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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k ES 2 101 333 kInt. Cl. : A61K 31/557

11 N.◦ de publicaci´ on: 6

51

˜ ESPANA

k

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 93917546.9 kFecha de presentaci´on : 09.08.93 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 686 036 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 13.12.95

T3

86 86 87 87

k

54 T´ıtulo: Utilizaci´ on de derivados de prostano para la preparaci´ on de un medicamento destinado al

tratamiento de la poliartritis cr´ onica.

k

30 Prioridad: 07.08.92 DE 42 26 615

19.08.92 DE 42 27 788

Mullerstrasse 170/178 13353 Berlin, DE

k

72 Inventor/es: Scholz, Peter

k

74 Agente: Lehmann Novo, Mar´ıa Isabel

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.07.97

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

01.07.97

ES 2 101 333 T3

k

73 Titular/es: Schering Aktiengesellschaft

Aviso:

k k

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 101 333 T3 DESCRIPCION El invento se refiere a la utilizaci´on de derivados de prostano para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de una respuesta inmune. 5

10

En la publicaci´ on de patente europea EP-0.011.591 (d´ıa de solicitud, 18 de octubre de 1.971) se describen algunos derivados de prostano y su preparaci´ on. Al referirse a estos derivados de prostano, se trata ´ contienen un grupo metileno en lugar de compuestos que se derivan de la prostaciclina (PGI2 ). Estos del a´tomo de ox´ıgeno en forma de ´eter en la posici´on 9 de la prostaciclina. Los derivados de prostano se emplean para el tratamiento de diferentes enfermedades, predominando claramente los efectos cardiovasculares e inhibidores de la agregaci´on de trombos. La utilizaci´on de derivados de prostano como medicamento se describe detalladamente en el mencionado documento EP-0.011.591:

15

20

25

Disminuci´on de la resistencia vascular perif´erica, arterial y coronaria, inhibici´ on de la agregaci´ on de trombocitos y disoluci´ on de trombos plaquetarios, citoprotecci´ on mioc´ardica y por consiguiente disminuci´on de la presi´ on sangu´ınea sist´emica, sin disminuir al mismo tiempo el volumen de latidos ni la circulaci´on por la coronaria; tratamiento de apoplej´ıa, profilaxis y terapia de enfermedades card´ıacas coronarias, de la trombosis coronaria, del infarto card´ıaco, de enfermedades de arterias perif´ericas, de arterioesclerosis y de trombosis, terapia del choque, inhibici´ on de la broncoconstricci´ on, inhibici´ on de la secreci´on de a´cidos g´astricos y citoprotecci´ on de las mucosas estomacales e intestinales; propiedades antial´ergicas, disminuci´ on de la resistencia vascular pulmonar y de la presi´ on sangu´ınea pulmonar, fomento de la circulaci´on sangu´ınea por los ri˜ nones, utilizaci´ on en lugar de heparina o como coadyuvante en la di´ alisis durante una hemofiltraci´ on, conservaci´on de conservas de plasma sangu´ıneo, especialmente de conservas de plaquetas sangu´ıneas, inhibici´ on de los dolores del parto, tratamiento de la toxicosis del embarazo, efecto antiproliferativo y aumento de la circulaci´ on sangu´ınea por el cerebro.

30

En los documentos EP-0.055.208, EP-0.099.538 y EP-0.119.949 se exponen derivados de carbaciclina, que poseen indicaciones similares a los derivados de prostano antes mencionados.

35

Otros derivados adicionales de prostano est´ an descritos en la publicaci´on EP-0.084.856, los cuales se propusieron para utilizarse en la inhibici´ on de la agregaci´ on de trombocitos, en la disminuci´ on de la presi´on sangu´ınea sist´emica o en el tratamiento de u ´ lceras de est´omago. En ese documento se menciona especialmente el Beraprost. La utilizaci´on de derivados de prostano para el tratamiento de respuestas inmunes se describe en diferentes publicaciones. As´ı, se menciona “de lado” el tratamiento de enfermedades antial´ergicas ya en el documento EP-0.011.591.

