Laboratorio Clínico ASI

Manual para el envío y recepción de muestras para las pruebas especiales:

ADN proviral de VIH-1, Antígeno de Histoplasma en orina, PCR para Mycobacterium tuberculosis, Genotipaje de VIH-1, Interferon-Gamma (QuantiFERON TB Gold ®)

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Índice

1. Información General ........................................................................ 2 2. ADN proviral .................................................................................... 3 3. Antígeno de Histoplasma ................................................................. 5 4. PCR para Mycobacterium tuberculosis ............................................. 7 5. Genotipaje para VIH-1 ................................................................... 10 6. Interferon Gamma ... …………………………………………………………………..14 7. Anexos: Sistema Triple Básico de Embalaje........................................ 16 Solicitud ADN proviral .......................................................... 19 Solicitud para prueba de Histoplasmosis y Criptococosis ...... 20 Solicitud PCR para Mycobacterium tuberculosis ................... 24 Solicitud Genotipaje VIH-1 Adultos....................................... 26 Solicitud Genotipaje VIH-1 Pediátrico ................................... 29 Solicitud de Interferon-Gamma (QuantiFERON TB Gold®) ……32 Preparación de muestras para Genotipaje VIH-1 .................. 33

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Propósito del Manual: Homogeneizar los procedimientos de toma de muestra, identificación, etiquetado, documentación y embalaje para asegurar la adecuada conservación y transporte de las muestras que se envían al Laboratorio de Asociación de Salud Integral.

Pruebas para las que aplica la información contenida en este manual: 1. 2. 3. 4. 5.

ADN proviral de VIH-1 Antígeno de Histoplasma en orina PCR para Mycobacterium tuberculosis Genotipaje de VIH-1 Quantiferon

Información para el envío adecuado de las muestras: Para cada prueba que se considera en este manual, se describirán los siguientes puntos importantes: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

Descripción de la prueba Tipos de muestra Toma de la muestra Identificación de la muestra Embalaje Documentación que acompañará a las muestras. Transporte Horario de Recepción y tiempo de entrega de resultados Información adicional

Cada apartado será explicado en mayor detalle en la sección correspondiente a cada prueba. Todas las muestras deberán enviarse a la siguiente dirección: Laboratorio Clínico ASI 2ª. Avenida 11.53, Zona 1, Guatemala, Ciudad. Tels.: 23118102, 23118100

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ADN proviral de VIH-1 Esta prueba identifica una sección del material genético del Virus del HIV-1 que ha sido incorporada dentro del material genético de los glóbulos blancos del paciente infectado. Se utiliza para realizar el diagnóstico temprano de la infección por VHI-1, principalmente en niños menores de 18 meses.

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Tipo de muestra: 2 tubos de 5 ml de Sangre completa con EDTA (tubo con tapón morado) Volumen mínimo: 1 tubo con 2.5 ml

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Toma de la muestra: Preparación del paciente: el paciente no requiere preparación. Procedimiento: la muestra deberá tomarse por medio de una punción venosa, el área deberá desinfectarse correctamente previo a realizar la punción. Debe utilizarse el método Vacutainer con tubos al vacío estériles. Conservación de la muestra: la muestra debe conservarse a temperatura ambiente (25°C) y deberá transportarse a la misma temperatura. Debe ser enviada antes de 24 horas de haber sido extraída.

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Identificación de la muestra: Debe rotularse sobre la etiqueta del tubo, con letra clara y legible, con marcador permanente, los siguientes datos: Código y nombre (opcional) del paciente Prueba que se realizará (ADN proviral, puede abreviarse ADN pro) Fecha en que fue extraída la muestra (d/m/aa)

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Embalaje de la muestra: Las muestras deberán embalarse de acuerdo a la regulación local vigente. De no conocerse regulación local, puede utilizarse el procedimiento que se describe en el anexo titulado “Sistema triple básico de embalaje” página 13 de este manual.

