LABORATORIO # 5: MICROORGANISMOS, INFECCIONES NOSOCOMIALES Y EL AMBIENTE http://app1.semarnat.gob.mx/playas/nuevo/i magenes/entfaec.jpg

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REPASO… ¿Cuántos tipos de tinciones discutimos en el laboratorio?
La tinción Gram, ¿de que tipo es?
¿Utilizando la tinción Gram, que color espera observar en una bacteria Gram +, y en una Gram -?
¿Cuál es la función del yodo como agente mordante?
Según la practica del laboratorio ¿Cuáles fueron las diferencias entre Serratia marcescens y Staphylococcus aureus al observar la laminilla?


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Repaso: Tinciones

Resumen resultados de tinciones

Tinción Gram (estructura de pared celular)

Tinción de esporas

Tinción de cápsula

Objetivos
Definir

y discutir sobre las enfermedades nosocomiales
Conocer qué son las enterobacterias y la importancia de éstas
Utilizar indicador de fluorescencia para identificar la presencia de microorganismos especificos

Enfermedades nosocomiales


Se adquieren durante la estadia del paciente en el hospital (intrahospitalarias), es decir, no son la causa del ingreso.




Se asocian a instrumentación, procedimientos invasivos, pacientes graves e inmunosuprimidos.

Pseudomonas aeruginosa

Enterococcus faecium

Enterococcus faecalis

MIEMBROS DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE           

Citrobacter sp. Enterobacter sp. Escherichia sp. Klebsiella sp. Morganella sp. Proteus sp. Providencia sp. Salmonella sp. Serratia sp. Shigella sp. Yersinia sp.

Salmonella typhimurium

Salmonella enteritidis

Yersinia pestis Shigella dysenteriae

Serratia marcescens Klebsiella pneumoniae

Familia Enterobacteriaceae


Miembros de la microbiota intestinal de la mayoría de animales y humanos.




Son bacterias que abundan en el agua, suelo y vegetación en descomposición.




Son los patógenos humanos más comunes




Entre sus características:
Cocobacilos o bacilos
Anaerobios facultativos (crece con o sin oxigeno)
Gram negativos
No esporulados
Algunos son mótiles (flagelos perítricos)
Algunos son capsulados
Poseen pilis

Enterobacterias: Estructura antigénica •El conocimiento detallado de la estructura antigénica resulta de utilidad para estudios epidemiológicos y en la formulación de vacunas Se distinguen tres tipos de antígenos: •AgO ó antígeno somático constituido por el lipopolisacárido (LPS) de la membrana externa. •H ó antígeno flagelar. •K ó antígeno capsular.

Enterobacterias: Factores de virulencia •Virulencia Virulencia: Grado de patogenicidad de un microorganismo. •Estructuras le brindan capacidad de sobrevivencia al microorganismo.

Enterobacterias: Factores de virulencia


Endotoxinas- (LPS) Su actividad depende del componente lípido A del lipopolisacárido. Las endotoxinas son liberadas por lisis o en forma de burbujas de la membrana externa, impregnadas con LPS.




Cápsula Los protege de la fagocitosis. repelen la superficie hidrofóbica de la célula fagocítica.




Sistema de secreción de tipo III Aproximadamente 20 proteínas que facilitan la secreción de factores de virulencia en bacterias hacia sus huéspedes.

Métodos de clasificación
Enterobacteriaceae

patógenos se clasifican en 3

grupos: Coliformes •Fermentan lactosa, microbiota normal y podrían ser patógenos oportunistas. Oportunistas* (no coliformes) •Provoca una enfermedad cuando el sistema inmunológico está débil. •No fermentan lactosa Patógenos verdaderos

Coliformes Oportunistas









Algunas características:
Aeróbicos o anaeróbicos facultativos
Bacilos Gram
Fermentadores de lactosa • Producción de gas a altas temperaturas en medio con lactosa Colonizan el tracto intestinal de animales y humanos. La presencia de coliformes en el agua es indicativo de impureza y pobre tratamiento de desagües. Ejemplos:






Escherichia coli Klebsiella spp. Klebsiella pneumoniae Serratia spp. Enterobacter spp spp, Hafnia y Citrobacter spp

Escherichia coli


El coliforme más común y más estudiado.




Cepas virulentas tienen genes localizados en un plásmido virulento que le permite a la bacteria colonizar el tejido humano.




Provoca gastroenteritis por exotoxinas




Causa más común de infecciones nosocomiales en el tracto urinario.

Escherichia coli O157:H7
Es

la cepa más patogénica




Causa diarrea, colitis hemorrágica, y síndrome hemolítico urémico (un desorden severo en riñones).