40

El documento EP-0.055.208 describe, entre otros efectos, el antial´ergico de ciertos derivados de carbaciclina. 45

En la publicaci´ on de H.J. Grundmann et al. (1992) J. Infect. Dis 1992, 165: 1-5 se expone detalladamente la utilizaci´on de un derivado de prostano, a saber el Iloprost, en el tratamiento del choque s´eptico.

50

En la solicitud de patente internacional PCT/DE 92/00100 (el d´ıa de presentaci´on de la solicitud que fundamenta la prioridad, 12 de febrero de 1991, en la Rep´ ublica Federal Alemana) se menciona la terapia del SIDA y de la diabetes con ayuda de derivados de prostano. Esta solicitud constituye un derecho m´ as antiguo. La publicaci´ on de K. Sliwa et al. (991) Infection and Immunity, 59: 3.846-3.848, se ocupa del tratamiento de la malaria cerebral con Iloprost.

55

Se descubri´ o por fin, con sorpresa, que se pueden emplear derivados de prostano en otra indicaci´ on adicional. El invento concierne a una utilizaci´on de derivados de prostano de las f´ ormulas generales I ´o II

60

2

ES 2 101 333 T3

5

10

15

20

en las que 25

X1 es un -CH2 -CH2 ; trans-CH=CH- o´ -C≡C-, X2 es un grupo alquileno saturado lineal o ramificado, que tiene de 1 hasta 6 a´tomos de carbono, X3 es un -O- ´o -CH2 -,

30

X4 es un -CH2 - ´o -[CH2 ]3 -, X5 es un -H ´o -C≡C-R2 ,

35

ogeno, un grupo alquilo que tiene de 1 hasta 6 a´tomos de carbono, un grupo R1 es un a´tomo de hidr´ cicloalquilo que tiene 5 o´ 6 ´atomos de carbono o un grupo fenilo, R2 es un grupo alquilo saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 hasta 6 ´atomos de carbono,

40

ogeno, un radical acilo que tiene de 1 hasta 4 ´atomos de carbono, o un radical R3 es un ´atomo de hidr´ benzo´ılo, y R4 es un -H ´o -CH3 ;

45

o β, estando el grupo -O-R3 situado en α ´ y de sus sales con bases fisiol´ ogicamente compatibles, en el caso de que R1 tenga el significado de un a´tomo de hidr´ ogeno, para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´onica.

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55

60

X2 representa grupos alquileno saturados, de cadena lineal o ramificados, que tienen de 1 hasta 6 a´tomos de carbono, as´ı por ejemplo metileno, etileno, propileno o isopropileno, estando unido el grupo metilo con el primero o segundo a´tomo de carbono del etileno, calculado comenzando por el grupo A; butileno, metilpropileno, etiletileno, dimetiletileno, estando los grupos metilo o etilo unidos arbitrariamente con la cadena alquileno; pentilo, metilbutileno, dimetilpropileno, etilpropileno, metiletiletileno, estando unidos los grupos metilo o etilo arbitrariamente con la cadena alquileno; hexileno, metilpentileno, dimetilbutileno, metiletilpropileno, estando unidos los grupos metilo o etilo arbitrariamente con la cadena alquileno. El grupo alquilo R1 abarca grupos alquilo lineales o ramificados con 1 hasta 6 ´atomos de carbono, tales como por ejemplo metilo, etilo, propilo, butilo, isobutilo, terc.-butilo, pentilo, neopentilo o hexilo. El grupo cicloalquilo R1 puede contener en el anillo 5 ´o 6 ´atomos de carbono.

3

ES 2 101 333 T3 El grupo alquilo R2 puede constar de radicales alquilo saturados o insaturados, con cadenas lineales o ramificadas, que tienen de 1 hasta 6 ´atomos de carbono; preferiblemente, los radicales alquilo est´an saturados. A modo de ejemplo se mencionar´ an grupos metilo, etilo, propilo, butilo, isobutilo, terc.-butilo, pentilo, hexilo, butenilo, isobutenilo, propenilo, pentenilo o hexenilo. 5

El grupo acilo R3 puede constar de un grupo acilo de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 hasta 4 ´atomos de carbono, tal como por ejemplo acetilo, propionilo, butirilo o isobutirilo.