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Documentación que acompañarán a la muestra: Las muestras para ADN proviral deberán acompañarse de 2 documentos debidamente llenos: Solicitud de la prueba (anexo, pág. 16)

Transporte de las muestras:

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Las muestras para ADN proviral deberán transportarse a temperatura ambiente. Puede utilizarse un servicio de mensajería o bien el transporte con el que cuente el centro que refiere.

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Horario de recepción y entrega de resultados: Las muestras para ADN proviral se recibirán en horario de 7:00 a 15:00 hrs. De lunes a Viernes. Los resultados serán entregados 15 días hábiles a partir de la fecha de ingreso de la muestra.

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Información adicional: CONTACTO: Laboratorio de Biología Molecular de Asociación de Salud Integral. E mail: [email protected] Teléfono: 2311-8102 ext. 105

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Antígeno de Histoplasma en Orina Esta prueba detecta la presencia del Antígeno Polisacárido de H. capsulatum en la orina del paciente. Proporciona resultados confiables de una manera rápida, disminuyendo el tiempo necesario para realizar el diagnóstico.

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Tipo de muestra: 20-40 ml de Orina La primera orina de la mañana. Colectar en recipiente estéril de boca ancha con tapadera de rosca.

Toma de la muestra: Preparación del paciente: El paciente no requiere preparación. Procedimiento: La orina debe tomarse al vuelo realizando los siguientes pasos: 1. Destape el envase, y deje la tapa boca arriba para que no se contamine 2. Elimine la primera parte del chorro de orina. 3. Detenga la micción y luego orine directamente en el envase 4. Recoja como máximo las tres cuartas partes del envase. 5. Retire el envase del chorro y elimine el resto de la orina. También son muestras aceptables las orinas obtenidas por medio de sonda urinaria o punción suprapúbica, siguiendo las mismas precauciones que en la obtención de muestra para urocultivo. Conservación de la muestra: conservar en refrigeración (4-8°C) y deberá transportarse a la misma temperatura. Debe ser enviada antes de 24 horas de haber sido extraída.

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Identificación de la muestra: Debe rotularse sobre la etiqueta del frasco, con letra clara y legible, con marcador permanente, los siguientes datos:

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Código y nombre (opcional) del paciente Prueba que se realizará (Antígeno de Histoplasma, puede abreviarse Ag. Histo) Fecha en que fue tomada la muestra (dd/mm/aa)

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Embalaje de la muestra: Las muestras deberán embalarse de acuerdo a la regulación local vigente. De no conocerse regulación local, puede utilizarse el procedimiento que se describe en el anexo titulado “Sistema triple básico de embalaje” página 13 de este manual.

Documentación que acompañará a la muestra: Las muestras para Antígeno de Histoplasma deberán acompañarse de los siguientes documentos debidamente llenos: Solicitud de la prueba (anexo, págs. 19 y 20)

Transporte de las muestras:

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Las muestras para Antígeno de Histoplasma deberán transportarse en cadena de frío (4-8°C). Puede utilizarse un servicio de mensajería o bien el transporte con el que cuente el centro que refiere.

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Horario de recepción y entrega de resultados: Las muestras para Antígeno de Histoplasma se recibirán en horario de 7:00 a 15:30 hrs. De lunes a Viernes. Los resultados serán entregados 10 días hábiles a partir de la fecha de ingreso de la muestra.

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Información adicional: CONTACTO: Laboratorio de Microbiología de Asociación de Salud Integral. E mail: microbiologí[email protected] Teléfono: 2311-8102 ext. 104

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PCR para Mycobacterium tuberculosis Esta prueba identifica el gen IS6110 que se encuentra en el ADN de las bacterias que pertenecen al complejo M. tuberculosis. Se utiliza para realizar el diagnóstico temprano de la infección por Mycobacterium tuberculosis.

