineland, NJ, EE.UU.) dispuesto en un cilindro graduado que conten´ıa 100 ml de soluci´ on de ClH 0,05 N. Despu´es de una recogida, se ajust´ o la intensidad i´ onica de la soluci´on de muestra empleando NaOH 5M/EDTA dis´ odico 0,05M/metanol al 10 % conteniendo un indicador de color. Se prepar´ o una curva de calibraci´on de amonio est´ andar cada d´ıa que se realiz´o un an´ alisis. Se obtuvieron los reg´ımenes medios de liberaci´on a partir de parches con dosis baja, media y alta tras varios tiempos de exposici´on durante per´ıodos de 39, 38 y 28 d´ıas, respectivamente. Se colocaron los parches en una campana de laboratorio, con un flujo de aire de, aproximadamente 0,22 m por segundo a, aproximadamente, 23◦C cuando no se estaban analizando. Los resultados obtenidos por los estudios relativos a los reg´ımenes de liberaci´on de los parches de acetato de amonio se muestran en la Figura 2. Hubo un incremento significativo del r´egimen de liberaci´on de amon´ıaco con el tiempo (d´ıas) solamente para la dosis media. El r´egimen de liberaci´on se redujo ligera pero no significativamente con el tiempo para el parche con la dosis alta y se mantuvo constante para el parche con la dosis baja. Los reg´ımenes de liberaci´on iniciales [±SD] de amon´ıaco desde los parches con dosis baja y alta fueron de 44,6±4,9 µg por h y 405,2±168,7 µg por h, respectivamente. La liberaci´on de amon´ıaco a la dosis alta fue relativamente constante durante los primeros 21 d´ıas en que se analizaron los parches. En la actualidad no se dispone de ning´ un m´etodo anal´ıtico para cuantificar el r´egimen de liberaci´on de putrescina. Debido a la naturaleza higrosc´ opica de la putrescina, el basarse en la p´ erdida de peso del material resulta comprometido. La observaci´on de la disminuci´ on de la cantidad de putrescina en un vial con el transcurso del tiempo, indic´o que el r´egimen de liberaci´on relativo era proporcional a la cantidad de material en el vial. Es decir, la carga original de 50, 100 y 200 µl de material proporcionar´ıa reg´ımenes de liberaci´ on relativos de 1x, 2x, 4x, respectivamente. Ejemplo 2

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Los ensayos en el campo para demostrar la importancia del agente qu´ımico de dos componentes y del color de la trampa se llevaron a cabo en la finca Peruccini, situada en Palin, Guatemala, la naranja Citrus 9

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sinensis (L.) hab´ıa madurado durante estos ensayos y constituye un hospedante para la C. capitata y la A. ludens. Se colocaron trampas en naranjos para todos los ensayos, sigui´endose el protocolo est´ andar para su colocaci´on en un a´rbol (Anonymous, Florida Fruit Fly Detection Manual, USDA, APHIS, PPQ & FLDACS, DPI, Gainesville, FL, EE.UU., 1989, que se incorpora a esta memoria como referencia). Se retiraron las moscas de las trampas cada 2-3 d´ıas y se registraron los n´ umeros de machos y de hembras de C. capitata y de A. ludens. Inicialmente, los tratamientos se situaron al azar en un a´rbol; luego, se movieron las trampas en secuencia a la siguiente posici´on en el a´rbol. En todos los ensayos, se colocaron tres grupos de trampas en a´rboles separados, aproximadamente, 20-30 m y se determin´o el n´ umero total de capturas por tratamiento a partir de la suma de cada sexo y especies recogidos ese d´ıa. As´ı, una r´eplica consist´ıa en la suma de capturas totales de tres trampas. La suma total se convirti´ o en el porcentaje de capturas por cebo o tipo de trampa para an´ alisis con el fin de facilitar comparaciones entre el margen de dimensiones de colonias de moscas de la fruta muestreadas. Todos los experimentos se repitieron con el transcurso del tiempo. Se llevaron a cabo ensayos para determinar si se necesitaban ambos componentes qu´ımicos para atraer a las moscas de la fruta (experimento 1) y para determinar la elecci´ on del color (experimento 2). En el experimento 1 se cebaron las trampas con acetato de amonio y putrescina, acetato de amonio solo, putrescina sola o se dejaron sin cebar (control). Se llevaron a cabo experimentos separados para cebos con dosis baja y media y todos los ensayos se realizaron utilizando trampas de color naranja. Hubo 8 y 10 repeticiones de los ensayos con dosis baja y media, respectivamente. En el experimento 2, se ensay´o el efecto del color de la trampa sobre la captura de moscas empleando trampas que eran transparentes, naranjas, verdes y amarillas. Todas las trampas se cebaron con la dosis media de acetato de amonio y putrescina y se realizaron 19 r´eplicas. Se analizaron los porcentajes de hembras y de machos de C. capitata y A. ludens mediante un an´ alisis unidireccional de variancia empleando Proc GLM (SAS Institute. SAS/STAT Guide for Personal Computers, ver. 6 ed., SAS Institute, Cary, NC, EE.UU., 1985) seguido por ensayos de separaci´ on media LSD (P=0,05). Los datos se evaluaron por el procedimiento Cox-Box y se transformaron seg´ un fue necesario, para estabilizar la variancia antes del an´alisis (Bos y otros, en Statistics for Experimenters: An Introduction to Design, Data Analysis and Model Building, de J. Wiley & Sons, NJ, EE.UU., 1978).