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El invento concierne asimismo a un procedimiento para el tratamiento de la poliartritis cr´onica en seres humanos y animales mam´ıferos, que necesitan de tal tratamiento, abarcando el tratamiento una administraci´on de una cantidad farmacol´ ogicamente segura y eficaz de los derivados de prostano seg´ un las f´ ormulas I ´o II a seres humanos y animales mam´ıferos. Para la formaci´ on de sales con los ´acidos libres son adecuadas las bases inorg´anicas y org´ anicas que son conocidas por un experto en la materia para la formaci´ on de sales fisiol´ogicamente compatibles. A modo de ejemplo se mencionar´an: hidr´ oxidos de metales alcalinos, tales como los hidr´oxidos de sodio y de potasio, hidr´ oxidos de metales alcalino-t´erreos, tal como hidr´ oxido de calcio, amon´ıaco, aminas tales como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metil-glucamina, morfolina, tris-(hidroximetil)-metilamina, etc. La formaci´ on del clatrato con β-ciclodextrina se efect´ ua de modo correspondiente al documento EP-0.259.468. La poliartritis cr´onica es una enfermedad de las articulaciones, ejerciendo el tejido sinovial un efecto destructivo sobre la matriz de los cart´ılagos de articulaciones. En el tejido sinovial y en el l´ıquido sinovial de pacientes con poliartritis cr´onica se encuentran c´elulas activadas, las cuales segregan citoquinas tales como TNF-α y Il-1. Ambas citoquinas, la TNF-α y la Il-1 est´an en situaci´ on de inducir la producci´ on de colagenasa y otras proteasas neutras en fibroblastos y condrocitos sinoviales, que se encuentran en la proximidad del cart´ılago de una articulaci´on. Estas enzimas degradan a los proteoglicanos y al col´ ageno, lo cual conduce a una destrucci´ on del cart´ılago. (TNF-α = factor de necrosis tumoral-α; Il-1 = interleuquina 1).

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35

Sorprendentemente, los derivados de prostano se adecuan para el tratamiento de la poliartritis cr´onica. Hasta ahora, se utilizaron para la terapia las sustancias tales como ´acidos carbox´ılicos (salicilatos, ´acidos arilac´eticos, fenamatos, ´acidos propi´ onicos), pirazolonas y Oxicamos. (Handbook of Experimental Pharmacology, 1979, Editorial Springer Verlag, volumen 50/II, compiladores: G.V.R. BORN et al., Cap´ıtulo 30, F´ armacos antiinflamatorios, J.R. VANE, S.H. FERREIRA, cap´ıtulo 32, Clasificaci´ on de f´ armacos antirreum´ aticos, E.C. HUSKISSON, cap´ıtulo 37, M.K. JASANI). Es preferida la utilizaci´ on de derivados de prostano conformes al invento que tienen la f´ ormula general I antes mencionada

40

en la que X1 es un trans-CH=CH, 45

X2 es un grupo alquileno saturado, lineal o ramificado, que tiene de 2 hasta 4 a´tomos de carbono, X3 es un -CH2 X4 es un -CH2 -,

50

X5 es un -C≡C-R2 , ogeno, un grupo alquilo que tiene de 1 hasta 3 a´tomos de carbono, o un grupo R1 es un ´atomo de hidr´ fenilo,

55

R2 es un grupo alquilo saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 hasta 3 ´atomos de carbono, ogeno o un radical acilo que tiene 2 a´tomos de carbono y R3 es un ´atomo de hidr´

60

R4 es un -H; estando el grupo -O-R3 situado en α ´o β, y de sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles, en ogeno, para la preparaci´ on de un medicamento el caso de que R1 tenga el significado de un a´tomo de hidr´ 4

ES 2 101 333 T3 destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. Es m´as preferida la utilizaci´on de derivados de prostano conformes al invento que tienen la f´ ormula general I precedentemente mencionada, 5

en la que X1 es un trans-CH=CH-, 10

X2 es un grupo metiletileno, estando unido el grupo metilo con el primer a´tomo de carbono del grupo etileno, y estando el primer ´atomo de carbono del grupo etileno orientado hacia el grupo X1 , X3 es un -CH2 -, X4 es un -CH2 -,