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Tipo de muestra: Esputo, lavado bronquial, aspirado orotraqueal, biopsias. Orina, la primera de la mañana. Volumen mínimo: 10 ml Líquidos (peritoneal, pleural, pericárdico, cefalorraquídeo), volumen mínimo: 10 ml Toda muestra debe colectarse en recipiente estéril de bocha ancha con tapadera de rosca.

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Toma de la muestra: ESPUTO: Preparación del paciente: Ayuno de 8 horas, sin cepillarse los dientes. Procedimiento: Enjuagar la boca con agua. Obtener el esputo tras una expectoración profunda luego de un esfuerzo de tos. La muestra debe provenir del sector bajo del tracto respiratorio. La saliva no se considera una muestra aceptable. Conservación de la muestra: la muestra debe conservarse en refrigeración (4-8°C) y deberá transportarse a la misma temperatura. Debe ser enviada antes de 24 horas de haber sido extraída.

MUESTRAS VARIAS (lavados, aspirados, biopsias, líquidos): Preparación del paciente: La preparación que requiera el procedimiento.

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Procedimiento: Estas muestras son obtenidas por medio de técnicas invasivas que serán realizadas por un médico entrenado. Conservación de la muestra: las muestras deben conservarse en refrigeración (4-8°C) y deberán transportarse a la misma temperatura. Deben ser enviadas antes de 24 horas de haber sido extraídas.

ORINA: Preparación del paciente: No requiere preparación. Procedimiento: La orina debe tomarse al vuelo realizando los siguientes pasos: 1. Destape el envase, y deje la tapa boca arriba para que no se contamine 2. Elimine la primera parte del chorro de orina. 3. Detenga la micción y luego orine directamente en el envase 4. Recoja como máximo las tres cuartas partes del envase. 5. Retire el envase del chorro y elimine el resto de la orina. También son muestras aceptables las orinas obtenidas por medio de sonda urinaria o punción suprapúbica, siguiendo las mismas precauciones que en la obtención de muestra para urocultivo. Conservación de la muestra: la muestra debe conservarse en refrigeración (4-8°C) y deberá transportarse a la misma temperatura. Debe ser enviada antes de 24 horas de haber sido extraída.

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Identificación de la muestra: Debe rotularse sobre la etiqueta del recipiente, con letra clara y legible, con marcador permanente, los siguientes datos: Código y nombre (opcional) del paciente Prueba que se realizará (PCR M. tuberculosis, puede abreviarse PCR MT) Fecha en que fue extraída la muestra (dd/mm/aa)

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Embalaje de la muestra: Las muestras deberán embalarse de acuerdo a la regulación local vigente. De no conocerse regulación local, puede utilizarse el procedimiento que se describe en el anexo titulado “Sistema triple básico de embalaje” página 13 de este manual.

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Documentación que acompañará a la muestra: Las muestras para PCR de Mycobacterium tuberculosis deberán acompañarse de los siguientes documentos debidamente llenos: Solicitud de la prueba (anexo, págs. 21, 22 y 23)

Transporte de las muestras:

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Las muestras para PCR de Mycobacterium tuberculosis deberán transportarse en cadena de frío (4-8°C). Puede utilizarse un servicio de mensajería o bien el transporte con el que cuente el centro que refiere.

8

Horario de recepción y entrega de resultados: Las muestras para PCR de Mycobacterium tuberculosis se recibirán en horario de 7:00 a 15:00 hrs. De lunes a Viernes. Los resultados serán entregados en 8 días hábiles a partir de la fecha de ingreso de la muestra.

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Información adicional: CONTACTO: Laboratorio de Biología Molecular de Asociación de Salud Integral. E mail: [email protected] Teléfono: 2311-8102 ext. 105

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Genotipaje de VIH-1 Esta prueba se utiliza para detectar mutaciones en el genoma del VIH, en los genes de transcriptasa reversa y de proteasa. Algunas de estas mutaciones pueden producir resistencia del VIH a los medicamentos antirretrovirales, por lo que la prueba de genotipaje del VIH permite identificar que medicamentos antirretrovirales son efectivos contra el VIH circulante en el paciente y cuales ya no deben utilizarse.