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Los resultados del experimento 1 demostraron que en las trampas vac´ıas o en las trampas cebadas u ´ nicamente con putrescina se capturaron pocos machos o hembras de cualquier especie (Fig. 3 y Tabla 1 siguiente). Para todas las especies, excepto para las moscas mediterr´ aneas macho de la fruta, en los ensayos con dosis medias, el acetato de amonio solo result´ o significativamente mejor que las trampas vac´ıas o que las trampas cebadas u ´ nicamente con putrescina. Sin embargo, la adici´ on de putrescina al acetato de amonio increment´o significativamente el porcentaje de hembras capturadas de ambas especies con respecto al acetato de amonio solo en cualquier dosis, el porcentaje de capturas de las moscas mejicanas macho de la fruta con acetato de amonio solo en dosis bajas, y el porcentaje de capturas de moscas mediterr´ aneas macho de la fruta con dosis medias, con respecto a todas las otras trampas con dosis bajas. Los ensayos llevados a cabo para determinar el efecto del color de la trampa indicaron que el color afectaba significativamente a la captura de las moscas de la fruta (Fig. 4 y Tabla 2 siguientes). Se atraparon significativamente m´ as moscas mediterr´ aneas hembra de la fruta hembras en trampas verdes que en trampas transparentes. Las moscas mediterr´ aneas macho de la fruta prefer´ıan las trampas amarillas y la captura de machos en las trampas amarillas fue significativamente mayor que en las trampas naranja. Las moscas mejicanas de la fruta, hembras y machos, no diferenciaron entre ninguna de las trampas pintadas y el porcentaje de capturas en todas las trampas coloreadas fue significativamente mayor que en las trampas transparentes.

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(Ver Tabla en p´ agina siguiente)

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ES 2 185 701 T3 TABLA 1

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Comparaci´ on de los porcentajes medios (SEM) de moscas de la fruta capturadas en una trampa para insectos de pl´ astico naranja conteniendo cebos sint´eticos en dos dosis, en ensayos de campo realizados en Palin, Guatemala Sin nada

Putrescina

Acetato de amonio

Acetato de amonio + putrescina

F

P

0,0a (0,00) 0,0a (0,00) 0,8a (0,84) 0,0a (0,00)

0,0a (0,00) 0,0a (0,00) 1,1a (1,07) 1,8a (1,79)

41,1b (4,95) 41,9b (11,34) 42,9b (2,77) 33,1b (8,58)

58,9c (4,95) 58,1b (11,35) 55,3c (3,19) 65,2c (9,53)

213,1

0,0001

18,7

0,0001

208,8

0,0001

29,7

0,0001

1,1a (1,11) 0,0a (0,00) 0,0a (0,00) 0,7a (0,71)

1,4a (1,43) 0,0a (0,00) 2,0a (0,88) 0,0a (0,00)

30,6b (5,25) 13,3a (13,34) 42,3b (4,96) 46,7b (4,34)

66,9c (1,11) 86,7b (13,34) 55,8c (5,25) 52,6c (4,46)

76,1

0,0001

22,2

0,0001

126,9

0,0001

208,9

0,0001

10

Dosis baja (n=8) 15

20

C.capitata hembras C.capitata machos A.ludens hembras A.ludens machos

25

Dosis media (n=10) 30

35

40

C.capitata hembras C.capitata machos A.ludens hembras A.ludens machos

Las medias dentro de una fila seguidas por la misma letra no son significativamente diferentes (ensayo de separaci´on media LSD sobre datos transformados por ra´ız cuadrada [x+0,5], P=0,05) TABLA 2