15

X5 es un -C≡C-R2 , ogeno o un grupo metilo, R1 es un ´atomo de hidr´ 20

R2 es un grupo metilo o etilo, ogeno o un grupo formilo y R3 es un ´atomo de hidr´ R4 es un -H;

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30

o β, y de sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles, en estando el grupo -O-R3 situado en α ´ ogeno, para la preparaci´ on de un medicamento el caso de que R1 tenga el significado de un a´tomo de hidr´ destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. Es sumamente preferida la utilizaci´ on de un derivado de prostano conforme al invento que tiene la f´ ormula general I antes mencionada en la que X1 es trans-CH=CH-,

35

X2 es un grupo metiletileno, estando unido el grupo metilo con el primer a´tomo de carbono del grupo etileno, y estando el primer ´atomo de carbono del grupo etileno orientado hacia el grupo A, X3 es un -CH2 -,

40

X4 es un -CH2 -, X5 es un -C≡C-R2 , ogeno, R1 es un ´atomo de hidr´

45

R2 es un grupo metilo, ogeno y R3 es un ´atomo de hidr´

50

R4 es un -H; estando el grupo OH situado en α ´ o β, y de sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles, para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica.

55

Esta sustancia posee el nombre “Iloprost” y lleva la denominaci´on sistem´atica de a´cido 5-(E)-(1S,5S,6R)-7-hidroxi-6-[(E)-(3S,4RS)-3-hidroxi-4-metil-1-octen-6-inil]biciclo-[3.3.0] octen-3-iliden´ pentanoico. Este es el compuesto m´as preferido de este invento.

60

Adem´as, el invento abarca la utilizaci´ on de las sustancias preferidas Cicaprost, Eptaloprost, Ciprosteno y/o Beraprost y sus sales, para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. Las sustancias, inclusive el Iloprost, se exponen en la Tabla 1 en relaci´ on con su estructura.

5

ES 2 101 333 T3 El invento concierne adem´as a la utilizaci´on de derivados de prostano conformes al invento en com´ un, con sustancias coadyuvantes y de veh´ıculo farmacol´ ogicas, que son fisiol´ogicamente compatibles. Tales on, Mack Publishing Company, sustancias se describen en Remington’s Pharmaceutical Science, 15◦ edici´ Easton Pennsylvania (1980). 5

10

Los procedimientos de preparaci´ on de algunos de los derivados de prostano conformes al invento se describen detalladamente en la publicaci´on EP-0.011.591 ´o EP-0.084.856. Las sustancias de las f´ ormulas I o II, no mencionadas expresamente all´ı, no se diferencian sin embargo en lo que se refiere al procedimiento ´ de preparaci´on. Estas pueden ser preparadas por un experto en la materia dentro del marco de los conocimientos generales. TABLA I Estructuras de los preferidos derivados de prostano

15

Designaci´ on F´ ormula I o´ II

X1

20

X2

X3

X4

X5

R1

R2

R3

R4

-CH2 -

-CH2 -

-C≡C-R2

H

-CH3

H

H

-O-

-CH2 -

-C≡C-R2

H

-CH3

H

H

-(CH2 )3 - -C≡C-R2

H

-CH3

H

H

CH3 <

QQ <

Iloprost

(I)

-CH=CH-

CH3

25

Cicaprost

(I)

-C≡C-

QQ CH3

Eptaloprost

(I)

-C≡C-

QQ

-O-

Ciprosteno

(I)

-CH=CH-

n-C5 H10

-CH2 -

-CH2 -

H

H

----

H

-CH3

-CH2 -

-CH2 -

-C≡C-R2

H

-CH3

H

H

30

35

CH3 < <

Beraprost 40

45

50

(II)