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Tipo de muestra: 2 ml de plasma El plasma debe ser separado antes de que transcurran 5 horas entre la extracción de sangre y la separación del plasma La sangre debe colectarse en tubos con EDTA (morados) NO UTILIZAR TUBOS CON HEPARINA Para instrucciones detalladas acerca de la toma de muestra y separación del plasma, favor ver anexo titulado “Preparación de muestras de plasma para genotipo de VIH-1”, página 30 de este manual.

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Toma de la muestra: Preparación del paciente: el paciente no requiere preparación. Procedimiento: la muestra deberá tomarse por medio de una punción venosa, el área deberá desinfectarse correctamente previo a realizar la punción. Debe utilizarse el método Vacutainer con tubos al vacío estériles. Utilizar tubos de tapón morado, con EDTA. No utilizar heparina. Conservación de la muestra: el plasma debe conservarse en congelación a -20°C y deberá transportarse con baterías congeladas en una hielera, para evitar que se rompa la cadena de frío. El plasma debe ser enviado lo antes posible al laboratorio de biología molecular de ASI.

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Identificación de la muestra: Debe rotularse sobre la etiqueta del tubo, con letra clara y legible, con marcador permanente, los siguientes datos: Código y nombre (opcional) del paciente Prueba que se realizará (genotipo) Fecha en que fue extraída la muestra (dd/mm/aa)

5

Embalaje de la muestra: Las muestras deberán embalarse de acuerdo a la regulación local vigente. De no conocerse regulación local, puede utilizarse el procedimiento que se describe en el anexo 1 de este manual, titulado “Sistema triple básico de embalaje”

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Documentación que acompañarán a la muestra: Las muestras para genotipo deberán acompañarse de la solicitud de genotipo debidamente llena. Hay una solicitud para pacientes adultos (anexos, págs. 24, 25 y 26) y una para pacientes pediátricos (anexos, págs. 27, 28 y 29). La solicitud completa consta de 3 páginas.

Transporte de las muestras:

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Las muestras para genotipo deberán transportarse congeladas, en hielera con baterías de gel o hielo congeladas, a manera de no romper la cadena de frío. Puede utilizarse un servicio de mensajería o bien el transporte con el que cuente el centro que refiere.

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Horario de recepción y entrega de resultados: Las muestras para genotipo se recibirán en horario de 7:00 a 15:00 hrs. De Lunes a Viernes. Los resultados serán entregados 10 días hábiles a partir de la fecha de ingreso de la muestra.

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Información adicional: CONTACTO: Laboratorio de Biología Molecular de Asociación de Salud Integral. E mail: [email protected] Teléfono: 2311-8102 ext. 105

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Interferon Gamma -QuantiFERON TB Gold®Esta prueba detecta el interferón-γ (IFN-γ), vinculadas a la infección por Mycobacterium tuberculosis. Es una prueba indirecta y se debe utilizar complementaria con estudios radiológicos, médicos y de laboratorio.

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Tipo de muestra: 3 ml de sangre 1 ml en cada tubo hasta la marca Solicitar los tubos al laboratorio de Microbiología de ASI

Toma de la muestra: Preparación del paciente: el paciente no requiere preparación. Procedimiento: la muestra deberá tomarse por medio de una punción venosa, el área deberá desinfectarse correctamente previo a realizar la punción con el método Vacutainer, agitar vigorosamente los tubos por 5 segundos para mezclar la sangre con el antígeno adherido a las paredes internas del tubo. Conservación de la muestra: Existen 2 formas: Si el transporte es de inmediato al laboratorio (no más de 3 horas): Se conservan a temperatura ambiente NO REFRIGERAR NI CONGELAR sangre completa y transportar de inmediato al laboratorio. Si el trasporte no es de inmediato al laboratorio (más de 3 horas) Incubar los tubos a 37ºC en posición vertical durante 16 a 24 horas, centrifugar los tubos por 15 minutos a 2000-3000 RCF, separar 150 ul de plasma en microtubos conservar a 2-8ºC (refrigeración).