Las epidemias están mayormente asociadas a carne de res no cocida o a leche no pasteurizada.

Klebsiella spp.


Algunas características:
Encontrado en el sistema digestivo y respiratorio de humanos y animales
Causa infección oportunista
Produce cápsula




Klebsiella pneumoniae especie más patógena.
Neumonía
Involucrada en bacteremia, meningitis, infección de heridas

Klebsiella pneumoniae

Serratia spp.


Pigmento rojo (temperatura ambiente).
Prodigiosina




Puede crecer en catéteres, solución salina y otros utensilios de hospitales.




Puede causar infecciones en el tracto urinario y respiratorio a pacientes inmunocomprometidos.




Difícil de tratar por resistir varios antibióticos.

Serratia marcescens

TSA

Enterobacter, Hafnia y Citrobacter


Encontrados en suelo, agua, vegetación y desagües.




Reside en sistema digestivo de humanos y animales.




Patógenos oportunistas.




Infecciones nosocomiales en pacientes inmunocomprometidos.




Resistentes a antibióticos. Enterobacter spp.

Oportunistas (No coliformes) Enterobacteriaceae



Incluyen varios patógenos oportunistas Ej. Proteus spp.
Gram -, anaerobio facultativo
Proteus mirabilis es la especie más común asociada a enfermedades
Infección urinaria en pacientes que tiene un catéter por mucho tiempo
Su infección puede inducir la piedra en riñón
Resistente a muchas drogas con poder antimicrobiano.

Proteus en EMB Agar

Patógenos verdaderos Enterobacteriaceae


Miembros importantes de este grupo son patógenos debido a numerosos factores de virulencia.




Sistema de secreción Tipo III Permite la entrada de proteínas que inhiben fagocitosis
Rearregla el citoesqueleto de células eucariotas
Induce apoptosis (muerte).





Algunos ejemplos:
Salmonella spp.

Salmonella spp.


Gram-, mótil, bacilo




Intestino de heces fecales de aves, reptiles y mamíferos.




Se adquiere por consumo de alimentos contaminados.




Dos patógenos importantes: S. typhimurium-causa salmonelosis
S. typhi-causa fiebre tifoidea


Yersinia spp.


Patógeno de animales.
Generalmente relacionado a cerdos.




Tres especies importantes:
Y. enterocolitica
Consumo de alimentos
Inflamación de intestino
Infecciones gastrointestinales


Y. pseudotuberculosis
Similar a Y. enterocolitica pero la inflamación intestinal es menos severa.

Coliformes totales vs. fecales


Coliformes Totales- el grupo de coliformes en general (de origen fecal y no fecal). Se utilizan en aguas tratadas para observar si ocurrió contaminación.




Coliformes Fecales- son un subgrupo de los coliformes totales, son de origen intestinal. Se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas.

“Todos los coliformes fecales son totales pero no todos los coliformes totales son fecales”

Método rápido para identificar coliformes: Colilert


Detecta la presencia de coliformes totales y fecales simultáneamente.




Consiste en añadir a un frasco con 100 ml de muestra el medio en polvo “Pouch” e incubar a 37°C/24hrs

.


Resultados:
Si la muestra se torna amarillo intenso contiene coliformes totales.
Si emite fluorescencia al exponerla en luz UV hay presencia de E. coli (coliforme fecal).

Familia Enterococcaceae


Género Enterococcus: Cocos Gram +
Aerobio facultativo
Prefiere oxigeno pero esta bien sin él
Toleran altas temperaturas y altas concentraciones de sal





Se encuentran de manera natural en muchos organismos como parte de su flora intestinal





E. faecalis y E. faecium en humanos

Agencia estatal y federal de Protección Ambiental lo utilizan para monitorear la calidad de agua en playas recreativas.

Método rápido para identificar enterococos: Enterolert


Similar al método de Colilert con algunas diferencias: Identifica microorganismos del género Enterococcus
Temperatura de incubación es a 41°C/24hrs
Al exponer las muestras en luz UV:


Fluorescencia=Positivo (Presencia de enterococos)
No Fluorescencia=Negativo


Observar fluorescencia en UV

24hrs.

EJERCICIO PRÁCTICO Paso #1: Lavado de Manos

RECAPITULACIÓN…


¿Qué es una enfermedad nosocomial?

Algunos factores de virulencia de las bacterias son…
¿Qué son los coliformes, coliformes oportunistas y patógenos verdaderos?





Un método rápido para identificar coliformes lo es...

¿¿Preguntas??...