-CH=CH-

QQ

Los compuestos de las f´ ormulas generales I ´o II se pueden emplear eficazmente en el siguiente ensayo: C´elulas procedentes del l´ıquido sinovial de pacientes con poliartritis cr´ onica son cultivadas conjuntamente in vitro con brotes de miembros (limbbuds) con 4 d´ıas de edad de embriones de ratones (de 12 d´ıas). Despu´es de una cultivaci´ on conjunta durante aproximadamente 7 d´ıas tiene lugar una degradaci´ on del cart´ılago en los brotes de miembros, que se puede reducir en presencia de los derivados de prostano conformes al invento. La degradaci´ on del cart´ılago se mide a trav´es de la liberaci´on de glicosaminoglicanos sulfatados, que son cuantificados en forma de un complejo de azul de Alcian y un glicosaminoglicano. Los derivados de prostano conformes al invento reducen la liberaci´ on de los glicosaminoglicanos, siendo inducida la liberaci´ on a trav´es de las c´elulas sinoviales.

55

60

Las investigaciones en microscopio electr´onico de un cart´ılago, que hab´ıa sido sometido a las c´elulas sinoviales activadas de pacientes con poliartritis cr´onica, muestran una degradaci´ on completa en cuanto a fibrillas de col´ageno. En presencia de los derivados de prostano conformes al invento se reduce la degradaci´on de fibrillas de col´ ageno. El sistema de ensayo muestra por medios bioqu´ımicos y de microscop´ıa electr´onica que la degradaci´on del cart´ılago que se induce a trav´es de c´elulas sinoviales de pacientes con poliartritis cr´ onica, es reducida por los derivados de prostano conformes al invento de las f´ ormulas I ´o II.

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Los derivados de prostano conformes al invento muestran el efecto en el ensayo precedentemente mencionado en los casos de concentraciones de 0,1 hasta 1.000 mg/ml. El sistema de ensayo in vitro antes mencionado puede ser transferido a procesos in vivo (comp´ arese: J.J. STEINBERG et al. (1983) as M.J. GROSSLEY e I.M. HUNNEYBALL (1984) Biochem Biochem Biophys Acta 757: 47-58, adem´ as K. KELLER et al. (1990) J. Orthop. Res. 8: 345-352). El sistema Pharmac 33: 1.263-1.271, y adem´ in vitro es tan complejo que es representativo para el cuadro patol´ogico cl´ınico en el caso de la poliartritis cr´onica. Los compuestos de las f´ ormulas generales I ´o II son apropiados para el tratamiento de la poliartritis cr´onica.

20

Para este efecto terap´eutico, la dosis apropiada es diversa y depende por ejemplo del compuesto de las f´ ormulas generales I ´o II que se utilice, del hospedante, del tipo de la administraci´ on y del tipo y de la gravedad de los estados que se hayan de tratar. En general, sin embargo, se pueden esperar resultados satisfactorios con animales en el caso de unas dosis diarias de 1 hasta 3.000 µg/kg de peso corporal del respectivo animal. En el caso de animales mam´ıferos de mayor tama˜ no, por ejemplo seres humanos, una dosis diaria recomendada es la de 0,1 hasta 200 mg de los derivados de prostano conformes al invento de las f´ ormulas generales I ´o II. Son preferidos unos valores de 0,3 hasta 60 mg por d´ıa, m´ as preferidos los de 1 hasta 20 mg por d´ıa y m´ aximamente preferidos los de 2 hasta 10 mg por d´ıa. La dosis diaria de los derivados de prostano se puede administrar convenientemente en 2 hasta 4 dosis parciales por d´ıa.

25

Los derivados de prostano de las f´ ormulas generales I ´o II se pueden administrar, en el caso de un tratamiento sist´emico, por cualquier v´ıa usual, especialmente la enteral, preferiblemente la oral y del modo m´ as preferido la parenteral. Los supositorios, las tabletas, las c´apsulas, las gotas, y las soluciones o suspensiones inyectables son las formas adecuadas para la administraci´on.