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Identificación de la muestra: Debe rotularse sobre la etiqueta del tubo o sobre la pared de los microtubos, con letra clara y legible, con marcador permanente, los siguientes datos: Código y nombre (opcional) del paciente Fecha en que fue extraída la muestra (dd/mm/aa) En los microtubos rotular: Nil control (tubo con tapa color gris) TB antigen (tubo con tapa color roja) Mitogen control (Tubo con tapa color purpura)

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Embalaje de la muestra: Las muestras deberán embalarse de acuerdo a la regulación local vigente. De no conocerse regulación local, puede utilizarse el procedimiento que se describe en el anexo 1 de este manual, titulado “Sistema triple básico de embalaje”

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Documentación que acompañarán a la muestra: Las muestras para Interferon Gamma deberán acompañarse de la solicitud de Quantiferon debidamente llena. (anexo ) La solicitud completa consta de 1 página.

Transporte de las muestras:

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Si el trasporte es de inmediato: Las muestras de sangre completa para Quatiferon deberán transportarse a temperatura ambiente. Si el transporte no es de inmediato: Las muestras de plasma para Interferon Gamma deberán transportarse en hielera con baterías de gel o hielo, a manera de no romper la cadena de frío. Puede utilizarse un servicio de mensajería o bien el transporte con el que cuente el centro que refiere.

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Horario de recepción y entrega de resultados: Las muestras para Interferon Gamma se recibirán en horario de 7:00 a 15:00 hrs. De Lunes a Jueves. Los resultados serán entregados 5 días hábiles a partir de la fecha de ingreso de la muestra.

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Información adicional: CONTACTO: Laboratorio de Microbiología E mail: microbiologí[email protected] Teléfono: 2311-8102 ext. 104

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Sistema Triple Básico de Embalaje Recipiente primario El espécimen para diagnostico (material humano que puede ser sangre o sus componentes, excretas, tejidos o fluidos tisulares) debe depositarse en un recipiente hermético: tubo, frasco, u otros con tapa de rosca FIG. 1 a prueba de filtraciones, que se colocarán en gradillas o con separadores que funcionarán como amortiguadores FIG. 2 Ejemplo de recipientes primarios

FIG. 1

FIG. 2

Recipiente secundario Los recipientes primarios uno o varios se colocan en un segundo recipiente también hermético, a prueba de filtraciones, con objeto de proteger el (los) recipiente(s) primario(s). Si se colocan varios recipientes primarios se debe usar suficiente material amortiguador y absorbente para proteger a todos los recipientes primarios y evitar que choquen entre ellos.

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No olvidar que alrededor de estos recipientes se colocarán refrigerantes (baterías de hielo) para mantener las muestras entre (4 – 8 °C) cuando así se requiere. Ejemplos de recipientes secundarios

FIG. 3

Paquete externo de envío El o los recipiente(s) secundario(s) se coloca(n) en un Paquete externo de envío que protege su contenido de los elementos externos del ambiente, a fin de evitar posibles daños físicos y filtración de agua, mientras se encuentra en tránsito. DOCUMENTOS: El centro que refiere deberá enviar los documentos que identifican y describen las muestras. Los documentos requeridos se enumeran en la sección específica de cada prueba. Estos documentos deberán adherirse a la parte interior del Paquete externo de envío. Es importante que los documentos primero se introduzcan en un sobre de plástico para protegerlos.

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ETIQUETADO El Paquete externo de envío debe llevar las siguientes etiquetas:

Riesgo biológico

Datos del remitente

Señal de orientación

Datos del destinatario o receptor

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