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Comparaci´ on del porcentaje medio (SEM) de moscas capturadas en trampas de pl´ astico para insectos pintadas de distintos colores y en una trampa transparente cebada con un cebo sint´etico en ensayos en el campo realizados en Palin, Guatemala 50

Color del exterior de la trampa Transparente

Amarillo

Verde

Naranja

19,2a (2,89) 28,9ab (11,15)

21,8ab (2,75) 39,7b (8,04)

31,4b (4,55) 25,2ab (11,19)

F

P

2,52

0,0669

2,55

0,0731

55

60

C.capitata hembras C.capitata machos

11

27,6ab (2,84) 6,2a (3,24)

ES 2 185 701 T3 TABLA 2 (Continuaci´on)

5

Comparaci´ on del porcentaje medio (SEM) de moscas capturadas en trampas de pl´ astico para insectos pintadas de distintos colores y en una trampa transparente cebada con un cebo sint´etico en ensayos en el campo realizados en Palin, Guatemala Color del exterior de la trampa Transparente

10

Amarillo

Verde

Naranja

15,4a (2,15) 12,7a (3,28)

25,0b (2,49) 32,0b (4,45)

27,2b (2,84) 28,6b (3,76)

32,4b (2,90) 26,8b (3,52)

F

P

8,26

0,0001

6,76

0,0005

15

A.ludens hembras A.ludens machos

20

Las medias dentro de una fila seguidas por la misma letra no son significativamente diferentes (ensayo de separaci´on media LSD sobre datos transformados por ra´ız cuadrada [x+0,5], P=0,05) Ejemplo 3

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55

60

La eficacia de capturas de las trampas de pl´ astico verdes y naranjas conteniendo dosis bajas, medias o altas de acetato de amonio y putrescina se compar´o con la de una trampa McPhail cebada con cinco gr´ anulos de levadura Torula-b´ orax (de ERA Int., de Freeport, NY, EE.UU.). En pruebas sin elecci´ on, realizadas en el mismo lugar en que se llev´o a la pr´ actica el Ejemplo 2, se aplicaron tratamientos aleatoriamente en tres a´rboles separados en unos 20-30 m. Se retiraron las moscas de las trampas cada 2-3 d´ıas y se registraron el n´ umero de machos y de hembras de C. capitata y A. ludens. Se desplazaron las trampas en secuencia a la siguiente posici´on entre los a´rboles en que estaban siendo comprobadas. Los gr´ anulos se disolvieron en 300 ml de agua y se pusieron en trampas McPhail de acuerdo con los procedimientos descritos (Gilebert y otros, en Insect Trapping Guide, Pest Detection/Emergency Projects, Departamento de Alimentaci´on y Agricultura del Estado de California, Sacramento, CA, EE.UU., 1984). Se a˜ nadi´ o agua a las trampas McPhail seg´ un era necesario durante el per´ıodo de dos semanas para mantener un volumen de, aproximadamente, 300 ml. Tras dos semanas de uso, se prepararon cebos nuevos. Hubo 18 r´eplicas para cada dosis probada. Se determin´ o el estado de apareamiento de las hembras de la mosca mediterr´ anea de la fruta de las diferentes trampas realizando disecciones de una submuestra de las hembras capturadas y comprobando la presencia o ausencia de esperma en la espermateca. Las submuestras, consistentes en diez moscas diseccionadas por cada tipo de trampa, se obtuvieron de 5 r´eplicas de cada dosis de cebo. Se analiz´o el n´ umero de hembras y de machos de C. capitata y A. ludens capturados mediante an´ alisis unidireccional de variancia seguido por ensayos de separaci´ on de media LSD (P=0,05). Los datos se evaluaron por el procedimiento Box-Cox y se transformaron seg´ un fue necesario para estabilizar la variancia antes del an´alisis (Box y otros, antes mencionados). Se utilizaron an´ alisis de Chi-cuadrado empleando el Proc FREQ (SAS Institute, antes mencionado) de tablas de contingencia de estado de apareamiento por tipo de trampa dentro de cada dosis, para comparar el estado de apareamiento de las hembras capturadas. Las comparaciones de las capturas en trampas color naranja y verde cebadas con dosis bajas, medias o altas de la mezcla sint´etica con las capturas de las trampas McPhail, se representan en la Fig. 5 y en la siguiente Tabla 3. Con dosis bajas, el n´ umero medio de moscas capturadas en las trampas McPhail era significativamente m´as alto que en cualquier trampa de pl´astico, para ambos sexos de cada especie de mosca de la fruta, con excepci´on de la captura de moscas mediterr´aneas macho de la fruta. Sin embargo, las trampas verdes, cebadas con la dosis baja de mezcla sint´etica, capturaron un n´ umero medio superior de moscas mediterr´aneas macho de la fruta que las trampas naranja con el mismo cebo y la captura de machos no difiri´ o significativamente de la de las trampas McPhail. No hubo diferencias estad´ısticamente significativas entre el n´ umero medio de moscas mediterr´aneas machos y hembras de la fruta capturadas por las trampas de pl´ astico verdes o naranjas, cebadas con la dosis media o con la dosis alta de mezcla sint´etica o en trampas McPhail. En las trampas McPhail se capturaron significativamente m´ as moscas mejicanas, machos y hembras, de la fruta que en las trampas del invento, con cualquiera de las dosis probadas.