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45

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El derivado de prostano Iloprost es la sustancia especialmente preferida. Es administrada del modo precedentemente expuesto por ejemplo en el caso de mam´ıferos de mayor tama˜ no, p. ej. seres humanos. Las dosis son en tal caso menores en un factor de 2 que las que se indicaron anteriormente. La soluci´ on para infusi´ on como infusi´ on permanente en disolventes acuosos usuales, p. ej. una soluci´ on fisiol´ ogica de cloruro de sodio, es la forma de administraci´ on preferida para el tratamiento sist´emico. En tales casos se administran desde 0,01 ng/kg/min hasta 1,0 ng/kg/min, preferiblemente de 0,03-0,3 ng/kg/min y del modo m´ as preferido de 0,1 ± 0,05 ng/kg/min. Puesto que la poliartritis cr´ onica se exterioriza tambi´en en ataques que transcurren bruscamente, un derivado de prostano conforme al invento puede administrarse tambi´en durante el per´ıodo de tiempo en el que no haya s´ıntomas. Por consiguiente el derivado de prostano conforme al invento sirve para el tratamiento profil´ actico. Las dosificaciones en el caso de la administraci´on profil´ actica no se diferencian esencialmente de las descritas con anterioridad, pero se prefieren unos valores que sean m´as bajos en el factor de 2 hasta 4 que los que se emplean en el caso de impulsos o esfuerzos agudos. El presente invento concierne tambi´en a composiciones terap´euticas, que contienen un derivado de prostano de las f´ ormulas generales I ´o II en com´ un con por lo menos un veh´ıculo, material aditivo o agente diluyente farmac´eutico, todos los cuales son compatibles fisiol´ ogicamente. Tales composiciones se pueden preparar de un modo en s´ı conocido. Materiales coadyuvantes y de veh´ıculo farmacol´ ogicamente compatibles y apropiados se describen por ejemplo en la obra Remington’s Pharmaceutical Science, 15◦ edici´ on Mack Publishing Company, Easton Pennsylvania (1980). Asimismo es posible la utilizaci´on de clatratos con ciclodextrina, que se exponen en el documento EP-0.259.468. En comparaci´on con el tratamiento por v´ıa sist´emica, es especialmente preferida la aplicaci´on por v´ıa local de un derivado de prostano conforme al invento, eventualmente con sustancias coadyuvantes y/o de veh´ıculo. En el caso de mayores concentraciones de derivados de prostano en la sangre pasa a predominar en gran manera el efecto cardiovascular. Por lo tanto, es ventajoso aplicar los derivados de prostano conformes al invento sobre la piel directamente junto a la articulaci´ on da˜ nada. Para ello, se adecuan pomadas, pastas, geles o envolturas. Esta enumeraci´on no es cerrada. Mediante la aplicaci´on por v´ıa local, de modo deseado la concentraci´on de los derivados de prostano en la respectiva articulaci´on es aumentada a un alto valor, situ´ andose simult´aneamente la concentraci´on de los derivados de prostano en la sangre pr´ acticamente por debajo del l´ımite de detectabilidad. La alta biodisponibilidad de los derivados de prostano conduce a una r´ apida penetraci´ on a trav´es de la piel y 7

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5

del tejido conjuntivo situado debajo, siguiendo la distribuci´ on de los derivados de prostano la ley de la difusi´ on. Por el contrario, el transporte mediante una circulaci´ on convectiva desempe˜ na un papel totalmente insignificante. Los vasos, que est´ an situados en o por debajo de la piel con los derivados de prostano aplicados, o bien son demasiado peque˜ nos (v´enulas, arteriolos) o tienen una superficie efectiva demasiado peque˜ na (venas, arterias) por cada parte de la piel, para poder provocar una concentraci´ on apreciable de los derivados de prostano en la sangre. Ejemplo parte 1

10

15

Cultivos celulares a partir del l´ıquido sinovial C´elulas procedentes del l´ıquido sinovial de pacientes con poliartritis cr´ onica se cultivan conjuntamente on (de 12 d´ıas de edad). in vitro con brotes de miembros (limbbuds) de 4 d´ıas de edad de embriones de rat´ Despu´es de una cultivaci´ on conjunta durante aproximadamente 7 d´ıas tiene lugar una degradaci´ on del cart´ılago en el brote de miembro, que puede ser reducida en presencia de los derivados de prostano conformes al invento. La sustancia Iloprost se encuentra en una concentraci´ on final de 100 ng/ml de medio de cultivo en los cultivos celulares y es a˜ nadida a estos cultivos celulares al poner en marcha el experimento.