12

ES 2 185 701 T3 TABLA 3

5

10

15

20

Comparaci´ on del n´ umero medio (SEM) de moscas de la fruta capturadas en trampas de pl´ astico para insectos conteniendo tres dosis de cebos sint´eticos con trampas McPhail est´ andar en ensayos de campo realizados en Palin, Guatemala (n=18) Naranja

Verde

McPhail

F

P

13,2a (2,08) 4,8a (0,71) 6,8a (0,72) 4,2a (0,51)

23,6a (3,95) 9,8ab (1,44) 9,6a (2,03) 5,4a (1,2)

35,4b (5,46) 14,2b (2,37) 83,4b (10,3) 57,3b (8,60)

8,0

0,0009

13,0

0,0001

96,51

0,0001

80,2

0,0001

10,6a (1,19) 3,8a (0,62) 7,3a (1,25) 3,1a (0,59)

10,9a (2,11) 3,4a (0,59) 6,6a (1,28) 2,2a (0,50)

18,6a (3,89) 6,6a (1,65) 59,1b (9,91) 41,8b (0,59)

1,5

0,2342

0,6

0,5718

68,3

0,0001

74,2

0,0001

12,6a (2,07) 4,3a (1,18) 4,2a (0,95) 1,5a (0,33)

16,9a (4,44) 6,2 (2,19) 3,9a (0,81) 2,4a (0,60)

17,2a (3,15) 5,4a (1,32) 23,2b (4,23) 13,7b (3,35)

0,6

0,5535

0,1

0,8701

31,6

0,0001

26,6

0,0001

Dosis baja C. capitata hembras C. capitata machos A. ludens hembras A. ludens machos Dosis media

25

30

35

C. capitata hembras C. capitata machos A. ludens hembras A. ludens machos Dosis alta

45

C. capitata hembras C. capitata machos A. ludens hembras A. ludens machos

50

Las mdias dentro de una fila seguidas por la misma letra no son significativamente diferentes (ensayos de separaci´on media LSD sobre datos transformados logar´ıtmicamente [x+1,0] P=0,05)

40

55

60

La comparaci´ on de los porcentajes de moscas mediterr´aneas hembra de la fruta que ya se hab´ıa apareado y v´ırgenes capturadas se muestra en la Fig. 5. Con la dosis baja de la mezcla sint´etica, los porcentajes de moscas mediterr´aneas hembra de la fruta todav´ıa no apareadas, capturadas con las trampas de pl´ astico (naranjas y verdes) fueron significativamente mayores que el porcentaje capturado con trampas McPhail. El porcentaje de hembras capturadas que no se hab´ıan apareado fue m´ as alto en las trampas verdes cebadas con la dosis baja de mezcla sint´etica. El porcentaje de hembras que no se hab´ıan apareado a´ un disminuy´o con la dosis media, aunque segu´ıa siendo significativamente mayor que el porcentaje entre hembras de trampas McPhail. El porcentaje de hembras no apareadas de moscas mediterr´ aneas de la fruta capturadas fue el m´ as bajo en las trampas verdes cebadas con la dosis alta de mezcla sint´etica y era significativamente menor que el porcentaje de hembras no apareadas capturadas en las trampas McPhail. Las capturas por trampa de hembras no apareadas en el caso de trampas naranja 13