20

25

Se toman muestras en los d´ıas 1◦ hasta 7◦ . Las condiciones de cultivo est´an descritas detalladamente as de H.J. MERKER en los art´ıculos de H. MOHAMED-ALI (1991) Z. Rheumatol. 50: 74-81; adem´ (1991) en Culture Techniques, D. NEUBERT y H.J. MERKER (compiladores) editorial Walter de Gruyter Verlag, Berlin-New York, p´aginas 119-133; y adem´ as de H.B. FELL y R.W. JUBB (1977) Arthritis Rheuma 20: 1.359-1.371. La tanda testigo contiene solamente el medio de cultivo, en lugar del Iloprost. Ejemplo parte 2

30

Medici´ on de la degradaci´ on del cart´ılago

35

La degradaci´ on del cart´ılago se mide a trav´es de la liberaci´on de glicosaminoglicanos sulfatados, que son cuantificados en forma de un complejo con azul Alcian y un glicosaminoglicano. La puesta en libertad de un glicosaminoglicano se describe en el art´ıculo de P. WHITEMAN (1973) Biochem. J. 131: 343-351. Las muestras tomadas en los d´ıas 1 hasta 7 muestran los resultados enumerados en la Tabla 2. TABLA 2

40

45 1)

50

D´ıa de la toma de muestras:

1

3

4

5

6

7

Cultivo con Iloprost1)

7

13

14

12

11

13

Testigo1)

11

24

19

22

21

21

= valores en µg de glucosaminoglucano por ml de medio

Los derivados de prostano conformes al invento reducen significativamente la liberaci´on de los glicosaminoglicanos. Ejemplo parte 3

55

60

Evaluaci´ on en microscopio electr´ onico Investigaciones realizadas en un microscopio electr´onico de un cart´ılago, que hab´ıa sido sometido a las c´elulas sinoviales activadas de pacientes con poliartritis cr´ onica, muestran una completa degradaci´ on de las fibrillas del col´ ageno. En presencia de los derivados de prostano conformes al invento se reduce la degradaci´on de las fibrillas de col´ ageno. La producci´ on de los preparados para microscopio electr´ onico y la evaluaci´on histol´ogica se describen as de H.J. MERKER (1991) en los art´ıculos de H. MOHAMED-ALI (1991) Z. Rheumatol. 50: 74-81; adem´ 8

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en Culture Techniques, D. NEUBERT y H.J. MERKER (compiladores) editorial Walter de Gruyter Verlag, Berlin-New York, p´ aginas 119-133; y adem´ as de H.B. FELL y R.W. JUBB (1977) Arthritis Rheuma 20: 1.359-1.371. Las c´elulas cultivadas, que han sido tratadas con el derivado de prostano conforme al invento, procedentes de pacientes con poliartritis cr´ onica, se encuentran en su cuadro de presentaci´ on entre las c´elulas procedentes de pacientes con poliartritis cr´ onica sin tratamiento con un derivado de prostano y las c´elulas procedentes de pacientes sin poliartritis cr´ onica. La reducci´on de la degradaci´ on del col´ ageno es estimada como de un 50% bas´ andose en los preparados.

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ES 2 101 333 T3 REIVINDICACIONES 1. Utilizaci´on de derivados de prostano de las f´ ormulas generales I ´o II 5

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en las que X1 es un -CH2 -CH2 ; trans-CH=CH- o´ -C≡C-, 30

X2 es un grupo alquileno saturado lineal o ramificado, que tiene de 1 hasta 6 a´tomos de carbono, X3 es un -O- ´o -CH2 -, X4 es un -CH2 - ´o -[CH2 ]3 -,

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X5 es un -H ´o -C≡C-R2 , ogeno, un grupo alquilo que tiene de 1 hasta 6 a´tomos de carbono, un grupo R1 es un a´tomo de hidr´ cicloalquilo que tiene 5 o´ 6 ´atomos de carbono o un grupo fenilo, 40