ES 2 185 701 T3 cebadas con una dosis alta de productos sint´eticos no difer´ıa, significativamente, de las observadas con la trampa verde o la trampa McPhail. TABLA 4 5

Comparaci´ on del estado de apareamiento de moscas mediterr´ aneas hembra de la fruta capturadas en trampas de pl´ astico para insectos conteniendo tres dosis de cebos sint´eticos con trampas McPhail est´ andar cebadas con cinco gr´ anulos de levadura Torula-b´ orax en ensayos de campo realizados en Palin, Guatemala (n=50)

10

Hembras sin aparear atrapadas ( %)

15

Dosis de mezcla sint´etica

Naranja

Verde

McPhail

Chi2

P

Baja

54,8b

69,0b

22,0a

21,00

0,0001

Media

45,4b

51,7b

25,0a

7,25

0,027

Alta

12,6ab

4,0

21,0b

6,59

0,037

20

An´ alisis de Chi-cuadrado basados en una tabla de contingencias de 2 por 3 dentro de cada dosis. Los medios dentro de una fila seguidos por la misma letra no son significativamente diferentes (tablas de contingencia 2 por 2 de dos comparaciones a la vez dentro de una dosis, P=0,05)

25

30

35

capturadas con las trampas de pl´ astico y McPhail. Del total de moscas capturadas entre las tres dosis de producto sint´etico ensayadas, las moscas no buscadas constitu´ıan del 2,1-5,5 %, del 3,7-7,0 % y del 39,3-60,2 % de las capturas en trampas de pl´astico naranjas, verdes y trampas McPhail, respectivamente. La descripci´on que antecede tiene fines ilustrativos. Otros expertos en la t´ecnica pueden aplicar el conocimiento descrito a otros insectos nocivos frug´ıvoros. Este detalle solamente tiene ese prop´osito y los expertos en la t´ecnica pueden llevar a cabo variaciones en ella sin apartarse del esp´ıritu ni del alcance del invento. ´ Indice de elementos

40

10. Trampa de pl´ astico seca 12. Cuerpo principal de la trampa 14. Orificios

45

16. Tapa extrema 17. Tapa extrema 18. Colgador interior de alambre

50

19. Colgador de alambre 20. Panel t´ oxico 21. Panel t´ oxico

55

23. Superficie interior de tapa extrema 26. Se˜ nuelo visual en cuerpo principal de trampa 27. Cinta adhesiva por ambas caras

60

28. Vial conteniendo 1,4 diaminobutano 30. Membrana con acetato de amonio 14

ES 2 185 701 T3 REIVINDICACIONES 1. Un cebo sint´etico para atraer insectos nocivos frug´ıvoros, que comprende 5

(a) acetato de amonio, y (b) putrescina,

10

en el que (a) y (b) proporcionan amoniaco y a´cido ac´etico y putrescina en cantidades efectivas para atraer insectos nocivos frug´ıvoros. 2. El cebo sint´etico de la reivindicaci´on 1, en el que (a) libera amon´ıaco y a´cido ac´etico como vol´atiles.

15

20

3. El cebo sint´etico de la reivindicaci´on 1 o de la reivindicaci´ on 2, en el que el r´egimen de liberaci´on de amon´ıaco es de entre unos 40 µg/h y 600 µg/h, preferiblemente entre unos 45 µg/h y 450 µg/h, y del modo m´ as preferido, 45 µg/h, 120 µg/h y 400 µg/h. 4. El cebo sint´etico de la reivindicaci´on 1 o de la reivindicaci´ on 2, en el que el r´egimen de liberaci´on de ´acido ac´etico es de entre unos 1,0 µg/h y 16 µg/h, preferiblemente de entre unos 1,5 µg/h y 13 µg/h, y del modo m´ as preferido, 1,5 µg/h, 3 µg/h y 13 µg/h. 5. El cebo sint´etico de la reivindicaci´on 1 o de la reivindicaci´ on 2, en el que el margen de putrescina es de entre unos 25 µl a 300 µl, preferiblemente de entre unos 50 µl a 200 µl y, del modo m´ as preferido, 50 µl, 100 µl y 200 µl de una preparaci´ on l´ıquida, sustancialmente pura, de putrescina.

25

6. Uso del cebo sint´etico de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en combinaci´on con un se˜ nuelo visual para vigilar y/o controlar insectos nocivos frug´ıvoros.

30

35

40

45

50

55

60

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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