R2 es un grupo alquilo saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 hasta 6 ´atomos de carbono, ogeno, un radical acilo que tiene de 1 hasta 4 ´atomos de carbono, o un radical R3 es un ´atomo de hidr´ benzo´ılo, y

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R4 es un -H ´o -CH3 ;

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estando el grupo -O-R3 situado en α ´o β, y de sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles, en ogeno, para la preparaci´ on de un medicamento el caso de que R1 tenga el significado de un a´tomo de hidr´ destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. 2. Utilizaci´on de derivados de prostano seg´ un la reivindicaci´ on 1 que tienen la f´ ormula general I en la que

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X1 es un trans-CH=CH, X2 es un grupo alquileno saturado, lineal o ramificado, que tiene de 2 hasta 4 a´tomos de carbono, X3 es un -CH2 -

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X4 es un -CH2 -, X5 es un -C≡C-R2 , 10

ES 2 101 333 T3 R1 es un ´atomo de hidr´ ogeno, un grupo alquilo que tiene de 1 hasta 3 a´tomos de carbono, o un grupo fenilo,

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R2 es un grupo alquilo saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 hasta 3 ´atomos de carbono, ogeno o un radical acilo que tiene 2 a´tomos de carbono y R3 es un ´atomo de hidr´ R4 es un -H;

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o β, y de sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles, en estando el grupo -O-R3 situado en α ´ ogeno, para la preparaci´ on de un medicamento el caso de que R1 tenga el significado de un a´tomo de hidr´ destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. 3. Utilizaci´on de derivados de prostano seg´ un la reivindicaci´ on 2 que tienen la f´ ormula general I en la que X1 es un trans-CH=CH-,

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X2 es un grupo metiletileno, estando unido el grupo metilo con el primer a´tomo de carbono del grupo etileno, y estando el primer ´atomo de carbono del grupo etileno orientado hacia el grupo A, X3 es un -CH2 -,

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X4 es un -CH2 -, X5 es un -C≡C-R2 ,

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ogeno o un grupo metilo, R1 es un ´atomo de hidr´ R2 es un grupo metilo o etilo, ogeno o un grupo formilo y R3 es un ´atomo de hidr´

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R4 es un -H; o β, y de sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles, en estando el grupo -O-R3 situado en α ´ ogeno, para la preparaci´ on de un medicamento el caso de que R1 tenga el significado de un a´tomo de hidr´ destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. 4. Utilizaci´on de un derivado de prostano seg´ un la reivindicaci´ on 3 que tiene la f´ ormula I en la que

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X1 es trans-CH=CH-, X2 es un grupo metiletileno, estando unido el grupo metilo con el primer a´tomo de carbono del grupo etileno, y estando el primer ´atomo de carbono del grupo etileno orientado hacia el grupo X1 ,

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X3 es un -CH2 -, X4 es un -CH2 -,

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X5 es un -C≡C-R2 , ogeno, R1 es un ´atomo de hidr´ R2 es un grupo metilo,

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ogeno y R3 es un ´atomo de hidr´ R4 es un -H; 11

ES 2 101 333 T3 estando el grupo OH situado en α ´ o β, y de sus sales con bases fisiol´ogicamente compatibles, para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica.

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5. Utilizaci´on de un derivado de prostano seg´ un la reivindicaci´ on 1, que es un Cicaprost, y de sus sales, para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. 6. Utilizaci´on de un derivado de prostano seg´ un la reivindicaci´ on 1, que es un Eptaloprost, y de sus sales, para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica.

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7. Utilizaci´on de un derivado de prostano seg´ un la reivindicaci´ on 1, que es un Ciprosteno, y de sus sales, para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica. 8. Utilizaci´on de un derivado de prostano seg´ un la reivindicaci´ on 1, que es un Beraprost, y de sus sales para la preparaci´ on de un medicamento destinado al tratamiento de la poliartritis cr´ onica.

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9. Utilizaci´on de derivados de prostano seg´ un por lo menos una de las precedentes reivindicaciones en com´ un con sustancias coadyuvantes y de veh´ıculo farmacol´ ogicas, que son fisiol´ogicamente compatibles.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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